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Functional assays for screening antibody activity in droplet-based microfluidics
No full textLes méthodes de criblage haut-débit sur des cellules nécessitent de petits volumes afin de réduire les coûts et permettre une manipulation rapide des échantillons. En effet, une miniaturisation supplémentaire des technologies classiques de criblage haut-débit en plaques devient problématique à cause de l’évaporation et des forces capillaires. Pour surmonter ces limitations, on a développé des systèmes basés sur la microfluidique en gouttes où des cellules sont cultivées dans des microcompartiments aqueux indépendants entourés d’huile perfluorée inerte. Un tel système permet d’effectuer des analyses automatisées à l’échelle individuelle de chaque compartiment suite à un certain temps d’incubation comme le requiert les tests cellulaires à haut-débit.
Nous nous sommes focalisés également sur le développement de tests fonctionnels pour le criblage d’anticorps comme par exemple les anticorps neutralisants le VIH (Virus de l’Immunodéficience Humaine) ou inhibant l’ECA (Enzyme de Conversion de l’Angiotensine). Les approches haut-débit pour la sélection d’anticorps utilisent le « phage display » ou des hybridomes. « Phage display » est une méthode efficace mais permet de sélectionner les anticorps pour leur activité de liaison et non pas de neutralisation. Les hybridomes permettent d’effectuer une sélection en fonction de l’activité neutralisante des anticorps, mais dans cette approche on est limité par le nombre de clones pouvant être sélectionnés. Le but de ce projet était d’établir un nouveau test permettant de sélectionner, au niveau de cellules uniques, des cellules sécrétrices d’anticorps (hybridomes). Ce système pourra être utilisé également pour le criblage de cellules B. Une fois établi, ce système pourrait être utilisé pour le criblage/sélection de beaucoup d’autres anticorps thérapeutiques.High-throughput, cell-based assays require small sample volumes to reduce assay costs and to allow for rapid sample manipulation. However, further miniaturisation of conventional microtiter plate technology is problematic due to evaporation and capillary action. To overcome these limitations, we developed droplet-based microfluidic platforms in which cells are grown in aqueous microcompartments separated by an inert perfluorocarbon carrier oil. Furthermore, this system allowed for an automated analysis of individual compartments subsequent to an incubation period as required for high-throughput, cell-based assays.
In addition, we focused on the development of functional assays for screening antibody activity, e.g. neutralisation of HIV or the inhibition of ACE-1. Common high throughput approaches for antibody screening use phage display or hybridoma cells. Phage display is powerful but based on binding properties rather than neutralising effects. Hybridoma cells allow for direct screening of neutralising activity, but are very restricted in the number of clones that can be screened due to their generation and proliferation as required for conventional screens. The aim of this study was the development of novel screening technology with the ultimate goal of screening single antibody-releasing cells (hybridoma cells). This system should also allow for direct B-cell screening. Once established, this technology could be used for the screening/ selection of many more therapeutic antibodies
The Christians’ political commitment in the French speaking countries of Western Africa (1990-2005).
