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Use of the recombinant EMA-2 protein of Theileria equi expressed in Pichia pastoris, as immunobiological
No full textTheileriosis, endemic disease in Brazil, is a piroplasmosis caused by intra-erythrocytic protozoan, Theileria equi. Causes losses associated with both clinical factors and restriction on the movement of positive animals. Transmission of T. equi occurs mainly during tick feeding which inoculates their infective forms (sporozoites) in horses, which are the vertebrate hosts. The diagnosis and prevention of this disease is needed in endemic and non endemic areas due to the presence of vectors and protozoa. Different ELISAs platforms have been developed using recombinant antigens. EMA-2 is released into the cytoplasm and erythrocyte membrane, suggesting that one of the first antigens recognized by the immune system. The aim of this study was to evaluate the EMA-2 protein of Theileria equi, expressed in Pichia pastoris, as immunobiological. After expression of EMA-2 glycoprotein, an indirect ELISA was developed. The ELISA demonstrated sensitivity of 90.9% and specificity of 83.3% when compared to the commercial kit cELISA. The protein also showed immunogenicity when test the sera of immunized mice with recombinant EMA-2 by immunofluorescence. As the EMA-2 protein antigenic and immunogenic, it may be used diagnostic tests as well as a promising antigen for the development of subunit vaccines.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESA theileriose, doença endêmica no Brasil, é uma piroplasmose causada pelo protozoário intraeritrocitário, Theileria equi. Provoca perdas associadas tanto a fatores clínicos como a restrição ao trânsito de animais soropositivos. A transmissão de T. equi ocorre principalmente no repasto do carrapato, o qual inocula suas formas infectantes (esporozoítos) nos equídeos, que são os hospedeiros vertebrados. O diagnóstico e a prevenção desta enfermidade se fazem necessários em áreas endêmicas e não endêmicas devido à disseminação dos vetores e do protozoário e de sua alta prevalência. Diferentes plataformas de ELISAs têm sido desenvolvidas com a utilização de antígenos recombinantes. A proteína de superfície de merozoíto EMA-2 é liberada no citoplasma e na membrana do eritrócito, sugerindo ser um dos primeiros antígenos reconhecidos pelo sistema imune. O objetivo desse estudo foi avaliar a proteína EMA-2 de Theileria equi, expressa em Pichia pastoris, como imunobiológico. Após expressão da glicoproteína EMA-2 foi desenvolvido um ELISA indireto. O ELISA demonstrou sensibilidade de 90,9% e especificidade de 83,3% quando comparado ao kit comercial de cELISA. A proteína também demonstrou imunogenicidade ao testarmos soros de camundongos imunizados com EMA-2 recombinante, por imunofluorescência. Sendo a proteína EMA-2 antigênica e imunogênica, poderá ser usada, além dos testes de diagnóstico, como antígeno para o desenvolvimento de vacinas de subunidade
Use of the recombinant EMA-2 protein of Theileria equi expressed in Pichia pastoris, as immunobiological
No full textTheileriosis, endemic disease in Brazil, is a piroplasmosis caused by intra-erythrocytic protozoan, Theileria equi. Causes losses associated with both clinical factors and restriction on the movement of positive animals. Transmission of T. equi occurs mainly during tick feeding which inoculates their infective forms (sporozoites) in horses, which are the vertebrate hosts. The diagnosis and prevention of this disease is needed in endemic and non endemic areas due to the presence of vectors and protozoa. Different ELISAs platforms have been developed using recombinant antigens. EMA-2 is released into the cytoplasm and erythrocyte membrane, suggesting that one of the first antigens recognized by the immune system. The aim of this study was to evaluate the EMA-2 protein of Theileria equi, expressed in Pichia pastoris, as immunobiological. After expression of EMA-2 glycoprotein, an indirect ELISA was developed. The ELISA demonstrated sensitivity of 90.9% and specificity of 83.3% when compared to the commercial kit cELISA. The protein also showed immunogenicity when test the sera of immunized mice with recombinant EMA-2 by immunofluorescence. As the EMA-2 protein antigenic and immunogenic, it may be used diagnostic tests as well as a promising antigen for the development of subunit vaccines.