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ポリフェノールによる齲蝕関連細菌のプラーク形成と脱灰に対する効果
Get PDF松本歯科大学博士（歯学）2015甲第175号application/pdf【背景と目的 】 齲蝕や歯周病の罹患率は国民全体の75％以上と今だに高い．また，誤嚥性肺炎の主たる起炎菌は口腔内常在菌であり，抗菌剤による除菌法もあるが高価なうえリスクも高く，近年では耐性を示すStreptococciをはじめBeta-lactamase産生株が高頻度に認められている．したがって，これらの疾病の予防としては機械的なプラークコントロールを主とし，補助として洗口剤や歯磨剤などよる殺菌，消毒が一般的である．植物に含まれるポリフェノールは，Sｔ．mutansやSt．sobrinusの増殖抑制やグルコシルトランスフェラーゼ(GTF)阻害効果などの作用があることが報告されている．これまでにわれわれは，低分子化したポリフェノールがSｔ．mutansの代謝活性およびプラーク形成を抑制することを報告してきた．そこで今回は，低分子ポリフェノールの基本体であるカテキンによる齲蝕関連菌の抑制効果を，細菌活性，酸産生によるハイドロキシアパタイトの脱灰度，pH値およびグルカン産生量を測定して検討した．【方法】 ポリフェノール試薬としてのカテキン水和物を濃度0～150 mMで用いた．細菌としてSｔ．mutansおよびSｔ．sobrinusを用い，グルコース1%を含む液体培地を37℃，20%CO2存在下で24から120時間培養増殖した．酸産生能は培養液中のpH測定により間接的に計測した．ハイドロキシアパタイトの脱灰量は培養液中に溶出されたカルシウム量をMXB法により測定した．細菌活性は，Resazurinの代謝還元能を用いて測定した．グルカン産生量については，培養器に付着した不溶性グルカンを染色して比色度により測定した．【結果】 培養液中のpH値はSｔ．ｍutansがpH4.18±0.03，Sｔ．sobrinusがpH4.12±0.03であった．カテキン添加によりSｔ．mutansはpH7.39±0.03，およびSｔ．sobrinusはpH7.47±0.03とともに脱灰を起こすpH5.5以下の低値から中性域への回復が確認された．また，Sｔ．mutansおよびSｔ．sobrinusともにカテキン添加により，ハイドロキシアパタイトの脱灰量が実験開始から72時間でSt．mutansで0.785倍（1.67±0.06 mg/dl）およびSt．sobrinusでは 1.54±0.17 mg/dl（p＜0.05）と著しく抑制された．さらに，培養液中とバイオフィルム内の細菌活性における生菌数（量）の比較実験では，カテキン添加により実験開始から72時間でSt．mutansでは0.257倍，St．sobrinusでは0.175倍（p＜0.05）にバイオフィルム内の生菌数（量）が著しく抑制された．【結論】 低分子ポリフェノールの基本体であるカテキンは，0.03 mMからSt.mutansおよびSt.sobrinusの細胞代謝活性，酸産生およびグルカン合成を抑制した．また，カテキンを添加したSt.mutansおよびSt.sobrinusの培地において，ハイドロキシアパタイトの脱灰を抑制した．以上より，カテキンは齲蝕を抑制できる可能性が示唆された．doctoral thesi
歯周病の重症度別分類を用いた歯周病と糖尿病の関係解析
Get PDF松本歯科大学博士（歯学）2015甲第176号application/pdf【背景と目的】現在，国際糖尿病連合によると，世界では3億8,670万人の糖尿病患者がいるといわれている．また，2012年の国民健康・栄養調査結果によると，日本人で糖尿病が強く疑われる者は950万人，さらに糖尿病の可能性を否定できない者が1,100万人いると報告されている．このように，糖尿病は日本においても非常に罹患率の高い疾患であり，歯科医院に通院中の患者の中にも多くの糖尿病罹患者が存在することが予想される．すでに，歯周病は，網膜症，腎症，神経障害，末梢血管障害，大血管障害に続く糖尿病の第6番目の合併症とされている．20年ほど前より，ペリオドンタルメディシンという概念のもと，歯周病と糖尿病との関連性が疫学研究を中心に数多く報告されているが，日本人における両疾患の関連性に関する統一見解，あるいは詳細なデータはほとんど存在しない．その理由の1つに，歯周病を評価する統一基準がなかったことがあげられる．そこで，2011年に特定非営利活動法人日本歯周病学会ペリオドンタルメディシン委員会は，より簡便で，医科と情報共有が可能な分類であることを目標とし，歯周病の臨床指標である歯槽骨吸収率と，炎症マーカーである高感度C-reactive protein (CRP)値を用いた歯周病の重症度別分類を作成した．本研究では，この重症度別分類に用いられ，指標となっている歯槽骨吸収率，および高感度CRP値と，糖尿病の関係を明らかにすることを目的とした．さらに，歯槽骨吸収率および高感度CRP値から糖尿病を予測しうるかどうかも検討した．【材料と方法】研究には，松本歯科大学病院健診センターに人間ドック，および同大学病院歯周病科を受診した糖尿病罹患者50名を含む患者374人（男性253名，女性121名）を対象とし，すべての被験者の撮影されたパノラマエックス線写真，あるいはデンタルエックス線写真から，歯槽骨吸収率を求めた．また，末梢血を採取し，高感度CRP値の測定を行った．その後，上述の重症度別分類を用いて，各々の被験者における歯周病の重症度程度を分類した．本研究で用いる重症度別分類とは，歯槽骨吸収率が25％以下を臨床的軽度：Ⅰ，25％以上を中等度：Ⅱ，35％以上を重度：Ⅲとし，高感度CRP値が440ng/ml以下を炎症度軽度：A，440ng/ml以上を中等度：B，1,020ng/ml以上を重度：Cとして，それぞれ3段階に分け，9つの群に分類するものである．解析方法は，性別，年齢，Body Mass Index(BMI)，喫煙の既往，現在歯数，歯槽骨吸収率（3分類），高感度CRP値（3分類）を独立変数とし，糖尿病の有無を従属変数とするロジスティック回帰分析（変数増加法）により評価した．さらに，歯槽骨吸収率および高感度CRP値により，糖尿病のスクリーニングができるか否かをROC（Receiver Operating Characteristic curve；受信者動作特性曲線）解析で検討した．【結果】解析結果より，糖尿病の有無に関連する因子は，年齢，BMI，歯槽骨吸収率，高感度CRP値であることが判明した．また，歯槽骨吸収率および高感度CRP値が高いほど糖尿病のリスクが高くなることが分かった．そこでROC解析を行ったところ，歯槽骨吸収率，および高感度CRP値と糖尿病のArea under the Receiver Operatorating Characteristic curve (AUROC)値は各々，0.76と0.71であり，歯槽骨吸収率と高感度CRP値が糖尿病のスクリーニング指標として有用であることが判明した．【結論】本研究により，糖尿病の有無に関連する因子は年齢，BMI，歯槽骨吸収率，高感度CRP値であることが判明した．さらに歯槽骨吸収率，および高感度CRP値が糖尿病のスクリーニング指標として有用であることがわかり，この事から，歯科受診時のエックス線写真撮影，あるいは健診時の高感度CRP値を測定することで，糖尿病のスクリーニングができ，早期発見，早期治療につながる可能性が示唆された．doctoral thesi
