Repositorio Institucional de CIAD
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“LAS CATEPSINAS LISOSOMALES COMO PARTE DEL SISTEMA DE DEFENSA DEL CAMARÓN BLANCO Litopenaeus vannamei
Get PDF"Las catepsinas B y L son cisteína proteasas recientemente descritas en crustáceos. Estas enzimas se caracterizan por hidrolizar proteínas de patógenos en el sistema lisosomal de mamíferos. En el camarón Litopenaeus vannamei se sabe que además de tener participación en la glándula digestiva, estas incrementan su expresión génica a causa de infección por bacterias tipo Vibrio spp. Debido a la necesidad de generar conocimiento acerca de la respuesta inmune del camarón, cuya sobrevivencia en condiciones de cultivo se ha visto afectada por la presencia de patógenos como el Virus del síndrome la mancha blanca (WSSV), se hace imperativo el estudio de las catepsinas y su función biológica en esta especie. El objetivo de esta investigación es evaluar los cambios en los niveles de ARNm de las catepsinas B y L y medir su actividad enzimática en la glándula digestiva y branquias del camarón Litopenaeus vannamei infectado con WSSV para establecer su posible participación en la respuesta inmune. En organismos experimentalmente infectados con WSSV, se detectaron cambios en la expresión relativa de las catepsinas B y L en comparación con camarones sanos. En la glándula digestiva de los camarones infectados no se detectó la expresión de ambos genes a las 0-3 horas post-infección (hpi), sin embargo, a las 24 y 42 hpi la cantidad de ARNm de ambos genes se incrementó significativamente, lo que sugiere una respuesta innata temprana. En branquias se detectó un incremento en la expresión de ambos genes tras la inoculación, pudiendo deberse a una respuesta innata inmediata. En cuanto a la evaluación de la actividad enzimatica de ambas catepsinas, en organismos infectados, se detectó un incremento a partir de la 1 hpi que se mantuvo hasta las 12 hpi, el cual comenzó a disminuir a las 24 hpi, alcanzando su nivel más bajo a las 42 hpi. Este resultado sugiere una respuesta innata temprana ante la infección, en donde las enzimas ya existentes en el lisosoma incrementan su actividad en presencia del patógeno.
Palabras claves: actividad enzimática, catepsina B, catepsina L, cisteína proteasas, expresión de genes, Litopenaeus vannamei, respuesta inmune.
PREVALENCIA DE PARASITOSIS INTESTINALES EN CANANEA, SONORA Y AGUA COMO FACTOR DE RIESGO ASOCIADO A SU TRANSMISIÓN
Get PDF"En México, estas parasitosis intestinales constituyen una de las principales causas de morbilidad, particularmente en la población infantil. La ciudad de Cananea Sonora ha mostrado un incremento de 60% en las tasas de enfermedades gastrointestinales del año 2003 al 2010, con 77.9/1000 habitantes según el Anuario estadístico del Sistema Nacional de Información en Salud (SINAIS), y considerada la segunda más alta en el estado de Sonora en 2010. Además, un estudio realizado en la ciudad de Cananea en 2013, reveló un 9.5% de C. parvum en muestras domiciliarias de agua. Por lo anterior, es importante el diagnóstico oportuno de estas infecciones con el fin de implementar las medidas sanitarias de salud necesarias para su prevención y control. Durante este estudio, se seleccionaron un total de 183 individuos en base a un aleatorizado de la lista actualizada de domicilios del año 2013 en la ciudad de Cananea, Sonora, para determinar la prevalencia de parásitos intestinales e identificar los principales factores de riesgo asociados a su presencia considerando dos aspectos: primero analizando el agua domiciliaria de los participantes en busca de parásitos intestinales, y segundo, definiendo si el agua de la llave se usaba como fuente directa de consumo. Lo anterior se investigó usando una encuesta, la cual incluyó también otros factores de riesgo a la infección y los cuales fueron tratados como variables confusoras. La asociación de las variables a la infección parasitaria, fue realizada categorizando a la muestra de participantes en el grupo de “Preescolares y Escolares” y otro grupo nombrado “Adultos”. Los datos fueron sometidos a análisis estadísticos multivariados. Se encontró una prevalencia de 52.5% de parasitosis intestinal general en el total de participantes. El parásito de mayor prevalencia general fue Endolimax nana con un 35.5%. Los parásitos patógenos predominantes fueron Cryptosporidium sp y Giardia lamblia, con 23.5% y 17.5% respectivamente. El agua se encontró asociada (p<0.05) a la infección parasitaria en el grupo de preescolares y escolares que manifestaron consumir agua de la llave no tratada. De acuerdo a la prevalencia de parasitosis intestinal encontrada en la ciudad de Cananea y a la asociación encontrada con el agua como factor de riesgo, es recomendable hervir el agua de la llave, o bien evitar su consumo.
