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EVALUACIÓN In vivo DEL POTENCIAL EFECTO PROTECTOR DE Lactobacillus reuteri y Lactobacillus casei Shirota CONTRA EL EFECTO TÓXICO DE ACRILAMIDA
Get PDFLos procesos térmicos empleados durante la fabricación de alimentos
pueden generar compuestos tóxicos como la acrilamida (AA), la cual es un
potente agente neurotóxico y probable carcinógeno. Estudios in vitro han
evidenciado que ciertas bacterias ácido lácticas presentan la capacidad de
remover AA en solución acuosa, así como reducir su disponibilidad bajo
condiciones gástricas simuladas. El objetivo de este trabajo fue evaluar la
capacidad de Lactobacillus reuteri NRRL14171 y Lactobacillus casei Shirota para
reducir la absorción intestinal de acrilamida y reducir los efectos tóxicos in vivo
en un modelo murino. Como parte de la estrategia experimental, primero se
evaluó in vitro el efecto de la fijación de AA sobre las propiedades de agregación,
hidrofobicidad y adhesión a mucosa intestinal de las bacterias probióticas. Para
ello se emplearon diferentes concentraciones de AA y diferentes tiempos de
incubación. Para el modelo murino se usaron 25 ratas distribuidas en cinco
grupos experimentales a los cuales se les administró el compuesto tóxico (AA) y
las bacterias anteriormente mencionadas, durante un período de 20 días. Las
cepas mostraron porcentajes de autoagregación en un rango de 11 a 83%, de
co-agregación de 39 a 51% e hidrofobicidad de 10 a 44%. Por otra parte, las
bacterias presentaron porcentajes de adhesión a la mucosa intestinal de rata en
un rango de 63 a 78%, siendo L. casei, no solo la bacteria con el mayor porcentaje
de adhesión, sino también la de valores más altos de agregación. En general,
dichos porcentajes no fueron afectados significativamente (p≤0.05) cuando las
cepas fijaron previamente AA en su superficie celular. En cuanto a los resultados
obtenidos del modelo murino se observó que el grupo que solamente se le
administró AA, presentó 2 veces más altos los niveles de ésta sustancia tóxica
en hígado, comparado con el resto de los grupos experimentales, sin embargo,
los niveles de su metabolito glicidamida, se mostraron en la misma cantidad, en
todos los grupos experimentales, excepto el grupo control, en el cual no se
detectó la presencia de éste compuesto. Estos hallazgos sugieren que las cepas
aún en presencia de AA presentan alto potencial para adherirse y colonizar el intestino, formando una barrera biológica, por lo cual evitan la absorción de una
porción de la acrilamida administrada a las ratas bajo estudio en el modelo
murino
SELECCIÓN DE BACTERIAS ÁCIDO LÁCTICAS AISLADAS DE QUESO FRESCO QUE POSEEN EL SISTEMA CRISPR-CAS COMO MECANISMO DE DEFENSA CONTRA BACTERIÓFAGOS
Get PDFLas bacterias ácido lácticas (BAL) son muy valoradas debido a sus aplicaciones en tecnología de alimentos por coferir características sensoriales como sabor, aroma y textura; y además, es ampliamente documentado que pueden ejercer efectos benéficos a la salud. Una de las principales fuentes de aislamiento de las BAL son los quesos artesanales como los quesos genuinos mexicanos, tal es el caso de los quesos Fresco y Cocido de Sonora, que son considerados como quesos frescos por no incluir a la maduración en su proceso de manufactura. Por otro lado, las capacidades de las BAL pueden verse afectadas por distintos factores como el ataque de bacteriófagos, los cuales son capaces de matarlas o afectarlas a nivel genético pudiendo comprometer su desempeño como cultivos lácticos. Afortunadamente, algunas BAL pueden poseer el sistema CRISPR-Cas que es uno de los mecanismos más robustos que les permite generar y heredar la resistencia contra fagos. Por todo lo anterior, el objetivo de este trabajo fue determinar la presencia y actividad del sistema CRISPR-Cas como mecanismo de defensa contra bacteriófagos