Ehime University Institutional Repository

Ehime University (愛媛大学)博士(農学)thesi

朴, 相我

 
 
（第５号様式）  
                        学位論文審査の結果の要旨 
 
    氏    名   朴 相我  
審 査 委 員 
    
       
       
       
       
       論  文  名 
 
室内環境中ポリ臭素化ジフェニルエーテルの分布と挙動および人体曝露の評価に関する研究 
(Study on the Distribution and Behavior of Polybrominated Diphenyl Ethers in Indoor    
Environment and their Assessment of Human Exposure) 
  
      審査結果の要旨 
 
ポリ臭素化ジフェニルエーテル（PBDEs)は，代表的な添加タイプの臭素系難燃剤であり，3 種
の工業製品(c-Penta-，c-Octa-，c-Deca-BDEs)がある。PBDEs はポリ塩化ビフェニルと類似した化
学構造を有し，難分解性と易脂溶性のため，広範囲な環境汚染や生体汚染を引き起こしている。
また，いくつかの PBDEs 異性体は生殖系，神経系，內分泌系に悪影響を及ぼすことから，スト
ックホルム会議(2009 年)において新規に“POPs (残留性有機汚染物質)”に指定され，c-Penta-と c-
Octa-BDEs は生産及び使用が禁止されている。 
一方，今なお継続使用されている c-Deca-BDEs は，分子量が大きいため，生体内への吸収率が
低く，従って，毒性影響も小さいと考えられてきた。ところが，人体試料の調査によると(朴ら，
2013)，血中に高濃度の高臭素化 PBDEs が検出され，また，母乳中にも主成分の一つであったこ
とから，食物以外にハウスダストの摂取や吸入がヒトへの取り込み経路として重要であると思わ
れたが，その詳細については未解決のままであった。 
本研究は，低揮発性物質である高臭素化 PBDEs の室内環境中の存在状態と挙動及び人体暴露
を解明するため，まず，（1）室内の床ダスト及び空気中（浮遊ダスト及びガス態）における
PBDEs の濃度と異性体組成を測定し，室内環境汚染の実態を明らかにした。次いで，（2）床ダ
スト及び浮遊ダストの粒径別キャラクタリゼーションを行い，室内環境中 PBDEs の分布と挙動
の解析を試みた。最後に，（3）室内環境中 PBDEs の分布と挙動及びその特性を基に，高臭素化
PBDEｓのヒトへの取り込み経路，特に，呼気経由による人体暴露について評価した。 
（１）最初に，床ダスト中の PBDEs 汚染の実態を明らかにするため，韓国の一般家屋内及び
愛媛大学農学部室内から採取した床ダスト試料中の PBDEｓ濃度と異性体組成を測定した。その
結果，韓国家屋内の床ダスト中 PBDEs はその 80%以上を高臭素化異性体が占め，その濃度及び
異性体組成は愛媛大学農学部内の居室，コンピュータ室及び休憩室の床ダストともよく一致し，
韓国及び日本の室内の床ダストは高臭素化異性体主体の PBDEｓ汚染であることが分かった。 
 