ESTILOS DE LIDERAZGO Y ORGANIZACIÓN EN LAS COOPERATIVAS PESQUERAS DE GUAYMAS Y LA RELACIÓN CON SU ALCANCE DE MERCADO
Get PDFEl objetivo del estudio es identificar estilos de liderazgo y formas de organización en las cooperativas pesqueras de Guaymas y evaluar sí existe una relación con su alcance en el mercado; con el fin de discernir sí hay una relación causal entre estos factores. El proceso metodológico consiste en entrevistas aplicadas a dirigentes de 32 cooperativas pesqueras de Guaymas. El instrumento es de elaboración propia con base en la teoría consultada. Los resultados indican que los estilos más abundantes son los autocráticos. Las estructuras organizativas son más complejas en la medida que las cooperativas atienden mercados más exigentes y son menos complejas en la medida en que éstas venden sus productos a mercados menos complejos. La gran mayoría de las cooperativas
pesqueras sirven únicamente cómo proveedoras de materia prima a las plantas procesadoras locales. Se concluye que tienen mayor alcance de mercado las cooperativas pesqueras con más de 20 socios y con estilos consultivos de liderazgo
IMPACTO SENSORIAL DE UN EXTRACTO ANTIOXIDANTE Y ANTIBACTERIANO DE SEMILLA DE MANGO APLICADO EN MANGO FRESCO CORTADO var. HADEN
Get PDFEl objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de la aplicación de extracto de
semilla de mango sobre la aceptación sensorial, capacidad antioxidante y carga
bacteriana de mango fresco cortado var. Haden. Los compuestos fenólicos
presentes en el extracto de semilla de mango fueron ácido gálico y ácido
clorogénico (160.15 y 100.85 mg/g, respectivamente). Dicho extracto presentó
un contenido de fenoles de 277.4 mg EAG/g y 143.7 mg EQ/g de flavonoides
totales, además mostró una capacidad antioxidante para la inhibición del radical
DPPH de 2034.1 μmol ET/g y 4205.7 μmol ET/g para ABTS. Por otro lado, el
extracto fue efectivo para inhibir el crecimiento in vitro de bacterias patógenas
como Escherichia coli (concentración mínima inhibitoria, CMI=16 mg/mL,
concentración mínima bactericida, CMB=18 mg/mL), Salmonella Typhimurium
(CMI=16 mg/mL, CMB=18 mg/mL), Staphylococcus aureus (CMI=16 mg/mL,
CMB=16 mg/mL) y Listeria monocytogenes (CMI=16 mg/mL, CMB=16 mg/mL).
La concentración de 6.25 mg/mL del extracto no afectó el nivel de agrado de
olor y sabor de los frutos tratados comparado con los testigos; sin embargo,
afectó ligeramente el nivel de agrado de color, sin ser rechazado por los
consumidores. Esta concentración del extracto provocó un incremento en el
contenido de fenoles totales (15.12%), flavonoides totales (13.08%) y actividad
antioxidante (DPPH 27.69% y ABTS 42.17%) de los frutos tratados comparados
con los testigos. El tratamiento causó una reducción en la carga de E. coli, S.
