Chung Hwa University of Medical Technology
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A Study on Job Burnout Factors of Elementary School Teachers also in Charge of Administrative Jobs: Exploring the influence among Personalities, Work Pressure, and Social Support
No full textEffects of Osmanthus Fragrans extract in human lung fibroblasts cells induced by transforming growth factor-β1
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論文口試委員會審定書 ii
誌謝 iii
中文摘要 iv
英文摘要 v
縮寫表 vi
總目錄 vii
圖表目錄 x
第一章 緒論
一、特發性肺纖維化 (Idiopathic pulmonary fibrosis) 1
二、纖維母細胞 (Fibroblast) 2
三、Transforming growth factor-beta (TGF-β)介紹 2
四、常見中草藥用在抗肺纖維化的發展研究 3
五、桂花簡介 5
第二章 研究目的 8
第三章 材料與方法
一、桂花 (Osmanthus fragrans) 水萃取物之製備 10
二、桂花水萃取物於高效能液相層析 (high performance liquid chromatography, HPLC) 之分析 10
三、細胞培養 11
（一）繼代細胞 12
（二）解凍細胞 13
（三）儲存細胞 13
（四）細胞計數 13
四、酵素連結免疫吸附分析 (ELISA) 14
五、細胞免疫螢光分析 14
六、細胞蛋白質總量測定 15
七、西方墨點分析 15
八、統計學分析 (Statistical Analysis) 17
第四章 結果
一、桂花水萃取物於高效能液相層析(high performance liquid chromatography, HPLC)之分析 19
二、桂花水萃取物對於TGF-β1所誘導HFL-1細胞之型態變化 19
三、桂花水萃取物對肺纖維母細胞，細胞外纖維蛋白表現量的測定 19
四、桂花水萃取物對於HFL-1細胞之免疫螢光化學染色法分析 20
五、桂花水萃取物降低TGF-β1所誘導肺纖維母細胞，細胞內TGF-β RΙ、TGF-β RΙΙ、Smad2/3、pSmad2/3、
fibronectin的蛋白質表現 20
六、在TGF-β1所誘導的肺纖維母細胞中，加入桂花水萃取物200 μg/ml觀察不同時間點pSmad2/3的蛋白質表現 21
第五章 討論 23
第六章 結論 27
第七章 圖表 30
第八章 參考文獻 38
圖表目錄
圖1.桂花水萃取物於高效能液相層析(high performance liquid chromatography, HPLC)之分析 30
圖2.桂花水萃取物對於TGF-β1所誘導HFL-1細胞之型態變化 31
圖3.桂花水萃取物對肺纖維母細胞，細胞外纖維蛋白表現量的測定 32
圖4.桂花水萃取物對於HFL-1細胞之免疫螢光化學染色法分析 33
圖5.桂花水萃取物降低TGF-β1所誘導肺纖維母細胞，細胞內TGF-β RΙ、TGF-β RΙΙ、Smad2/3、pSmad2/3、
fibronectin的蛋白質表現 34
圖6.在TGF-β1所誘導的肺纖維母細胞中，加入桂花水萃取物200 μg/ml觀察不同時間點pSmad2/3的蛋白質表現 35
圖7.桂花水萃取物抑制TGF-β1所誘導的肺纖維母細胞纖維形成的可能機制 36[[abstract]]肺炎是國內十大死因之一，依據行政院衛生署公布101年國人十大死因統計報告「肺炎」排名第四。桂花具有廣泛的藥理活性，然而，桂花萃取物在肺纖維化這部分的分子機轉作用尚未被研究探討。因此本篇研究以肺纖維母細胞 (HFL-1)，研究桂花水萃取物於第一型乙型轉型生長因子 (TGF-β1) 刺激下，探討其下游路徑機轉作用。方法：首先將生長良好的HFL-1細胞加入TGF-β1刺激誘導作為肺細胞纖維化的體外模型，經由不同濃度的桂花水萃取物培養24小時。結果：在酵素連結免疫吸附法中，可觀察到桂花水萃取物在100與200 μg/ml的劑量下，有顯著差異降低細胞外纖維連接蛋白的表現量。在免疫螢光化學染色分析中，以桂花水萃取物最高劑量200 μg/ml與TGF-β1組比較，有降低細胞外纖維蛋白的含量。在西方墨點法中，可觀察到桂花水萃取物在200 μg/ml的劑量下，顯著抑制TGF-β RΙ、TGF-β RΙΙ、Smad2/3、pSmad2/3、fibronectin的表現。結論:在西方墨點法中桂花水萃取物在200 μg/ml的劑量下，顯著抑制TGF-β RΙ、TGF-β RΙΙ、Smad2/3、pSmad2/3與fibronectin的蛋白質表現，表示桂花水萃取物對於TGF-β1所誘導的肺纖維母細胞具有一定的調控角色。