Histological Evaluation of Periodontal Ligament in Response to Orthodontic Mechanical Stress in Mice
Get PDF松本歯科大学博士（歯学）2015甲第186号application/pdfThe purpose of the study was to determine the cell dynamics in periodontal ligament in response to mechanical stress during orthodontic movement. Following Waldo’s method, a square sheet of rubber dam was inserted in between the first and second maxillary molars in 10 ddY mice leaving the stress load for 3 hours. After 3 days and at 1 week, cell count on pressure and tension sides of the periodontal ligament was determined. Furthermore, the type of cell present after mechanical stress was identified using GFP bone marrow transplantation mouse model. Immunohistochemistry was carried out at 0 min (immediately after mechanical stress), 24 hours, 1 week, 2 weeks and 6 months. Temporal changes in the expression of GFP-positive bone marrow derived cells were examined. Moreover, double immunofluorescent staining was performed to determine the type of cell in the periodontal ligament. Cell count on the tension side tremendously increased 3 days after mechanical stress. At 1 week, spindle and round cell count increased compared to the control group. These changes were observed on both tension and pressure sides. Cell count on pressure side at 3 days (22.11+/-13.98) and at 1 week (33.23+/-11.39) was higher compared to the control group (15.26+/-8.29). On the tension side, there was a significantly increased at 3 days (35.46+/-11.85), but decreased at 1 week (29.23+/-13.89) although it is still higher compared to the control group (AD+/-SD: 10.37+/-8.69). Using GFP bone marrow transplantation mouse model, GFP positive cell count increased gradually over time in 6 months. GFP positive cells were also positive to CD31, CD68 and Runx2 suggesting that fibroblasts differentiated into osteoclasts and tissue macrophages. In conclusion, mechanical stress during orthodontic movement promoted the increase in the number of cells in the periodontal ligament on both tension and pressure sides. The increase in the number of cells in the periodontal ligament is believed to be due to the migration and cell division of undifferentiated mesenchymal cells.doctoral thesi
CO2 レーザー照射はチタン上のヒト歯根膜線維芽細胞に対するリポ多糖（LPS）の影響を抑制し細胞の増殖および機能を回復させる
Get PDF松本歯科大学博士（歯学）2015甲第191号application/pdf【目的】インプラント周囲炎に対して、レーザーを用いた外科治療が応用されるようになってきた。しかし、レーザーがどのようにインプラント表面や歯肉組織に影響を与えるかを記載した報告は少ない。そこで本研究では、CO2レーザー照射がチタン材料研磨表面と粗造表面の表面形状にどのような影響を及ぼすかを解析した。チタン研磨面と粗造面上で培養したヒト歯根膜線維芽細胞に対するCO2レーザー照射の影響を解析した。さらに、リポ多糖（lipopolysaccharide、LPS）で処理した後にCO2レーザーを照射し、細胞数と細胞機能の回復を評価した。【材料および方法】チタン板（JIS Grade 2）を研磨処理あるいは粗造処理に供した。これらのチタン板にCO2レーザーを出力20w/秒にて60 秒間照射し、チタン表面の形状変化を共焦点レーザー顕微鏡にて観察した。また、研磨および粗造チタン板上でヒト由来歯根膜線維芽細胞を培養し、それにCO2レーザーを出力20w/秒にて60 秒間照射した。CO2レーザー照射3日後と7日後の細胞を観察した。また、チタン板上で培養したヒト歯根膜線維芽細胞をLPS(100ng/ml、1μg/ml)で3日間処理し、そこでCO2レーザーを照射した（出力20w/秒、60秒間）。CO2レーザー照射3日後と7日後の細胞を観察した。4',6-diamidino-2-phenylindole （DAPI）染色により細胞数を評価した。細胞付着状態はアクチン染色によって評価した。Ｉ型コラーゲンおよびvascular endothelium growth factor （VEGF）の遺伝子の発現はreverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR）法で、またそれらのタンパク質発現は免疫染色法で観察した。【結果】①CO2レーザー照射により、チタン研磨面および粗造面に形状変化は認められなかった。②CO2レーザー照射により、チタン研磨面および粗造面上のヒト歯根膜線維芽細胞の細胞数は3日目に減少したが、７日目では研磨面および粗造面の表面全体はヒト歯根膜線維芽細胞で覆われていた。LPS添加により、チタン研磨面および粗造面上のヒト歯根膜線維芽細胞の細胞増殖は7日目まで抑制されていた。