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CARACTERIZACIÓN INMUNOQUÍMICA Y MOLECULAR DE ANTIGENOS INMUNODOMINANTES DE Giardia lamblia EN UN MODELO MURINO DE GIARDIASIS
Get PDFGiardia lamblia es un parásito protozoario intestinal que infecta a humanos y algunos mamíferos. Se conocen ocho genotipos del parásito clasificados del A al H, pero solo A y B infectan humanos. La eliminación de Giardia del intestino requiere la activación de mecanismos inmunológicos en el hospedero mediados por células B y T. No obstante, el conocimiento acerca de las proteínas del parásito que inducen una respuesta inmunológica eficaz es limitado. Estudios previos de nuestro grupo de investigación reportaron el antígeno 5G8 de Giardia GS/M83-H7 como altamente inmunogénico, y sugirieron que podría ser una proteína de choque térmico (HSP70) llamada BIP. El objetivo del presente trabajo fue caracterizar inmunoquímica y molecularmente los antígenos de G. lamblia 5G8 y BIP en un modelo de infección murino. Para ello, se sobreexpresó y purificó BIP recombinante con la que se generaron anticuerpos policlonales. Mediante Citometría de Flujo y Western blotting se determinó que el perfil de expresión de 5G8 y BIP en la superficie de trofozoítos GS/M83-H7 y GS/M83-H7-5G8(+) fue distinto (5G8 en 2-95% y BIP en < 1% de la población), lo que sugiere que son antígenos diferentes. El análisis de la respuesta inmune humoral por ELISA y Western blotting determinó que BIP es reconocido por sueros de ratones reinfectados. La respuesta inmune celular se evaluó mediante ensayos de proliferación por MTT, empleando esplenocitos de ratones infectados. Sin embargo, en las condiciones evaluadas no se detectó estimulación por parte de BIP. Se determinó mediante algoritmos de predicción de epítopes de células B y T, que BIP posee en su secuencia regiones con alta probabilidad de ser reconocidas por el sistema inmune del hospedero. Incluso, el epitope 590-609 podría ser reconocido por ambas células. Por otro lado, el análisis molecular de 5G8 determinó que pertenece a la familia de proteínas variables de superficie (VSP) de Giardia. El gen vsp-5g8 se amplificó por PCR y se obtuvo la secuencia nucleotídica (1824 pb) que codifica para VSP-5G8 (607 aminoácidos, 61 kDa), presente en Giardia genotipo B. Los análisis de homología y predicción de epítopes de VSP-5G8 indicaron que posee epítopes de alta probabilidad que además están conservados en otras VSP de diferentes genotipos de Giardia
ESTIMULACIÓN CON OLIGOSACARIDOS DE LA CAPACIDAD ANTAGÓNICA DE BACTERIAS ÁCIDO LÁCTICAS EPÍFITAS DE MELÓN CANTALOUPE CONTRA Salmonella Typhimurium
Get PDFEl melón cantaloupe posee un epicarpio rugoso, que reduce la eficacia de los
procesos de desinfección para eliminar patógenos causantes de enfermedades
transmitidas por alimentos (ETAs). La superficie de frutos y hortalizas hospeda
microorganismos inocuos, como las bacterias acido lácticas (BAL), capaces de
inhibir el crecimiento de patógenos. Esta capacidad antagónica es estimulada
por la fermentación de carbohidratos complejos. Por lo que el objetivo de este
estudio fue aislar BAL del epicarpio de melón cantaloupe y evaluar su actividad
antagónica, in vitro e in vivo, contra Salmonella Typhimurium, así como
determinar el efecto estimulante de dicha actividad mediante la adición de
oligosacáridos específicos. Para ello, primero se aislaron 43 cepas de BAL
antagonistas del epicarpio de melón cosechados en las temporadas otoñoinvierno
(2014) y primavera-verano (2016), de los cuales se seleccionaron
nueve cepas con la mayor actividad inhibitoria contra S. Typhimurium (halo de
inhibición >1cm). Posteriormente, se determinó la capacidad de las cepas
seleccionadas para metabolizar oligosacáridos de pectina (OP) y de ácido
poligalacturónico (OAPG) mediante los parámetros cinéticos DOmax y tasa
específica de crecimiento (h-1). Las cepas 45, 70, 77, 102, 170 y 210, y la cepa
175 fueron seleccionadas con el tratamiento de OAPG y con OP,
respectivamente, (por presentar parámetros cinéticos superiores al del
patógeno). El efecto estimulante del antagonismo se evaluó in vitro en agar
MRS enriquecido con 1 % de oligosacáridos. Se observó que los OP
estimularon la actividad inhibitoria in vitro de la cepa 175, mientras que los
OAPG estimularon a las cepas 45 y 170, mostrando un incremento significativo
(P≤0.05) de 3.3, 2.1 y 1.35 veces, respectivamente. La identificación molecular
de las cepas, indicó que el aislado 45 corresponde a Enterococcus faecalis y los
aislados 170 y 175 a Pediococcus pentosaceus. En ensayos in vivo, se observó
que la cepa de P. pentosaceus redujo el número de UFC/cm2 de S.
