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Réplication de l'ADN mitochondrial : identification d’une seconde activité ADN polymérase dans la mitochondrie de S.cerevisiae et Contribution à l’étude du réplisome mitochondrial
No full textAu cours de la croissance des levures, la cellule doit dupliquer sont génome nucléaire et mitochondrial, le processus de réplication est bien moins étudié dans les mitochondries. Néanmoins, si de multiples ADN polymérases sont impliquées dans les processus de réplication et de réparation dans le noyau, il est considéré jusqu’à aujourd’hui qu’une seule ADN polymérase est impliquée dans ces processus dans la mitochondrie. Des résultats récents mettent en exergue le fait que la situation est bien plus compliquée qu’il n’y apparait au départ. Pour élucider le processus de réplication dans la mitochondrie de levure, j’ai focalisé mon intérêt à tenter de purifier et de caractériser le complexe de réplication. Ce travail était important à développer étant donné la découverte au laboratoire d’une seconde ADN polymérase supplémentaire à la polymérase gamma, dans les mitochondries de levure. Une première partie de ma thèse a été de m’investir afin d’obtenir suffisamment de protéines dans le but d’une identification par spectrométrie de masse, compte tenu de la faible proportion des ADN polymérases dans la cellule et en particulier dans la mitochondrie. Nous avons démontré que cette polymérase est codée par le gène unique POL1. Par des techniques d’ultracentrifugation et d’analyse biochimiques, j’ai réussi à isoler et caractériser un complexe de réplication mitochondrial. Des techniques d’exclusion chromatographiques ont permis d’attribuer une masse native à ce complexe. Sa composition a été étudiée grâce à des colonnes ioniques et hydrophobes, une autre méthode d’analyse repose sur l’utilisation de colonnes d’affinité afin de reconstituer in-vitro les interactions existant entre plusieurs protéines présumées impliquées. Ainsi, un réseau d’interactions impliquant les deux ADN polymérases mitochondriales avec cinq autres protéines a été reconstitué. La masse native de différentes formes stables de ce complexe se situent à 500 kDa ou au-delà de 1 MDa.During yeast growth, cells must duplicate their nuclear and mitochondrial DNA. The replication process involved is less studied in mitochondria. Nevertheless, if multiple DNA polymerases are implicated in the nuclear replication and repair mechanisms, until now it is believed that only one DNA polymerase is involved in these processes in mitochondria. Recent results pointed out that the situation is more complicated than preliminary believed. To elucidate the replication process in yeast mitochondria I focused my interest in attempts to purify and characterize the replication complexes. This work was important to develop in accord with the discovery in the laboratory of a second DNA polymerase in addition to the polymerase gamma in yeast mitochondria. One first part of my thesis was to hardly purify enough of this enzyme to be allowed to identify it by mass spectrometry as the DNA polymerase alpha, encoded by the unique POL1 gene. By ultracentrifugation and biochemical techniques, I succeeded to purify the complex. Exclusion chromatographies were managed to elucidate the native mass of this complex. In addition ionic and hydrophobic chromatographic columns were carried out to determine its composition. Another way to study the complex was the reconstitution in vitro of the interactions happening with some usual suspect proteins with the help of chromatographic affinity columns. I reconstituted partly an interactions model network, including the two mitochondrial DNA polymerases and 5 others proteins implicated in replication. I determined the mass of different stable forms of the isolated complexes, around 500 kDa and over 1 MD
Réplication de l'ADN mitochondrial : identification d’une seconde activité ADN polymérase dans la mitochondrie de S.cerevisiae et Contribution à l’étude du réplisome mitochondrial