 
一方，室内空気中の PBDEs について，愛媛大学農学部内の居室，分析機器室，コンピュータ
室及び TV 後部から採取した空気中（浮遊ダスト及びガス態）の PBDEｓを測定したところ，
26.5~80.5pg/m3 の PBDEs が検出され，その内，居室(室内オフィス環境)と分析機器室(分析機器
類が多い作業環境)は高臭素化異性体主体の汚染であったが，コンピュータ室(コンピュータ関連
機器が多い環境)と TV 後部(PBDEs の揮散が予想される環境)では比較的濃度が高く、しかも、低
臭素化異性体主体の汚染であった。つまり，室内空気中の PBDEｓ汚染は，床ダストの場合とは
異なり，室内に置かれた機器類や場所によって汚染の形態が大きく異なること，また、低臭素化
異性体に加えて高臭素化 PBDEs もコンピュータや TV 等の発生源から気化し空気中へ移行する
ことが明らかとなった。 
（２）次に，室内における PBDEｓの挙動を明らかにするため，床ダストはサイズにより３画
分（150~75，75~32，<32µｍ）に篩別し，また，アンダーセンサンプラとガス態吸着フィルタに
よって採取した空気中の浮遊ダスト及びガス態試料は６画分（＞11~7，7~3.3，3.3~1.1，
1.1~0.43µm，エアロゾル，ガス態）に分級し，各試料中の PBDEs 濃度を測定した。その結果，
床ダストは３画分ともほぼ同じ濃度を示し，高臭素化異性体が主体であった。一方，空気中の浮
遊ダスト及びガス態の PBDEｓはガス態に最も濃度が高く，次いで，エアロゾル画分であり，い
ずれも低臭素化異性体が主体であったが高臭素化異性体も存在し，それより粒子サイズが大きい
画分は高臭素化異性体が主体でほぼ同じ濃度であった。つまり，空気中 PBDEs は，ガス態及び
エアロゾル画分とそれよりも大きい画分とで濃度と異性体組成が異なるものの高臭素化異性体の
存在が明らかとなった。 
そこで，室内のダストの起源とそれに伴った PBDEｓの挙動の詳細を明らかにするため，光学
顕微鏡観察と構成元素の測定及び赤外分光測定により，各ダストのキャラクタリゼーションを行
った。その結果，室内浮遊ダストは室外由来のダストに加えて，家具や電気機器に由来するエア
ロゾル等の混合物から成り，そして，それら浮遊ダストが集合し，大粒子化して沈降し，建物や
人間活動由来のダストと混じり床ダストを形成していることが分かった。こうして形成された浮
遊ダスト中 PBDEs は，ダストの大粒子化と共に沈降し，高臭素化 PBDEｓ主体の床ダストとな
り，次いで，床ダストは低臭素化 PBDEs が気化し，さらに高臭素化する。高臭素化 PBDEs は，
室内の機器類等から気化し、ガス態，エアロゾル及び浮遊ダストに、最終的に床ダストに含有さ
れると結論付けられた。 
（３）最後に，室内環境中 PBDEs の分布と挙動及びその特性に関する知見を基に，ヒトへの
取り込み経路，特に，呼気経由による高臭素化 PBDEｓの人体暴露を評価した。その結果，食物
や床ダストの摂食を通して胃消化管から取り込まれる PBDEｓ量は呼気経由のものに比べて相対
的に大きく，特に，幼児では床ダストの摂食による取り込みが相当量あるが，高臭素化 PBDEｓ
は胃消化管吸収率が低く，従って，高臭素化異性体の取り込み量だけでは体内蓄積を説明するこ
とが難しい。これに対して，呼気経由の PBDEｓ取り込みは，肺胞深部まで移行する 2.5µm 以下
の浮遊ダストとエアロゾル及びガス態の PBDEｓが大きく関与し，そこでは低臭素化のみならず，
高臭素化異性体の肺胞を通しての体内吸収率も高く，従って，ヒト血液中の高臭素化 PBDEｓの
高い残留にも大きく寄与していると思われた。つまり，これまで，高臭素化異性体のヒトへの取
り込みと体内蓄積は，主に，床ダストや食物の摂取によると考えられてきたが，本研究結果より，
空気中のエアロゾルやガスに含まれる高臭素化 PBDEｓが人体暴露と蓄積を考える上でより重要
な因子であることを初めて提示することができた。また、本研究の成果は、PBDEs 以外の低揮
発性難分解性物質の室内環境中の挙動や人体暴露を考える上で適用できる部分がある。 
 
本論文に関する公開審査会は平成 26 年 2 月 1 日、愛媛大学農学部で開催され、申請者の論文発表
と適切な質疑応答が行われた。引き続いて行われた学位論文審査会で本論文の内容を慎重に審議し、
審査委員全員一致して博士（農学）の学位を授与するに値するものと判定した。 


Japanese

Study on the Distribution and Behavior of Polybrominated Diphenyl Ethers in Indoor Environment and their Assessment of Human Exposure

ソヨダ, ジュブン ナハル

Syeda, Jabun Nahar

（第３号様式）(Form No. 3) 
学  位  論  文  要  旨  
Dissertation Abstract 
 
 
氏名：  
Name 
Syeda Jabun Nahar 
学位論文題目：  
Title of Dissertation 
Studies on environmental control of organogenesis in orchids 
（ランの器官形成における環境制御に関する研究）  
 