Pneumonia is among the 10 leading causes of death in Taiwan. Osmanthus fragrans exhibits a wide range of pharmacological activity. However, the molecular mechanisms of the Osmanthus fragrans extract related to pulmonary fibrosis have not been explored. Therefore, this study uses a lung fibroblast (HFL-1) model to examine the mechanisms of the Osmanthus fragrans water extract’s downstream paths when stimulated Transforming growth factor β1 (TGF-β1). Methods: Stimulated TGF-β1 was added to a well-developed HFL-1 lung fibroblast to form an in vitro model of fibrosis, which was then cultured with various concentrations of Osmanthus fragrans water extract for 24 h. Results: In the enzyme-linked immunosorbent assay, extracellular fibronectin expression was analyzed, for the 100 μg/ml and 200 μg/ml Osmanthus fragrans water extracts, significantly reduced extracellular fibronectin expression was observed. The immunofluorescence analysis results showed a decline in extracellular fibronectin expression for the highest concentration of Osmanthus fragrans water extract (i.e., 200 μg/ml) compared to that for the TGF-β1 group. In western blotting, for 200 μg/ml of Osmanthus fragrans water extract, expressions of TGF-β RΙ、TGF-β RΙΙ、Smad2/3、pSmad2/3, and fibronectin were significantly suppressed. Conclusion: Indicating that the Osmanthus fragrans water extract serves as a regulator for TGF-β1 induced lung fibroblasts
The study of flexible electric material for pesticide detection biosensor
No full text論文目錄
口試委員審定書
授權書 ii
中文摘要 iii
英文摘要 iv
致謝 vi
第一章 緒論
1.1研究背景 -1-
1.2研究目的與動機 -2-
1.3論文架構 -3-
第二章 理論分析與探討
2.1生物感測器之種類與應用 -6-
2.2酵素固定化技術 -9
2.3延伸式感測場效電晶體原理 -10-
2.4電子材料應用 -11-
2.5戊二醛之固定交聯理論 -11-
2.6酵素介紹 -11-
2.6乙醯膽鹼生理作用機制 -13-
2.7農藥抑制乙醯膽鹼酯酶作用機制 -14-
第三章 材料與方法
3.1材料 -15-
3.2器材 -16-
3.3實驗流程 -17-
3.4感測器之製作 -18-
3.5測量系統 -18-
3.6可繞性電子材料農藥生物感測器之製作 -19-
3.7抑制劑檢測試驗 -20-
3.8酵素活性驗證試驗 -21-
第四章 結果與討論
4.1可繞性感測器探討 -22-
4.2酵素與交聯劑固定化之探討 -22-
4.3緩衝溶液濃度與反應電壓 -23-
4.4.緩衝溶液pH與酵素活性 -23-
4.5受質之反應區間(曲線) -24-
4.6抑制劑對酵素活性與反應電壓之影響 -25-
4.7生物感測器與現有商業化測量探討 -26-
第五章 結論 -27-
參考文獻 -29-
附錄 -32-[[abstract]]延伸式離子感測場效電晶體(extended-gate field effect transistors ,EGFET)，對於溶液中離子含量的測量應用非常廣泛，一般電極製造的基質材料通常為不可彎曲性或易碎的物質，這將會限制了感測器在環境上的發展和促使感測器成本提高。本研究提出如何製造出一個體積小、體積薄和可撓曲而有效的pH電極進而製作出生物感測器，並應用於農藥檢測上，農藥在環境上的汙染程度是無法立即得知的，當有了農藥生物感測器後，將可幫助更快速的得知食物是否遭受污染。在可繞性感測電極實驗結果發現此結構在pH2至pH12之間有好的線性和pH Nerstern響應，其感測度在54-58 mV/pH。本研究利用此感測架構經交聯方法將乙醯膽鹼酯酶(acetylcholinestrases,AcChE)固定於元件感測窗上製作成酵素修飾感測場效電晶體(enzyme modified field effect transistor ,EnFET)，乙醯膽鹼酯酶會與乙醯膽鹼素催化水解成產物伴隨著氫離子的衍生使感測膜上的pH值產生改變，而檢測到電壓值。經由環境pH值、乙醯膽鹼度濃度、乙醯膽鹼酯酶固定化條件等參數測試後，本研究找到最適化的農藥感測參數。而利用乙醯膽鹼酯酶可被農藥抑制的此種機制進而抑制了氫離子的衍生來發展出農藥檢測生物感測器，實驗結果顯示將可量測到1 ppm的加保扶農藥。