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESA theileriose, doença endêmica no Brasil, é uma piroplasmose causada pelo protozoário intraeritrocitário, Theileria equi. Provoca perdas associadas tanto a fatores clínicos como a restrição ao trânsito de animais soropositivos. A transmissão de T. equi ocorre principalmente no repasto do carrapato, o qual inocula suas formas infectantes (esporozoítos) nos equídeos, que são os hospedeiros vertebrados. O diagnóstico e a prevenção desta enfermidade se fazem necessários em áreas endêmicas e não endêmicas devido à disseminação dos vetores e do protozoário e de sua alta prevalência. Diferentes plataformas de ELISAs têm sido desenvolvidas com a utilização de antígenos recombinantes. A proteína de superfície de merozoíto EMA-2 é liberada no citoplasma e na membrana do eritrócito, sugerindo ser um dos primeiros antígenos reconhecidos pelo sistema imune. O objetivo desse estudo foi avaliar a proteína EMA-2 de Theileria equi, expressa em Pichia pastoris, como imunobiológico. Após expressão da glicoproteína EMA-2 foi desenvolvido um ELISA indireto. O ELISA demonstrou sensibilidade de 90,9% e especificidade de 83,3% quando comparado ao kit comercial de cELISA. A proteína também demonstrou imunogenicidade ao testarmos soros de camundongos imunizados com EMA-2 recombinante, por imunofluorescência. Sendo a proteína EMA-2 antigênica e imunogênica, poderá ser usada, além dos testes de diagnóstico, como antígeno para o desenvolvimento de vacinas de subunidade
Caracterização de filmes de EMA e EMA/PCL-T e aplicação em sistemas de liberação controlada de fármacos
Get PDFTese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas. Programa de Pós-Graduação em Química.Filmes de (poli(etileno-co-metil acrilato) (EMA) e EMA/poli(caprolactona-triol)(PCL-T) foram caracterizados em relação as suas características térmicas, mecânicas, de intumescimento, interações fármaco-polímero e aplicação na liberação controlada de fármacos. O aumento no teor de metil acrilato nos filmes de EMA promoveu redução da cristalinidade, diminuição da tensão máxima, aumento da capacidade de elongação e no módulo de elasticidade, aumento na capacidade de intumescimento dos filmes em etanol e favorecimento da permeação dos fármacos, paracetamol, ibuprofeno e cloridrato de diltiazem (DZ). A aumento da fração de etanol/água utilizado como solvente para solubilizar o fármaco promoveu aumento do coeficiente de permeabilidade do cloridrato de diltiazem fator influenciado pelo maior intumescimento do filme. Os resultados de DSC, FTIR e MEV demonstraram que os filmes de EMA/PCL-T variando em concentração de 100/0 até 60/40 são imiscíveis. O DZ quando incorporado aos filmes de EMA/PCL-T sofre redução progressiva do grau de cristalinidade com a adição de PCL-T. Este efeito é associado à interações da PCL-T com o grupamento iônico da amina terciária observados por FTIR. A progesterona (PG) quando incorporada aos filmes de EMA/PCL-T sofre redução para 5% de cristalinidade somente com a presença de EMA, a adição progressiva de PCL - T não promoveu efeito aditivo sobre esta propriedade. Os filmes EMA/PCL-T/DZ 80/0/20 e 70/10/20 apresentaram baixíssima liberação do fármaco incorporado, contudo os filmes 60/20/20 e 50/30/20 apresentaram mecanismo de liberação anômalo. Os filmes de EMA/PCL-T/PG, 80/0/20, 70/10/20, 60/20/20 e 50/30/20 apresentaram total liberação do fármaco incorporado em 48 horas e o mecanismo de liberação segue o comportamento descrito por HIGUCHI
EXTRAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO ESPECTROMÉTRICA DE SUBSTÂNCIAS EXTRAÍDAS DE VELLOZIA SQUAMATA (CANELA DE EMA)
Get PDFDurante um incêndio na Serra da Canastra foi verificado pela brigada de incêndios uma grande dificuldade em extinguir as chamas quando estas chegavam aos campos de canelas de ema. Os brigadistas viam-se em dificuldade para cessar o fogo, tendo que fazer o rescaldo para evitar que incendiassem novamente. A planta apresenta característica pirofágica de longa duração. Em função desse aspecto peculiar, resolveu-se analisar os extratos da planta, que tem uma enorme facilidade em brotar após as queimadas. Dentre as espécies de Canela de Ema encontradas no parque, a Vellozia squamata foi escolhida para o estudo em questão. O trabalho foi desenvolvido através da extração por solvente e caracterização das substâncias encontradas na raiz e caule da Canela de Ema por espectrometria UV-VIS e Infravermelho. Os resultados indicaram a presença de substâncias orgânicas com ligações insaturadas, tanto no caule como na raiz, sendo essas substâncias facilmente oxidáveis, e tal fato, contribui para que as Vellozia squamata entrem em combustão por um período prolongado
Heterologous Expression of Theileria equi EMA-2 protein in Pichia pastoris.