Typhimurium en presencia de OP al 1 % (P≤0.05)
Efecto de Volátiles Azufrados de Ajo sobre la Actividad de la Enzima Endo-¡3-(1,3)-glucanasa Fúngica, para el Control de Pudrición Gris en Uva de Mesa
No full textLa pudrición gris de racimos de uva, es una enfermedad cuyo agente causal es Botrytis cinerea, que ocasiona el deterioro de la uva de mesa durante postcosecha. En búsqueda de métodos para controlar esta enfermedad, nos planteamos la utilización de compuestos volátiles azufrados derivados de ajo para el control de la germinación de conidias de B. cinerea. Este hongo, requiere de la enzima endo-¡3-(1,3)-glucanasa para la germinación de sus conidias, donde la enzima participa en la extensión de la pared celular desde las conidias hacia los tubos germinales. En este trabajo se evaluó el efecto de compuestos volátiles azufrados contenidos en un extracto de ajo, sobre la actividad de endo-¡3-(1,3)-glucanasa fúngica y su efecto en la incidencia de la pudrición gris en racimos de uva del Cv. Flame Seedless. Se preparó un extracto hidroalcohólico de ajo (EHA) y se analizó por HPLC la concentración de sus compuestos azufrados previamente reportados por nuestro grupo con actividad fungicida: alicina (0.13 mg mL-1), disulfuro de dialilo (DAOS) (0.13 mg mL-1), trisulfuro de dialilo (DATS) (0.206 mg mL-1), E ajoeno (0.007 mg mL-1) y Z ajoeno (0.003 mg mL-1). Para evaluar los volátiles azufrados emitidos por el EHA y alicina, DAOS y DATS puros sobre la incidencia de pudrición gris, los racimos de uva fueron inoculados con una suspensión de 1 x 106 conidias de B. cinerea /mL. Determinado que 2 mL de EHA, impregnados en un emisor de celulosa, emiten suficientes volátiles azufrados para controlar la enfermedad durante 14 días a 4 y 25 ºC. La evaluación de los compuestos puros nos indicó que únicamente los volátiles emitidos por DATS, presentaron un control similar a EHA. (P<0.05). La evaluación del efecto de los volátiles emitidos por los compuestos azufrados, tanto en su forma pura como contenidos en el EHA sobre la actividad de endo-¡3-(1,3)-glucanasa, resultó en un reto metodológico, ya que no encontramos reportes de metodología que midieran el efecto de sustancias volátiles sobre actividades enzimáticas, por lo que realizamos modificaciones a una metodología conocida para determinar actividad de endo-¡3-(1,3)-glucanasa, adaptándola para utilizar sustancias volátiles. Con esta metodología pudimos determinar que el EHA reduce en un 80 % la actividad del enzima, seguido de DATS con 31 %, DAOS con 26 % y alicina con 12 %
INTOLERANCIA ALIMENTARIA A MONO, DI, OLIGOSACÁRIDOS Y POLIOLES FERMENTABLES: DETECCIÓN POR HIDRÓGENO ESPIRADO Y ADECUACIÓN DIETÉTICA EN POBLACIÓN SONORENSE
Get PDFLos carbohidratos como lactosa, fructosa, sorbitol o fructanos de fácil
fermentación en el colon (FODMAP), producen síntomas gastrointestinales en
algunas personas. Sin un tratamiento, estos pacientes además del malestar
pueden sufrir depresión y relegarse socialmente. El objetivo de la tesis fue
detectar intolerancia a FODMAP en población sonorense, analizar el contenido
de esos carbohidratos en alimentos de consumo común y recomendar un
tratamiento dietético individualizado. Se invitó a personas con síntomas
gastrointestinales, sin parasitosis ni infección bacteriana. Se realizaron pruebas
de hidrógeno espirado para detectar sobrecrecimiento bacteriano, intolerancia a
lactosa, fructosa, sorbitol y fructanos. Al inicio y post-tratamiento con dieta
