Repositorio Institucional de CIAD
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CARACTERIZACIÓN BIOQUÍMICA Y MODELACIÓN ESTRUCTURAL DE LA ENZIMA DEHIDROASCORBATO REDUCTASA (DHAR) DE MANGO (Mangifera indica L.)
Get PDFLas plantas se encuentran expuestas de manera constante a diversos factores de estrés que las lleva a producir especies reactivas de oxígeno (ROS) adicionales a las generadas en el metabolismo celular, causándoles estrés oxidativo y daño celular. Para protegerse del daño oxidativo causado por ROS, las plantas cuentan con un sistema antioxidante, siendo el ascorbato (AsA) el principal antioxidante hidrosoluble en plantas. La cantidad de AsA es estrechamente controlada por sus rutas de síntesis y de reciclaje, donde el reciclaje tiene un importante rol en la respuesta y adaptación al estrés. En la vía de reciclaje de AsA, la enzima dehidroascorbato reductasa (DHAR), la cual es un miembro de la familia de las glutatión S-transferasas (GSTs) es clave para el mantenimiento del AsA reducido. El objetivo de este trabajo fue determinar las características bioquímicas y modelar la estructura tridimensional de la enzima DHAR de mango (MiDHAR). La proteína se sobreexpresó de forma heteróloga encontrándose en forma soluble y se purificó por cromatografía de afinidad a metales (Ni-NTA). Una vez purificada, se determinó su actividad enzimática así como su estabilidad a diferentes rangos de temperatura y pH. La proteína pura fue estable en un amplio rango de pH y temperatura conservando más del 80 y 75% de su actividad a pH 9 y 45°C, respectivamente. Por otra parte, MiDHAR mostró un comportamiento cinético de tipo Michaelis-Menten y se determinaron las constantes cinéticas para sus sustratos, obteniendo una Km y Vmax para GSH de 5.63mM y 84.3μM min-1 y para DHA 0.77mM y 74.0μM min-1 respectivamente. A partir de la secuencia aminoacídica de MiDHAR, se obtuvo un modelo estructural por homología de la enzima, utilizando la estructura cristalina recientemente reportada de DHAR de arroz (OsDHAR) (PDB: 5D9W) y se identificaron los posibles aminoácidos del sitio catalítico. Los resultados muestran que la MiDHAR es una enzima estable a valores de pH altos y es termoestable a las condiciones probadas, lo que podría brindarle resistencia en condiciones de estrés. Se sugiere un mecanismo catalítico de reducción tipo ping-pong, que sería necesario corroborar con otros estudios
Evaluación de la actividad antimicrobiana de un extracto de tallo de Yucca baccata y su uso potencial como conservador en homogenizado de pollo
Get PDFLa proliferación microbiana en alimentos tiene gran impacto negativo en el sector salud y en la industria a nivel mundial. Las causas de las pérdidas y el desperdicio de alimentos están relacionados principalmente con limitaciones económicas, deficiencias de infraestructura y almacenamiento, los sistemas de comercialización involucrados y en gran parte por las condiciones de envasado y conservación de los alimentos. El presente proyecto surge del creciente interés en el desarrollo de conservadores naturales efectivos y seguros para alimentos. El objetivo del trabajo fue evaluar el uso de un extracto con actividad antimicrobiana del tallo de Yucca baccata como componente activo en un envase para conservación de homogenizado de pollo. La extracción se realizó con agua (extracto acuoso) y con n-butanol (extracto butanólico), el cual fue posteriormente evaporado para obtener el extracto en polvo. El rendimiento del extracto butanólico fue de 6.76 g/100 g de polvo del tallo de Yucca baccata (6.7%) y del extracto acuoso fue de 24.69 g/100 g de tallo empleado (24.6%). La evaluación cualitativa de actividad antibacteriana de ambos extractos frente a Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 usando el método de difusión por disco demostró mayor sensibilidad frente al extracto butanólico. Se determinó la concentración mínima inhibitoria (CMI) usando el método de microdilución en caldo, siendo 37.5 mg/mL para P. aeruginosa. Para probar los resultados obtenidos in vitro, se añadió el 1% en peso del extracto a un homogenizado de pechuga de pollo y se almacenó en refrigeración durante 10 días (4°C±1), realizando una cuenta total viable de mesófilos en placa cada 2 días, tanto al homogenizado con el extracto como a un control (0% de extracto)