No full textQuelle politique en Afrique et comment s'engager? Les pays francophones d'Afrique de l'Ouest sont à la recherche d'un système politique stable permettant le développement de l'homme et de la société. Le choix ou l'acceptation de la
démocratie ne garantit pas encore la stabilité politique et ce type de développement. Critiquée par certains et encouragée par d'autres, la démocratie a sa place dans la société africaine. Son inculturation exige la participation de tous les citoyens, notamment des associations, des groupes et mouvements de la société civile. Les religions, et en particulier les chrétiens, ont un rôle décisif à jouer dans le processus démocratique en cours en Afrique. Ceux-ci, dont la croissance numérique et le dynamisme ne sont plus à démontrer en Afrique, peuvent s'unir en associations et agir dans la politique en défendant les valeurs sociales humaines et chrétiennes. L'engagement
politique des chrétiens d'Afrique, par la voie des associations, peut enrichir les formes d'intervention politique de leurs Églises, donner à celles-ci une autre considération dans la société et la politique, et leur permettre de peser dans les instances de prise de décisions politiques.Which politics in Africa and how to commit? The French speaking countries of Western Africa are searching a stable political system allowing them to develop men and society. Political stability and those developments are not yet guaranteed by the choice or the acceptance of democracy. Democracy has its place in African society, even though some criticize and others encourage it. Its enculturation
needs the participation of every citizen, especially associations, groups and movements of the civil society. Religions and Christians, in particular, must play a decisive role in the current democratic system in Africa. Their numerical growth and dynamism need no longer to be
proven in Africa. Christians must unite in associations, and act in politics by defending human and Christian social values. The Christians’ political commitment, by means of
associations, can enrich the substance of politics intervening in their churches. It may also give them new consideration in society and politics, enabling them to influence authorities in their political-decision making
Synthesis and studies of molecular tool-box for proteomic
No full textL’objectif majeur de ce travail a été de développer une boite à outil moléculaire permettant la visualisation des protéines dans la cellule et leur identification par spectrométrie de masse. Ces outils ont été conçus pour réagir de façon bioorthogonale avec des sondes chimiques ciblant une classe spécifique de protéine. Le premier objectif a été de développer une approche de marquage fluorescent des protéines en conditions non-covalentes et non-dénaturantes puis de développer un système pour la purification de complexe protéique en conditions non-dénaturantes pour identifier les sous-unités protéiques.The general topic of this work was to develop new chemicals and biochemical tools box allowing proteinsvisualization in cells and identification of proteins by mass spectrometry. These tools were designed to react bioorthogonally with chemicals probes that target a specific class of protein. The first objective was to develop a non-covalent and non-denaturing fluorescent labeling approach of proteins then to develop a system for protein complex purification in non-denaturing conditions in order to identify multisubunit protein complex and functional activity
Role of glucocorticoid receptor (GR) and transcription intermediairy factor (TIF2) in mouse skeletal muscle at adulte stage.
No full textLe muscle squelettique est un tissu dynamique ayant la capacité de réguler sa taille et son activité en réponse à différents stimuli extérieurs. Mon travail de thèse a principalement porté sur l’étude d’un récepteur nucléaire, le récepteur des glucocorticoïdes (GR) et de l’un de ces co-régulateur, le facteur intermédiaire de transcription TIF2, dans ce tissu. Ainsi afin de mieux comprendre le rôle de GR et de TIF2 dans les myofibres, nous avons généré des souris dans lesquelles ils sont sélectivement invalidés dans le muscle squelettique de souris adultes (souris GR(i)skm-/- et TIF2(i)skm-/-). La première partie de ma thèse a démontré que l’augmentation du découplage mitochondrial dans les myofibres protège les souris TIF2(i)skm-/- de la diminution des capacités oxydatives induite par la sédentarité, retarde le développement du diabète de type 2 et atténue la prise de poids induite par un régime hypercalorique. De plus, nos résultats démontrent que SRC-1 et TIF2 peuvent moduler l’expression de la protéine découplante UCP3 de manière antagoniste, et que l’augmentation des niveaux de SRC-1 dans les myofibres des souris TIF2(i)skm-/- est impliquée de manière critique dans la mise en place des changements métaboliques de ces souris.