一方CO2レーザー照射群7日目では、LPSによる細胞増殖抑制から回復していた。④Ｉ型コラーゲンのmRNA発現は、LPS添加により低下したが、CO2レーザー照射群では培養日数に比例して増加した。VEGFのmRNAとタンパク質発現もLPS処理群では低下したが、その抑制はCO2レーザー照射により解除された。チタン研磨面上および粗造面上で培養した細胞において、これらの傾向は同様に認められた。【考察】研磨および粗造のチタン表面へのCO2レーザーの照射は、それらの表面形態に変化を与えなかったことより、CO2レーザー照射はチタン表面の形状変化を誘導しないと結論された。また、LPS はヒト歯根膜線維芽細胞の増殖や機能を抑制することが示された。CO2レーザーの照射はLPSによるヒト歯根膜線維芽細胞への影響を抑制し、細胞増殖および機能発現を回復させた。チタン研磨面上および粗造面上で培養した細胞において、これらの傾向は同様に認められた。以上より、チタン表面へのレーザー照射は、チタンの表面形状を変化させるとなく、周囲の細胞の増殖と分化を促進し、組織再生に必要なコラーゲン産生や血管形成を促すことが示唆された。【結論】CO2レーザー照射は、インプラント表面の形状を変化させることはなく、周囲の細胞の増殖と分化を促進する可能性が示された。doctoral thesi
歯周疾患の病態に関する栄養学的視点を含めた総合的分析
Get PDFapplication/pdfTo clarify risk factors for periodontal disease from the viewpoints of physiology, blood biochemistry, and nutrition, a survey involving 364 persons (224 males, 140 females) who consulted the Medical Examination Center of Matsumoto Dental University Hospital was conducted. The pathogenesis of periodontal disease was investigated using the maximum Community Periodontal Index (CPI) and Attachment Loss (AL) values, and their distributions with respect to the sex were analyzed using Wilcoxonʼs rank sum test. Based on the CPI and AL values, the subjects were divided into 3 groups: healthy (0), mild (1–2), and severe (3–4). The mean values obtained from the physiological, dental, blood biochemical, and nutritional findings in the 3 groups were analyzed using the multiple comparison test. Furthermore, their distributions with respect to sex and smoking in the 3 groups were analyzed using Fisherʼs direct probability test. A p–value of 0.05 was regarded as significant. Factors influencing the CPI included the sex (male), body mass index (BMI), abdominal circumference, diastolic blood pressure, AL, alanine aminotransferase (ALT), fasting blood glucose, neutral fat, HDL cholesterol, and smoking. Factors influencing the AL included the sex (male), age, current number of teeth, CPI, lipid intake, manganese intake, vitamin C intake, monounsaturated fatty acid intake, polyunsaturated fatty acid intake, n–6 fatty acid intake, fruit intake, and smoking. The results suggest that the physiological, blood biochemical, and nutritional states are involved in the pathogenesis of periodontal disease. The CPI was associated with metabolic error in the presence of metabolic syndrome. There was an association between the AL and diet as an environmental factor.journal articl
マコモタケ由来成分による抗炎症作用
Get PDFapplication/pdfZizania latifolia (wild rice) is native to Eastern and Southeastern Asia. The fungus Ustilago esculenta penetrates this aquatic perennial grass. Makomotake refers to penetration of the Zizania latifolia shoot by Ustilago esculenta. Recent studies demonstrated that Zizania latifolia extracts exhibit diverse biological activities, such as anti–oxidant effects. The purpose of this study was to investigate the anti–inflammatory effect of Makomotake on endotoxin–induced uveitis (EIU) in mice. After the daily oral administration of Makomotake for 5 days, EIU was induced by the injection of a lipopolysaccharide (LPS) into the footpad of mice. At 24 hours–after injection, the eyes were enucleated and cells infiltrating the anterior chamber and vitreous cavity were counted histologically. Makomotake administration significantly reduced the total number of infiltrating cells. In addition, Makomotake suppressed the production of interleukin (IL)–1 β and tumor necrosis factor (TNF)–α in murine macrophages induced by LPS. Our findings show that Makomotake can be used as an anti–inflammatory agent against EIU, and that it may be useful for the treatment of acute uveitis.journal articl