DISEÑO DE UN PROTOCOLO PARA LA PROPAGACIÓN IN VITRO DE Agave parviflora Torr. MEDIANTE ORGANOGÉNESIS DIRECTA
Get PDFEl género Agave es endémico del Continente Americano. En México crecen más de 125 taxones de los más de 200 registrados a nivel mundial. Sonora tiene alrededor de 30 especies endémicas de maguey, entre ellas Agave parviflora Torr. Esta especie actualmente se encuentra amenazada (NOM-059-SEMARNAT-2010), por la pérdida de su hábitat. El objetivo de este estudio fue diseñar un protocolo de propagación in vitro mediante organogénesis directa como método alternativo para su conservación. Se colectaron plantas con apariencia sana y vigorosa, se tomó como explante el meristemo apical del pseudotallo. Se desinfectaron los explantes y colocaron en medio Murashige-Skoog (MS) suplementado con auxinas y citocininas por siete semanas. Plántulas >2 cm se colocaron en medio MS modificado con diferentes concentraciones de 6-Bencilaminopurina (BAP) para su multiplicación. Plántulas >5 cm se indujeron a enraizamiento en medio MS suplementando 0.25 y 0.5 mg L-1 de ácido indolacético (IBA) y ácido naftalenacético (ANA) y un testigo sin fitoreguladores. La aclimatación se realizó en cuartos de cultivo transfiriendo plantas completas a macetas en una mezcla de sustrato. Los datos se analizaron en un diseño completamente al azar con arreglo factorial y estadística descriptiva. La obtención de brotes en el cultivo in vitro fue de 12.6 ± 6.2 por explante. La mejor concentración para la multiplicación fue 15 mg L-1 de citocinina (P<0.05), con 24 brotes por planta. Se lograron plantas con mejores raíces en medio MS sin fitoreguladores (P<0.05) y la sobrevivencia de las plantas aclimatadas fue en un 97%
EVALUACIÓN DE LA CLORACIÓN Y RADIACIÓN GAMMA SOBRE LA INACTIVACIÓN DE NOROVIRUS, Y SU EFECTO EN VEGETALES FRESCOS
Get PDFEn México las infecciones gastrointestinales son la segunda causa de morbilidad, principalmente por agentes bacterianos y parásitos. Sin embargo, no existe vigilancia epidemiológica para otros agentes, como por ejemplo, norovirus (NoV), que es la principal causa de gastroenteritis epidémica y esporádica a nivel mundial. Un alto número de infecciones intestinales se atribuyen al consumo de alimentos contaminados con NoV. Los productores de frutas y hortalizas han utilizado distintas estrategias para inactivar al virus, y así detener la cadena de transmisión. Una de ellas es la cloración, ya que es un método barato y de fácil aplicación. Por otro lado, los métodos físicos como la radiación gamma muestran excelentes resultados en la inactivación de bacterias, pero su efecto en NoV ha sido poco estudiado. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto de la cloración y la radiación gamma sobre la inactivación de NoV, y sobre las características topográficas celulares de fresa, como prototipo de frutos rojos blandos. Muestras de heces positivas a NoV fueron cloradas a una concentración final de 200 mg/L de hipoclorito de sodio (NaClO), y comparadas con muestras irradiadas a dosis de 5, 10, 15, y 20 kilograys (kGy). El efecto de ambos métodos en la inactivación de NoV, se midió mediante la cuantificación de copias del genoma viral por reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa