Chung Hwa University of Medical Technology
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Investigation the Effect of Lactobacilli on Intestinal Inflammation
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授權.................................................................................................................i
目錄................................................................................................................ii
英文縮寫........................................................................................................v
中文摘要......................................................................................................vii
英文摘要.......................................................................................................ix
壹、導論...........................................................................................................1
貳、研究構想.................................................................................................22
參、研究材料與方法....................................................................................25
肆、結果........................................................................................................41
伍、討論........................................................................................................48
陸、結論.........................................................................................................56
柒、參考文獻.................................................................................................58
捌、表.............................................................................................................71
玖、圖.............................................................................................................74
拾、附表.......................................................................................................90
拾壹、附圖...................................................................................................93[[abstract]]近年來，益生菌(probiotics)應用於改善腸道功能之效用受到相當的
重視，因此本研究利用本實驗室篩選所得具有抗發炎潛力之 L6 乳酸菌
株作為實驗材料，採用人類腸道腺癌細胞株(Caco-2)之細胞培養模式，
以及利用含 2.5%葡聚醣硫酸鈉(Dextran sodium sulfate, DSS)之飲水誘發
C57BL/6 小鼠產生急性腸炎為實驗模式，探討乳酸菌對於改善腸道發炎
之作用及其可能之機轉。由細胞培養實驗結果發現，以不同濃度之 L6
乳酸菌處理 Caco-2 細胞株 24 或 48 小時後，其細胞生存力沒有下降之
現象，且細胞形態完整。在預處理不同濃度之 L6 乳酸菌 6 小時後，再
加入 TNF-α 共同培養 12 小時後，其腸道細胞分泌 IL-8 之含量有顯著下
降之現象(P<0.05)。另外，在 L6 乳酸菌預處理 Caco-2 細胞株 6 小時後，
再加入 TNF-α 共同培養 1 小時，細胞質的 p-IκB 蛋白表現量與細胞核內
NF-κB 蛋白含量皆有顯著性下降之現象(P<0.05)。從上述結果可知，L6
乳酸菌可以藉由抑制 NF-κB 路徑的活化，而抑制 IL-8 分泌之作用，達
到抑制腸道細胞株發炎之現象。本研究之動物實驗部分之結果發現，在
飼養第四天後，DSS 組及 DSS 合併不同劑量 L6 乳酸菌處理組小鼠之飲
水及飲食量有開始減少之現象，而在第八天後，DSS 組及 DSS 合併不
同 L6 乳酸菌處理組之小鼠之體重、腸道長度皆有顯著減少之現象
(P<0.05)，而脾臟皆有腫大之現象(P<0.05)。由其臨床症狀評估發現，在
餵食 1×107 CFU/ml L6 乳酸菌第八天後其腸道腹瀉與出血情形皆有顯著
低於 DSS 組之現象(P<0.05)。由組織病理檢驗可知，在餵食第八天後，
DSS 組有腸隱窩明顯受損、杯狀細胞明顯減少、粘膜水腫以及細胞有嚴
重浸潤等現象，然而在 1×107 L6 CFU/ml 乳酸菌處理後，上述症狀均有
明顯改善之現象。另外，在餵食 1×107 CFU/ml L6 乳酸菌第八天後，小
鼠腸道組織細胞之 TNF-α 含量有顯著低於 DDS 組之現象(P<0.05)，而
IL-10 及 IFN-γ 含量則有顯著高於 DSS 組之現象(P<0.05)，另外，1×107
CFU/ml L6 乳酸菌處理組在脾臟細胞 IL-6 分泌量有顯著低於 DSS 組
(P<0.05)，而 IL-10 分泌量有顯著高於 DSS 組之現象(P<0.05)。由以上結
果可知適當濃度之 L6 乳酸菌具有改善腸道細胞株因 TNF-α 誘發細胞發
炎以及經由 DSS 誘發小鼠急性腸道發炎之症狀，其原因可能是透過調