Studies on Shokyo, Kanzo, and Keihi in Kakkonto Medicine on Prostaglandin E2 Production in Lipopolysaccharide-Treated Human Gingival Fibroblasts
Get PDFapplication/pdfWe previously demonstrated that a kampo medicine, kakkonto, decreases lipopolysaccharide- (LPS-) induced prostaglandin E2 (PGE2) production by human gingival fibroblasts. In this study, we examined the herbs constituting kakkonto that exhibit this effect. Shokyo strongly and concentration dependently and kanzo and keihi moderately decreased LPS-induced PGE2 production. Shokyo did not alter cyclooxygenase-2 (COX-2) activity, cytosolic phospholipaseA2 (cPLA2), annexin 1 and COX-2 expression, and LPS-induced extracellular signal-regulated kinase (ERK) phosphorylation. Kanzo inhibited COX-2 activity but increased annexin 1 and COX-2 expression and did not alter LPS-induced ERK phosphorylation. Keihi inhibited COX-2 activity and LPS-induced ERK phosphorylation but slightly increased COX-2 expression and did not alter cPLA2 and annexin 1 expression. These results suggest that the mechanism of shokyo is through the inhibition of cPLA2 activity, and that of kanzo and keihi is through the inhibition of COX-2 activity and indirect inhibition of cPLA2 activity.Therefore, it is possible that shokyo and kakkonto are clinically useful for the improvement of inflammatory responses.journal articl
顎矯正手術における全身麻酔後の悪心・嘔吐発生要因の検討
Get PDFapplication/pdfThe purpose of this study is to evaluate the rate of incidence and risk factor of postoperative nausea and vomiting (PONV) in patients who underwent orthognathic surgery. The subjects were 84 patients aged 1₅–₅2 years old (3₇ males and 4₇ females) who underwent orthognathic surgery under general anesthesia in Matsumoto Dental University Hospital from January 2011 to October 2016. The operation methods were sagittal split ramus osteotomy （SSRO) 44 cases, SSRO and Le Fort I osteotomy（Le Fort I）28 cases, SSRO, Le Fort I and genioplasty 6 cases, SSRO and genioplasty 4 cases, Le Fort I and anterior maxillary alveolar osteotomy 1 case, and SSRO, Le Fort I and genioplasty with upper and lower alveolar bone osteotomy 1case. Anesthesia was maintained with nitrous oxide or air in oxygen, sevoflurane or desflurane, remifentanil and fentanyl. The factors investigated were age, gender, minimum alveolar concentration hours (MAC hours), use of nitrous oxide, remifentanil dose, anesthesia time and the type of surgery. Statistical investigation was preformed using logistic regression analysis to confirm the significance between the incidence of PONV and follows; age, gender, MAC hours, use of nitrous oxide, remifentanil dose, anesthesia time and the type of surgery. The rate of incidence in nausea was ₇₇％, and that in vomiting was 3₅%. The incidence of nausea was 4.4 times higher in females than males. The incidence of vomiting was 4.6 times higher in cases with nitrous oxide than those without nitrous oxide.journal articl