cuantitativa (RT-qPCR), posterior a un tratamiento enzimático. El efecto de los tratamientos sobre las características superficiales y fisiológicas de las células, se evaluó mediante microscopía de fuerza atómica (AFM) y microscopía confocal. Altas dosis de radiación gamma (20 kGy) fueron necesarias para conseguir una reducción significativa (p<0.05) de 1.26 log10 del número de copias virales. Esta dosis aumentó significativamente (p<0.05) la rugosidad media cuadrática (Rq), aspecto que tuvo un impacto en la calidad y la textura del alimento. La cloración con 200 mg/L de NaClO y la radiación a dosis de 10 kGy redujeron el perfil de fluorescencia de las células, en cambio una dosis de 20 kGy, mostró un perfil fluorescente similar al control. En conclusión, las dosis de cloro y gamma probadas no fueron suficientes para inactivar completamente a NoV, esto al utilizar RT-qPCR con un pre tratamiento enzimático como herramienta predictiva de la infectividad. Así mismo, la cloración y radiación a dosis permitidas para productos frescos, no presentan efecto negativo sob
REQUERIMIENTO NUTRICIONAL DE RIBOFLAVINA Y EFECTOS DE SU DEFICIENCIA EN JUVENILES DE PARGO FLAMENCO Lutjanus guttatus (Steindachner, 1869).
Get PDFLa riboflavina (B2) es una vitamina hidrosoluble perteneciente al complejo B. Es precursora de dos coenzimas flavin mononucleótido (FMN) y flavin dinucleótido (FAD) que colaboran en procesos redox, metabolismo de algunas vitaminas, carbohidratos, proteínas y grasas, absorción de aminoácidos y síntesis de hormonas. Una deficiencia de riboflavina en la alimentación de peces puede provocar diversos signos clínicos: cataratas, hemorragia en ojos, fotofobia, descoordinación, poco apetito, anemia, bajo crecimiento. En este trabajo se elaboraron siete dietas isoproteícas e isolipídicas con diferentes inclusiones de riboflavina (0, 5.88, 11.65, 18.66, 36.32, 77.82 y 118.27 mg kg-1) para determinar el requerimiento óptimo en juveniles de Lutjanus guttatus con un peso inicial de 9.8 g ± 0.1. Los resultados se evaluarán en términos de parámetros hematológicos, alteraciones histológicas, signos clínicos, crecimiento, supervivencia, eficiencia alimenticia y reserva de vitamina en el hígado. Los peces alimentados con deficiencia de vitamina (0 a 18.66 mg kg-1) mostraron diferencias en el nivel de hematocrito, hemoglobina, conteo de eritrocitos y leucocitos, en comparación a los organismos de las dietas altas. No se encontraron daños a nivel histológico en ningún tratamiento. Entre la inclusión de riboflavina y su almacenaje en el hígado, resultó una correlación positiva al mostrar diferencias significativas entre la primera dieta y las de mayor inclusión (18.66 a 118.27 mg kg-1). Aparecieron signos clínicos en peces deficientes (0 a 18.66 mg kg-1): bajo crecimiento, erosión en aletas, oscurecimiento de piel e iris y nado errático. Se concluye que el requerimiento óptimo de riboflavina para juveniles de Lutjanus guttatus es de 34.17 mg kg-1 de dieta, para mantener una salud en los parámetros hematológicos, optimizar su crecimiento y evitar signos clínicos
INDICADORES DE BIOLOGÍA REPRODUCTIVA Y EXPRESIÓN DE VITELOGENINA EN TOTOABA (Totoaba macdonaldi) EN EL GOLFO DE CALIFORNIA