節 NF-κB 路徑之活化作用以及 TNF-α、IL-10、IL-6、IFN-γ 等細胞激素
分泌有密切之關係
The role of transcription factor nuclear respiratory factor 1 in regulating capping protein (actin filament) muscle Z-line alpha 2 gene expression
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口試委員會審定書 -------------------------------------------------------------------------------- i
授權書 ----------------------------------------------------------------------------------------- ii
誌謝 ------------------------------------------------------------------------------------------- iii
Abstract -------------------------------------------------------------------------------------- iv
中文摘要 --------------------------------------------------------------------------------------- v
Contents -------------------------------------------------------------------------------------- vi
Figure contents ------------------------------------------------------------------------------- ix
Abbreviation ---------------------------------------------------------------------------------- xi
Chapter 1 Introduction
1-1 Introduction to capping proteins ------------------------------------------------------ 1
1-1-1 Capping proteins ---------------------------------------------------------------------- 1
1-1-2 Functions of capping proteins in neuronal differentiation ----------------------------- 2
1-2 CAPZA2 -------------------------------------------------------------------------------- 3
1-3 NRF-1 --------------------------------------------------------------------------------- 3
1-3-1 Structure and functions of NRF-1------------------------------------------------------- 3
1-3-2 Role of NRF-1 in neurite outgrowth ---------------------------------------------------- 4
1-3-3 NRF-1-increased neurite outgrowth mediated by its downstream genes -------------------- 5
1-4 PGC-1 --------------------------------------------------------------------------------- 5
1-4-1 PGC-1 family -------------------------------------------------------------------------- 5
1-4-2 NRF-1 activation by PGC-1 co-activator ------------------------------------------------ 6
1-4-3 Functions of PGC-1 in neurons --------------------------------------------------------- 7
1-5 Specific aims ------------------------------------------------------------------------- 7
Chapter 2 Materials and methods
2-1 Cell culture -------------------------------------------------------------------------- 8
2-2 Plasmid constructs -------------------------------------------------------------------- 8
2-3 Transient transfection ---------------------------------------------------------------- 9
2-4 Dual-luciferase assay ----------------------------------------------------------------- 10
2-5 Preparation of nuclear extracts ------------------------------------------------------- 11
2-6 Gel electrophoretic mobility shift assays (EMSA) -------------------------------------- 12
2-7 RNA isolation and reverse transcription (RT)-polymerase chain reaction (PCR) ---------- 13
2-8 Measurement of neurite outgrowth ------------------------------------------------------ 14
2-9 Statistics ---------------------------------------------------------------------------- 14