The separative structure of an extended-gate field effect transistor (EGFET) is an extremely broad application for detecting ion content in a solution. Inflexible or brittle materials, such as glass, are commonly used as substrates for electrode fabrication. However, such materials limit the range for successful and cost effective application in the environment. In our research, indium tin oxide (ITO) films were directly deposited onto the polyethylenetelephthalate (PET) substrate as a working electrode for an EGFET. The component exhibited some advantages for pH sensors such as being small, bulk, low cost and material flexibility. The sensor facilitates package to biosensor of detecting pesticides. In the future, the proposed application will be able to detect pollutants rapidly. The initial experimental result showed this structure having the linear and pH Nerstern response of approximately 54-58 mV/pH between pH2 and pH12. In this study, The EnFET structure was immobilized acetylcholinesterase (AChE) resulting from a cross-link method. Normally, AchE hydrolyses acetylcholine (Ach). However these reactions were the result of hydrogen ion generation, causing the changed pH in the membrane. This allowed using the potentionmetric method for voltage value measurement. We changed the buffer pH, acetylcholine concentration and acetylcholinesterase concentration of this process. Result shows the optimization responses of the sensing for detection pesticides. Acetylcholinesterase has been used in the design of biosensors for the detection of pesticides, based on the inhibitor for AchE. This inhibition effect can decrease the hydrogen ions in the sensing membrane. In addition, the mechanisms can be a pesticide biosensor for detecting pollutants. Our experiential results shows that the EnFET is a detection method for 1 ppm Carbofuran pesticide sensing
1. Overexpression and Purification of Recombinant Vascular Endothelial Growth Factor A in Yeast Expression System 2.Compare the Thermotolerance of Recombinant SCF1-165 and SCF1-141 Expressed and Purified in Yeast
No full text致謝……………………………………………………………………..3
中文摘要………………………………………………………………..4
英文摘要………………………………………………………………..6
一、 前言…………………………….…………………………………….7
1. 文獻及簡介
血管內皮細胞生長因子(Vascular Endothelial Growth Factor A)
人類幹細胞生長因子( human Stem cell factor)
2. VEGF與SCF生產來源
3. 嗜甲醇酵母菌（Pichia pastoris）真核表現系統
4. 以醱酵槽大量表現重組蛋白質
5. 分子模擬(Molecular modeling)
二、 研究動機…………………………………………………………...25
三、 實驗材料…………………………………………………………...26
1. 物品
2. 酵素
3. 抗體
4. 菌株
5. 細胞株
6. 儀器
7. 分子模擬軟體
8. 本論文所使用之質體 (Plasmids)
四、 實驗方法…………………………………………………………...31
五、 結果………………………………………………………………...65
六、 討論………………………………………………………………...70
七、 結論………………………………………………………………...72
八、 參考文獻…………………………………………………………...74
九、 圖表及附件………………………………………………………...81[[abstract]]血管內皮生長因子A（VEGFA），有121或165個胺基酸殘基兩種型式，是五種血管內皮生長因子家族的成員之一。VEGFA是一個訊息調控生長因子，可調節血管生成，胚胎發育，傷口癒合，腫瘤的生長，促進血管內皮細胞的增殖和遷移。本論文中我們已經成功地利用酵母菌表現系統與醱酵槽大量表現重組VEGF1-121和VEGF1-165，並以陰離子交換及肝素親和性層析法純化。