No full textAu cours de la croissance des levures, la cellule doit dupliquer sont génome nucléaire et mitochondrial, le processus de réplication est bien moins étudié dans les mitochondries. Néanmoins, si de multiples ADN polymérases sont impliquées dans les processus de réplication et de réparation dans le noyau, il est considéré jusqu’à aujourd’hui qu’une seule ADN polymérase est impliquée dans ces processus dans la mitochondrie. Des résultats récents mettent en exergue le fait que la situation est bien plus compliquée qu’il n’y apparait au départ. Pour élucider le processus de réplication dans la mitochondrie de levure, j’ai focalisé mon intérêt à tenter de purifier et de caractériser le complexe de réplication. Ce travail était important à développer étant donné la découverte au laboratoire d’une seconde ADN polymérase supplémentaire à la polymérase gamma, dans les mitochondries de levure. Une première partie de ma thèse a été de m’investir afin d’obtenir suffisamment de protéines dans le but d’une identification par spectrométrie de masse, compte tenu de la faible proportion des ADN polymérases dans la cellule et en particulier dans la mitochondrie. Nous avons démontré que cette polymérase est codée par le gène unique POL1. Par des techniques d’ultracentrifugation et d’analyse biochimiques, j’ai réussi à isoler et caractériser un complexe de réplication mitochondrial. Des techniques d’exclusion chromatographiques ont permis d’attribuer une masse native à ce complexe. Sa composition a été étudiée grâce à des colonnes ioniques et hydrophobes, une autre méthode d’analyse repose sur l’utilisation de colonnes d’affinité afin de reconstituer in-vitro les interactions existant entre plusieurs protéines présumées impliquées. Ainsi, un réseau d’interactions impliquant les deux ADN polymérases mitochondriales avec cinq autres protéines a été reconstitué. La masse native de différentes formes stables de ce complexe se situent à 500 kDa ou au-delà de 1 MDa.During yeast growth, cells must duplicate their nuclear and mitochondrial DNA. The replication process involved is less studied in mitochondria. Nevertheless, if multiple DNA polymerases are implicated in the nuclear replication and repair mechanisms, until now it is believed that only one DNA polymerase is involved in these processes in mitochondria. Recent results pointed out that the situation is more complicated than preliminary believed. To elucidate the replication process in yeast mitochondria I focused my interest in attempts to purify and characterize the replication complexes. This work was important to develop in accord with the discovery in the laboratory of a second DNA polymerase in addition to the polymerase gamma in yeast mitochondria. One first part of my thesis was to hardly purify enough of this enzyme to be allowed to identify it by mass spectrometry as the DNA polymerase alpha, encoded by the unique POL1 gene. By ultracentrifugation and biochemical techniques, I succeeded to purify the complex. Exclusion chromatographies were managed to elucidate the native mass of this complex. In addition ionic and hydrophobic chromatographic columns were carried out to determine its composition. Another way to study the complex was the reconstitution in vitro of the interactions happening with some usual suspect proteins with the help of chromatographic affinity columns. I reconstituted partly an interactions model network, including the two mitochondrial DNA polymerases and 5 others proteins implicated in replication. I determined the mass of different stable forms of the isolated complexes, around 500 kDa and over 1 MD
La révolution de velours dans les romans de Sylvie Germain et de Pascale Tison
No full textIn the report we parallel the two French-language novels, by Sylvie Germain and Pascale Tison, which deal with the velvet revolution in Prague. The French author in the novel Immensités focuses primarily on the internal transformation of its main character Prokop Poupa. This is more a personal revolution against the background of the historical one. While reading the poem What God? A Man? by Bridel, the man falls under the influence of the poem and opens himself to new dimension of his life and he begins to perceive God. The story of the heroes of the novel Le Velours de Prague by Belgian artist starts in 1968, by their emigration to Canada and continues their search for the promised land. Their stories form a mosaic, which links together, this gives a picture of the time in which these human destinies were developed. The author recalls the symbolism of twenty years, in which the Czech history always brought significant changes. Both novels proof the fact that literature not only responds to events that change the course of history, but above all human destinies