Typhimurium, S. aureus y L. monocytogenes inoculadas previamente en los
frutos de mango. Estos resultados comprueban el potencial que tiene el extracto
de semilla de mango a la concentración de 6.25 mg/mL como agente
antioxidante y antibacteriano en la conservación de mango fresco cortado, sin
causar un impacto negativo en la aceptación sensorial de los frutos
DIETA Y DISBIOSIS INTESTINAL EN NIÑOS CON DIABETES TIPO 1 ó ENFERMEDAD CELIACA DE LARGA EVOLUCIÓN: ESTUDIO DE CASOS
Get PDFEl objetivo de esta tesis fue evaluar si las restricciones dietéticas son las responsables de dicha disbiosis en niños con DT1 o EC. Se registró historial clínico. Se evaluó antropometría y dieta. Se analizaron haplotipos y autoanticuerpos. Se cuantificaron Prevotella y Bacteroides en heces, por PCR tiempo real. Participaron 7 niños con DT1, 4 con EC y 8 sin esas patologías, como referencia. El alelo predominante de los niños con DT1 o EC fue DQB1*0302. De acuerdo a los valores de puntaje Z de IMC/Edad, los niños con DT1 o EC presentaban desde desnutrición leve hasta sobrepeso. En la dieta de aquéllos con DT1 se observó reducción sustantiva de carbohidratos y aumento de grasas totales y saturadas, respecto a los saludables. Mientras Prevotella fue prevalente en niños saludables, en aquéllos con DT1 o EC casi no se detectó. Bacteroides se presentó en todos los participantes, con mayor acumulación en los niños con DT1. En conclusión, se observó una modificación en la dieta de los niños con DT1, lo cual podría afectar la microbiota y limitar la recuperación de su equilibrio, durante la evolución de la DT1 o EC
“EVALUACIÓN DE LA INCIDENCIA Y NIVELES DE AFLATOXINA M1 EN LECHE MATERNA DE MADRES DONADORAS EN LA REGIÓN CENTRO-SUR DE MÉXICO”
Get PDF"El objetivo de este trabajo fue determinar la incidencia y niveles de Aflatoxina M1 en la leche de un grupo de madres lactantes mexicanas, de la región centro-sur del territorio nacional, en diferentes periodos y etapas de lactación. Para ello se colectaron 112 muestras de leche de madres lactantes que asistieron voluntariamente a donar leche a un banco especializado ubicado en la zona noreste del Estado de México, en el periodo enero-agosto de 2014. Los resultados obtenidos mostraron una tasa de incidencia del 95% con niveles de contaminación en un rango de 0.00127-0.0342 μg AFM1/L. Las muestras recolectadas en invierno mostraron niveles significativamente (p0.05) respecto a la etapa de lactación. El tipo de alimentación de las participantes se correlacionó significativamente (p<0.05) con los niveles de AFM1 determinados en las muestras, siendo carne de cerdo, cereal, tortillas de maíz, crema, aceite de girasol, pan y yogurt, los alimentos que podrían determinar la presencia de AFM1 en la leche materna. En contraste, el peso-estatura, nivel de estudio, nivel socioeconómico y edad de las participantes no se correlacionaron con los niveles de AFM1 determinados. Los resultados obtenidos en este trabajo sugieren que la población infantil, particularmente de la región centro-sur del territorio nacional, podría estar expuesta de forma crónica a niveles importantes de AFM1 a través de la leche materna.