幹細胞生長因子（SCF）是一種醣蛋白，也稱為kit配體。人類SCF可以經由選擇性剪接形成可溶性和跨膜形式的SCF。本論文研究主角，SCF1-141及SCF1-165，是屬於可溶性SCF。SCF會表現在纖維母細胞、肥大細胞、角質形成細胞與上皮細胞等。SCF在調節造血幹細胞的生存、增殖和分化；生殖細胞、肥大細胞與黑色素細胞的發育和生物功能與皮膚和毛囊的黑色素生合成上扮演著重要的角色。本論文中，我們利用圓二色光譜，分子模擬軟體和限制性蛋白酶水解實驗分析SCF1-165和SCF1-141的熱耐受性。圓二色光譜和限制性蛋白酶水解的實驗條件在指定的溫度範圍從25到90°C，結果顯示SCF1-165的C端對於生長因子結構的熱穩定性，扮演了一個重要的角色。本論文中還進行了分子動力學模擬實驗，分析SCF1-141與SCF1-165在10 ns時間內，三個不同溫度下，即298 K，343 K和363 K，其RMSD曲線差異結果顯示，兩者的熱穩定性差異與上述結果相符。本論文報告說明了SCF1-165在其C-端氨基酸序列(STLSPEKDSRVSVTKKPFMLPPVA)截短後，形成SCF1-141之型式，會明顯降低其熱耐受性，顯示SCF1-165之C-端序列在SCF結構的穩定上，發揮了重要作用。
Vascular endothelial growth factor A (VEGFA), one of five members of the VEGF family has 121 or 165 amino acid residues. It is a signaling growth factor that regulates angiogenesis, embryogenesis, wound healing and tumor growth by promoting proliferation and migration of endothelial cells. We have successfully overexpressed recombinant VEGF1-121 and VEGF1-165 in yeast expression system by fermenter and purified them by anion exchange and affinity chromatographies.
Stem cell factor (SCF) is a glycoprotein growth factor, also called kit ligand. Human SCF can be alternatively spliced into soluble and transmembrane forms. Both of our study material, SCF1-141 and SCF1-165, are soluble form. It is expressed by various cells from fibroblasts, mast cells, keratinocytes and epithelial cells. SCF is important that regulates survival, proliferation, and differentiation of hematopoietic stem cells as well as in the development and function of germ cells, mast cells, melanocytes, skin and hair follicular melanogenesis. In this study, we performed far-UV CD spectrum, molecular modeling and limited protease digestion experiments to analyze the thermotolerance of SCF1-165 and SCF1-141. Far-UV CD spectrum and limited protease digestion of SCF1-165 and SCF1-141 were employed at the indicated temperatures ranging from 25 to 90 °C, and the results were presented that at the C-terminus of SCF1-165 does play an important role in the structural stability of the growth factor. We also performed molecular dynamics simulations of SCF1-141 and SCF1-165 for 10 ns each at three different temperatures namely at 298 K, 343 K and 363 K. Profiles of root mean square deviation (RMSD) indicate the thermostability between both resembles the results described above. This report demonstrates that SCF1-141, the truncated form of SCF1-165 in its C-terminus, deleted in STLSPEKDSRVSVTKKPFMLPPVA amino acid sequences, significantly decreases the thermotolerance of this growth factor
Analysis Of Polyphenols In Hibiscus sabdariffa, Nelumbinis Receptaculum And Graptopelaum Paraguayense By HPLC
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授權書