学位論文要旨：  
Dissertation Abstract 
 Orchids are marketed both as plants and as cut flowers and their production has 
been increased in recent years. In vitro propagation of orchids as an option for rapid 
propagation of commercially valuable cultivars progressed well during the last decades. 
Plant organogenesis in vitro is a more controllable and reliable process. Studies on 
environmental control of organogenesis in orchids describe some new organogenesis 
methods of orchid tissue culture by using different types of plant growth 
regulators/elicitors under different qualities of LED lights. 
 Chapter I. The effects of elicitors (5-aminolevulinic acid and lysozyme) on 
organogenesis of Cymbidium spp. were conducted. 5-aminolevulinic acid (5-ALA) has 
been suggested as a new natural and environmentally friendly regulator, which can be 
widely used in agriculture. In this study, 5-ALA added with modified MS medium in 
PLBs culture of Cymbidium spp. under white fluorescent tube. In C. finlaysonianum, 
0.01 and 0.1 mg/L ALA supplementation in culture medium enhanced the best formation 
of PLBs and shoots, in C. dayanum, 1 mg/L ALA induced highest formation of PLBs, 
shoots and roots and in C. insigne 1 mg/L ALA with modified MS medium increased 
maximum number of PLBs and maximum formation of PLBs. 0.1 mg/L induced highest 
number of shoots and highest formation rate of shoots. These study results suggest that 
low concentrations of ALA added with culture medium enhance PLBs, shoots formation 
compare with control treatment. In this study lysozyme was firstly used as a plant 
growth regulator in Cymbidium tissue culture. Lysozymes are enzyme, also known as 
muramidase or N-acetylmuramide glycanhydrolase, are glycoside hydrolases. Lysozyme, 
successfully worked as a plant growth regulator in PLBs culture of C. insigne. Dipping 
(PLBs) into 30 minutes at lysozyme aqueous solution, 0.1 mg/l lysozyme significantly 
increased the number of PLB, shoot and root formation of C. insigne. 
 Chapter II. The combination of HA and NAG (N-acetyl-D-glucosamine) at 
different concentrations with modified MS medium under white fluorescent tube was 
studied. NAG is a monosaccharide derivative of glucose; it is an amide between 
glucosamine and acetic acid. In C. finlaysonianum highest PLBs formation were found 
at combination of HA 0.1 mg/L + 10 mg/L NAG, in C. dayanum, cultures the maximum 
formation rate of PLBs, shoots and roots were found in treatment of 0.1 mg/L HA + 1 
（第３号様式）(Form No. 3) 
mg/L NAG. In C. insigne cultures, thr highest formation rate of PLBs and shoots were 
found combination of 0.1 mg/L HA + 0.1 mg/L NAG with modified MS medium. These 
results suggest that combination of two polysaccharides had best effect in PLBs culture 
of Cymbidium spp. compare with single treatment. Chondroitin sulfate is polysaccharide 
elicitor, which was firstly used in Cymbidium tissue culture. Application of chondroitin 
sulfate in growing media, new PLB, shoot and root were successfully regenerated within 
6/8 weeks of culture. In C. insigne 0.1 mg/l chondroitin sulfate was effective; in C. 
finlaysonianum, 1 mg/l chondroitin sulfate and in C. dayanum, 10 mg/l chondroitin 
sulfate was more effective for PLB and shoot formation after 6/8 weeks of culture. 
 Chapter III, comparative study was conducted with two elicitors (Chitosan H 
and HA9) under different sources of lights. These study results suggested that green 
LED is best light source for C. insigne and C. finlaysonianum and blue LED is best light 
source for C. dayanum PLBs culture and it should therefore be possible to improve PLB 
and shoot formation by using HA and chitosan under different light in Cymbidium spp. 
in vitro. Effects of chondroitin sulfate under different sources of lights were conducted. 
In C. finlaysonianum, 10 mg/l chondroitin sulfate was effective under green LED, 0.1 
mg/l chondroitin sulfate was effective under blue LED and 0.1 mg/l and 1 mg/l 
chondroitin sulfate was effective under red LED for highest PLB formation. In C. 
insigne, 0.1 mg/l chondroitin sulfate under red LED was effective for highest formation 
of PLB and shoot. Every concentration of chondroitin sulfate was induced 100% PLB 
under green LED. In C. dayanum 1 mg/l chondroitin sulfate was effective under blue 
LED, 0.1 mg/l chondroitin sulfate was effective under green LED and 1mg/l and 10 mg/l 
chondroitin sulfate was effective for highest formation of PLB and shoot.  
 Chapter IV, disaccharide (trehalose) was used as an alternative of sucrose on 
modified MS medium than added HA9 at different concentrations. Results of the study 
revealed that 0.1 mg/l HA9 and 1 mg/l HA9 with trehalose induced maximum PLB 
formation and 10 mg/l HA9 with trehalose induced maximum shoot formation after 5 
weeks of culture in C. insigne. In C. dayanum, 0.01 mg/l HA9 with trehalose induced 
maximum PLB and shoot formation after 3 weeks of culture.  
 Chapter V, different sources of lights were used for regeneration of 
Anoectochilus formosanaus in vitro. Compare with five different sources of lights 
(white fluorescent tube, green LED, blue LED, red LED, red FEL), green LED was best 
light source for organogenesis of Anoectochilus formosanaus plantlets in vitro. In other 
experiment, shoot tips of A. formosanaus, dipping into MeJA and HA9 aqueous solution 
at three hours. 0.1 mg/l MeJA was effective for maximum fresh weight, highest leaf 
number and highest rhizome number. 100 mg/l HA9 was effective for maximum fresh 
weight. The results indicated that A. formosanaus shoot tips were successfully increased 
fresh weight, leaf number, root number and also elongated leaf size. Reports of this 
study suggest an easy, fast and reliable in vitro regeneration system for the propagation 
system of A. formosanaus.  