reducida en FODMAP, se evaluó la intensidad de los síntomas con escala visual
análoga y la dieta mediante recordatorio de 24 h. Se analizó el contenido de
lactosa y fructosa por HPLC y fructanos después de hidrólisis enzimática, en
alimentos y bebidas de consumo común. De los 11 participantes, 6 fueron
intolerantes a lactosa, 3 a fructosa, 9 a sorbitol y 6 a fructanos; 7 (63.6%) de ellos,
fueron intolerantes a 2 o más FODMAP. Las recomendaciones dietéticas
ayudaron a disminuir (p≤0.05) el dolor, distención y ruidos abdominales,
estreñimiento, diarrea y gases. Los alimentos altos en FODMAP fueron el queso
regional, salsa de tomate tipo cátsup, coyotas de piloncillo, jugo de manzana o
durazno, cebolla cambray y tortilla de harina. Los alimentos bajos en FODMAP
fueron leche deslactosada, nopalitos, tortilla de maíz, tostadas de maíz, chile
colorado, chile verde, jugo de naranja “con-frutta” y tallos de cebolla cambray. En
conclusión, el protocolo de este estudio consistente en pruebas de aliento
espirado y recomendaciones dietéticas bajas en FODMAP, fue eficiente para
disminuir los síntomas gastrointestinales
ANÁLISIS DE FRAGMENTOS DE RAMNOGALACTURONANO I COMO INDUCTORES DEL MECANISMO DE DEFENSA DEL TOMATE
Get PDFEl ramnogalacturonano I (RG I) es parte de la pectina de la pared celular
vegetal y se ha sugerido que cumple una función importante en la fisiología de
la pared celular. Los cambios en ella son catalizados por enzimas como la RG
liasa (RGL) dando lugar a la formación de diversos fragmentos. Actualmente,
existe poca información sobre el efecto inductor de estos fragmentos en el
mecanismo de defensa en frutos, y sobre sus características físico-químicas y
estructurales. Por lo anterior, el objetivo fue caracterizar parcialmente el RG I de
papa y sus fragmentos obtenidos por degradación enzimática de la RGL; así
como determinar el efecto inductor de estos fragmentos en los niveles de
actividad de enzimas de defensa en frutos de tomate. Se obtuvieron tres
fragmentos mediante la degradación de RG I de papa con la enzima RGL. Se
determinaron las bandas de absorción asociados a enlaces químicos mediante
espectroscopía de infrarrojo con transformada de Fourier (FT-IR), el peso
molecular y viscosidad intrínseca por cromatografía de alta resolución de
exclusión por tamaño acoplado a un detector de dispersión de luz, el perfil de
azúcares neutros por cromatografía de gases y el ácido galacturónico por
espectrofotometría (UV-visible). Se aplicaron dos fragmentos de RG I (F-1 y F-
2) a frutos de tomate, se evaluó la actividad enzimática de quitinasa por
fluorometría y de glucanasa y peroxidasa por espectrofotometría (UV-visible) a
distintos tiempos: 0, 0.5, 1, 6, 24 y 48 horas. Se observaron cambios en los
espectros de FT-IR obtenidos de los fragmentos con respecto al de RG I sin
fragmentar. El peso molecular promedio del RG I sin fragmentar fue de 53 kDa
y la viscosidad intrínseca de 41 mL/g; mientras que los fragmentos presentaron
valores más bajos. El contenido de azúcares neutros aumentó y el de ácido
galacturónico disminuyó con respecto al RG I sin fragmentar. En los frutos de
tomate, los niveles de la actividad de las enzimas quitinasa y peroxidasa
incrementaron a la media hora posterior a la aplicación del fragmento F-2,
indicando la respuesta inmediata de estas dos enzimas
EVALUACIÓN DEL CAMBIO EN LA MICROBIOTA DEL CONTENIDO INTESTINAL DE CAMARÓN SILVESTRE (Penaeus vannamei) SOMETIDO A DIFERENTES CONDICIONES DE CULTIVO.