Chapter 3 Results
3-1 The basal promoter activity of CAPZA2 is located at -42 to -477 ----------------------- 15
3-2 Mutation of NRF-1 sites decreases CAPZA2 basal promoter activity ---------------------- 16
3-3 NRF-1 binds to NRF-1 elements on CAPZA2 promoter -------------------------------------- 18
3-4 Overexpression of NRF-1 increases CAPZA2 promoter activity but dominant-negative NRF-1
decreases promoter activity ----------------------------------------------------------- 18
3-5 Mutation of both pGL3-477M1 and pGL3-477M2 sites influences NRF-1-induced CAPZA2 promoter
activity but not that of pGL3-477M1 and pGL3-477M2 alone ------------------------------ 20
3-6 Dominant-negative NRF-1 further decreases promoter activity of single mutation of CAPZA2
gene but not that of double mutation -------------------------------------------------- 21
3-7 Overexpression of PGC-1 increases CAPZA2 promoter activity ---------------------------- 21
3-8 Mutation of putative NRF-1 binding sites influences PGC-1-induced CAPZA2 promoter activity
--------------------------------------------------------------------------------------- 22
3-9 CAPZA2 may not involve in neurite outgrowth ------------------------------------------- 23
Chapter 4 Discussion
4-1 NRF-1 and PGC-1 regulates CAPZA2 gene promoter ---------------------------------------- 24
4-2 One NRF-1 site is sufficient to drive CAPZA2 expression ------------------------------- 25
4-3 NRF-1 regulates CAPZA2 promoter in a cell-specific manner ----------------------------- 26
4-4 Several transcription factors may involve in regulating CAPZA2 expression ------------- 26
4-5 CAPZA2 may not involve in neurite outgrowth ------------------------------------------- 27
Chapter 5 Conclusion -------------------------------------------------------------------------- 29
References ------------------------------------------------------------------------------------ 30
Figures --------------------------------------------------------------------------------------- 35
作者簡歷---------------------------------------------------------------------------------------- 59[[abstract]]CapZ為異雙體蛋白質，由a及b次單位所組成，其功能是結合到肌動蛋白絲的barbed end上，以防止游離的肌動蛋白單體再結合至肌動蛋白絲上以及防止已結合之肌動蛋白單體從上脫落，有維持肌動蛋白絲穩定之作用。CAPZA2屬於capping protein的一個次單位，在CAPZA2基因的啟動子上有兩個可能的NRF-1 (Nuclear respiratory factor-1)的結合位，因此我們懷疑CAPZA2很可能是NRF-1轉錄因子調控的下游基因之一。然而，目前有關CAPZA2在哺乳動物的神經細胞中的調控表現仍不清楚。因此在本篇的研究中，我們將探討CAPZA2在細胞中是如何被調控表現且此過程是否與NRF-1的調控有關。在研究啟動子的調控中，我們選殖出不同長度的CAPZA2啟動子片段並且進行Dual-luciferase 的分析。發現在啟動子-42/-477片段具有CAPZA2基本啟動子活性，若進一步將NRF-1的結合位做突變之後會減少此基因啟動子之活性。另外由EMSA的結果證明， NRF-1會結合至此基因啟動子上的兩個NRF-1結合位。進一步，大量表現全長的NRF-1會促進CAPZA2啟動子之活性，反之大量表現競爭抑制的NRF-1則抑制該活性，因此NRF-1對於調控CAPZA2表現是很重要之媒介者。由以上的結果得到一個結論：NRF-1會結合到CAPZA2啟動子上的兩個NRF-1結合位，並且調控此基因的表現。
