Ehime University Institutional Repository

露口, 健司

Japanese

キー・コンピテンシーが社会関係資本の醸成に及ぼす効果 : 学習の社会的成果についての検討

丹下, 晴喜

地方創生における大企業と労働組合 : 愛媛県西条市における農業振興を事例として

Ehime University (愛媛大学)博士(工学)doctoral thesi

SWEATA, SIJAPATI

English

Study on Local Cloud Coverage Using Ground-Based Measurement of Solar Radiation

山口, 智之

寺谷, 亮司

高知市の飲食文化 : ひろめ市場を事例として

深田, 昭三

幼稚園における即興的な歌に対する言語・会話面からの事例分析

Ehime University (愛媛大学)博士(医学)thesi

Endy, Adnan

（第 12 号様式） 
 
 
学 位 論 文 の 要 約 
（ 研 究 成 果 の ま と め ） 
 
 
 
            氏   名 Endy Adnan 
 
 
            学位論文名 C キナーゼ阻害剤で誘導されたヒト寛容型樹状細胞の抑制機能の解析― 
各種誘導寛容型樹状細胞との比較試験 
 
    学位論文の要約 
1. Background and purpose  
Dendritic cells (DCs) are professional antigen presenting cells involved in initiation of both 
immunity and immunological tolerance. Tolerogenic DCs (tDCs) are characterized by a semimature 
phenotype, with a capacity for high antigen uptake and low expression of co-stimulatory molecules.  
Most patients with autoimmune diseases and graft transplantation are treated with 
immunosuppressive drugs that induce generalized immune suppression, thus increasing the risk of 
infection and cancer. Therefore, to prevent undesirable side effects, the use of antigen specific tDCs 
that target autoreactive T cells in an attractive strategy, with the aim of reprogramming the immune 
system.   
Human tDCs can be generated ex vivo using various compounds. However, the compounds most 
suitable for clinical application remain undefined. In the present study, we systematically evaluated 
seven kinds of tDCs generated ex vivo using the compounds for their tolerogenic potential, stability, 
and capacity for migration toward secondary lymphoid organ.  
 
2. Material and Methods 
1) Agents used in this study were as follows; IL-10; TGF-β1; PPAR γ agonist, 15-deoxy-△-12,14 PG J2 
(15d-PGJ2) with all trans retinoic acid (ATRA); 1 α dihidroxyvitamin D3 (VitD3); PKCI, 
bisindolylmaleimide I; dexamethasone (Dexa); and rapamycin (Rapa).  
2) Generation of human dendritic cells   
After PBMC isolated using CD14+ Isolation Kit, immature DCs (iDCs) were generated from the 
CD14+ monocytes by culturing them in X-VIVO medium with 2 % human autologous serum, 75 
ng/mL rhGM-CSF, and 10 ng/mL rhIL-4 for 5 days. To induce mature DCs (mDCs), iDCs were 
incubated with a maturation cocktail containing rhTNF-α (10ng/ml), rhIL-1β (10ng/mL) and 
PGE2 (1μg/mL) for a further 48 h. Compound-treated tDCs were generated by culturing iDCs with 
a maturation cocktail in the presence of each compound for 48 h. 
3) Other methods : Flow cytometric analysis; in vitro T cell proliferation assay; measurement of 
cytokine production from DCs; phagocytic ability; induction of regulatory T cells by compound- 
treated DCs; in vitro T regulatory activity; stability of DCs under proinflammatory stimuli; and 
chemotaxis assay.  
3. Results  
1) Comparison of the surface phenotypes of compound-treated human tDCs 
We compared the surface expression of costimulatory molecules (CD40, CD80, CD83, and 
CD86) and MHC Class II on iDCs, mDCs and each of the compound-treated tDCs. The expression 
levels of costimulatory molecules, CD40, CD80, CD83, and CD86 on tDCs treated with PKCI, IL-10, 
Vit D3, or PPAR γ+ATRA remained as low as those on iDCs, whereas those on tDCs treated with 
Dexa, TGF- β, or Rapa were higher than those on iDCs. Upregulation of CCR7 expression was 
recognized on PKCI-, TGF-β- and Rapa-tDCs. In contrast, IL-10-, Vit D3-, PPAR γ+ATRA-, and 
Dexa-tDCs showed little or no expression of CCR7 or migration to CCL19.  
2) Cytokine production and phagocytic ability of the various compound-treated human tDCs          
   IL-10 production was high in IL-10-tDCs, moderate in PKCI-tDCs and low in other tDCs, iDCs 
and mDCs. The production of TGF-β by PKCI-tDCs was higher than by other tDCs, and mDCs.  
3) Suppressive properties of the various compound-treated human tDCs 
PKCI-IL10-, and Vit D3-tDCs and iDCs reduced the proliferation of allogenic CD4+T cells 
strongly by 69-86% in comparison with mDCs, whereas Dex-, TGF-β-, and Rapa-tDCs reduced the 
proliferation weakly by 21-27 %.      
4) Induction of functional regulatory T cells by the various compound-treated human tDCs 
CD4+T cells co-cultured with PKCI-, or IL-10-tDCs significantly suppressed the proliferation of 
effector Th1 cells in comparison with those co-cultured with other tDCs. 
5) Stability of the tolerogenic properties of the various compound-treated human tDCs 
All of the tDCs used in this study were refractory to stimulation with proinflammatory mediators 
and their tolerogenic properties were stable. 
 