La seconde partie de ma thèse a montré que les souris GR(i)skm-/- ont une masse et une force musculaire plus importantes que des souris contrôles, du fait d’une hyperactivation des voies anaboliques. Par ailleurs, ces animaux ne subissent pas l’atrophie musculaire induite par un traitement à la dexaméthasone, un glucocorticoïde de synthèse, ou par une mise à jeun prolongée, montrant que la fonte musculaire est strictement contrôlée par GR dans les myofibres. Cette étude nous a permis d’éclaircir les mécanismes moléculaires et cellulaires régulant l’homéostasie musculaire et ouvriront de nouvelles voies dans le traitement des myopathies.Skeletal muscle is a dynamic tissue that has the capacity to regulate its size in response to a variety of external cues. My thesis work focused on the role of a nuclear receptor, the glucocorticoid receptor (GR) and of one of it co-regulator, the transcriptional intermediary factor TIF2, in this tissue. To improve our knowledge concerning the role of GR and TIF2 in myofibers, we generated mice in which GR or TIF2 are selectively ablated in skeletal muscle myofibers at adult stage (GR(i)skm-/- and TIF2(i)skm-/- mice). The first part of this work demonstrated that increased mitochondrial uncoupling in skeletal muscle myocytes protected these mice from decreased muscle oxidative capacities induced by sedentariness, delayed the development of type 2 diabetes and attenuated high caloric diet-induced obesity. Moreover, our results demonstrate that SRC-1 and TIF2 can modulate the expression of the uncoupling protein UCP3 in an antagonistic manner, and that enhanced SRC-1 levels in TIF2-deficient myofibers are critically involved in the metabolic changes of TIF2(i)skm-/- mice. The second part of this work demonstrated that GR(i)skm-/- mice skeletal muscle mass and strength were increased, due to anabolic pathway enhancement. Moreover, such mice are protected against dexamethasone-induced muscle catabolism and partially resistant to fasting-induced muscle atrophy, thus demonstrating that myofiber GR plays a major role in coordinating degradation of muscle proteins. This work highlighted molecular mechanisms regulating muscle homeostasis and should provide new insights in treatment of muscular disorders
Contribution of microscanner in the preclinical study of hepatic and pancreatic cancer treatments in rat.
No full textL’expérimentation animale, étape préliminaire incontournable dans la recherche pré clinique, repose essentiellement sur le petit animal. L’imagerie in vivo constitue un outil précieux qui permet l’obtention d’informations anatomiques, biochimiques, physiologiques, génétiques, pharmacologiques, etc..., tout en respectant l’intégrité cellulaire et tissulaire des animaux étudiés. Elle ouvre ainsi d’énormes perspectives scientifiques dans les domaines de la biologie du développement, de la physiopathologie des maladies, ainsi qu’en cancérologie, du diagnostic précoce au traitement des cancers.
Notre travail de thèse a consisté à démontrer la pertinence du microscanner dans le suivi longitudinal et la prise en charge de modèles orthotopiques de cancers hépatiques et pancréatiques chez le rat. Il s’agit de deux types de cancers très peu ou pas curables pour lesquelles la recherche concernant les bases de l’oncogenèse de même que l’exploration des nouvelles voies thérapeutiques qui en résultent devient une urgence. Au vu des résultats de notre thèse l’imagerie par microscanner pourrait avoir un rôle dans l’évaluation préclinique de thérapeutiques émergeantes pour ces types de cancers. Sur le plan de l’expérimentation animale, l’imagerie in vivo par microscanner permet d’une part de réduire le nombre d’animaux utilisés pour chaque expérience et d’autre part de définir de nouveaux points limites (issus de l’imagerie) autorisant l’arrêt des expériences en amont de toute souffrance de l’animal. Ceci répond ainsi aux principales exigences de l’expérimentation animale.Animal experimentation is an unavoidable step in preclinical studies and relies on small animals. In vivo imaging constitutes a precious tool giving information on anatomy, biochemistry, physiology, genetic, pharmacology, while saving cell and tissue integrities of investigated animals. It opens wide the scientific perspective in the field of biological development, physiopathology of diseases, as well as in oncology, from early diagnosis to cancer treatment.
This thesis had demonstrated the relevance of microscanner in the longitudinal follow up and the management of orthotopopic models of hepatic and pancreatic carcinoma in the rat. For both of these cancers, known to be very poorly or even non curable, there is an urgent need of research on the bases of their oncogenesis as of investigation of the resulting new therapeutic routes. The results of our thesis suggest a role for micro-CT in the preclinical evaluation of their emerging therapies. As far as animal experiment is concerned, in vivo microscanner imaging permits, beside a reduction in the number of experimental animals, to establish new (imaging) end-points allowing experiment ending before any sign of animal suffering. It fulfils the main requirements of animal experiment
Evolution of the SH3 domain protein interaction networks in yeast; functions and interactions of the Lsb1 and Lsb2 protein family.
