Matsumoto Dental University Repository
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マウス緻密骨由来細胞から形成された自発的スフェロイドは高い幹細胞性と分化能力を持つ
Get PDF松本歯科大学大学院歯学独立研究科博士（歯学）学位申請論文;硬組織疾患制御再建学講座（主指導教員:各務 秀明教授）application/pdfothe
骨形成抑制因子であるスクレロスチン欠損マウスにおけるBMP-2誘導性異所性骨の解析
Get PDF松本歯科大学博士（歯学）2020甲第235号application/pdf要旨歯周炎は進行に伴い歯槽骨が吸収し，歯の喪失につながる疾患である．しかし現在の歯科治療では，高度に吸収された骨を完全に回復することは困難であり，歯槽骨の再生治療の発展が期待されている．近年，骨細胞から分泌されるスクレロスチンは，Wnt/β-cateninシグナルを阻害し骨形成を阻害するタンパク質であることが報告された．スクレロスチンをコードするSOST遺伝子の喪失は頭蓋骨における骨の過形成を特徴とする硬結性骨硬化症を引き起こす．スクレロスチンの働きを阻害する抗スクレロスチン抗体は骨形成を促進して骨量を増加することが報告されている．しかし，骨再生におけるスクレロスチン抑制の影響についての詳細は不明である．一方，骨誘導因子 (Bone morphogenetic protein 2，BMP-2) は，骨基質中に存在し，異所性骨形成を誘導するタンパク質である．本研究では，BMP-2誘導性異所性骨におけるスクレロスチン発現を検討する．更に，スクレロスチン欠損マウスにおいて異所性骨を作製し，その骨量や骨密度が増加するかを検討することを目的とした．Sostのプロモーター下に造礁サンゴ由来蛍光タンパク質 (Zs-Green) の遺伝子を挿入したSost-Greenレポーターマウス (SostG/+) が松本歯科大学総合歯科医学研究所にて作製された．このSostG/+マウスはExon1へのノックインマウスである．このノックインによりSost遺伝子が欠損したSost遺伝子ホモ欠損マウス (SostG/G) マウスを得た．コントロールマウス (Wild-type，WT) としてC57BL/6マウスを使用した．これらの8週齢雄マウスの右側大腿部内側の筋膜下に，BMP-2を浸漬した直径2 mmの円柱のコラーゲンペレットを埋入し，14日，28日後に誘導された異所性骨を採取した．マイクロCTおよび各種染色により，異所性骨の組織学的解析を行った．また，異所性骨におけるSost遺伝子発現の経時的変化やスクレロスチン欠損マウスに埋入した異所性骨の骨形成関連遺伝子への影響を検討するために，埋入後14日目の異所性骨のmRNA発現をreal-time RT-PCRにて解析した．また，骨芽細胞マーカーとして，アルカリホスファターゼ (Alkaline phosphatase，ALP) の免疫染色を行った．WTマウスのBMP-2ペレットを埋入後14日目に回収した異所性骨は，直径3-4 mmの球形の骨が形成された．埋入後28日目に回収したWTの異所性骨では，扁平な形状の骨が形成された．SostG/Gの異所性骨はWTと同程度の大きさだが，凸凹な形状の骨が形成された．外殻の骨組織の蛍光観察では，埋入後14，28日目のSostG/Gの異所性骨において，Zs-Green陽性の骨細胞を認めたが，WTのマウスでは，Zs-Green陽性の骨細胞は認められなかった．スクレロスチンの免疫染色では，BMP-2ペレット埋入後14，28日目のSostG/Gの異所性骨においてスクレロスチン陽性骨細胞は認めなかったが，WTにおいてスクレロスチン陽性の骨細胞を認めた．以上より，WTマウスのBMP-2誘導性異所性骨ではスクレロスチン陽性骨細胞が出現するが，SostG/Gマウスの異所性骨ではスクレロスチン陽性骨細胞は消失していた．real-time RT-PCRによる解析では， WTの異所性骨においてSost遺伝子の発現は，埋入後7日目では検出されず，10，14，28日目に検出され，14日目にピークを示した．マイクロCTを用いて，形成された異所性骨の骨量と骨塩量を定量的に解析した．埋入後14日目の異所性骨のマイクロCT水平断面画像より，異所性骨の外殻に多孔質な石灰化像を認めた．WTと比較してSostG/Gの異所性骨のBV/TV (WT=4.59%，SostG/G=9.04%) とBMD (WT=468 mg/cm3，SostG/G=602 mg/cm3) は有意に増加した．埋入後28日目の異所性骨のマイクロCT水平断面画像より， BMPペレットを取り囲む外殻に層板様構造の石灰化像を認めた．WTと比較してSostG/Gの異所性骨のBV/TV (WT=5.27%，SostG/G=9.58%) とBMD (WT=763 mg/cm3，SostG/G=943 mg/cm3) は有意に増加した．以上の結果より，BMP-2ペレット埋入後14，28日目の異所性骨は，Sost遺伝子とスクレロスチンタンパク質が発現していた．スクレロスチン欠損マウスにおいて，BMP-2ペレット埋入後14日，28日目の異所性骨の骨量が増加した．このことから，歯槽骨の再生治療において，スクレロスチンの抑制は，骨量を増加させる可能性が示された．doctoral thesi
歯科衛生士の就業継続意思に影響する要因─外的・内的キャリアとの関連性─
Get PDF松本歯科大学大学院歯学独立研究科博士（歯学）学位申請論文;健康増進口腔科学講座（主指導教員:小笠原 正教授）application/pdfothe
The Vitamin D Receptor in Osteoblast-Lineage Cells Is Essential for the Proresorptive Activity of 1α,25(OH)2 D3 In Vivo