4. Discussion and Conclusion    
For clinical application of tDCs, three functional characteristics are required;     1) CCR7-
dependent migration toward secondary lymphoid organs, 2) efficient induction of functional 
regulatory T cells and 3) stability upon exposure to proinflammatory stimuli.  
In the present study, we compared seven different protocols for generation of tDCs using 
compounds suitable for use in clinical trials. PKCI-, IL-10, and VitD3-tDCs appeared to have strong 
tolerogenic properties and stable  phenotypes. However, PKCI-tDCs exhibit CCR7-dependent 
migration, whereas IL-10-, and Vit D3-tDCs hardly do so. Therefore, PKCI-tDCs may be useful for 
tolerance-inducing therapy, since they satisfy the required functional characteristics for clinical-grade 
tDCs. 
 
なお、この学位論文の内容は、以下の原著論文に既に公表済である。 
 
主論文：Adnan E, Matsumoto T, Ishizaki J, Onishi S, Suemori K, Yasukawa M, Hasegawa H.:
Human tolerogenic dendritic cells generated with protein kinase C inhibitor are optima
l for functional regulatory T cell induction - A comparative study. Clinical Immunolo
gy 173:96-108, 2016. DOI: 10.1016/j.clim.2016.09.007. 
   


Human tolerogenic dendritic cells generated with protein kinase C inhibior are optimal for cunctinal regulatory T cell induction -A comparative study

Ehime University (愛媛大学)博士(医学)doctoral thesi

小泉, 雅江

KOIZUMI, Masae

Lgr4 Controls Specialization of Female Gonads in Mice1

Ehime University (愛媛大学)博士(農学)thesi

Shicai, Shen

 
 
（第５号様式）  
                        学位論文審査の結果の要旨 
 
    氏    名 Shicai Shen 
審 査 委 員 
      
 
        論  文  名 
Distribution, impact and control of invasive alien species Mikania micrantha H.B.K.  
in Yunnan Province of China 
(外来植物 Mikania micrantha H.B.K.の中国雲南省における分布，影響および管理)  
 
      審査結果の要旨 
 
ミケニア（Mikania micrantha）は，南・中央アメリカ原産で，キク科のつる性の植物である．
ミケニアは，成長が早く，クローンで簡単に増殖する．その増殖性の速さと侵略性の強さから，
最も危険な侵略性外来植物に指定されている．現在，ミケニアは，中国の隣国ミャンマーから中
国国境をへて雲南省に進入してきている．本研究では，ミケニアの雲南省での進入度合い，生態
系に与える影響等を検証し，総合的な制御方法を探索するために，以下の一連の研究が行なわれ
た． 
 
ミケニアの進入度合いが，雲南省の 6 郡で調査された．その結果，ミケニアは，すでに雲南
省の 6 郡の中で，主に亜熱帯や熱帯地域に進入していることが明らかになった．また，ミケニア
は，作物生産や生態系に重大な負の影響を与えていることが判明した． 
 