No full textChez S. cerevisiae, les nutriments, les lipides et les protéines membranaires sont internalisés par endocytose. Ce processus requiert des filaments d’actine dynamiques. Un facteur clé pour la polymérisation de l’actine est le nucléateur Arp2/3, activé par des facteurs de promotion de
la nucléation (NPF). Pendant l’endocytose, la polymérisation de l’actine est initiée, entre autre, par les NPFs Las17 et les myosines de type I. Nous avons caractérisé deux protéines, Lsb1 et Lsb2 qui lient Las17 par leurs domaines SH3 et qui inhibent in vitro la polymérisation de l’actine dépendante du complexe Arp2/3. Lsb1 et Lsb2 colocalisent avec des protéines du
cytosquelette, Las17, Abp1 et Sla1 et influencent la stabilité de Las17 in vivo. Nous avons ainsi identifié deux nouveaux régulateurs négatifs de l’activité NPF de Las17 ce qui permet de mieux comprendre son rôle dans la polymérisation de l’actine et l’endocytose. Nous avons également caractérisé chez des levures S. cerevisiae, A. gossypii, C. albicans et S. pombe des réseaux d’interactions protéine-protéine à travers des spécificités de liaison des domaines SH3 par la technique SPOT. Une conservation de la spécificité des myosines de type I, connu par ailleurs, a été montrée par analyse bioinformatique et valide notre méthode. De plus, nous montrons que la fonction de la myosine I de recruter la machinerie de polymérisation dans un extrait de S. cerevisiae est conservée de S. cerevisiae à A. gossypii.
Nous faisons des analyses similaires pour de nombreuses autres protéines à domaine SH3 ce qui nous permettra de prédire des interactions protéines-protéines ainsi de mieux comprendre l’évolution des réseaux d’interaction protéique.In S. cerevisiae, nutrients, lipids and membrane proteins are internalized by endocytosis. These processes require dynamic actin filament assembly. A key factor for actin
polymerization is the nucleating complex Arp2/3 that is activated by nucleation promoting factors (NPF). During the process of endocytosis, a strong NPF activity is exhibited by Las17, the unique S. cerevisiae homolog of WASP and the type I myosin, Myo5, among others. Here, we characterize two SH3 domain containing proteins Lsb1 and Lsb2. We could show that both proteins bind to the proline rich sequence of the NPF Las17 via their SH3 domains and efficiently inhibit Las17 induced Arp2/3-dependent actin polymerization in vitro. We could also show that Lsb1 and Lsb2 partially colocalize with Las17 and that they influence the stability of Las17 in vivo. However, we did not detect any defect in endocytosis for the single or double deletion mutants of LSB1 and LSB2. In conclusion, we identified two new negative regulators of the NPF activity of Las17 that will help us to further understand actin nucleation and endocytosis. The characterization of the SH3 domain binding specificity in four yeast species S. cerevisiae, A. gossypii, C. albicans and S. pombe showed high conservation of the type I myosin specificity during evolution, validating our method. The ability of type I myosin to recruit the actin polymerization machinery in S. cerevisiae is conserved from S. cerevisiae to A. gossypii. Similar analysis of numerous other SH3 domains, including Lsb1 and Lsb2, is in progress, which will allow us to predict new protein-protein interactions and to gain insights into the
evolution of protein interaction networks
Prevention of hepatitis C virus reinfection during liver transplantation using monoclonal anti-receptor antibodies