No full textThe equine piroplasmosis caused by Theileria equi is considered one of the most
important equine diseases in both tropical and subtropical countries. Theileriosis is
endemic in Brazil and causes significant economic losses for equine breeders.
Disease-free countries restrict horse transit coming from endemic areas due to the
high prevalence of asymptomatic carrier animals. In order to prevent and control this
disease, it is therefore necessary to develop efficient diagnostic methods. Previous
Theileria equi immunological diagnostic studies have been based in outer membrane
antigens. Equi merozoite antigen (EMA) is a major outer membrane antigen of this
protozoan, recognized by antibodies of Theileria equi positive horses. In this study, we
reported the expression, purification and characterization of EMA-2 protein of Theileria
equi in the yeast Pichia pastoris. The EMA-2 gene was cloned into the expression vector
pPICZαB and the expressed protein was secreted to the medium as a soluble form.
The expression and antigenicity of rEMA-2 protein was demonstrated by Dot and
Western Blotting, using anti-histidine and equine Theileriosis clinically positive
antibodies. An indirect ELISA with the rEMA-2 was performed and it was possible to
differentiate with more than a threefold difference between negative and positive
serum from horses confirmed with Theileriosis. The data obtained in this work
suggest that the rEMA-2 protein expressed in P. pastoris is a potential candidate for
use as antigen in immunodiagnostic of T. equi.A Piroplasmose equina causada por Theileria equi é considerada uma das mais
importantes doenças dos equinos em regiões tropicais e subtropicais. Acomete os
equinos de forma endêmica no Brasil levando a significativas perdas econômicas.
Países livres da doença não permitem a entrada de animais provindos de regiões
endêmicas devido à alta prevalência de animais assintomáticos. Para controle e
prevenção desta enfermidade se faz necessário desenvolvimento de métodos de
diagnóstico eficazes. Os estudos sobre o diagnóstico imunológico para Theileriose
concentram-se em antígenos da membrana externa. O principal antígeno da
membrana externa deste protozoário, Equi Antígeno Merozoite (EMA) é reconhecido
por anticorpos de cavalos positivos para Theileria equi. Neste estudo reportamos a
expressão, purificação e a caracterização da proteína EMA-2 de Theileria equi na
levedura Pichia pastoris. O gene EMA-2 foi clonado no vetor de expressão pPICZαB
sendo a proteína expressa, secretada de forma solúvel ao meio. A expressão e
antigenicidade da proteína rEMA-2 foi demonstrado por Dot e Western Blotting
utilizando-se anti-histidina e anticorpos de equinos clinicamente positivos para
Theileriose. Um ELISA indireto com rEMA-2 foi realizado e foi possível determinar
uma diferença de mais de três vezes entre os soros de equinos confirmados como
positivos e negativos para Theileriose. Com os dados obtidos neste trabalho
podemos sugerir que a proteína rEMA-2 é um potencial candidato para ser utilizado
como antígeno em imunodiagnóstico de T. equi
Heterologous Expression of Theileria equi EMA-2 protein in Pichia pastoris.
No full textA Piroplasmose equina causada por Theileria equi ?? considerada uma das mais
importantes doen??as dos equinos em regi??es tropicais e subtropicais. Acomete os
equinos de forma end??mica no Brasil levando a significativas perdas econ??micas.