ミケニアの進入度を５段階に分けそれぞれの段階で，植物多様性に与える影響が調査された．
その結果，ミケニアの進入度が 1-25％の時，種多様性は，Simpson index で 0.86，Shannon-
Wiener index で 2.10，Pielou index で 0.73 であったが，ミケニアの進入度が 26-100％の時，い
ずれの係数も，進入度が大きくなるに従い，種多様性が著しく失われていることを示した．これ
らの研究から，ミケニアの進入度が大きいほど植物多様性が失われていることが明らかになり，
ミケニアの進入防除が重要であることが実証された． 
 
 
 
一般的な除草剤 20 種類について，ミケニア防除の効果が検証された．その結果，土壌適用型
の農薬，アトラジン，メチルベンスルフロンおよびプロメトリン剤は，ミケニアの発芽と実生の
成長を著しく抑制した．また，葉面適用除草剤スルホメツロンメチル，フルロキシピルおよびグ
リホサートも，ミケニアの成長を著しく抑制したが，残留性の問題から食用作物生産の安全性に
問題があることが分かった．これらの研究から，アトラジンはサトウキビ園，果樹園，ゴム園で，
グリホサートはゴム園で，スルホメツロンメチルは，森林等で有効であることが示唆された． 
 
次に，生物学的ミケニア防除の方法が様々検討された結果，ミケニアと同様のつる性の作物
サツマイモ(Ipomoea batatas)がミケニアの成長を抑制することが分かった．ミケニアとサツマ
イモをそれぞれ単独で栽培したとき，サツマイモの総バイオマス量，不定根量，茎量，葉量は，
ミケニアのそれらより著しく大きかった．ミケニアとサツマイモを混植すると，サツマイモによ
りミケニアのバイオマス量が著しく減少していることが分かった．サツマイモは，ミケニアより
も栄養塩（窒素，リン酸，カリウム，カルシュム，マグネシウム，マンガン，ホウ素）の吸収が
著しく大きかった．これらの研究より，サツマイモはミケニアと栄養塩類を巡る競合で著しく優
位にたつことができ，ミケニアに十分な栄養を与えないことで，ミケニアの成長を抑えているこ
とが示唆された． 
 
さらに，サツマイモと除草剤を併用することで，減農薬でのミケニアの防除方法の開発が検
討された．その結果，除草剤ベンタゾンを単独でミケニアに与えたときよりも，サツマイモとベ
ンタゾンを組み合わせたとき，ミケニアの防除効果は著しく大きく，ベンタゾンの投与量を著し
く減少できた．以上の結果，ミケニアを防除するために，除草剤ベンタゾンにサツマイモを組み
合わせることで，除草剤の使用が減少することができ，より安全で持続的かつ長期的な制御を達
成することが可能であると示唆された． 
 
本論文に関する公開審査会は，平成２８年２月６日に愛媛大学農学部において開催され，論
文発表と質疑応答が行われた．引き続いて行われた学位論文審査委員会で本論文の内容を慎重に
審査した結果，審査委員全員一致して博士（農学）の学位を授与するに値するものと判定した．  
 
 


Distribution, impact and control of invasive alien species Mikania micrantha H.B.K. in Yunnan Province of China

日浅, 祥

HIASA, Syo

（様式５）(Style5) 
学位論文全文に代わる要約 
Extended Summary in Lieu of Dissertation 
 
 
氏名： 
Name 
日浅 祥 
 
学位論文題目： 
Title of Dissertation 
柑橘系未利用資源からのセルロースナノファイバー製造及び     
材料利用技術の研究 
 
 
 
学位論文要約： 
Dissertation Summary 
本研究では、みかん搾汁残渣からセルロースナノファイバー（CNF）を製造する方法と、CNFを樹脂
の補強繊維として利用する新しい方法の開発を目指した。 
 