No full textLe virus de l’hépatite C (VHC) représente un problème de santé publique majeur. Environ 170 millions de personnes sont infectées dans le monde, et plus de 70% développeront une infection chronique. Le traitement actuel qui associe l’interféron-αpégylé et la ribavirine ne permet de guérir que 50% des patients tous génotypes confondus. Les complications de l’hépatite C chronique, la cirrhose et le carcinome hépatocellulaire, représentent des indications majeures de transplantation hépatique (TH). Malheureusement la récurrence de l’infection par le VHC sur le greffon est systématique et évolue vers une cirrhose en moins de 5 ans chez une proportion importante de patients. A l’heure actuelle, il n’y a pas de moyen de prévention de la réinfection du greffon par le VHC. Une meilleure connaissance des phases précoces de la réinfection permettrait le développement de stratégies préventives de l’infection par le VHC. Durant ma thèse nous nous sommes intéressés aux mécanismes de la réinfection par le VHC au cours de la TH en nous focalisant sur l’étape de l’entrée virale dans l’hépatocyte. Nous avons montré pour la première fois qu’au cours de la TH, et contrairement aux variants non sélectionnés après la greffe, les variants du VHC sélectionnés après la greffe (qui réinfectent le greffon) entrent plus efficacement dans la cellule hôte et échappent à la neutralisation induite par les anticorps des sérums autologues collectés avant la greffe. Nous avons, par la suite, identifié les mutations impliquées dans l’entrée et l’échappement viral aux anticorps neutralisants. Ces mutations favorisent l’entrée virale en modulant la dépendance du VHC à un des facteurs d’entrée virale, le CD81. La protéine de jonction Claudine 1 (CLDN1) est un autre facteur d’entrée essentiel à l’infection par le VHC. Nous avons produit des anticorps monoclonaux anti-CLDN1 et montré que ces anticorps inhibent de manière spécifique tous les génotypes du VHC ainsi que les variants viraux résistants à la neutralisation par le sérum autologue lors de la TH. L’ensemble de ces résultats suggère que l’étape d’entrée du virus pourrait constituer une cible prometteuse pour le développement de stratégies préventives de la réinfection du greffon par le VHC.Hepatitis C virus (HCV) is a major problem of public health. Approximatively 170 million individuals are infected worldwide, and more than 70% of infected individuals will develop chronic hepatitis. The current treatment based on pegylated interferon-α and ribavirin can only cure 50 % of patients. HCV-related cirrhosis and hepatocellular carcinoma are a leading indication for liver transplantation (LT). The major limitation of LT is the universal re-infection of the liver graft. To date, there is no prophylactic strategy to prevent re-infection. A better understanding of the early phases of re-infection would allow developing of preventive strategies. During my PhD thesis, we focussed on the viral entry step to study the molecular mechanisms of re-infection of the liver graft. For the first time, we have demonstrated that during LT, selected variants re-infecting the liver graft show enhanced entry and escape from antibody-mediated
neutralization. We identified two adaptive mutations in envelope glycoprotein E2 mediating enhanced entry and evasion of an highly infectious escape variant. These mutations markedly modulated CD81 receptor dependency resulting in enhanced viral entry. Among the host entry
factors involved in viral entry, claudin 1 (CLDN1) is essential for HCV infection. We have produced monoclonal anti-CLDN1 antibodies and have shown that these antibodies specifically inhibit HCV entry from all major genotypes, as well as cell entry of the highly infectious escape variants of HCV that were resistant to autologous neutralizing antibodies. Taken together, these results suggest that targeting HCV entry into hepatocytes with specific monoclonal antibodies, as anti-CLDN1 antibodies, may constitute a novel antiviral approach to prevent primary HCV
infection, such as after LT
In vitro and in vivo analysis of anti‐tumour activity of UVI5008, a novel chromatin enzyme inhibitor
No full textDe plus en plus de données indiquent que le cancer n’est pas uniquement la conséquence d’altérations génétiques, mais résulte également en partie d’altérations épigénétiques. De façon intéressante, cette dérégulation épigénétique est réversible, faisant des enzymes
responsables des cibles thérapeutiques potentielles. En effet, les enzymes de modification de la chromatine et en particulier les Histones Déacétylases (HDACs) et les ADN