Réplication de l'ADN mitochondrial (identification d'une seconde activité ADN polymérase dans la mitochondrie de S.cerevisiae et Contribution à l'étude du réplisome mitochondrial)
No full textAu cours de la croissance des levures, la cellule doit dupliquer sont génome nucléaire et mitochondrial, le processus de réplication est bien moins étudié dans les mitochondries. Néanmoins, si de multiples ADN polymérases sont impliquées dans les processus de réplication et de réparation dans le noyau, il est considéré jusqu à aujourd hui qu une seule ADN polymérase est impliquée dans ces processus dans la mitochondrie. Des résultats récents mettent en exergue le fait que la situation est bien plus compliquée qu il n y apparait au départ. Pour élucider le processus de réplication dans la mitochondrie de levure, j ai focalisé mon intérêt à tenter de purifier et de caractériser le complexe de réplication. Ce travail était important à développer étant donné la découverte au laboratoire d une seconde ADN polymérase supplémentaire à la polymérase gamma, dans les mitochondries de levure. Une première partie de ma thèse a été de m investir afin d obtenir suffisamment de protéines dans le but d une identification par spectrométrie de masse, compte tenu de la faible proportion des ADN polymérases dans la cellule et en particulier dans la mitochondrie. Nous avons démontré que cette polymérase est codée par le gène unique POL1. Par des techniques d ultracentrifugation et d analyse biochimiques, j ai réussi à isoler et caractériser un complexe de réplication mitochondrial. Des techniques d exclusion chromatographiques ont permis d attribuer une masse native à ce complexe. Sa composition a été étudiée grâce à des colonnes ioniques et hydrophobes, une autre méthode d analyse repose sur l utilisation de colonnes d affinité afin de reconstituer in-vitro les interactions existant entre plusieurs protéines présumées impliquées. Ainsi, un réseau d interactions impliquant les deux ADN polymérases mitochondriales avec cinq autres protéines a été reconstitué. La masse native de différentes formes stables de ce complexe se situent à 500 kDa ou au-delà de 1 MDa.During yeast growth, cells must duplicate their nuclear and mitochondrial DNA. The replication process involved is less studied in mitochondria. Nevertheless, if multiple DNA polymerases are implicated in the nuclear replication and repair mechanisms, until now it is believed that only one DNA polymerase is involved in these processes in mitochondria. Recent results pointed out that the situation is more complicated than preliminary believed. To elucidate the replication process in yeast mitochondria I focused my interest in attempts to purify and characterize the replication complexes. This work was important to develop in accord with the discovery in the laboratory of a second DNA polymerase in addition to the polymerase gamma in yeast mitochondria. One first part of my thesis was to hardly purify enough of this enzyme to be allowed to identify it by mass spectrometry as the DNA polymerase alpha, encoded by the unique POL1 gene. By ultracentrifugation and biochemical techniques, I succeeded to purify the complex. Exclusion chromatographies were managed to elucidate the native mass of this complex. In addition ionic and hydrophobic chromatographic columns were carried out to determine its composition. Another way to study the complex was the reconstitution in vitro of the interactions happening with some usual suspect proteins with the help of chromatographic affinity columns. I reconstituted partly an interactions model network, including the two mitochondrial DNA polymerases and 5 others proteins implicated in replication. I determined the mass of different stable forms of the isolated complexes, around 500 kDa and over 1 MDaBORDEAUX2-Bib. électronique (335229905) / SudocSudocFranceF
BEI DER WIEDEN, Helge, Ein norddeutscher Renaissancefürst. Ernst zu Holstein-Schaumburg; 1569-1622
No full textEn ses vingt ans de règne (1601-1622), le comte d’Empire Ernst zu Holstein-Schaumburg réalise dans sa résidence de Bückeburg un programme de construction qui nous a légué quelques-uns des plus beaux exemples de la (tardive) »Renaissance des bords de la Weser«. Ami du faste et de la musique, mais aussi législateur respecté (son ordonnance ecclésiastique – encore en vigueur aujourd’hui – et son ordonnance de police générale furent lors de ses funérailles portées sur un coussin de velours noir à..