Pa??ses livres da doen??a n??o permitem a entrada de animais provindos de regi??es
end??micas devido ?? alta preval??ncia de animais assintom??ticos. Para controle e
preven????o desta enfermidade se faz necess??rio desenvolvimento de m??todos de
diagn??stico eficazes. Os estudos sobre o diagn??stico imunol??gico para Theileriose
concentram-se em ant??genos da membrana externa. O principal ant??geno da
membrana externa deste protozo??rio, Equi Ant??geno Merozoite (EMA) ?? reconhecido
por anticorpos de cavalos positivos para Theileria equi. Neste estudo reportamos a
express??o, purifica????o e a caracteriza????o da prote??na EMA-2 de Theileria equi na
levedura Pichia pastoris. O gene EMA-2 foi clonado no vetor de express??o pPICZαB
sendo a prote??na expressa, secretada de forma sol??vel ao meio. A express??o e
antigenicidade da prote??na rEMA-2 foi demonstrado por Dot e Western Blotting
utilizando-se anti-histidina e anticorpos de equinos clinicamente positivos para
Theileriose. Um ELISA indireto com rEMA-2 foi realizado e foi poss??vel determinar
uma diferen??a de mais de tr??s vezes entre os soros de equinos confirmados como
positivos e negativos para Theileriose. Com os dados obtidos neste trabalho
podemos sugerir que a prote??na rEMA-2 ?? um potencial candidato para ser utilizado
como ant??geno em imunodiagn??stico de T. equi.The equine piroplasmosis caused by Theileria equi is considered one of the most
important equine diseases in both tropical and subtropical countries. Theileriosis is
endemic in Brazil and causes significant economic losses for equine breeders.
Disease-free countries restrict horse transit coming from endemic areas due to the
high prevalence of asymptomatic carrier animals. In order to prevent and control this
disease, it is therefore necessary to develop efficient diagnostic methods. Previous
Theileria equi immunological diagnostic studies have been based in outer membrane
antigens. Equi merozoite antigen (EMA) is a major outer membrane antigen of this
protozoan, recognized by antibodies of Theileria equi positive horses. In this study, we
reported the expression, purification and characterization of EMA-2 protein of Theileria
equi in the yeast Pichia pastoris. The EMA-2 gene was cloned into the expression vector
pPICZαB and the expressed protein was secreted to the medium as a soluble form.
The expression and antigenicity of rEMA-2 protein was demonstrated by Dot and
Western Blotting, using anti-histidine and equine Theileriosis clinically positive
antibodies. An indirect ELISA with the rEMA-2 was performed and it was possible to
differentiate with more than a threefold difference between negative and positive
serum from horses confirmed with Theileriosis. The data obtained in this work
suggest that the rEMA-2 protein expressed in P. pastoris is a potential candidate for
use as antigen in immunodiagnostic of T. equi
Dopad Rusko-Ukrajinské války na formování a obsah vládní energetické politiky České republiky
No full textCHARLES UNIVERSITY FACULTY OF SOCIAL SCIENCES Institute of Social Studies Department of Public and Social Policy Master's Thesis 2023 Ema Brunovská CHARLES UNIVERSITY FACULTY OF SOCIAL SCIENCES Institute of Social Sciences Department of Public and Social Policy The impact of the Russian-Ukrainian war on the formation of the energy policy in the European Union Master's thesis Author: Ema Brunovská Study programme: Public and Social Policy Supervisor: prof. PhDr. František Ochrana, DrSc. Year of the defence: 2023 Abstract The Russia-Ukraine conflict has caused substantial problems to the European Union's energy policy, disrupting the region's energy security and posing repercussions for the transition to a lowering the heavily carbon energy system. The purpose of this thesis is to assess the influence of the Russia-Ukraine war on EU energy policy and prospective changes as a result of the situation. The study investigates the development of energy policy inside the EU using retrograde analysis and a historical institutionalism approach. It examines the implications of Russian gas and oil supply constraints, the possible implications on energy affordability and security, and the necessity for alternative energy sources. The