Get PDFLa totoaba (Tototaba macdonaldi) es un pez carnívoro, que alcanza tallas aproximadas de hasta dos metros de longitud y hasta 100 kg de peso; es una especie endémica del Golfo de California y considerada en peligro de extinción. En un esfuerzo multidisciplinario e interinstitucional por conocer y evaluar el estatus actual de la totoaba en el Golfo de California con fines de conservación y aprovechamiento sustentable, se llevó a cabo el proyecto “Estado de salud y estatus de conservación de la(s) población(es) de totoaba (Totoaba macdonaldi) en el Golfo de California: una especie en peligro de extinción”. El presente estudio forma parte de este proyecto integral cuyo objetivo es conocer si esta especie presenta evidencias de exposición a contaminantes estrogénicos. Los compuestos endocrino-alterantes se distribuyen extensamente en el ambiente, presentan efectos miméticos o antagónicos en las funciones biológicas de las hormonas naturales alterando el equilibrio hormonal y la regulación del desarrollo embrionario, por tanto, tienen la capacidad de provocar efectos adversos sobre la salud de un organismo o de su progenie. Existen diversos indicadores biológicos del estado reproductivo de una especie, en este trabajo se analizaron proporción de sexos, época reproductiva y expresión de vitelogenina, ya que la alteración de estos parámetros indicaría una posible exposición a contaminantes estrogénicos. La vitelogenina es una fosfoglicolipoproteína sintetizada en el hígado y liberada a la sangre en respuesta a los estrógenos. Los niveles bajos o no detectables de vitelogenina en machos en condiciones normales, y la capacidad de ser expresada o inducida por exposición a compuestos estrogénicos la hacen un biomarcador ampliamente utilizado y estudiado en diferentes organismos. En el presente estudio se detectaron niveles de vitelogenina en machos comparables con los de hembras inmaduras, en ovulación y en desove, lo cual sugiere exposición a compuestos estrogénicos. Los parámetros reproductivos no presentaron alteraciones, la proporción de sexos fue cercana a 1:1, mientras que la época reproductiva se detectó de febrero a mayo, coincidiendo con lo reportado por otros autores. Se concluyó que existe exposición de la totoaba a contaminación estrogénica en el Golfo de California, sin embargo ésta no parece afectar la biología reproductiva ni la proporción de sexos
Genes y enzimas asociados a la degradación de pectinas y sus cambios por efecto del tratamiento hidrotérmico en frutos de mango ataulfo durante su maduración poscosecha
Get PDFLa maduración de frutos involucra cambios fisiológicos y bioquímicos regulados genéticamente, donde suceden cambios en el color, sabor, aroma, firmeza y en los frutos climatéricos un incremento en la producción de CO2 y etileno. El tratamiento hidrotérmico (TH) aplicado como medida cuarentenaria a frutos de mango acelera su proceso de maduración. La firmeza es uno de los parámetros de calidad que más se afecta, la cuál se pierde por la acción de enzimas que degradan la pared celular, donde las pectinas son las más abundantes. En este trabajo se presenta el transcriptoma de mango “Kent” y se evalúan los cambios transcripcionales que ocurren durante la maduración del fruto, donde destacan la estimulación de genes de la biosíntesis y señalización de etileno, metabolismo de la pared celular, sacarosa y carotenoides, entre otros. También se obtuvo el transcriptoma de mango “Ataulfo” en frutos testigos y con
TH donde se analizó la expresión génica diferencial por efecto del calor aplicado. Se evaluó la expresión de genes de la degradación de pectinas como pectin methylesterasas (PMEs), pectato liasas (PLs), poligalacturonasas (PGs), beta-galactosidasas (BGAL),alfa-galactosidasas (AGAL), arabinofuranosidasas (ARAB) y ramnogalacturonano liasas
(RGLs) por RT-qPCR así como la actividad enzimática de PME, PL, PG y BGAL. Se inmunodetectaron pectinas en la pared celular de los frutos y se evaluaron los cambios fisiológicos durante la maduración de los frutos testigos y tratados. El TH estimuló la expresión de 25 de los 26 genes evaluados y la actividad de las enzimas PL, PG y BGAL. Estos resultados concuerdan con el enriquecimiento de genes de los procesos biológicos del metabolismo de sacarosa, almidón y carbohidratos desde las 24 horas post-tratamiento. En los parámetros fisiológicos se hace evidente la aceleración del