Get PDFEn México, la producción de camarón Penaeus vannamei, proviene principalmente de prácticas semi-intensivas, donde se usan estanques rústicos, estanques de concreto o de fibra de vidrio y el suministro de alimentación puede ser alimento natural o alimento balanceado. Debido a esto, el objetivo del presente estudio fue comparar la microbiota del contenido intestinal del camarón (P. vannamei) de origen silvestre al someterlos a condiciones experimentales de cultivo. Se colectaron camarones silvestres de un sistema lagunar y se sometieron a bioensayo, el cual consto de tres variantes, en la primer variante los camarones se dividieron de forma aleatoria en cuatro tratamientos: 1) alimentados con calamar fresco, 2) alimentados con calamar fresco y la pecera contaba con sedimento, 3) alimentados con alimento balanceado y 4) alimentados con alimento balanceado y la pecera contenía sedimento. En la segunda variante del bioensayo, se realizó un cambio de alimentación, es decir, los organismos alimentados con calamar fresco fueron alimentados con alimento balanceado y viceversa. Mientras que en la tercer variante se realizó un cambio de sustrato. Se secuenció la región V3 del gen 16S ribosomal mediante la plataforma Ion Torrent PGM, se obtuvieron un total de 1,541,248 secuencias. El análisis comparativo de las comunidades microbianas, se realizó con QIIME 1.9., el phylum Proteobacteria fue el más abundante, así como los taxa incluidos en este, además, la diversidad bacteriana del contenido intestinal disminuyó al someter camarones silvestres a condiciones experimentales, los camarones con sedimento y dieta balanceada mostraron mayor diversidad que los que mantuvieron sin sedimento y alimentados con calamar fresco
ASOCIACIÓN DE LA COMPOSICIÓN BACTERIANA DE LA MICROBIOTA INTESTINAL CON LOS COMPONENTES DE LA DIETA Y LA PRESENCIA DE OBESIDAD EN ADULTOS
Get PDFLa presencia de obesidad está influenciada por varios factores como la dieta, sedentarismo, genética y recientemente se ha asociado a la microbiota intestinal (MI) como un factor involucrado. La microbiota intestinal presenta funciones metabólicas e inmunológicas en el hospedero que le permiten obtener mayor energía de la dieta y originar procesos de inflamación que pueden contribuir a la ganancia de peso. Se ha reportado que la proporción de Firmicutes/Bacteroidetes se encuentra alterada en personas con obesidad; sin embargo los resultados en diferentes estudios, no son consistentes. Se han identificado géneros bacterianos dentro de estos filos que son modificados por la dieta y algunos de ellos, asociados con obesidad. El objetivo del estudio fue determinar si existe asociación entre la presencia de ciertos géneros y la obesidad, el consumo de carbohidratos, grasas y fibra. Para Bacteroidetes se incluyeron Bacteroides/Prevotella; Actinobacteria: Bifidobacterium; Firmicutes: Clostridium coccoides, Clostridium leptum, Faecalibacterium prausnittzi, Roseburia y Ruminoccocus gnavus; Verrucomicrobia: Akkermansia muciniphila. Se determinó la amplificación relativa de estas bacterias en heces provenientes de 21 adultos con obesidad (IMC ≥ 30 kg/m2) y 26 sin obesidad (IMC < 25 kg/m2). Los géneros bacterianos que predominaron en el grupo con obesidad fueron Bacteroides/Prevotella, Faecalibacterium prausnitzii y Roseburia, mientras que en el grupo sin obesidad predominó Bifidobacterium. Los géneros Bacteroides/Prevotella y Bifidobacterium se asociaron con el consumo de carbohidratos, grasa y proteína, mientras que Ruminoccocus gnavus se relacionó con el consumo de fibra dietaria. Se encontró que si existe una relación entre la abundancia de algunos géneros bacterianos de la microbiota intestinal, la presencia de obesidad y la dieta