en BAL de interés tecnológico, aisladas de queso fresco. Para ello, se llevó a cabo una caracterización fisicocoquímica y microbiológica del queso fresco artesanal de acuerdo a metodologías estándar y se aplicó secuenciación masiva para caracterizar la microbiota bacteriana con la finalidad de encontrar las BAL representativas de este tipo de productos. Con base en ello, mediante análisis bioinformático se estudió el sistema CRISPR-Cas de cepas específicas, seleccionadas por sus capacidades tecnológicas demostradas. Los resultados fisicoquímicos y microbiológicos mostraron una alta variabilidad composicional y presencia de diversos grupos bacterianos, lo cual evidencia la falta de estadarización de procesos y de aplicación de buenas prácticas de manufactura. Los géneros de BAL más representativos fueron Lactococcus, Streptococcus, Lactobacillus y Leuconostoc. El análisis de los genomas de dos cepas de Limosilactobacillus fermentum evidenció que estas poseen dos locus CRISPR-Cas cada una (tipos I-E y II-A), que poseen todos los elementos necesarios para su funcionamiento. Asimismo, el análisis de los espaciadores CRISPR-Cas permitió determinar que la mayoría corresponden a bacteriófagos específicos de Limosilactobacillus fermerntum y en menor medida a plásmidos bacterianos. Por lo anterior con el presente estudio, se logró revelar la presencia del sistema CRISPR-Ca
REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN DE FOSFOFRUCTOCINASA Y FRUCTOSA 1,6- BISFOSFATASA EN CAMARÓN Litopenaeus vannamei POR HIF-1 EN HIPOXIA
Get PDFLa hipoxia es un fenómeno que enfrenta el camarón blanco Litopenaeus vannamei tanto
en hábitats naturales como en cultivo. En estas condiciones, emplea diversas estrategias
de supervivencia, entre ellas, la activación del metabolismo anaerobio para obtener
energía. En esta tesis se estudió la regulación de dos enzimas del metabolismo de la
glucosa. En mamíferos se ha reportado que la fosfofructocinasa (PFK) y la fructosabisfosfatasa
(FBP) se inducen en hipoxia. Por ello, posterior a la caracterización del cDNA
de FBP, se evaluó el efecto de la hipoxia en la expresión de PFK y FBP en L. vannamei,
enzimas clave de glucólisis y gluconeogénesis, respectivamente. Los resultados
experimentales demostraron que la expresión de PFK y FBP, es inducida por efecto de la
hipoxia en hepatopáncreas pero no en branquias. Partiendo de esto, se evaluó la
participación de HIF-1 (Hypoxia Inducible Factor, por sus siglas en inglés) en este
proceso. Para ello, se inyectó intramuscularmente RNA de doble cadena (dsRNA) para
silenciar HIF-1 y tras un período de 24 h, los camarones fueron sometidos a 3 y 48 h de
hipoxia (1.57 ±0.2 mg DOL-1). Los resultados indicaron que HIF-1 participa en la
regulación de PFK en hepatopáncreas en ambos tiempos de hipoxia debido a que la
inducción de este gen (~1.6 y ~4.2-veces a 3 y 48 h, respectivamente) es afectada
significativamente cuando HIF-1 está silenciado. Además, a las 3 h de hipoxia aumentó
la actividad de PFK y la concentración de lactato (comparado con sus respectivos
controles de normoxia). No obstante, cuando HIF-1 fue silenciado, esta respuesta se
restringió. Por otra parte, a las 48 h de hipoxia los transcritos de FBP aumentaron (~5.3
veces) y se demostró que HIF-1 interviene en esta inducción ya que esta respuesta fue
parcialmente disminuida en los camarones tratados con dsRNA. Sin embargo, la actividad
de FBP no se afectó ni por la hipoxia ni por efecto del silenciamiento, lo cual sugiere
cambios post-traduccionales o estabilización de la proteína. Por lo tanto, estos resultados
sugieren que la glucólisis se está acelerando en camarón en condiciones de hipoxia y que
HIF-1 está involucrado en este proceso. Además, la inducción de FBP sugiere que la
gluconeogénesis o la ruta de las pentosas fosfato se activa bajo condiciones de hipoxia.