Get PDF松本歯科大学博士（歯学）2020甲第238号application/pdf要旨我々は以前、活性型ビタミンD3 [1α,25(OH)2D3]製剤であるエルデカルシトールの薬用量の投与は、骨吸収を抑制することで、骨量を増加させることを報告した。この骨吸収抑制効果は、骨芽細胞系列細胞のビタミンD受容体（VDR）を介することを明らかにした。本研究において我々は、骨芽細胞系列細胞特異的VDR欠損（Ob-VDR-cKO）マウスを用いて、1α,25(OH)2D3の大量投与によって誘導される骨吸収促進が骨芽細胞系列細胞のVDRを介するか否かを調べた。4日間の野生型マウスへの1α,25(OH)2D3（5 µg/kg体重/日）投与は、骨における破骨細胞数を増加させ、骨吸収マーカーであるI型コラーゲンC末端テロペプチド（C-terminal crosslinked telopeptide of type I collagen, CTX-I）の血清濃度を上昇させた。骨吸収促進は、血清カルシウム（Ca）値、線維芽細胞増殖因子23（Fibroblast Growth Factor, FGF-23）値の上昇と、体重の減少を伴っていた。このことは、中毒量の1α,25(OH)2D3は、骨吸収促進と高Ca血症を誘導することを示している。対照的に、野生型マウスへの抗Receptor Activator of NF-κB Ligand（RANKL）中和抗体前投与は、1α,25(OH)2D3が誘導する血清CTX-I, CaおよびFGF23値の上昇を抑制した。また、抗RANKL中和抗体前投与は、1α,25(OH)2D3が誘導する体重減少を抑制した。抗RANKL中和抗体前投与マウスの所見と一致して、1α,25(OH)2D3をOb-VDR-cKOマウスに大量投与しても、破骨細胞数、血清CTX-I値、血清Ca値、血清FGF-23値は、有意に上昇せず、また体重も減少しなかった。以上、本研究において、1α,25(OH)2D3の大量投与による骨吸収促進、血清Ca値上昇および毒性作用は、骨芽細胞系列細胞のVDRを介して発揮されることを明らかにした。doctoral thesi
てんかんを合併した骨格性上顎前突症に対しての一症例
Get PDFapplication/pdfGingival overgrowth, certain characteristic facial features, and a thickening of the calcaneus are known to be side effects of phenytoin, an antiepileptic drug. Furthermore, a thickening of the maxillary alveolar bone, an increase in bone density, suppression of alveolar bone resorption, etc. have also been reported. We performed orthodontic treatment for a patient who had been taking antiepileptic drugs before his first visit. The patient was diagnosed with skeletal maxillary prognathism, in which he had a large overjet of 12.0 mm, and an ANB of +6.0 mm. As a phase I treatment, we attempted mandibular anterior guidance using Activator, and then we attempted to suppress the growth of the maxilla using a lingual arch and headgear. During the treatment, plaque control was thoroughly performed as a measure against gingival overgrowth.The phase II treatment aimed at removing the discrepancy with the arch length and improving the overjet. After performing a gingivectomy, a multi–bracket and a transparatal arch were attached, and use of the headgear continued. Furthermore, in order to improve the overjet, orthodontic anchor screws were applied to the maxillary palate, and then, the maxilla was centrifugally moved to obtain an appropriate occlusion. During this orthodontic treatment period, the patient suffered epileptic seizures intermittently, which required epilepsy surgery. Hence, we had to interrupt treatment. As a result, the period of dynamic orthodontic treatment from the first visit was 10 years and 1 month, which was long; however, the treatment resulted in a proper occlusion. The experience of this treatment reaffirmed that orthodontic treatment is important in that it can contribute to improved QOL for patients and their families, and that orthodontic treatment should be performed in consideration of the patient’s general conditionjournal articl