Méthyltransférases (DNMTs), ont récemment émergé comme de nouvelles cibles prometteuses appelées « drogues épigénétiques » pour le traitement des cancers. Le but de ce
projet a été de caractériser l’activité de UVI5008, un dérivé de la psammaplin A qui a initialement été isolée de l’éponge marine Psammaplysilla. Ce composé a été synthétisé dans le laboratoire de l’un de nos collaborateurs, le professeur Angel R. de Lera (Université de Vigo, Espagne), et nous avons pu montrer que ce composé cible spécifiquement plusieurs enzymes épigénétiques et présente une activité anti-tumorale in vitro et in vivo. Nous avons évalué l’activité anti-tumorale potentielle de UVI5008 in vitro sur des lignées de cellules cancéreuses et ex vivo sur des blastes issus de patients leucémiques. Nos résultats
indiquent que UVI5008 réduit la prolifération cellulaire en induisant un arrêt du cycle cellulaire en phase G1-M et l’apoptose dans des lignées cellulaires de leucémie myéloïde
aiguë (AML) établies et dans des blastes issus de patients AML en culture ex vivo. Des essais enzymatiques in vitro ont permis de mettre en évidence que UVI5008 bloque l’activité de HDAC1, 4 et 6 et augmente l’acétylation globale et spécifique des histones. Outre son activité
d’inhibition des HDACs, ce nouvel inhibiteur bloque également la méthylation des îlots CpG situés sur les promoteurs des gènes suppresseurs de tumeur p16/INK4 et RAR-Beta, un récepteur de l’acide rétinoïque. Enfin, nous avons observé que UVI5008 possède des capacités inhibitrices des sirtuines, le niveau d’acétylation de p53 sur le résidu lysine 382 étant augmenté suite à un traitement avec ce composé. Nous avons également pu mettre en évidence une activité antitumorale de UVI5008 in vivo dans des xénogreffes de cellules HCT116 (issues de cancer du colon humain) et de cellules MCF7 (provenant de cancer du
sein humain) dans des souris nues, de même que dans un modèle murin de cancer mammaire, les souris MMTV-Myc. Dans ces différents modèles, une augmentation de l’acétylation des histones et de p53K382 a pu être observée in tumouri. De façon importante, l’activité de UVI5008 est spécifique des cellules cancéreuses et sans toxicité importante pour les cellules normales. De plus, son activité est indépendante de p53, ce qui représente un avantage, la
majorité des cancers ayant une mutation ou une extinction de l’expression de p53. ErbB2 joue un rôle important dans de nombreuses pathologies humaines. Son niveau est
augmenté par amplification génique ou surexpression dans environ 30 % des cancers mammaires humains, de même que dans d’autres pathologies humaines, et cette marque est
associée à un mauvais pronostique pour les patients. Nous avons donc choisi de tester l’activité anti-tumorale de UVI5008 sur un autre modèle de tumorigenèse chez la souris par la surexpression de l’oncogène ErbB2 dans la glande mammaire, les souris MMTV-ErbB2, et nous avons pu montrer une efficacité similaire de UVI5008 sur ces tumeurs mammaires. À l’heure actuelle, il n’existe pas de traitement qui cible simultanément l’ensemble de ces 3
familles d’enzymes que sont les HDACs, les DNMTs et les SIRTs. Nos résultats suggèrent fortement que ces enzymes peuvent être ciblées simultanément par un composé unique, ce qui pourrait représenter un avantage pour les nouvelles thérapies contre le cancer.It is becoming increasingly clear that cancer is a consequence not only of genetic but also of epigenetic alterations. Interestingly, this epigenetic deregulation is reversible making the corresponding enzymes promising drug targets. Chromatin modifying enzymes, in particular
histone deacetylases (HDACs) and DNA methyltransferases (DNMTs), have recently emerged as new promising targets of the so-called “epigenetic drugs” for the treatment of
cancer. The aim of this project is to characterize the activities of UVI 5008, a derivative of psammaplin A, a natural product that was originally isolated from the marine sponge Psammaplysilla sp. This compound was synthesized by one of our collaborators, Prof. Angel.