English

Studies on environmental control of organogenesis in orchids

Ehime University (愛媛大学)博士(学術)thesi

Nagganatha, Suganthan Ravi

 
 
 
（第５号様式）  
                        学位論文審査の結果の要旨 
 
    氏    名 NAGGANATHA SUGANTHAN RAVI 
審 査 委 員 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
          
 
 
         論  文  名  
Evolutionary, molecular, and expression studies on YGHL gene family （YGHL 遺伝子ファミリー
の分子構造進化、発現、および機能に関する研究） 
 
 
本学位論文において、申請者は、ブリ脳下垂体ｃDNA 発現ライブラリーを抗サケ GH 抗体を用いて分離
された YGHL1(HIG1)および YGHL2(MKRN2)の発現と機能の解明を行った。 このうち YGHL1 は、のちに別
の研究者により、肝臓においては低酸素環境誘導であると報告されているが、本論文では脳下垂体をは
じめ脳や心臓など、肝臓と筋肉を除く多くの臓器で構造的に発現していること、ならびににプロモータ
ー領域の解析により低酸素誘導因子のほか cAMP 応答因子の制御下にあることを見出し、構造的発現の
モデルを構築した。また、脳下垂体が生産する主要ホルモンのひとつである GH も cAMP 応答制御下にあ
り、YGHL1 の発現と GH の発現に密接な関連があることが示唆された。 
 一方、YGHL1 は遺伝子ファミリーとして動植物に広く分布しているが、本研究においてデーターベ
ース解析を進めた結果、そのうち脊椎動物の YGHL1 ファミリーは、脊椎動物への進化の直前の下等無脊
椎動物であるホヤに存在する YGHL1 がソース遺伝子となり、進化の過程で生じた少なくとも 2 回のゲノ
ムの重複によって４個程度の基本パラログにより構成されるファミリーに進化したことが解明された。 
さらにその進化の過程で核内受容体遺伝子(NR)ファミリーなどと隣接しながらそれらの遺伝子とともに
協調進化し、数本の染色体に別れて存在するようになったことも明らかとなった。 これらの YGHL1 の
パラログのひとつが、マウスゲノムにおいて 5‘側に隣接の独立の遺伝子と転写レベルの融合遺伝子産
物として発現することが見出され、その機構と局在を解明した。 その結果、ミトコンドリアなどの電
子伝達に関与するユビキノンメチル基転移酵素ドメインタンパク質(Mettl7a2)を N 末端側とし YGHL1 ド
メインを C 末端側とする融合産物で、この YGHL1 側がミトコンドリア標的シグナルとして機能して本来
細胞質局在である Mettl7a がミトコンドリアに標的するようになることを発見し、この融合遺伝子のマ
 