EFECTO DE LA SUPLEMENTACIÓN DIETARIA DE ÁCIDO FERÚLICO EN EL COMPORTAMIENTO PRODUCTIVO, CALIDAD DE LA CANAL Y CARNE DE CERDO
Get PDFEl objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto de la suplementación dietaria de ácido ferúlico (AF) sobre el comportamiento productivo, calidad de la canal y carne de cerdos. A 110 cerdos (Landrace x Yorkshire; 68kg promedio) por tratamiento, se les asignó aleatoriamente uno de cuatro tratamientos: Control, dieta basal (DB); RAC, DB+10 ppm de clorhidrato de ractopamina + 0.3% de lisina; AF, DB+25 ppm de AF y AF-L, DB+25 ppm de AF + 0.3% de lisina, durante los últimos 27 días de la fase de finalización. En la prueba de alimentación se evaluó el peso inicial y peso final de los animales, ganancia diaria de peso (GDP), consumo de alimento y conversión alimenticia. En las canales se evaluó el pH, área del ojo de costilla (AOC) y espesor de grasa dorsal (EGD) en 10 canales por tratamiento. Se obtuvo el músculo Longissimus thoracis para su análisis de composición química (humedad, grasa, proteína y perfil lipídico) y estudio de vida de anaquel (características fisicoquímicas y sensoriales) en refrigeración durante 10 días. Se realizó un ANOVA para comportamiento productivo, calidad de la canal y composición química y se probaron contrastes ortogonales para la comparación de medias. Los datos de vida de anaquel, se analizaron con un ANOVA GLM con arreglo factorial (tratamiento x día) y se compararon medias por Tukey-kramer (P0.05). El perfil lipídico fue modificado por efecto de la suplementación de AF y RAC, donde se redujo el contenido de ácidos grasos saturados (principalmente C16:0 y C18:0), y se incrementaron los ácidos grasos insaturados en grasa dorsal e intramuscular (P<0.05) de animales suplementados
CARACTERIZACIÓN BIOQUÍMICA Y ESTRUCTURAL DE UNA LIPASA DE Vibrio parahaemolyticus CAUSANTE DE SINDROME DE MORTALIDAD TEMPRANA EN CAMARÓN BLANCO
Get PDFEn 2013 en México, se presentó una grave disminución en la producción de
camarón blanco Litopenaeus vannamei, la cual fue asociada a la presencia de
cepas patógenas de la bacteria Vibrio parahaemolyticus. Estas mortalidades se
asocian al síndrome de mortalidad atípica (early mortality syndrome o EMS,
acute hepatopancreatic necrosis disease o AHPND). En un trabajo previo se
estudió el genoma de dos cepas de Vibrio, una patógena y una inocua para el
camarón. En dichos genomas se identificaron enzimas lipasas, de las cuales se
seleccionó una para su estudio y caracterización, designada LipVp (Lipasa de
Vibrio parahaemolyticus). Las lipasas confieren a las bacterias la capacidad de
utilizar lípidos como única fuente de carbono e incluso pueden tomar parte en la
virulencia de éstas. Después de seleccionar a LipVp se alineó contra otras
lipasas y se modeló con el algoritmo PHYRE2, encontrándose mayor similitud
con una lipasa de Pseudomonas aeruginosa. En el modelo teórico de LipVp se
localizó la tríada catalítica conformada por S86, D233 e H255, 5 laminas-β