thesis gives insights into the evolving dynamics of EU energy security by analysing...CHARLES UNIVERSITY FACULTY OF SOCIAL SCIENCES Institute of Social Studies Department of Public and Social Policy Master's Thesis 2023 Ema Brunovská CHARLES UNIVERSITY FACULTY OF SOCIAL SCIENCES Institute of Social Sciences Department of Public and Social Policy The impact of the Russian-Ukrainian war on the formation of the energy policy in the European Union Master's thesis Author: Ema Brunovská Study programme: Public and Social Policy Supervisor: prof. PhDr. František Ochrana, DrSc. Year of the defence: 2023 Abstrakt Rusko-ukrajinský konflikt spôsobil značné problémy v kontexte energetickej politiky Európskej únie, narušil energetickú bezpečnosť regiónu a má vplyv na doterajšie vízie v oblasti energetiky. Cieľom tejto práce je predostrieť vplyv rusko-ukrajinskej vojny na energetickú politiku EÚ a perspektívne zmeny v dôsledku vzniknutej situácie. Práca skúma vývoj energetickej politiky v rámci EÚ s využitím retrográdnej analýzy a prístupu historického inštitucionalizmu. Skúma dôsledky obmedzenia dodávok ruského plynu a ropy, možné vplyvy na dostupnosť a bezpečnosť energie a potrebu alternatívnych zdrojov energie. Práca poskytuje pohľad na vyvíjajúcu sa dynamiku energetickej bezpečnosti EÚ analýzou dokumentov zo zasadnutí Energetickej rady od apríla 2021 do júna 2023 s využitím obsahovej analýzy...Katedra veřejné a sociální politikyDepartment of Public and Social PolicyFaculty of Social SciencesFakulta sociálních vě
KIT PARA DIAGNÓSTICO E IMPLANTAÇÃO DE FERRAMENTAS DE LEAN MANUFACTURING EM PEQUENAS PROPRIEDADES RURAIS PRODUTORAS DE LEITE
No full textA partir dos padrões de qualidade do leite exigidos pela instrução normativa nº 62 regulamentada pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento e pela responsabilidade social atribuída ao produtor de leite é fundamental obter o controle sobre o processo produtivo, principalmente sobre o manejo nutricional (proteína, energia e minerais), manejo sanitário (doenças e medicamentos) e manejo da ordenha (higienização). A importância deste estudo é baseada na sustentabilidade das pequenas propriedades rurais e no impacto da qualidade do leite sobre seus produtos derivados consumidos pela população. Após o entendimento da realidade das pequenas propriedades rurais foram realizados estudos para entendimento da adequação das principais ferramentas do Lean Manufacturing para então desenvolvermos uma ferramenta de controle de simples utilização e fácil visualização pelo produtor sobre a qualidade do leite, que por sua vez também impacta diretamente no valor pago pelo lacticínio ao produtor de leite. O kit de ferramentas Lean Manufcturing proposto estrutura um modelo de controle de gestão visual composto por Indicadores de CBT (Contagem Bacteriana Total), Indicadores de CCS (Contagem de Células Somáticas), Indicadores de Composição Mínima do Leite (gordura, proteína, lactose, sólidos totais e sólidos desengordurados ou extrato seco desengordurado) ema planilha para coletas dos dados que possibilitam demonstrar ao produtor a atual qualidade do leite que está entregando para os lacticínios, bem como identificar os aspectos que estão impactando negativamente no seu desempenho
Le travail du coton chez les Ema de Timor portugais
No full text2. Brigitte Clamagirand (C.N.R.S., Paris) telah dua kali tinggal dalam watu jang lama di daerah penduduk Kemak, Timor Portugis, untuk mengadakan penjelidikan. Penulis memaparkan berbagai tahap pengerdjaan kapas, jang hanja dikerdjakan oleh kaum wanita; untuk tiap tahap jang penting, mulai dari membersihkan kapas dari bidji2-nja sampai memberi warna (proses ikai) dan waktu penenunan, penulis memberikan semua istilah tehniknja beserta photo dan skemanja.(2) Brigitte Clamagirand (CRNS, Paris) has made two field trips of long duration among the Ema (Kemak) of Portuguese Timor; she presents us with the diverse phases of working of cotton, which, there, is exclusively the work of women. For each of the principal phases, from the gining of the wad, to the tinting (ikat process), to the weaving (with a back strap loom), the author gives us the technical terms with photographs and schémas.Clamagirand Brigitte. Le travail du coton chez les Ema de Timor portugais. In: Archipel, volume 3, 1972. pp. 55-80