Capping protein is a heterodimer that consists of a and b subunits and binds to the barbed end of actin filament to prevent additional monomer G-actin binding and stabilize the structure of actin filament. One of the capping protein subunits, CAPZA2, has two putative binding sites for transcription factor nuclear respiratory factor-1 (NRF-1) on its promoter. There it may be a downstream gene of NRF-1. However, the regulation of CAPZA2 expression in mammalian neurons is currently unknown. In this study, we investigated how to regulate the expression of CAPZA2 gene and if NRF-1 regulates this process. To investigate the regulation of CAPZA2, we cloned different fragments of CAPZA2 promoter and subjected them to promoter studies with dual-luciferase assays. We found that the basal promoter region is located on -42/-477 fragment of CAPZA2 promoter and mutation of putative NRF-1 binding sites decreased CAPZA2 promoter activity. Furthermore, EMSA (gel electrophoretic mobility shift assay) showed that NRF-1 binds to these two putative binding sites in vitro. To further study the role of NRF-1 in regulating CAPZA2 expression, we cloned a series of shorter fragments of CAPZA2 promoter and found that NRF-1 binding sites are on the critical region for its expression. In addition, overexpression of full-length NRF-1 increased CAPZA2 promoter activity, whereas overexpression of dominant-negative NRF-1 decreased that. Therefore, NRF-1 is the major mediator in regulating CAPZA2 expression. According to these results, we concluded that NRF-1 binds to its putative binding sites indeed and regulates the expression of CAPZA2 gene
Lactobacilli reduced interleukine-8 expression through down-regulation of NF-κB activation in human colon cancer cell lines
No full text謝誌 ii
授權書 iv
中文摘要 x
英文摘要 xii
縮寫表 xiii
壹、導論 1
一、發炎反應與免疫系統 2
1.1發炎的原因 2
1.2急性發炎與慢性發炎 3
1.3發炎的訊息調控路徑 4
1.4發炎之相關因子 6
二、腸道發炎與疾病 8
2.1腸道免疫系統 8
2.2大腸直腸癌（Colon cancer）之罹患率 9
2.3腸道發炎性疾病 10
2.4腸道發炎性疾病的預防與治療 11
三、益生菌與免疫調節 13
3.1益生菌的定義 13
3.2益生菌的分類 13
3.3乳酸菌的功能 14
3.4乳酸菌於腸道發炎性疾病之應用 18
貳、研究構想 21
參、材料與方法 24
一、實驗材料之製備 25
1.1乳酸菌株培養與繼代 25
1.2紫外光致死( UV-killed )乳酸菌體之製備 25
1.3 細胞培養與繼代 26
二、細胞存活率 27
三、細胞形態觀察 28
四、細胞激素分析 28
五、細胞內NF-κB路徑調節分子之表現分析 29
六、轉錄因子NF-κB與DNA結合活性分析 32
七、統計分析 33
肆、結果 34
伍、討論 42
陸、結論 48
柒、參考文獻 51
捌、圖 60
玖、附表 73
拾、附圖 75[[abstract]]乳酸菌屬（Lactobacillus spp.）為保健食品中常使用的重要益生菌之一。本研究為探討乳酸菌菌體對於腸道發炎之影響，因此利用紫外線致死（UV-killed）之不同乳酸菌株（L1~L9或S10）為實驗材料，配合人類腸癌細胞株（human colon cancer cells, HT-29）以TNF-α誘發發炎之實驗模式，研究乳酸菌對於HT-29細胞株在細胞發炎之狀況下，對其細胞激素（cytokine）分泌之影響及其調控機轉。由本研究實驗結果可知，以不同品系之乳酸菌合併或不合併TNF-α誘發HT-29細胞發炎之狀況下，皆不影響HT-29細胞株之細胞生存力。配合倒立式相位差微鏡觀察之實驗結果亦可發現HT-29細胞株之細胞數量及形態並不受影響。進一步以不同品系之乳酸菌合併TNF-α誘發HT-29細胞發炎之實驗模式下，可見腸道細胞在以L1、L3或L9菌株處理24小時後，其介白素-8之分泌量有顯著低於TNF-α誘發組之現象（P<0.05）；在IL-10的分泌量方面，當腸道細胞以不同品系之乳酸菌株處理後，其IL-10的分泌量與TNF-α誘發組間皆沒有顯著變化。本研究進一步分別以菌數1×107、108或109 CFU/mL之L1、L3及L9乳酸菌分別處理經TNF-α誘發發炎之HT-29細胞株，觀察其對NF-κB訊息路徑之調控作用。由西方墨點法及NF-κB與DNA結合活性試驗之結果可見，L1、L3或L9實驗組在特定菌數下，有明顯減少細胞質IκB的磷酸化及降低細胞核內NF-κB與DNA結合活性之表現（P<0.05）。因此，綜合上述之實驗結果發現特定的乳酸菌株能有效降低經TNF-α誘導發炎之HT-29細胞株細胞激素IL-8分泌量之作用；其調控作用是透過抑制細胞質IκB的磷酸化及降低細胞核內NF-κB與DNA結合活性。
Lactobacillus species is one of the important probiotic used for functional food. To evaluate the effect of Lactobacillus on intestinal inflammation, the different UV-killed Lactobacillus strains (L1 ~ L9 or S10) co-culture with an intestinal cell line-HT-29 cells was as a experimental model, and its cell cytokine secretion and regulation mechanism were measured in this study. According to the results, when HT-29 cells was treated with different Lactobacillus strains and