Estos hallazgos posicionan a HIF-1 como un importante factor de transcripción que regula
el metabolismo de la glucosa en camarón en condiciones de hipoxia
EFECTO DEL ZINC SOBRE Giardia lamblia, SU PATOGENICIDAD E INDUCCIÓN DE RESPUESTA INMUNE HUMORAL
Get PDFLa giardiosis es una enfermedad gastrointestinal común y una causa importante de diarrea y malabsorción. La Organización Mundial de la Salud y el Fondo de las Naciones Unidas para la Infancia recomiendan la administración de suplementos de zinc como terapia auxiliar en niños con diarrea. Evidencia reciente indica que el efecto benéfico del zinc es patógeno-específico. Por lo anterior, es de interés investigar la relevancia del zinc en la patogénesis de la infección por Giardia. En éste trabajo, el gluconato de zinc (GZ) provocó alteraciones morfológicas e inhibición (>90%) en el crecimiento de trofozoítos in vitro (P<0.001). El análisis de trofozoítos por microscopía electrónica de barrido (MEB) reveló alteraciones topológicas severas; análisis por microscopía electrónica de transmisión (MET) mostratron cambios ultraestructurales: formación de áreas vacías en citoplasma, acumulación de material granular electrodenso, desplazamiento del disco adhesivo, alteración y pérdida de flagelos. En consecuencia, se consideró estudiar como la deficiencia o suplementación con zinc influyen en la capacidad de colonización y patogenicidad de Giardia in vivo. Jerbos (Meriones unguiculatus) fueron asignados a tres grupos: ZA (zinc- adecuado), ZD (zinc-deficiente) y ZS (zinc-suplemento) (ZA+50 mg GZ/kg peso/día). La infección se asoció con efectos adversos sobre la ganancia de peso del grupo ZA. La deficiencia de zinc (ZD) acentuó la severidad del efecto, incrementando significativamente la pérdida de peso. La administración de zinc (ZS) mejoró la ganancia de peso. Jerbos ZD desarrollaron altas cargas parasitarias, mientras que en ZS se observó una reducción significativa en la intensidad de la infección (P<0.05). MEB mostró alteraciones morfológicas en trofozoítos recuperados de jerbos ZS. Mientras que en ZA y ZS no se detectaron trofozoítos al día 30pi, en jerbos ZD la infección persistía con altas cargas parasitarias (6.6 log10). El título de anticuerpos (IgG) incrementó al avanzar la infección en todos los grupos. La administración de zinc potenció las respuesta inmune anti-G. lamblia (ZS 0.249 vs ZA 0.131, 5dpi). Jerbos ZD mostraron menores incrementos en IgG (ZD 0.249 vs ZA 0.525, 30dpi), lo que sugiere una respuesta inmune deteriorada
TAXONOMÍA Y ACTIVIDAD ANTIPROLIFERATIVA DE AISLADOS DE GanodermaDE SONORA: MICELIO VS CUERPOS FRUCTÍFEROS
Get PDFAlgunas especies de Ganoderma, principalmente G. lucidum se han utilizado en la medicina tradicional asiática por más de dos milenios, como tónico medicinal, tanto cuerpos fructíferos como micelio pulverizados. El consumo de este hongo se recomienda para tratar distintos padecimientos, entre estos el cáncer. Algunas especies del género sintetizan triterpenoides con actividad antiproliferativa. Ganoderma presenta una distribución cosmopolita, con registros en zonas templadas, tropicales y desérticas. La especie más estudiada y la única que se cultiva a nivel mundial es G. lucidum, no obstante existen más de 219 en el género y muchas de ellas aún no han sido estudiadas. En este trabajo se realizaron exploraciones a distintos puntos de Sonora, con el fin de aislar cepas de Ganoderma e identificarlas taxonómicamente. Se estudiaron ejemplares de ocho especies: G. applanatum, G. curtisii, G. lobatum, G. oerstedii, G. sessile, G. sessiliforme, G. subincrustatum y G. weberianum. Este es el primer reporte de G. lobatum y G. oerstedii en Sonora, y de G. sessile y G. weberianum en México. Además, se estudió la variabilidad morfológica de una cepa de G. subincrustatum, comparando basidiomas silvestres y cultivados. El estudio mostró que los caracteres propuestos para la delimitación de las especies del género (tipo de contexto e incrustaciones, forma de los elementos de la cutícula y esporas) son constantes entre los distintos ejemplares estudiados. También se evaluó la actividad antiproliferativa de extractos de dos fases de desarrollo (micelio dicariótico y cuerpos fructíferos) de aislados de G. subincrustatum y G. weberianum de Sonora, sobre distintas líneas celulares. Se encontró que los extractos de cuerpos fructíferos presentan mayor actividad que los de micelio. Mediante cromatografía en una columna con sílica se obtuvieron 26 sub-fracciones del extracto de cuerpos fructíferos de G. subincrustatum (escogido por su alta actividad), de las cuales las fracciones F7 y F15 presentaron actividad antiproliferativa en la línea A549 (IC50: 37.9 y 41.9 μg/mL, respectivamente). Sin embargo, el extracto completo tuvo mayor actividad (IC50:<25 μg/mL) sobre todas las líneas evaluadas (HeLa, Raw 264.7, A549 y L-929), lo cual indica que existen otros compuestos bioactivos en el extracto