Characterization of spontaneous spheroids from oral mucosa-derived cells and their direct comparison with spheroids from skin-derived cells
Get PDF松本歯科大学博士(歯学）2019甲第220号application/pdfAbstract Background: Our group has developed a novel method for spontaneous spheroid formation using a specific lowadherence culture plate with around 90° water contact angle. In this study, this method was applied for oral mucosa-derived cells. First, the feasibility of spontaneous spheroid formation was tested. Next, the characteristics of spontaneous spheroids from oral mucosa- and skin-derived cells were compared with special focus on the stemness and neuronal differentiation capability. Methods: Oral mucosal cells were obtained from the palate and buccal mucosa of C57BL/6J mice. Similarly, skin cells were obtained from the back of the same mouse strain. Passage 2–3 cells were inoculated into the specific low-adherence culture plates to form spontaneous spheroids. The effect of basic fibroblast growth factor (bFGF), epidermal growth factor (EGF), and B27 supplement on spheroid formation and maintenance was assessed. Immunofluorescence and quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR) were performed to investigate the expression of pluripotency markers, cell proliferation and apoptosis markers, and neurogenic differentiation markers. Results: Using this culture plate, spontaneous spheroid formation was feasible. This process depended on the presence of serum but was independent of the additives such as bFGF, EGF, and B27 supplement, although they improved the efficiency and were essential for spheroid maintenance. This result was confirmed by the higher expression of Caspase7 in the spheroids cultured without the additives than that with the additives. The spheroids from oral mucosa-derived cells expressed stem cell markers, such as Sox2, SSEA1, Oct4, Nanog, and Nestin. The expression of Sox2 in spheroids from oral mucosal cells was higher than that in spheroids from skin-derived cells. Both spheroid-forming cell types had the ability to differentiate into neural and Schwann cells after neurogenic induction, although significantly higher MAP 2, MBP, Nestin, and Nurr1 gene expression was noted in the cells from oral mucosa-derived spheroids. Conclusions: The results showed that spontaneous spheroids from oral mucosa-derived cells contain highly potent stem cells, which were as good as skin-derived stem cells. The high expression of certain neuronal marker genes suggests an advantage of these cells for regeneration therapy for neuronal disorders.doctoral thesi