co-culture with or without TNF-α for 24 hours, the cell viability was not significantly change. The cell number and shape of HT-29 cells were not affected. The secretion levels of cytokine IL-10 was not significantly change in all of Lactobacillus strains groups. But, the IL-8 secretion in the L1, L3 or L9 groups were significantly decreased as compared with TNF-α control group (P<0.05) when various Lactobacillus strains co-culture with HT-29 cells induced by TNF-α for 6 hours. In addition, the cytoplasmic IκB phosphorylation and nucleic NF-κB-DNA binding activity were significantly decreased induced by TNF-α. We identified the specific Lactobacillus strains can reduce cytokine IL-8 secretion levels. The regulate mechanism maybe through the inhibition of cytoplasmic IκB phosphorylation and reduce NF-κB-DNA binding activity in HT-29 cells induced by TNF-α（P<0.05）
The DNA sequences diversity of Fusarium oxysporum
Get PDF中文摘要 II
英文摘要 III
致謝 V
壹、 前人研究 2
一、 鐮孢菌介紹 2
二、 生理發育 3
三、 分類依據 4
四、 特異性核酸序列介紹 4
五、 生物資訊 5
六、 生物晶片 6
七、 研究方向 7
貳、 材料與方法 8
一、 材料 8
(一)、菌株來源、培養及保存 8
二、 真菌DNA萃取 8
三、 聚合酶連鎖反應 (polymerase chain reaction, PCR) 9
四、 PCR產物之純化 9
五、 PCR產物與質體之接合作用 9
六、 核酸轉型作用 10
七、 DNA定序與引子組設計 10
八、 生物資訊分析 11
參、 結果與討論 12
一、 鑑定相關性基因之分析 12
二、 β-Tubulin (BT2) 基因序列之相似度分析 12
三、 Elongation Factor ( EF )基因序列之相似度分析 13
四、 Fusarium Osmotin Resistance ( FOR3 ) 基因序列之相似度分析 13
五、 Internal Transcribed Spacer ( ITS ) 核酸序列之相似度分析 14
六、 生物晶片之設計 15
八、 引子組設計 16
肆、 文獻 18
圖表 23
表一、 NCBI資料庫中不同鐮孢菌菌株之ITS序列及其相關資料。 24
表二、NCBI資料庫中不同鐮孢菌菌株之EF序列及其相關資料。 25
表三、NCBI資料庫中不同鐮孢菌菌株之BT2序列及其相關資料。 26
表四、寡核苷酸生物晶片之設計。 27
表五A、BT2測試點對不同分宿主離株之雜合反應型。 29
表五B、EF測試點對不同宿主分離株之雜合反應型。 30
表五C、FOR測試點對不同宿主分離株之雜合反應型。 31
表五D、ITS測試點對不同宿主分離株之雜合反應型。 32
圖一、作物所分離Fusarium菌株的BT2核酸序列之相似度分析。 34
圖二、作物所分離Fusarium菌株的EF核酸序列之相似度分析。 35
圖三、不同來源之Fusarium染色體DNA以 FOR3-F及FOR3-R引子組所進行之PCR增幅。 36
圖四、不同來源Fusarium之FOR3基因序列以多序列比對軟體所進行之相似度分析。 37
圖五、作物所分離Fusarium菌株的ITS核酸序列之相似度分析。 38
圖六A、FOR基因之多序列比對及測試點所在位置。 39
圖六B、FOR基因之多序列比對及測試點所在位置。 40
圖七、EF基因之多序列比對及測試點所在位置。 41
圖八A、ITS基因之多序列比對及測試點所在位置。 42
圖八B、ITS基因之多序列比對及測試點所在位置。 43
圖八C、ITS基因之多序列比對及測試點所在位置。 44
圖九、BT2基因之多序列比對及測試點所在位置。 45
圖十、不同來源鐮孢菌JN995193-EF-30核酸序列之多序列比對及引子設計位置。 46
附錄 47
附錄二 49[[abstract]]鐮孢菌 (Fusarium oxysporum) 為台灣地區田間常見的病原真菌，造成多種農作物包括香蕉、西瓜、香瓜等高經濟作物之病害，為台灣重要病害之一。本病原菌在早期多以顯微鏡下觀察型態來進行分類，近年使用Polymerase chain reaction 、Restriction fragment length polymorphism、Amplified fragment length polymorphism等方法來進行分類。由於Fusarium oxysporum的宿主廣泛，對不同宿主產生分化型(Formae Special)，由於分化型日益增加，因此在分類工作需要有更多的資料來判斷分化型的差異所在。本研究利用核酸序列比對方法去分析不同來源之Internal Transcribed Spacer (ITS)、Intergenic Spacer (IGS)、Elongation Factor(EF)、Fusarium Osmotin Resistance (FOR)等之相似度分析，可了解不同分化型菌株核酸序列間之差異。研究成果顯示FOR3核酸序列及比對後相似度較高之序列資料的結果可區分成8個Divisions，定序後之序列以BLAST搜尋NCBI資料庫發現此序列與Nectria及Gibberella的相似度較高其中FDS與Nectria其相似度86% ；Fo. Tomato和Fo. Cucumber與Gibberella相似度80%。以NCBI搜尋作物的Fusarium oxysporum f. sp.的不同來源之宿主分離株統整後進行相似度分析，分別建立ITS、EF及BT2的小型資料庫，經多序列比對後可發現ITS資料庫可分為3個Divisions。EF資料庫可分為2個Divisions。BT2資料庫可分為2個Divisions。ITS、EF及BT2核酸序列對不同宿主之分離株不具差異性，但多序列比對仍有顯示特異性序列，將有差異性之序列開發生物晶片之測試點，希望可依測試點所預測之特定反應型以區分宿主間的差異。