TRANSFERENCIAS MONETARIAS Y SU IMPACTO EN EL BIENESTAR DE LOS HOGARES EN LA REGIÓN TRADICIONAL DE MÉXICO
Get PDFUno de los principales objetivos de los gobiernos en el mundo, así como de organismos internacionales es la búsqueda de mecanismos y herramientas, para la mejora del bienestar de la población. La crisis de 2008 afectó fuertemente a la población mexicana y sus efectos fueron visibles en el ingreso familiar, el empleo y la pérdida de bienestar. En este sentido, las transferencias monetarias se han vuelto un tema relevante de análisis en relación a la obtención de bienestar.
Este estudio tiene como objetivo conocer el impacto de dos transferencias monetarias, una pública (Programa Oportunidades) y otra privada (remesas familiares), en el bienestar de los hogares en la Región Tradicional para el período 2006-2014. La información proviene de la Encuesta Nacional de Ingresos y Gastos de los Hogares (ENIGH) para los años 2006, 2010, y 2014. Se emplea el Método de Líneas de Bienestar y los Índices Foster-Greer-Thorbecke para estimar los niveles de bienestar económico, y se recurre a la Técnica de Microsimulación Estática para medir el impacto del Programa Oportunidades y las remesas.
Se encontró que tanto en el país, como en la Región Tradicional, la incidencia en carencia de bienestar económico ha ido aumentado del periodo de crisis (2006-2010) al periodo de poscrisis (2010-2014). Los impactos de las transferencias monetarias son paliativos para la magnitud de carencia de bienestar de los hogares. Por otro lado, los recursos recibidos en los hogares, por ambas transferencias monetarias, han demostrado ser mucho menores al necesario para verdaderamente lograr mejoras en los niveles de bienestar mínimo y económico
EFECTO DE LAS CARACTERÍSTICAS QUÍMICAS Y REOLÓGICAS DE LAS PECTINAS EN LA MICELARIZACIÓN DE CAROTENOIDES
Get PDFLos carotenoides son pigmentos liposolubles con efectos benéficos en la salud. Su
absorción es extremadamente baja y limita su bioactividad. El proceso de absorción
implica su transferencia de las gotas de grasa emulsificadas hacia las micelas. Solamente
los carotenoides micelarizados pueden ser absorbidos. La micelarización de carotenoides
es altamente variable, dependiendo principalmente de la matriz alimenticia que los
contiene. Bajo diversas premisas se hipotetizó que la cantidad y propiedades de las
pectinas contenidas en alimentos ricos en carotenoides limitan su micelarización a través
de diversos mecanismos involucrados en la digestión de lípidos. Esta hipótesis se intentó
demostrar tomando como modelo de estudio las pectinas y carotenoides del chile
Jalapeño. Se extrajeron y caracterizaron pectinas de chile Jalapeño verde y rojo, crudo y
procesado, permitiendo obtener pectinas con diversas propiedades. Se seleccionaron tres
pectinas con diferente peso molecular, grado de esterificación y viscosidad. Se
prepararon emulsiones aceite en agua con dos niveles (0.14% y 1%) de concentración de
pectina y aceite enriquecido con carotenoides libres y esterificados de chile Jalapeño
rojo. Las emulsiones se sometieron a un proceso de digestión in vitro para evaluar el
impacto de la cantidad y propiedades de pectina en diversos eventos involucrados en la
micelarización de carotenoides. La viscosidad del medio gastrointestinal dependió de la
concentración y propiedades de las pectinas adicionadas. Dicha viscosidad fue diferente
a la observada en soluciones modelo. El tamaño de partícula incrementó con la
concentración de pectina en los medios intestinal y micelar. Las fibras secuestraron sales
biliares, pero este efecto se rejudo al incrementar la concentración de pectina. Los
resultados sugirieron que esta capacidad de secuestro dependió del grado de
esterificación. La lipólisis, medida por titulación (PH-STAT), dependió de la
concentración y tipo de pectina. Con altas concentraciones, la lipólisis fue más tardada.