目錄 ……………………………………………………………………… II
表目錄……………………………………………………………………… IV
圖目錄……………………………………………………………………… V
摘要 …………………………………………………………………… VII
Abstract …………………………………………………………VIII
致謝 ……………………………………………………………………… X
第一章 緒論 ………………………………………………………1
第一節 前言 …………………………………………………………1
第二節 多酚類化合物介紹 ………………………… 3
第三節 多酚類化合物之毒性 ………………………5
第四節 多酚類化合物之分析方法 ……………………6
第五節 洛神花介紹 ………………………………………………7
第六節 蓮蓬介紹 …………………………………………………8
第七節 石蓮花介紹 ………………………………………………8
第八節 實驗目的 ……………………………………………………9
第二章 材料與方法 ……………………………………………10
第一節 儀器設備介紹 ……………………………………10
第二節 樣品和藥品與操作步驟 ………………………11
第三章 結果與討論 ……………………………………………21
第一節 建立高效能液相層析儀分析系統 …………21
第二節 分析系統條件探討 …………………………………21
第三節 實驗室驗證 ………………………………………………25
第四節 分析方法之應用…………………………………………29
第四章 結論 …………………………………………………………31
參考文獻 ……………………………………………………………………32
表1 多酚類化合物之同日內精密度結果 ……………38
表2 多酚類化合物之異日間精密度結果 ………………40
表3 洛神葉水萃取物回收率 ……………………………………42
表4 洛神葉甲醇萃取物回收率 ………………………………43
表5 蓮蓬水萃取物回收率 …………………………………………44
表6 蓮蓬甲醇萃取物回收率 ……………………………………45
表7 石蓮花水萃取物回收率 ……………………………………46
表8 石蓮花有機取物回收率 ……………………………………47
表9 針對蓮蓬基線飄高添加1 ppm標準品之回收率(水萃) …………48
表10針對蓮蓬基線飄高添加1 ppm標準品之回收率(有機萃取) ……48
圖1 搜尋流動相濃度梯度之最佳化參數…………………49
圖2 搜尋流動相流速之最佳化參數…………………………51
圖3 混合標準品層析圖………………………………………………52
圖4 Gallic acid之檢量線……………………………………53
圖5 Protocatechuic acid之檢量線………………53
圖6 Catechin之檢量線 …………………………………………54
圖7 Procyanidin B2之檢量線 …………………………54
圖8 Epicatechin之檢量線……………………………………55
圖9 Caffeic acid之檢量線…………………………………55
圖10 Epigallocatechin gallate之檢量線…56
圖11 Ellagic acid之檢量線…………………………………56
圖12 Rutin之檢量線 …………………………………………57
圖13 ρ-Coumaric acid之檢量線…………………………57
圖14 Epigallocatechin之檢量線 ……………………58
圖15 Ferulic acid之檢量線 ………………………………58
圖16 Epicatechin Gallate之檢量線 ……………59
圖17 Gossypin之檢量線 …………………………………………59
圖18 Gossypetin之檢量線 ……………………………………60
圖19 Querctin之檢量線 …………………………………………60
圖20Naringenin之檢量線 ……………………………………61
圖21洛神葉水萃取層析圖 ……………………………………………62
圖22洛神葉甲醇萃取層析圖 ………………………………………63
圖23蓮蓬水萃取層析圖 …………………………………………64
圖24蓮蓬甲醇萃取層析圖 ……………………………………………65
圖25石蓮花水萃取層析圖 ……………………………………………66
圖26石蓮花甲醇萃取層析圖 ………………………………………67[[abstract]]多酚類化合物在近年來是非常熱門的研究，因為多酚類化合物具有著超強抗氧化能力。許多消費者攝取從植物中萃取出多酚類化合物的萃產物來預防疾病。許多消費者涉取植物萃取物不僅因為抗菌或者抗病毒，甚至可以抑制人類低密度脂蛋白氧化進而預防心血管疾病。本實驗，植物中分離多酚類化合物使用高效能液相層析儀搭配紫外光全波長檢測器，C-18管柱和流動相0.1% 甲酸搭配乙腈含有0.1% 甲酸，流速設定在每分鐘1毫升，偵測波長285和345nm，溫度為室溫。本次的實驗分析了三種植物樣本，洛神葉、蓮蓬和石蓮花。接著將層析圖積分面積代入檢量線所求得的線性方程式中求得植物萃取物樣本濃度。在我們的研究中測得洛神葉水萃取物內含Catechin 6.41 ppm和Ellagic acid 3.37 ppm ; 洛神葉使用甲醇萃取物測得Protocatechuic acid 0.67 ppm、Catechin 53.4 ppm、Caffeic acid 14.6 ppm、Epigallocatechin 11.1 ppm、Ferulic acid 15.4 ppm、Quercetin 1.94 ppm、Ellagic acid 113.8 ppm ; 蓮蓬水萃取物測得Catechin 5.93 ppm、Procyanidin B2 1.92 ppm、ρ-Coumaric acid 0.45 ppm、Epigallocatechin 74.1 ppm ; 蓮蓬使用甲醇萃取物測得Catechin 329 ppm、Procyanidin B2 7.16 ppm、Caffeic acid 3.6 ppm、ρ- Coumaric acid 7.63 ppm、Epigallocatechin 14.8 ppm。石蓮花水萃取物測得ρ- Coumaric acid 1.34 ppm ; 石蓮花使用甲醇萃取物測得Gallic acid 5.92 ppm、Caffeic acid 0.51 ppm、ρ- Coumaric acid 1.17 ppm、Epigallocatechin 25.1 ppm、Ferulic acid 0.55 ppm、Gossypetin 1.93 ppm。未來我們將針對樣本萃取物中的未知波峰使用氣相層析質譜儀進行分析，以便得到樣本萃取物更多資訊。