Palabras clave: Leche materna, aflatoxina M1, población infantil
CARACTERIZACIÓN ESTRUCTURAL DE PCNA DE CAMARÓN Litopenaeus vannamei Y SU INTERACCIÓN CON LA ADN POLIMERASA DEL VIRUS DEL SÍNDROME DE LA MANCHA BLANCA
Get PDF"El antígeno nuclear de proliferación celular (PCNA) es una proteína involucrada en varios procesos celulares, principalmente en la replicación del ADN. Durante la replicación del material genético, el PCNA se une a la ADN polimerasa sujetándola a la cadena de ADN y de esta manera aumenta la procesividad de la enzima. Esta interacción se lleva a cabo a través de una región llamada caja PIP, presente en la mayoría de las proteínas que se unen a PCNA. Algunos virus como el virus del síndrome de la mancha blanca (WSSV) codifican su propia ADN polimerasa Este virus en particular es de gran importancia para la industria de cultivo de camarón Litopenaeus vannamei, ya que por su alta patogenicidad causa grandes pérdidas económicas en pocos días después de la infección. Se conoce el genoma completo del virus el cual posee alrededor de 180 marcos de lectura abiertos, dentro de los cuales el marco de lectura abierto 514 codifica para una ADN polimerasa. En estudios anteriores realizados por nuestro equipo de trabajo se caracterizó esta enzima recombinante, la cual tiene una actividad deficiente in vitro. Esto sugiere que la enzima necesita un factor de procesividad adicional, probablemente del hospedero ya que en el genoma viral no se ha identificado una proteína que tenga esta función. En el presente trabajo se caracterizó la estructura tridimensional de PCNA del camarón blanco Litopenaeus vannamei (LvPCNA) mediante cristalografía de rayos X. La estructura se compone de un homotrímero con forma de anillo y mantiene el arreglo típico de la mayoría de los PCNA de eucariotas. Con la estructura cristalográfica generada se realizó un modelo donde se aprecia una factible interacción del LvPCNA con la caja PIP de la ADN polimerasa viral. Este estudio ayuda a entender la interacción huésped-patógeno y abre una oportunidad para generar una estrategia antiviral, considerando que la inhibición de la interacción LvPCNA-ADN polimerasa viral puede bloquear la replicación viral.
Palabras claves: Antígeno nuclear de proliferación celular, ADN polimerasa, L. vannamei
METABOLITOS VOLÁTILES EMITIDOS POR FRUTOS DE TOMATE INFECTADO POR Alternaria COMO INDICADORES DE INFECCIÓN EN ESTADOS TEMPRANOS DE DESARROLLO
Get PDF"El tomate es una de las principales hortalizas que se produce y exporta en México. Debido a su fisiología y alto contenido de agua es altamente perecedero y susceptible a podredumbres causadas por fitopatógenos como Alternaria alternata, el cual produce pérdidas postcosecha. Las enfermedades son detectadas una vez que los síntomas son visibles en el fruto y ya es demasiado tarde para controlarlas, por lo que surge el interés de contar con métodos alternativos para la detección temprana del patógeno antes del desarrollo de la enfermedad. Se ha reportado que tanto los frutos como los microorganismos, así como durante el proceso de infección, éstos emiten metabolitos volátiles (MV) los cuales pueden ser utilizados como indicadores de la enfermedad o de la presencia del patógeno. En este trabajo se evaluaron cambios en el perfil de MV en tomates sanos e infectados por Alternaria alternata con el fin de evaluar la posibilidad de utilizarlos para la detección temprana de la infección, así como también metabolitos volátiles liberados por el hongo. Se inocularon frutos de tomate con esporas de A. alternata y tomates no inoculados fueron utilizados como testigo. Los frutos se mantuvieron a 15 y 20°C por 48 horas. Se tomó una muestra del espacio de cabeza mediante la técnica de cromatografía de gases y microextracción en fase sólida (CG-MEFS), a las 0, 3, 6, 9, 12, 24, y 48 horas post-inoculación. Adicionalmente se determinaron los MV emitidos por A. alternata Los metabolitos volátiles se analizaron mediante un cromatógrafo de gases utilizando estándares comerciales y un detector de masas cuadrupolo para su identificación.