La cantidad de ácidos grasos liberados pareció estar inversamente relacionada con el
peso molecular de las pectinas
ESTABILIDAD FÍSICO-QUÍMICA DE UNA BACTERIOCINA OBTENIDA DE Lactobacillus graminis CON POTENCIAL CONTROL DE BACTERIAS PATÓGENAS Y FITOPATÓGENAS
Get PDFA pesar de las propuestas prometedoras de múltiples bacteriocinas descubiertas en estudios in vitro, pocas han logrado mantener su actividad en las aplicaciones, debido a condiciones que provocan su inactivación. La estabilidad físico-química, es un parámetro importante en la caracterización de una bacteriocina. Por ello el objetivo de este trabajo fue obtener un concentrado de bacteriocina producida por un aislado crioconservado por dos años y que fue obtenido de frutos, para caracterizar su estabilidad fisico-química y evaluar su efectividad contra bacterias patógenas y fitopatógenas. De los 369 aislados bacterianos antagonistas crioconservados por dos años, se observó que 49 de éstos mantuvieron la actividad antagónica, y solamente dos, presentaron actividad bacteriocinogénica sobre Salmonella Saintpaul. La producción de bacteriocina del aislado con mayor halo de inhibición (A1), se evaluó a las 24 y 48 horas, y su efectividad se comparó con la de Lactobacillus animalis (control). El A1 mantuvo una actividad constante entre las 24 y 48 horas y el sobrenadante del cultivo de 24 horas, con una concentración de 17.8 5mg/mL de proteína, presentó mayor halo de inhibición (28 mm) que L. animalis (17 mm) sobre la cepa indicadora. La bacteriocina producida por A1, resultó ser estable en un amplio rango de temperaturas, pH y ante distintos solventes, metales y surfactantes. Además fue resistente a proteasa, proteinasa K, tripsina y lipasa. Adicionalmente, resultó efectiva para controlar el crecimiento de S. Typhi, S. Typhimurium, S. choleraesius, E. coli O157:H7 y Erwinia carotovora. La identificación molecular del aislado mediante la secuenciación del gen 16S ARN ribosomal, indicó un 99% de identidad con Lactobacillus graminis. Basados en las características de estabilidad físico-química y la efectividad contra otra bacteria se infiere que la bacteriocina producida por esta cepa representa una potencial alternativa de biocontrol sobre el fitopatógeno Erwinia carotovora y sobre patógenos contaminantes en frutos y hortalizas
EFICACIA DE UN PROGRAMA PILOTO DE INTERVENCIÓN UTILIZANDO LA ENTREVISTA MOTIVACIONAL PARA PROMOVER CAMBIOS Y MEJORAR LA ADHERENCIA A UNA DIETA Y ACTIVIDAD FÍSICA SALUDABLES EN SOBREVIVIENTES DE CÁNCER DE MAMA.