第2章では、みかん搾汁残渣から製造したCNFの特性解析を行った。みかん搾汁残渣に対して漂白処
理、水熱処理、アルカリ処理を行うことで、高純度のセルロースが得られた。次いでみかん搾汁残渣
由来セルロースに対して解繊処理を行うことでCNF分散液を調製した。Fig. 1にCNF分散液の偏光顕微
鏡結果を示す。精製木材パルプでは、10回の解繊処理後も繊維の塊が確認された。一方、みかん搾
汁残渣由来セルロースからは解繊処理を1回行うだけで、光学顕微鏡では確認できないほど細いCNF
が得られた。このことは、みかん搾汁残渣由来セルロースは精製木材パルプ由来セルロースと比べ、
CNF分散液が容易に製造可能であることを示している。Fig. 2の原子間力顕微鏡（AFM）による観察
結果から、どちらのサンプルからも繊維状の構造が確認され、みかん搾汁残渣由来セルロースからは
僅か１回のみの解繊処理で繊維幅2-3 nmのCNFが得られることが明らかになった。これは精製木材パ
ルプ由来セルロースから製造したCNF（幅3-8 nm）に比べて細かった。走査型電子顕微鏡（SEM）によ
る観察を行ったところ、みかん搾汁残渣由来セルロースは、セルロース繊維間の結合が緩いことが確
認され、このことが低回数での解繊処理で、微細かつ均一なCNF分散液が得られた原因であったと考
えられる。みかん搾汁残渣由来セルロースを用いた場合、僅かな解繊処理でCNFが製造可能であるた
め、解繊処理によるセルロースの結晶構造の損傷を抑えられた。 
 
第 3章では、みかん搾汁残渣からセルロースを精製する際に、ペクチンを残留させ、残留ペクチン
による CNF の凝集抑制について検討した。漂白処理後のサンプルに対して酸添加水熱処理を行う際、
処理時間を制御することで、含有ペクチン量の異なるペクチン含有セルロースを調製した。このペク
チン含有セルロースに対して高圧ホモジナイザー処理を行い、ペクチン含有 CNFを調製した。Fig. 3
に、市販ペクチンとペクチン含有 CNFの AFM観察結果を示す。ペクチンは非繊維状の物質として観察
され、ペクチン含有 CNFでは、繊維の表面を非繊維状のもので覆われた構造であることが確認された。
これらのことから、ペクチン含有 CNFでは、みかん搾汁残渣の主成分であるペクチンがセルロース繊
維表面を被覆していると考えられる。 
ペクチン含有 CNFをオーブン乾燥後、SEMで観察したところ、繊維の凝集が抑制されていた。これ
は、ペクチンが CNF表面に存在することで、物理的にセルロース繊維同士の接近が抑制され、乾燥工
程での繊維の凝集が抑制されたことが原因だと考えらえられる。さらにペクチンを適量含むペクチン
含有 CNF は、Fig. 4 のように、オーブン乾燥後も水への再分散が可能であった。しかし、市販のペ
クチンを CNF分散液に添加しただけでは、乾燥後の CNFの凝集を防ぐことはできなかった。みかん搾
汁残渣から調製したペクチン含有 CNFには、CNFとペクチンの間に相互作用が見られたが、市販ペク
チンと CNFとの間に相互作用は見られなかった。みかん搾汁残渣由来のペクチン含有 CNFに見られる
このペクチンと CNF間の相互作用により CNF表面はペクチンに覆われ、CNFの凝集が抑制されたと考
えられる。 
 
 第 4 章では、疎水性の樹脂に親水性の CNF を均質に分散させるための新たな樹脂/CNF 複合体の作
製方法の開発を試みた。乾燥による CNFの凝集を防止するため、CNF分散液を粒度の細かいポリプロ
ピレン（PP）粉末と共に混合した後、オーブンで静置乾燥させた。尚、CNFには標準 CNFとして精製
木材パルプ由来 CNFを用いた。その結果、Fig. 5の複合体の写真のように、PPの粒度が細かくなる
につれCNFの凝集は抑制され、PP/CNF複合体中のCNF凝集物のサイズも小さくなる傾向が見られた。
（様式５）(Style5) 
このことから PP の粒度が細かいほど、乾燥時の CNF の凝集が抑制され、CNF の分散性の良い複合体
が作製可能になることが明らかになった。実際、粒度 106 µm 以下の PP と共にオーブン乾燥させた
CNFを SEMで観察したところ、数十µmの CNF凝集物が確認されたが、その繊維間には空隙が見られ、
ナノサイズの繊維形状が維持されていた。このことから、粒度の細かい PP 粉末は、セルロース繊維
同士の接近を物理的に防ぐことができ、乾燥過程の CNF の凝集を抑制したのだと考えられる。また、
Table 1の複合体の強度試験結果から、粒度の細かい PP粉末を用いた場合、CNFの添加量を 5 %まで
増やしても CNFの凝集は抑制され、CNFの添加量に応じた樹脂の補強効果が得られた。この粒度の細
かいPPを用いた樹脂/CNF複合体の作製方法をみかん搾汁残渣から製造したペクチン含有CNFに適用
したところ、精製木材パルプ由来 CNFを用いた場合と同様に樹脂補強効果が得られた。 
 