 
ウス腎臓における重要な役割の解明の突破口を開いた。  
  引き続き、YGHL2 の発現と機能解析をゼブラフィッシュの受精卵を用いて取り組み、発生におけ
る YGHL2 の詳細な発現パターンを初めて解明した。この YGHL2 は真核生物に見出される６個の亜鉛フィ
ンガーモチーフの特有な配置をもつ Makorin ring zinc finger protein（MKRN）をコードする遺伝子
（MKRN）のファミリーで、MKRN1 をソース遺伝子として魚類進化の過程で生じた MKRN2 と呼ばれるパラ
ログとして最初に発見されたものであり、脊椎動物固有の役割をもつ遺伝子である。 この研究の結果、
YGHL2 は、初期胚において神経菅や脳、視覚器官などの脊椎動物において高度に進化した器官の形成に
関与している可能性が明らかにされた。 さらに YGHL2(MKRN2)とそのソース遺伝子である MKRN1 のプロ
モーター部位の詳細な解析の結果、化学物質および重金属などに反応する因子に結合する配列を発見し、
環境評価や汚染の影響評価、あるいは、産物の安全性評価などの指標や研究開発に有用であることを示
した。 
 
本論文の公開審査会は、平成 26 年 2 月  1 日に愛媛大学農学部において開催され、論文発表とこ
れに関連する質疑応答が行われた。 引き続き行われた学位論文審査委員会において本論文の内容につ
いて審査が行われた。 その結果、本学位論文は、脊椎動物の発生や成長にかかわる遺伝子が果す器官
の分化や形成に関する有用な知見を多く含んでおり、バイオテクノロジーによる食糧増産や環境評価指
標として食の安全評価などへの応用展開の基礎としての価値を有するのみならず、生理学、内分泌学、
分子生物学、細胞生物学、発生学、環境科学などの、さまざまな学問分野・領域にまたがる境界領域分
野に属する研究であると認定され、５人の審査委員全員が一致して博士（学術）の学位を授与するに値
すると判定した。 
 
 


YGHL遺伝子ファミリーの分子構造進化、発現、および機能に関する研究

Trivima, Sharma

 
 
 
（第５号様式）  
                        学位論文審査の結果の要旨 
 
    氏    名 TRIVIMA SHARMA 
審 査 委 員 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
         論  文  名  
Studies on expression of PsAPY1 in early stages of development in pea (Pisum sativum L. 
var. Alaska) （エンドウ(Pisum sativum L. Var. Alaska)の初期成長段階における PsAPY1 の発現に関
する研究） 
 
 
 
申請者の研究は世界的に重要なマメ科作物のひとつであるエンドウのガーデン系の栽培品種の一つであ
るアラスカエンドウの黄化芽生えに多量に発現している 49 kDa apyrase をコードする遺伝子 APY1 の転
写産物の発現と局在を、吸水、発芽、および分化・成長過程において詳細に研究したものである。 
暗所で発芽したアラスカエンドウ芽生えから作成した凍結試料切片を用いて、PsAPY1のoligo DNAプ
ローブを用いたIn situ hybridization により、吸水10時間から、播種後78時間までの器官の成長や分
化におけるPsAPY1の発現を調べた。その結果、PsAPY1の発現は吸水開始10時間後から胚の茎や根の組織
でわずかに見られ、16時間後の発芽時点では茎頂分裂組織(SAM)と表皮および根端の維管束組織の細胞
に顕著に観察されるようになった。その後、時間を追って発現がより広く、より強くなり、62時間で最
大となった。 その後は、APY1の発現は全体的に低下したが、茎頂や根端では依然発現の高い状態が続
いた。また、茎頂のフックにおいてはその成長が著しくなるにつれて発現が強まった。 さらに84時間
 