Get PDFEl cáncer de mama (CaMa) es la segunda causa de muerte por neoplasias malignas en mexicanas mayores de 25 años. México ha reportado solo 58.9% de supervivencia. Las organizaciones de cáncer recomiendan a las sobrevivientes realizar actividad física (AF) moderada, consumir verduras, frutas y granos enteros y un peso corporal saludable. La adopción de estos estilos de vida saludables es un problema constante en la salud pública; estrategias como la Entrevista Motivacional (EM) podrían favorecer cambios positivos, mejorar la adherencia, aumentar la calidad de vida y prevenir la recurrencia. El objetivo fue evaluar la eficacia de un programa piloto de intervención utilizando la EM para promover cambios y mejorar la adherencia a un estilo de vida saludable en sobrevivientes de CaMa. Se realizó un ensayo clínico aleatorizado y controlado de dos grupos de sobrevivientes de CaMa durante 2 meses (n=12). El grupo de intervención recibió orientación nutricional mediante la EM (n=6), y el de comparación recibió consejería nutricional (n=6). Los cambios y adherencia a la orientacion alimentaria se estimaron utilizando recordatorios de 24 horas, análisis de perfil lipídico y concentración de α y β carotenos en plasma, la AF se evaluó con podómetro. De manera exploratoria se evaluó la dieta, el perfil lipídico, la concentración de carotenoides, las prácticas alimentarias, el peso corporal y nivel de AF a los cuatro meses. Se realizaron pruebas t-Student para muestras independientes y para datos exporatorios se utilizaron pruebas t para muestras relacionadas. La edad promedio de las participantes fue de 48.9 años. A los dos meses, hubo un aumentó de β-carotenos en el grupo EM (43.6 ± 25.6 μg/dL) que refleja mayor consumo de vegetales y frutas. El porcentaje de energía proveniente de grasa disminuyó más en el grupo de intervención (-6.2±13.0%). La fibra aumentó 2.5 ± 21.6 gramos en este grupo y en el de comparación disminuyó 2.7 ± 6.7 gramos. Los cambios en dieta se reflejaron en la ingestión energética, que disminuyó 505.0±0.843.8 kcal en el grupo EM y 682.8±0.826.6 kcal en el de comparación. Ambos grupos aumentaron el número de pasos (869 y 536 pasos adicionales para EM y grupo de comparación)
Evaluación del proceso de colonización de Vibrio parahaemolyticus causante de la Enfermedad de Necrosis Aguda del Hepatopáncreas en Litopenaeus vannamei
Get PDFEn México, durante 2013 se registraron mortalidades en granjas de camarón blanco Litopenaeus vannamei asociadas a la Enfermedad de la Necrosis Aguda del Hepatopáncreas (AHPND, por sus siglas en inglés), comúnmente llamada Enfermedad de la Muerte Temprana (EMS, por sus siglas en inglés), que causaron un descenso de 40% de la producción nacional. En el desarrollo de esta enfermedad,
cuyo agente causal fue identificado como cepas toxigénicas de Vibrio parahaemolyticus (Vp) que portan un plásmido con genes codificantes para liberación de toxinas tipo Pir, se han caracterizado tres fases: inicial, aguda y terminal. Con la finalidad de identificar si esta bacteria patógena tiene capacidad de colonización, se realizaron desafíos experimentales en L. vannamei con las cepas de
Vp AHPND+ M0904, considerada de alta virulencia, y M0605, referida como de moderada virulencia. Se diseñó una sonda molecular dirigida al gen PirA, la cual fue utilizada para la técnica de hibridación in situ para identificar presencia de Vp M0605 en estómago y hepatopáncreas, y de M0904 en hepatopáncreas de los organismos desafiados. Con el objetivo de observar la posible adherencia y
comprobar los daños ocasionados a nivel ultraestructural en estómago y hepatopáncreas, se utilizó microscopía electrónica de transmisión. Mediante los primers AP4, se realizó amplificación por PCR en tiempo real del ADN de las regiones PirA/PirB contenido en estómago, hepatopáncreas y agua de estanque de los camarones desafiados con la cepa M0605 con el fin de probar su multiplicación.
La sonda de ADN probó especificidad para Vp AHPND+ y permitió distinguir entre las bacterias portadoras del gen PirA de aquéllas libres de él. La presencia de Vp AHPND+ fue comprobada en estómago y hepatopáncreas de los organismos inoculados con las cepas M0904 y M0605 desde las primeras horas post infección. Se encontró multiplicación de Vp M0605 en agua, mas no en estómago ni
hepatopáncreas. No se encontraron evidencias de adherencia durante las primeras horas post infección en estómago ni hepatopáncreas, pero pudo observarse los cambios ocurridos a lo largo de las fases del proceso infeccioso. No se encontró
relación entre la cantidad de bacteria y el nivel de mortalidad de los organismos inoculados