 本研究では、CNFにペクチンを残留させることで、乾燥時の凝集を抑制可能な CNFの製造方法を確
立し、粒度の細かい樹脂を用いることで、乾燥後の CNFの凝集を抑制し、樹脂中への CNFの分散性の高
い樹脂/CNF複合体の作製方法を開発した。CNFの実用化における課題のひとつは、その凝集性の高さであ
ることから、本研究で開発した CNFの凝集抑制技術はCNFの実用化に貢献する技術になりうる。 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
（様式５）(Style5) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Fig. 1 （a）精製木材パルプ、（b）みかん搾汁残渣由来セルロースから調製          
したCNF分散液の偏光顕微鏡観察結果 
 
20 μm 20 μm
(a) (b)
（様式５）(Style5) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Fig. 2  （ a）精製木材パルプ、（ b）みかん搾汁残渣由来セルロースから           
調整したCNFの AFM観察結果 
 
500 nm
(a) (b)
500 nm
（様式５）(Style5) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Fig. 3 AFM観察結果 （a） 市販ペクチン、（b）ペクチン含有 CNF （ペクチン含有量 30.5 % ） 
 
500 nm
(b)
500 nm
(a)
（様式５）(Style5) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Fig. 4 再 分 散 後 の ペ ク チ ン 含 有 CNF                                            
ペクチン含有量（a）30.5 %、（b）4.9 %、 (c) 0.0 % 
 
（様式５）(Style5) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
(a) (b)
(c) (d)
Fig. 5  PP/CNF 複 合 体 フ ィ ル ム の 写 真 観 察 結 果                     
樹脂粒径（ a）  106 µm 以下、（ b） 106-250 µm、 (c) 250-425 µm、               
（d） 425-500µm 
 
（様式５）(Style5) 
 
Table 1 PP/CNF複合体の引張強度結果 
　 under 106 µm 106-250 µm  250-425 µm  425-500 µm
PP/CNF /MAPP =95.5 /1.5 / 3 35.8 ± 0.2 35.7 ± 0.4 34.8 ± 0.7 34.9 ± 0.3
PP/CNF /MAPP =94 / 3 / 3 35.7 ± 0.2 35.3 ± 0.3 35.3 ± 0.3 35.1 ± 0.3
PP/CNF /MAPP =92 / 5 / 3 37.0 ± 0.2 34.8 ± 0.1 35.5 ± 0.2 34.9 ± 0.3
Composition of composite (wt%)
Tensile strength (MPa)
Particle size of polypropylene (PP)
 
 
 
(注) 要約の文量は，学位論文の文量の約１０分の１として下さい。図表や写真を含めても構いません。
(Note)  The Summary should be about 10％ of the entire dissertation and may include illustrations 


柑橘系未利用資源からのセルロースナノファイバー製造及び材料利用技術の研究

Md., Shamim Akhter

 
 
（第５号様式）  
                        学位論文審査の結果の要旨 
 
    氏    名 Md. Shamim Akhter 
審 査 委 員 
       
 
         論  文  名 
Molecular Biological analysis of Beet pseudoyellows virus (Closteroviridae, Crininivirus). 
(ビートシュードイェローズウイルス（クロステロウイルス科，クリニウイルス属）の分子生物学的解
析) 
 
         審査結果の要旨 
 
新興感染症における病原体の特定と診断技術の確立は，ヒトの疾患だけでなく，植物病害分野において
も喫緊の課題である．近年，クリニウイルス属に属する様々なウイルスが新規に同定され，新興感染症
として注目を集めている．クリニウイルス属は（＋）鎖 RNA ウイルスであるクロステロウイルス科に属
し，コナジラミによって媒介されることが知られている．同属に属するビートシュードイェローズウイ
ルス（BPYV）は，オンシツコナジラミによって媒介され，世界各地でウリ科作物を中心に発生が知られ
てきた．わが国ではキュウリ黄化ウイルスとして分離され，全塩基配列が決定された．一方，米国では
同ウイルスがイチゴのパリドーシス発症個体の一部から分離され，全塩基配列が決定されたが，そのゲ
ノム構成においてわが国のキュウリ株との間に明確な違いが認められた．さらに，本ウイルスは被害の
多い重要病原体であるにもかかわらず，ウイルス遺伝子の機能については何ら知見が蓄積されていない．
本研究は，BPYV のゲノム構成を明確にするとともに，それぞれの遺伝子機能を明らかにする方途を開く
ことを目的として行われたものである． 
 