R de Lera’s lab (Vigo University, Spain) and we were able to show that it targets several epigenetic effector enzymes and displays anti-tumour activity in vitro and in vivo.
We have assessed the tumoricidal activity of UVI5008 both in vitro in a panel of cancer cell lines as well as ex vivo in leukemia patient’s blasts. Our results indicate that UVI5008 reduces cell proliferation by inducing G1-M arrest and apoptosis in established acute myeloid leukemia (AML) cells and AML patient’s blasts in ex vivo culture. In vitro enzymatic assays showed that UVI5008 blocks HDAC1, 4 and 6 as well as increases the global and site-specific histone acetylation. Apart from its HDAC inhibitory activity, the novel inhibitor blocks CpG island methylation of the promoters of p16/INK4 and retinoic acid receptors (RAR)-beta
tumor suppressors. Moreover, we have observed that UVI5008 has sirtuin inhibitory capacity as it increases the acetylation levels of p53 on lysine 382 residue. We could also show that UVI5008 exerts its antitumor effect in vivo in HCT-116 (human colon cancer) and MCF-7 (human breast cancer) xenografted tumours in nude mice as well as in a mouse breast cancer model MMTV-myc, which was accompanied by increased histone and p53K382 acetylation in tumouri. Importantly, UVI5008 anti-tumoral activity is selective for cancer cells, without significant toxicity to normal cells and is p53-independent which is also promising, as in the
majority of cancers p53 is either silenced or mutated.
It is well documented that ErbB2 gene plays an important role in human malignancies. It is amplified and /or overexpressed in approximately 30% of human breast carcinomas and in many other types of human malignancies and individuals with ErbB2-overexpressing tumours
have significantly poor clinical outcome. Taking into consideration this fact, we have assessed the anti tumour activity of UVI5008 in one more mouse breast cancer model MMTV-ErbB2, which revealed that UVI5008 is equally active in ErbB2 overexpressing breast tumours. To date there is not a single drug that simultaneously targets all these three families of enzymes namely HDACs, DNMTs and SIRTs. Taken together, our data strongly suggest that targeting these enzymes simultaneously by a single drug is a feasible and an attractive paradigm for new cancer therapies
laminin-511, actor of inflammation and of tumoral progression in the intestine?
No full textLa laminine-511 (α5β1y1, élément de la matrice extracellulaire, fait partie des molécules médiatrices des interactions épithélio-mésenchymateuses qui contrôlent le développement intestinal puis le renouvellement cellulaire dans l’organe mature. Une rupture de l’homéostasie de l’ensemble de ces mécanismes est centrale dans les maladies inflammatoires chroniques de l’intestin (MICI) qui, dans une certaine proportion, peuvent dégénérer en cancer colorectal. Ce travail de thèse a permis de démontrer que la chaîne α5 de laminine, caractéristique de la laminine-511, pouvait d’une part réguler l’expression de gènes cibles importants dans les fonctions biologiques majeures des cellules intestinales et d’autre part était capable de réprimer ou d’activer deux voies de signalisation, Wnt et PI3K/Akt, suivant le contexte physiologique. Dans le contexte pathologique particulier des MICI, j’ai pu définir la composition en laminines de la lame basale dans des segments pathologiques issus d’exérèses chirurgicales de côlons de patients atteints de maladie de Crohn ou de rectocolite
hémorragique. De façon très intéressante, des glandes atypiques y ont été trouvées, délimitées
par une lame basale enrichie en chaînes α1 et α5 de laminines et caractérisées par une
accumulation nucléaire de la protéine p53, suppresseur de tumeur. J’ai pu définir, par des
expériences in vitro, une chronologie d’activation montrant que la protéine p53 était capable
de stimuler l’expression endogène de la chaîne α1 de laminine. J’ai également pu modéliser
les résultats obtenus chez l’humain par des inductions chimiques d’inflammation et de
tumorigenèse associée grâce à des modèles de souris transgéniques sur-exprimant soit la
chaîne α1 soit la chaîne α5 dans l’épithélium intestinal, modèles établis par l’équipe. Les
dérégulations des laminines qui ont été observées peuvent jouer un rôle important dans la
rupture de l’épithélium, l’inflammation et les mécanismes de réparation qui leur sont inhérents ou dans la progression des MICI en cancer.The laminin-511 (α5β1y1, key element of the extracellular matrix, mediates the epithelialmesenchymal interactions controlling the intestinal development and the cell renewal in the mature organ. A deregulation of the mechanisms implied in the homeostasis is obvious in inflammatory bowel diseases (IBD). IBD can in some cases degenerate into colorectal cancer.