proceso de maduración en los frutos tratados, y la firmeza fue el parámetro más afectado. Estos resultados son consistentes con lo encontrado por inmunodetección, donde la degradación de pectinas fue más rápida en los frutos tratados. Las familias de genes que pudieran tener una mayor participación en el ablandamiento de los frutos de
mango son las PME, PL y BGAL. La información obtenida en este trabajo proporciona las bases para futuros experimentos donde se podría evaluar la función de proteínas individuales (enzimas o factores de transcripción que las regulan) y que pudieran ser blanco para alargar la vida de anaquel de los frutos de mango y mejora
EVALUACIÓN DE LOS COMPUESTOS FENÓLICOS DE MANGO (Mangifera indica L.) CV. ‘ATAULFO’ COMO INHIBIDORES DE LA LIPASA PANCREÁTICA Y SU MECANISMO DE INHIBICIÓN
Get PDFEl mango (Mangifera indica L.) cv. ‘Ataulfo’ por su alto contenido en CF, representa un modelo de estudio para evaluar la capacidad de los mismos como inhibidores de la LP. El objetivo del estudio fue evaluar el potencial de CF identificados en pulpa [ácido gálico (AG), clorogénico (AC), protocatéico (AP) y vanílico (AV)] y cáscara [ácido tánico (AT), penta-O-galoil-β-D-glucosa (PGG) y mangiferina (MG)] de mango, como inhibidores de la LP porcina, su mecanismo cinético y posibles interacciones, mediante ensayos de inhibición enzimática, espectroscopia de fluorescencia y anclaje molecular in silico (docking). Los resultados indican que AT, PGG y MG inhibieron la actividad de la LP, mostrando un IC50 de 22.40 μM, 64.6 μM y 144.3 μM, respectivamente; mientras que AG, AC, AP y AV mostraron menor efectividad para inhibir a la LP con un IC50 > 500 μM. Los ensayos cinéticos de inhibición mostraron que AT y PGG disminuyeron Vmax y Km de la LP, sugiriendo que ambos compuestos muestran un mecanismo de inhibición acompetitivo. Además se encontró que AT y PGG presentaron alta afinidad por la LP, de acuerdo a sus valores de Ki (AT: 0.018 μM y PGG: 0.0094 μM). Asimismo, el patrón de emisión de fluorescencia de la LP cambió en presencia de los CF, presentándose opacamiento en todos los casos, y desplazamiento batocrómico e hipsocrómico en el caso de AT, PGG y MG. Respecto al docking, se observó que AT y PGG podrían unirse en la cavidad formada por la interface dominio C-terminal y lid de la LP, en su conformación abierta, y colipasa, lo que puede apoyar el mecanismo cinético de inhibición determinado. Además, los CF mostraron interaccionar con residuos de naturaleza polar expuestos en dicha cavidad. Por lo tanto, se concluye que AT y PGG mostraron interacción específica con la LP; lo cual sugiere que CF de alto peso molecular presentes en cáscara de mango, un subproducto de la industria agroalimentaria, podrían ser aprovechados para la formulación de nutracéuticos dirigidos a la prevención y tratamiento de la obesidad
EVALUACIÓN DEL AUTOCUIDADO Y CALIDAD DE VIDA DE NIÑOS Y JÓVENES CON DIABETES TIPO 1 A CINCO AÑOS DE SU PARTICIPACIÓN EN UN PROGRAMA EDUCATIVO
Get PDFExisten programas de intervención para mejorar el control de la
diabetes tipo 1 en niños; sin embargo, se conoce muy poco de los efectos a largo
plazo. Estudios previos en el norte de México realizados por CIAD (2 programas
de educación en diabetes entre 2008 y 2010) basados en la Teoría Social
Cognitiva (TSC); observaron mejoría en el control metabólico, calidad de vida y
actividad física, más no se evaluó su efecto a largo plazo. Objetivo: Evaluar el
autocuidado y calidad de vida en niños y jóvenes que han participado en los
programas de educación en diabetes tipo 1 implementados por CIAD y analizar
los factores que facilitaron o dificultaron el control de su enfermedad.