Fusarium oxysporum is a common pathogenic fungus in the fields of Taiwan. It causes serious diseases on plants including crops such as bananas, watermelons, melons and other economic crops, and it is one of the serious plant diseases in Taiwan. In the early stage, Fusarium was identified by the patterns under microscope. In recent years, the identify method often used is Polymerase chain reaction, Restriction fragment length polymorphism and Amplified fragment length polymorphism, etc. Because of the wide range of hosts, different Formae Special of Fusarium oxysporum are very much which is specific to their hosts and the association interaction between Fusarium oxysporum f.sp toxicity and hosts will be established. Since the increasing number of Formae Special, it is more and more difficult in identifying the Fusarium oxysporum. In this study, we utilized bioinformatics to analysis the similarity of nucleic acid sequence including Internal Transcribed Spacer (ITS), Intergenic Spacer (IGS), Elongation Factor (EF) and Fusarium Osmotin Resistance (FOR), etc. It can help us to find out the difference between different strains. The result shows FOR3 nucleic acid sequence and similarity higher, and the sequence data results can be divided into eight divisions, after sequencing and comparing to NCBI database found this sequence are similar with Nectria and Gibberella. The FDS and Nectria of similarity is 86%; the Fo. Tomato, Fo. Cucumber and Gibberella of similarity is 80%. By searching Fusarium oxysporum f. sp.'s crop from different host on NCBI and integrating similarity analysis, we established small databases for ITS, EF and BT2. The multiple sequence alignment results can be obtained from ITS database and can be divided into three divisions; EF database can be divided into two divisions; BT2 database can be divided into two divisions. ITS, EF and BT2 nucleic acid sequences of different host does not have any diversity, but still have specific sequence, these specific sequence will be designed to development the bio-chip test points, hope distinguish the diversity between the host by these test point
柔道選手運動表現歸因傾向之研究
Get PDF[[abstract]]摘 要
近年來，國內運動歸因研究引起了運動心理學界的廣泛興趣，其進展已從理論研究已轉化實際測驗的研究分析。許多研究證明，個體的運動歸因傾向性，會影響著選手的情緒、態度和努力的程度。本研究檢驗了羅素因果歸因維度量表，並以此量表檢測量表的信度與效度。藉由量表結果分析選手面對成功與失敗的不同情境時的歸因傾向，並研究了焦慮與歸因傾向的關係。結果發現柔道選手面對成功傾向於內部的、不穩定可控制的歸因；而面對失敗傾向於內部的、穩定可控制的歸因。在不同焦慮狀態下，歸因的內外源維度方面存在著差異，穩定性和可控性方面則不存在差異。因此證明柔道選手內外源是歸因於不穩定因素，且受到焦慮的影響
國小學校文化與組織承諾的關係：初探積德行善學校文化之影響
No full text[[abstract]]華人社會相信善有善報，必須積德行善以為自己與子孫謀幸福。積德行善透過組織社會化，使得華人學校文化逐漸顯現積德行善文化的樣貌。本研究以組織承諾為效標，探討積德行善文化的影響。研究發現如下：因素分析顯示華人學校文化包含支持文化、學習文化、創新文化、積德行善文化。積德行善文化較其他三種文化/支持文化、學習文化、創新文化更能預測努力承諾
仙人掌於美容作用之探討及與仙人球、火龍果莖抗氧化、抗紫外線、美白及保濕之比較
No full text[[abstract]]人掌除食用外也可用於醫療，然而仙人掌在預防老化、保濕肌膚及美容方面又是如何？本研究使用細刺仙人掌、網仙人球、火龍果莖作為原料，利用還原力(Reducing power)、DPPH(DPPH radical scavenging activity)
、螯合作用(Ferrous ion chelating ability)及保濕作用(efficacy of mosturizing)測定等方法，驗證及比較三種不同科、屬的仙人掌之間其抗氧化力及美容保濕之差異
不同飛輪模式運動強度之探討
No full text[[abstract]]本研究利用不同的操作姿態來組合一套飛輪運動模組，探討男、女參與者之心跳變化情形，並經六周訓練後，測定其心跳恢復程度，評估飛輪運動對體適能之影響
大台南地區製造業雇主與受僱者工作壓力與疲勞感受之相關研究
No full text[[abstract]]因此今天無論是雇主或受僱者都應該要了解工作壓力與疲勞對勞工所造成的的影響。
近年來由於社會結構與經濟活動的競爭，雇主與企業中的受僱者均較以往面臨更大的工作壓力與挑戰。因為工作環境中潛藏著各式各樣引發壓力的因素，使得工作中的勞工，隨時都可能受到它們的威脅，而產生疲勞