CARACTERIZACIÓN DE LAS CÉLULAS PRESENTADORAS DE ANTÍGENO DEL SISTEMA RESPIRATORIO DEL CERDO Y SU PAPEL EN LA RESPUESTA INMUNE
Get PDF"Las células presentadoras de antígenos (APCs), están ubicadas estratégicamente en todos los sitios con alta exposición a antígenos, como el sistema respiratorio. Las APCs más importantes en el sistema respiratorio son las células dendríticas (DCs) de pulmón, las DCs de linfonodos y los macrófagos alveolares pulmonares (PAMs). Sin embargo, aún en la actualidad, es difícil discriminar entre DCs y macrófagos en muchas especies, esto debido a que no se han descrito marcadores fenotípicos exclusivos para cada población. En el cerdo, la información disponible acerca de las APCs asociadas al sistema respiratorio es escasa. Por esta razón ha sido una tarea difícil la caracterización de las DCs pulmonares, así como su rol en la inmunopatología de las enfermedades respiratorias en el cerdo. El objetivo de este estudio fue caracterizar fenotípica y funcionalmente las poblaciones de APCs de pulmón (LCs) y compararlas con otras células presentadoras de antígeno asociadas al tracto respiratorio porcino; así como la susceptibilidad de las L-Cs, APCs de linfonodo mediastinal (LN-Cs) y PAMs al virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV). Para ello, las células fueron seleccionadas en base a su tamaño y su complejidad y la población de APCs con el fenotipo MHC-IIhighCD172a+ fue seleccionada. En esta población, se evaluó la expresión de los marcadores CD1a, CD163, CD206, CD16 y CD11R3, así como su funcionalidad en base a sus habilidades de internalización de antígenos, reacción leucocitaria mixta y capacidad de producción de lisozima. Para la evaluación de la susceptibilidad, las APCs fueron inoculadas con la cepa del PRRSV NVSL-9587 con un MOI de 0.1 y se incluyeron controles sin virus (mock); y se analizó las replicación, fenotipo, MLR y apoptosis. Los resultados muestran que los receptores CD1a, CD163 y CD206 fueron expresados diferencialmente entre L-Cs, LN-Cs y PAMs, sugiriendo el fenotipo MHCII
highCD172+CD1alow/-CD163lowCD206- para las L-Cs y MHCII highCD172+CD1a+CD163low/-CD206+ para las LN-Cs. Adicionalmente, se observaron indicios de que el PRRSV podría estarse replicando y afectando el fenotipo y funcionalidad en las L-Cs. En conclusión, se logró caracterizar a las APCs del sistema respiratorio del cerdo y se observó preliminarmente la infección por PRRSV en las L-Cs.
Palabras clave: Células presentadoras de antígenos, cerdo, células dendríticas, sistema respiratorio, pulmón, PRRSV.
INMOVILIZACIÓN DE PROTEASAS ÁCIDAS DE ESTÓMAGO DE SARDINA MONTEREY (Sardinops sagax caerulea) EN SOPORTES A BASE DE QUITINA Y QUITOSANO
Get PDF"Se realizó la inmovilización de un extracto semipurificado de proteasas ácidas obtenido de estómagos de sardina Monterey (Sardinops sagax caerulea) en diferentes soportes de inmovilización como esferas de quitosano, hojuelas de quitosano y hojuelas
de quitina parcialmente desacetilada. Los diferentes soportes fueron activados con genipina (inmovilización covalente) y tripolifosfato de sodio (inmovilización iónica). Los sistemas de inmovilización con esferas de quitosano fueron los que presentaron la
mayor capacidad de unir proteína (mg proteína/g soporte) pero a su vez exhibieron la menor retención de actividad proteolítica. El sistema de inmovilización que presentó la mayor retención de actividad enzimática (P < 0.05) fue el constituido por hojuelas de
quitina parcialmente desacetilada activadas con tripolifosfato de sodio. Por lo tanto, este sistema fue caracterizado bioquímica y operacionalmente. Las proteasas inmovilizadas presentaron su máxima actividad enzimática a 50°C, diez grados por arriba de la temperatura óptima de las proteasas solubles. Asimismo, la estabilidad térmica de las proteasas inmovilizadas fue mayor (P < 0.05) que la de las proteasas sin inmovilizar. El pH óptimo de reacción, tanto de las proteasas solubles como inmovilizadas se mantuvo en 2; sin embargo, las proteasas inmovilizadas presentaron mayor estabilidad a este pH que su contraparte soluble. El sistema
biocatalítico mantuvo el 40.7% de su actividad enzimática inicial después de dos ciclos de reacción. La estabilidad al almacenamiento a 6 y 25°C de las proteasas ácidas de sardina fue influida positivamente por el proceso de inmovilización, observándose que después de 60 días de almacenamiento las proteasas inmovilizadas presentaron una mayor actividad enzimática residual (P < 0.05) que las proteasas solubles. Los resultados obtenidos indican que el proceso de inmovilización aplicado
confiere efectos positivos en las características bioquímicas y de estabilidad operacional de las proteasas ácidas provenientes de vísceras de sardina Monterey potenciando su aplicación como herramienta biotecnológica. Palabras clave: Proteasas, inmovilización, quitina, desechos de la pesca