Metodología: El seguimiento incluyó la evaluación del control metabólico
mediante hemoglobina glucosilada (%HbA1c), así como actividad física,
alimentación, estado nutricio y calidad de vida, mediante cuestionarios. Para
identificar barreras en el cuidado de la enfermedad se realizaron entrevistas
semiestructuradas. Resultados: De 42 participantes en los programas previos,
se localizaron e incluyeron a 22, cuya hemoglobina glucosilada mostró una
tendencia al aumento (%HbA1c: 9.46+5.0 a 10.18+2.1), sin cambios
significativos. Actualmente el 90% de los participantes no tiene un control
glicémico adecuado; los participantes que mostraron un control metabólico más
cercano a las recomendaciones fueron los niños menores de 12 años, debido a
los cuidados de sus padres. Además, el crecimiento en talla estuvo dentro de
parámetros normales en todos los participantes. Se encontró disminución en el
nivel de actividad física y mayor inadecuación en la alimentación, pero estos
cambios no fueron significativos. Por otro lado, la calidad de vida empeoró
significativamente. El análisis cualitativo mostró que los entornos poco
saludables, el factor económico y factores personales, son las principales
barreras que influyen en el autocuidado de la diabetes tipo 1; por otro lado, el
conocimiento fue el principal facilitador de sus esfuerzos de autocuidado
CALIDAD E INOCUIDAD EN LAS QUESERÍAS ARTESANALES DE UNA COMUNIDAD RURAL DE SONORA: UN ANÁLSIS SOCIOLÓGICO
Get PDFEn Sonora, la producción artesanal de queso es realizada por cientos de Unidades Rurales Familiares (URF), quienes enfrentan regulaciones sanitarias que amenazan su permanencia en el mercado. Esta problemática tiene como contexto la centralidad adquirida por la calidad, y la inocuidad, como ejes de la competencia en el Sistema Agroalimentario Globalizado (SAG). Nuestro objetivo es entender las representaciones colectivas (ideas compartidas por los miembros de una comunidad) sobre calidad e inocuidad que rigen la producción artesanal de queso fresco, en las queserías artesanales de una comunidad rural sonorense, para aportar elementos que permitan a las URF mejorar su calidad respecto a las regulaciones vigentes y conservar su actividad. El marco teórico utilizado tuvo como base las teorías regulacionista (TR) y de las convenciones (TC), complementadas con el concepto Durkheimiano de representación colectiva (RC). Así mismo se analizó el marco normativo mexicano y las tendencias globales en materia de regulación alimentaria, particularmente de lácteos. El estudio se realizó en el Ejido Cobachi, en Sonora, usando una metodología cualitativa, desde una perspectiva comprensiva, trabajando a nivel de URF en una primera etapa y posteriormente a nivel de comunidad. Los instrumentos utilizados consistieron en entrevistas semiestructuradas cara a cara, observación directa del proceso productivo, entrevistas a profundidad y entrevistas grupales. Se identificaron las representaciones de calidad e inocuidad de los productores y se confrontaron con las normas vigentes aplicables a la materia. Así mismo se analizó el entorno en el que se llevan a cabo las interacciones sociales dentro de la comunidad y de ésta con su mercado particular. A través de la investigación se mostró que las tradiciones, ligadas al territorio, y la preferencia del consumidor hacia su producto son prioridades para los productores más allá de los reglamentos y normas existentes. Palabras clave: Calidad, Inocuidad, Representación Colectiva