Expressão heteróloga e utilização da proteína recombinante EMA-1 de Theileria equi como imunobiológico
Get PDFEquine theileriosis is considered to be one of the most important parasitic diseases
that affect horses, and has great economic impact on the equine industry. The
disease is caused by the etiologic agent Theileria equi, which is classified as a
hematozoan. The losses associated with equine theileriosis are related to clinical
manifestation as well as restriction to international travel to positive horses. Chronic
infected equines suffer the risk of the disease relapse which leads to losses in
reproduction performance and are potentially disseminators of the disease. In the last
years, studies on the immunologic diagnosis and vaccination against T. equi have
focused to obtain distinct antigenic proteins. On the outer membrane of this
protozoan, major surface proteins has been characterized and named as EMAs (equi
merozoite antigen). Of these, EMA-1 has been used as antigen for diagnosis due to
its conservation in diverse isolates. Its role as a potential immunogen has been well
documented due its ability to stimulate a humoral response with production of
specific antibodies in infected animals. Through this antibodies one can used as tool
for immune diagnostic of this disease. EMA-1 is also a strong candidate to be use as
a vaccine in the control of equine theileriosis. In this study we used the Pichia
pastoris yeast as expression system for the production of the EMA-1 protein of T.
equi and evaluated its antigenicity and immunogenicity. When tested for antigenicity,
the recombinant protein was recognized by antibodies form chronic T. equi infected
horses, suggesting that epitopes of the native were conserved in the recombinant
protein. Also we were able to observe that this protein was immunogenic in mice.
The data obtained in this study demonstrated that the yeast P. pastoris is an
expression system of heterologous protein suitable for the production of EMA-1 from
T. equi.A Theileriose eqüina é considerada uma das principais doenças parasitárias que
acometem os eqüinos, acarretando grande impacto econômico na equinocultura. A
doença é causada pelo hematozoário Theileria equi. As perdas econômicas
associadas à theileriose eqüina estão relacionadas tanto aos fatores clínicos, quanto
à restrição ao trânsito internacional de animais soropositivos, já que animais
portadores crônicos são passíveis de reagudizações, gerando perda de performance
física e reprodutiva, e são potencialmente disseminadores da enfermidade. Nos
últimos anos, os estudos sobre o diagnóstico imunológico e vacinação contra T. equi
concentram-se na obtenção de frações antigênicas. Na membrana externa deste
protozoário foram caracterizadas proteínas principais de superfície denominadas de
EMAs (equi merozoite antigen). Dentre estas, a EMA-1 destaca-se como antígeno
para diagnóstico em função de sua conservação entre diversos isolados. Seu papel
também tem sido caracterizado como imunógeno por estimular forte resposta
humoral com produção de anticorpos em animais infectados, podendo ser usado
como ferramenta para imunodiagnóstico dessa doença. EMA-1 é também um
potencial candidato como antígeno vacinal no controle da theileriose equina. Neste
estudo utilizou-se o sistema eucariótico de expressão baseado na levedura
metilotrófica Pichia pastoris, para a produção da proteína EMA-1 de T. equi e a
avaliação quanto a sua antigenicidade e imunogenicidade. Quanto a sua
antigenicidade, a proteína recombinante foi reconhecida por anticorpos de animais
portadores crônicos de T. equi, sugerindo que epítopos nativos foram conservados
na proteína recombinante. Também foi observado que a proteína recombinante foi
capaz de gerar resposta imune em camundongos vacinados com esta proteína. Os
dados obtidos neste estudo demonstram que a levedura P. pastoris é um sistema de
expressão heterólogo adequado para a produção da proteína EMA-1 de T. equi,
podendo ser utilizada como imunobiológico no desenvolvimento de testes
diagnósticos e vacina recombinante
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