 
目ごろから生じる側根原基とその成長過程においてPsAPY1の発現が強くみられた。 これらのことから、
PsAPY1はエンドウの発芽と成長過程において細胞の増殖と成長あるいは分化が活発な部位に強く発現す
ることが明らかとなった。 また、液胞化の活発な細胞群においても発現が顕著であることも明らかと
なり、細胞骨格の構築や機能、輸送などに役割を果している可能性も示された。 
 続いて、PsAPY1の酵素化学的性質から予想される機能モデルの構築を試みた結果、細胞の成
長や分化にともなう細胞周期に関連したアデニレートプールによるエネルギー生産と消費のバラ
ンスの形成や余剰のヌクレオチドの分解による高エネルギーヌクレオチド分子のクエンチングや
リサイクルあるいは細胞骨格の動態の調節などに重要な役割を果していると結論された。特に根
の機能の発現の第一段階である側根原基の分化と形成ならびに茎頂フックの形態形成にPsAPY1が
重要な役割を果たすことを明らかにしたこと、ならびに種子吸水に始まる植物の形態形成におけ
る分化と成長のウエーブにおいて遺伝子発現のレベルでPsAPY1の動態を詳細に明らかにしたこと
は注目に値する。 本論文の成果により、これまで多くの疑問点のあったエンドウ芽生えにおけ
るPsAPY1の細胞質での分子機能について、かなり明確なモデルが描けるようになったことは、特
記すべきである。 
 
本論文の公開審査会は、平成 26 年 2 月  1 日に愛媛大学農学部において開催され、論文発表とこ
れに関連する質疑応答が行われた。 引き続き行われた学位論文審査委員会において本論文の内容につ
いて審査が行われた。 その結果、本学位論文は、植物の発芽および成長過程における器官の分化と形
成に関する有用な学術的知見を有しており、バイオテクノロジーによる食糧増産などへの応用展開の基
礎としての価値のみならず、生理学、植物生理学、分子生物学、細胞生物学、発生学などの、さまざま
な学問分野・領域にまたがる、境界領域分野に属する価値のある研究であることから、５人の審査委員
全員が一致して博士（学術）の学位を授与するに値すると判定した。 
 
 


Studies on expression of PsAPY1 in early stages of development in pea (Pisum sativum L. Var. Alaska)

愛媛大学Ehime University博士(理学)doctoral thesi

浅野, 優太

ASANO, Yuta

変形Lennard-Jones系の相図と状態方程式

愛媛大学Ehime University博士(工学)doctoral thesi

日下部, 武志

KUSAKABE, Takeshi

Studies on high-capacity multiplexing transmisson systems of multi-channel digital broadcasts

光信, 一宏

フランスにおける人権差別的表現の法規制(1)

川瀬, 久美子

KAWASE, Kumiko

松山市興居島における近代以降の海岸環境の変遷(その1) : 空中写真と地形図を手がかりとして

張, 貴民

ZHANG, Gui-Min

中国における少数民族の火文化に関する考察 : [イ]族を例として

Ehime University (愛媛大学)博士(医学)doctoral thesi

藤田, 陽平

FUJITA, Yohei

 （第３号様式）     
 
 
学 位 論 文 要 旨 
 
 
 
            氏   名       藤田 陽平 
 
 
 
            論 文 名 口腔扁平上皮癌患者における予後予測因子としての 
インターロイキン-8 の有用性：インターロイキン-8 による CD163 
陽性 M2 マクロファージの誘導 
 
 
 
 
 