Vier eeuwen behang; De geschiedenis van de wandbespanning in Nederland
No full text'Vier eeuwen behang' beschrijft de geschiedenis van de wandbespanning in Nederland. De eerste kostbare veloutéwandbespanning was slechts weggelegd voor de beter gesitueerden. Met de opkomst in de 19de eeuw van het zogenaamde ' papier zonder einde' kon ook de gewone burger de wanden van zijn woning verfraaien met dessins en kleuren die vaak nog gelijkenis vertoonden met de dure wandbespanningen van vroeger. In dit boek worden achtereenvolgens beschreven de wandbespanningen van velours, trijp en goudleer, geschilderde behangsels en behangselpapier. Daarnaast wordt in ruime mate aandacht geschonken aan de Nederlandse ontwerpers, fabrikanten en leveranciers van behang en behangsel papier
Vaclav Havel : le premier président postmoderne?
No full textDans cet article, l’auteur tente de cerner la pensée philosophico-politique du dramaturge tchèque et ex-dissident Vaclav Havel. À la lumière de sa critique à l’égard de la modernité et de l’européocentrisme, l’auteur s’interroge sur la portée de la réflexion de celui qui fut porté à la présidence de son pays suite à la révolution de velours, et se demande si elle peut s’inscrire dans le sillon postmoderniste.In this article, the author tries to define the philosophical and political thought of the Czech dramatist and the ex-dissident Vaclav Havel. In the light of his critical position against modernity and europeocentrism, the author is questioning himself about the Havel's thought's impact, and wondering if this one can be connected with the postmodern thought
Biochemical and Structural Insights into Microtubule Perturbation by CopN from Chlamydia pneumoniae
No full textInternational audienceAlthough the actin network is commonly hijacked by pathogens, there are few reports of parasites targeting microtubules. The proposed member of the LcrE protein family from some Chlamydia species (e.g. pCopN from C. pneumoniae) binds tubulin and inhibits microtubule assembly in vitro. From the pCopN structure and its similarity with that of MxiC from Shigella, we definitively confirm CopN as the Chlamydia homolog of the LcrE family of bacterial proteins involved in the regulation of type III secretion. We have also investigated the molecular basis for the pCopN effect on microtubules. We show that pCopN delays microtubule nucleation and acts as a pure tubulin-sequestering protein at steady state. It targets the β subunit interface involved in the tubulin longitudinal self-association in a way that inhibits nucleotide exchange. pCopN contains three repetitions of a helical motif flanked by disordered N- and C-terminal extensions. We have identified the pCopN minimal tubulin-binding region within the second and third repeats. Together with the intriguing observation that C. trachomatis CopN does not bind tubulin, our data support the notion that, in addition to the shared function of type III secretion regulation, these proteins have evolved different functions in the host cytosol. Our results provide a mechanistic framework for understanding the C. pneumoniae CopN-specific inhibition of microtubule assembly
Structural snapshots of the kinesin‐2 OSM‐3 along its nucleotide cycle: implications for the ATP hydrolysis mechanism
No full textInternational audienceMotile kinesins are motor proteins that translocate along microtubules as they hydrolyze ATP. They share a conserved motor domain which harbors both ATPase and microtubule-binding activities. An ATP hydrolysis mechanism involving two water molecules has been proposed based on the structure of the kinesin-5 Eg5 bound to an ATP analog. Whether this mechanism is general in the kinesin superfamily remains uncertain. Here, we present structural snapshots of the motor domain of OSM-3 along its nucleotide cycle. OSM-3 belongs to the homodimeric kinesin-2 subfamily and is the Caenorhabditis elegans homologue of human KIF17. OSM-3 bound to ADP or devoid of a nucleotide shows features of ADP-kinesins with a docked neck-linker. When bound to an ATP analog, OSM-3 adopts a conformation similar to those of several ATP-like kinesins, either isolated or bound to tubulin. Moreover, the OSM-3 nucleotide binding site is virtually identical to that of ATP-like Eg5, demonstrating a shared ATPase mechanism. Therefore, our data extend to kinesin-2 the two-water ATP hydrolysis mechanism and further suggest that it is universal within the kinesin superfamily
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