interconectadas con 10 hélices-α, el agujero oxianiónico y posibles aminoácidos
para formar un sitio de unión a calcio. Se diseñó un gen sintético con la
secuencia de LipVp el cual fue utilizado para transformar bacterias E. coli BL21
(DE3). La LipVp recombinante se obtuvo en cuerpos de inclusión, los cuales
fueron solubilizados con urea 8 M, posteriormente se dializó contra urea 4 M,
para proceder a purificar la proteína por cromatografía de afinidad a metales
(IMAC). El replegamiento de LipVp se realizó mediante diálisis con buffer
conteniendo: Tris-HCl 55 mM pH 8.0, NaCl 10.56 mM, KCl 0.44 mM,
polietilenglicol 3350 0.055%, MgCl2 2.2 mM, CaCl2 2.2 mM, L-arginina 550 mM,
glutatión reducido 0.5 mM y glutatión oxidado 0.05 mM. Se determinó una Km=
4.34 mM y una Vmax= 0.018 μM/min utilizando p-nitrofenil laurato como sustrato.
Por último, se comprobó la inhibición de la actividad enzimática con Orlistat®
(tetrahidro lipstatin: (S)-((S)-1-((2S,3S)-3-hexil-4-oxooxetan-2-il) tridecan-2-il) 2-
formamido-4-metil pentanoato). En conclusión se corroboró que LipVp codifica
para una lipasa funcional, donde se predice una estructura similar a otras
DENSIDAD MINERAL ÓSEA EN MUJERES ADULTAS Y SU CORRELACIÓN CON VARIABLES ANTROPOMÉTRICAS, DIETARIAS, GINECOLÓGICAS Y REPRODUCTIVAS. ESTUDIO PROSPECTIVO
Get PDFLa masa ósea (MO) está definida por factores modificables y no modificables; en las mujeres, existe controvesia del impacto que tiene el historial ginecológico y reproductivo sobre la MO. El objetivo de este estudio fue comparar la densidad mineral ósea (DMO) actual de la región lumbar (RL), cuello de fémur (CF) y fémur total (FT) con la de hace doce años en mujeres hermosillenses y evaluar su correlación con variables antropométricas, dietarias, ginecológicas y reproductivas. Se obtuvo información antropométrica, ginecológica, reproductiva y del consumo de alimentos de las participantes. La DMO se midió por densitometría dual de rayos X. Actualmente todas las participantes son adultas y el 64% de las que hace doce años eran nulíparas, tienen hijos. En promedio, el número de hijos aumentó en las que hace doce años eran madres adolescentes (G1) y en las que eran madres adultas (G3) y el índice de masa corporal (IMC) en las participantes que hace doce años eran adolescentes nulíparas (G2) y adultas nulíparas (G4). En G1, la DMO actual fue más elevada que la de hace doce años en la RL y de FT; mientras que en G2, G3 y en todas las mujeres (G1+G2+G3+G4) lo fue en la RL; en G4 no se observaron diferencias en ninguna región ósea, entre ambas mediciones. En G1, la DMO en la RL fue más elevada que en G2 al ajustar por el número de hijos y por el IMC, y en CF al ajustar por el número de hijos. La DMO en la RL del G3 fue más elevada que en el G4. La DMO actual del CF corrrelacionó negativamente con la edad de la menarquia en las que hace doce años eran nulíparas y en las que siguen siendo nulíparas; el IMC, lo hizo positivamente con la DMO de la RL en las que eran madres hace doce años y las que son madres actualmente y con FT en el total de mujeres. En conclusión, la DMO actual fue más elevada en al menos una región ósea, en las mujeres que hace doce años eran adolescentes y madres adultas. El IMC y la edad de la menarquia fueron las únicas variables que influyeron la DMO de la RL, CF y FT, en las mujeres adultas participantes en este estudio