My present work demonstrates that the α5 chain, characteristic of the laminin-511 molecule, regulates the expression of target genes important for major biological functions of the intestinal cells as well as is able to repress or activate two signaling pathways, Wnt and
PI3K/Akt, according to the physiological context. In the particular context of IBD, I could define the laminin composition of the basement membrane in pathological samples from surgical resection of colon from patients with Crohn’s disease or Ulcerative colitis.
Interestingly, atypical glands are also found in these samples. These glands are encircled with a basement membrane enriched in lamininα1 and α5 chains and are characterized by a nuclear accumulation of p53, a tumor suppressor. By in vitro experiments, I have defined a
chronology of activation showing that the p53 protein is able to stimulate the endogenous expression of the laminin α1 chain. I could mimic the results obtained in humans by triggering inflammation and inflammation-associated tumorigenesis chemically to transgenic murine models overexpressing either the laminin α1 or α5 chain, models that were previously established in the team. The laminin-observed deregulations could play an important role in the epithelium rupture, the inflammation and the inherent repair mechanisms, as well as in the progression of IBD into cancer
The star formation history of Virgo spiral galaxies. Combined spectral and photometric inversion
No full textCette thèse étudie l'influence du balayage par pression dynamique sur l'histoire de la formation stellaire des galaxies spirales qui se trouvent dans des amas.
Le balayage par pression dynamique est l'interaction hydrodynamique entre le milieu interstellaire (ISM) d'une galaxie spirale qui évolue dans le puits de potentiel d'un amas, et le milieu intra-amas (ICM). Si la pression dynamique exercée par l'ICM excède la force d'attraction gravitationnelle due au potentiel galactique, la galaxie perd du gaz de sa partie externe.
L'amas de la Vierge constitue un laboratoire idéal pour étudier les effets de l'environnement sur l'évolution des galaxies. En effet, cet amas est riche en spirales et dynamiquement jeune. Des observations nous montrent que la quantité de gaz atomique qui se trouve dans les spirales de la Vierge est moins importante que celle des galaxies du champ. En particulier, les spirales de la Vierge est moins importante que celle des galaxies du champ. En particulier, les spirales des amas présentent des disques HI tronqués (Giovanelli & Haynes 1983). Pour celles des galaxies qui présentent aussi une distribution stellaire symétrique, le balayage par pression dynamique semblerait être l'origine la plus probable de la troncature du gaz du disque.This thesis investigates the influence of ram pressure stripping on the star formation history of cluster
spiral galaxies.
Ram pressure stripping is the hydrodynamical interaction between the interstellar medium (ISM) of a
spiral galaxy that is moving inside the potential well of a cluster, and the intracluster medium (ICM). If
the dynamical pressure exerted by the ICM is larger than the restoring force due to the galactic potential,
the galaxy loses gas from the outer disk.
The Virgo cluster is an ideal laboratory to study environmental effects on galaxy evolution, because
it is rich in spirals and dynamically young. From observations we know that the amount of atomic gas
in Virgo spirals is less than that of galaxies in the field. In particular cluster spirals show truncated HI
disks (Giovanelli & Haynes 1983, Cayatte et al. 1990). For those galaxies that also show a symmetrical
stellar distribution, ram pressure stripping is the most probably origin of the gas-disk truncation