    学位論文要旨 
世界で年間約 50 万人の新規頭頸部扁平上皮癌患者が報告されており、その中でも口腔扁平上
皮癌は最も症例数が多く、約半数以上を占める。われわれの知見や技術、治療法の進歩にも関わ
らず、 5 年生存率は早期癌で約 90 %、進行癌で約 50 %と過去 40 年有意な上昇を認めていな
いのが現状である。新規治療法として分子標的治療薬や免疫治療が期待されているが、まだ発展
途上である。われわれは担癌患者の免疫抑制状態に注目し、免疫抑制状態を反映するバイオマー
カーを探索すること、またその免疫抑制機序を明らかにすることを目的として本研究を行った。 
最初に口腔扁平上皮癌患者の術前血清を用いて予後予測因子のスクリーニングを Multiplex
 Suspention Array System(IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, GM-CSF, IFN-γ, TNF-α) 
を用いて行った。その結果、早期癌患者において術前血清中の IL-6 及び IL-8 低値患者が、
高値患者に比べて有意に OS,DFS が延長していることが明らかになった。IL-6,8 はともに他
癌種において予後との相関が報告されている炎症性サイトカインであり、 IL-8 は血管新生に
関わる予後不良因子として報告されている。今回はその IL-8 に注目し、腫瘍微小環境下にお
ける腫瘍免疫抑制細胞との相関を解析し、 IL-8 による免疫抑制機序を検討した。 
 次に 3 年以上経過観察可能な根治的切除治療を行った口腔扁平上皮癌患者 50 例の手術時
または生検時のパラフィンブロックを使用して、腫瘍微小環境下における IL-8 発現および腫
瘍免疫抑制に関与している CD163⁺  M2 マクロファージの浸潤を免疫組織化学染色を用いて評
価した。その結果、腫瘍微小環境下における IL-8 の分泌と CD163⁺ M2 マクロファージの腫
瘍周囲への浸潤度には正の相関が認められ、またそれぞれが独立して予後不良予測因子となる
ことが認められた。 
 氏名 藤田 陽平  
さらに術前血清 IL-8 値と腫瘍微小環境下における IL-8 の分泌は早期癌においては相関し
ている傾向が認められたが、進行癌においては相関が全く認められなかった。これは進行癌に
おいては腫瘍細胞や免疫担当細胞などの様々な細胞からサイトカインが分泌されており、サイ
トカインストームの状態に陥っていることが考えられた。 
 次いで IL-8 による CD163⁺ M2 マクロファージへの分化誘導の確認を in vitro にて行っ
た。健常人末梢血を 100 ml 採取し、Lymphoprep®を用いて Periphperipheral blood mononucl
eated cell(PBMC) を分離して 10cm ディッシュ に播種した。12 時間後に PBS にて洗浄後、
5 日間 M-CSF(25ng/ml)にて刺激し、2 日間 IL-8(10ng/ml)で刺激した(IL-8 群)。コントロー
ル群には無刺激で 7 日間培養した群(CTL①群)、及び始めの 5 日間は M-CSF(25ng/ml)で刺激
し、残りの 2 日間を無刺激で培養した群(CTL②群)の 2 群を設定した。ポジティブコントロ
ールには 5 日間を M-CSF(25ng/ml)で刺激し、残りの 2 日間を IL-4(20ng/ml)および IL-13
(20ng/ml) で刺激した群(PC 群)を設定した。培養終了後 FACS 解析を行い、CD163 への分化
誘導の確認を行った。CTL①に比較してその他 3 群では有意に CD163⁺ M2 マクロファージの細
胞数が増加しており、 M-CSF によって分化されていることが確認された。また、 IL-8 群に
は CTL②と比較して、有意に CD163⁺ 細胞数が増加しており、 IL-8 によりさらに CD163⁺ M2
マクロファージへの分化誘導が促進されていることが示唆された。 
 次に M2 マクロファージの活性化を確認するために、活性化した M2 マクロファージが産生
すると報告されている IL-10 の濃度を上記 4 群で培養した際の培養上清を用いて ELISA に
て測定した。その結果、CTL①ではほとんど産生されていない IL-10 が、CTL② において産生
の上昇を認め、 PC,IL-8 においてさらになる上昇が認められた。この結果より、IL-8 は分化
誘導だけでなく、 M2 マクロファージの IL-10 産生能も上昇させ、活性化にも関与している
ことが示唆された。 
 以上の結果より、早期癌においては血清中の IL-8 濃度が腫瘍微小環境下を反映しており、
また全病期においては腫瘍微小環境下の IL-8 の発現強度,CD163⁺ M2 マクロファージの浸潤
度が予後予測バイオマーカーとして有用である可能性が示唆された。また、その免疫抑制機序
として、腫瘍細胞により産生された IL-8 によって、単球から CD163⁺ M2 マクロファージへ
の分化誘導が促進され、尚且つ M2 マクロファージを活性化することで IL-10 などの免疫抑
制性サイトカインの産生能を上昇させ、最終的に腫瘍免疫の抑制に繋がっていることが示唆さ
れた。 
 
 
 
 
 
キーワード（３～５） 
 
 
 
口腔扁平上皮癌 
Interleukin-8(IL-8) 
CD163⁺ M2マクロファージ 
腫瘍微小環境下 
バイオマーカー 
 


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