Phenolic compounds are the popular studies in the present day , cause of antioxidants. In this day, many people are using phenolic compounds to prevent disease from Plant extract. More and more people eat plant extract products , because it is not only can antiseptic or anti-virus but also inhibit LDL oxidation and prevention cardiovascular disease. High performance liquid chromatography with UV separation of these phenolic compounds are possible on C-18 column, using 0.1% formic acid and acetonitrile with 0.1% formic acid as mobile phase. Flow-rate, detection wavelength and temperature were adjusted to 1.0 mL/min, 285 & 345nm and RT, respectively. In this study, Roselle’s leaf, extract by water, detection Catechin 6.41 ppm and EA 3.37 ppm , extract by methanol detection Protocatechuic acid 0.67 ppm、Catechin 53.4 ppm、Caffeic acid 14.6 ppm、Epigallocatechin 11.1 ppm、Ferulic acid 15.4 ppm、Quercetin 1.94 ppm with 285 nm and EA 113.8 ppm with 345 nm. Nelumbinis Receptaculum,are extracted by water, detection Catechin 5.93 ppm、Procyanidin B2 1.92 ppm、ρ- Coumaric acid 0.45 ppm、Epigallocatechin 74.1 ppm and extract by methanol detection Catechin 329 ppm、Procyanidin B2 7.16 ppm、Caffeic acid 3.6 ppm、ρ- Coumaric acid 7.63 ppm、Epigallocatechin 14.8 ppm with 285 nm. Graptopelaum Paraguayense, are extracted by water, detection ρ- Coumaric acid 1.34ppm with 285 nm, extract by methanol detection Gallic acid 5.92 ppm、Caffeic acid 0.51 ppm、ρ- Coumaric acid 1.17 ppm、Epigallocatechin 25.1 ppm、Ferulic acid 0.55 ppm、Gossypetin 1.93 ppm with 285 nm. In the future, the unknown peaks would be detected by gas chromatography – mass spectrometry(GC-MS)
社會大眾對於「科技保母」方案認同接受度之調查研究
No full text[[abstract]]「科技保母」一詞源自於以高科技生理監控產品輔助保母人員的理念，讓保母人員能隨時隨地掌握嬰幼兒的生理狀態，使托育服務品質更趨完善。本研究旨在探討日後若推出「科技保母」方案，社會大眾的反應以及接受度為何。本研究採用自編問卷進行問卷調查，研究對象為臺灣中南部4所幼托園所幼兒家長及適婚年齡男女共100人
GABA強化發芽米之新產品開發
No full text[[abstract]]由於現今社會工作繁忙，精神壓力倍增，慢性疾病的發生率也日益增加。因此，市面上販售之保健食品相繼增加。台灣平日的飲食即以『米飯』作為主食，除了供給身體所需之能量外，強化米飯之營養價值更值探討
由性別因素探討女學生對電腦與網路使用行為
No full text[[abstract]]本研究以Davis(1989)所提出的科技接受模式(TAM, Technology Acceptance Model)為基礎，提出一包含「社經地位」、「性別角色」、「性別平權」和「自我意象」之科技接受模式，期能了解各變數間交互影響之關係，研究之結果將有助於檢視兩性平權近年來在學校推動的成效，了解女學生對於資訊科技的接受度，從而解釋其電腦或網路之使用行為
仙人掌於美容作用之探討及與仙人球、火龍果莖抗氧化、抗紫外線、美白及保濕之比較
No full text[[abstract]]由實驗證實細刺仙人掌有明顯的抗氧化能力及保濕作用,為仙人掌用於化妝品的應用與開發，提供了科學依據