１．BPYV ゲノム構造の再検討 
わが国で全塩基配列が決定された BPYV キュウリ系統（BPYV-JC）と米国のイチゴ系統（BPYV-S）の間
には２つのゲノム構成上の違いが指摘されていた．１つは RNA1 にコードされるプロテアーゼ，メチル
トランスフェラーゼ（MT），およびヘリカーゼ（HEL）の各ドメインを有するポリプロテインをコード
するオープンリーディングフレーム（ORF），ORF1a において，BPYV-S では MT 領域と HEL 領域の間に
BPYV-JC にはない 147 塩基の挿入配列が存在することである．もう一つは，BPYV-JC では RNA1 の RNA 依
存 RNA ポリメラーゼ（RdRp）コード領域の下流にタンパク質をコードしうる ORF は存在しないが，
BPYV-S では約 6 kDa のタンパク質（p6）をコードする ORF2 が存在することである．2013 年に愛媛県松
山市伊台で採取された罹病植物から得られた BPYV-MI について全塩基配列を決定したところ，ORF1a に
ついては BPYV-S と同様に 147 塩基の挿入配列を持っており，RNA1 の ORF2 については BPYV-JC と同様に
保有しないことが明らかとなった．そこで，2005 年に愛媛県大洲市肱川で採取された 2 株の罹病植物に
 
 
ついてもこれらの 2 点について RT-PCR 法で検討したところ，ORF1a については BPYV-S と同様に 147 塩
基の挿入配列が存在し，RNA1 の ORF2 については BPYV-JC と同様に持たないことが示された．ORF1a に
ついては 147 塩基の挿入配列を持つものが本来の BPYV のゲノム構造であることが強く示唆された．一
方，RNA1 の ORF2 については，わが国のキュウリで採取されたすべての BPYV 試料において保有しないこ
とが明らかとなったが，これがキュウリ系統に共通した特性であるのか，あるいはわが国の BPYV 系統
に限られた特性であるのか不明であった．そこで，南アフリカ共和国の研究者との共同研究によって，
同国産の BPYV キュウリ系統においても ORF1a に 147 塩基の挿入配列が存在すること，および RNA1 の
ORF2 は持たないことが確認された．以上のことから，BPYV-JC が 147 塩基の欠失を持つ特殊な系統であ
ること，および BPYV のキュウリ系統は RNA1 の ORF2 を持たないことが明らかとなった．また，RNA1 の
ORF2 にコードされる p6 は BPYV-S に特異的なものであり，イチゴ宿主への適応に関与することが示唆さ
れた． 
 
２．ハンマーブロットを介した核酸抽出法の開発 
BPYV-S において RNA1 の ORF2 にコードされる p6 がイチゴ宿主への適応に関与する可能性が示唆され
たことから，これを検証する目的で感染性 BPYV クローンの構築を試みたが，感染性を示すクローンは
得られなかった．また，リンゴ小球形潜在ウイルス（ALSV）ベクターを用いて p6 を発現する組換え
ALSV を構築し，イチゴ，およびキュウリにおける感染実験を行ったが再現性の高い結果を得るには至ら
なかった．これらの植物材料から RNA を抽出することが困難であることがその一因であると考え，RNA
抽出の新手法を開発した．ハンマーブロッティング法は植物ウイルス学の研究に広く用いられる免疫学
的ウイルス検出法であるが，この方法におけるウイルス抗原の抽出は，2 枚のろ紙に挟んだ植物組織を
ハンマーで叩いて破砕し，その汁液をろ紙に吸収させるという，迅速かつ簡便なものである．このろ紙
に吸収された汁液から RNA を抽出することを想起し，抽出条件を検討した．その結果，ウイルス RNA の
みならず，植物の mRNA についても RT-PCR 法によって検出可能であることが示された．さらに，免疫染
色によってウイルスを検出したのちに RNA を抽出し，RT-PCR 法によってウイルスを検出可能であること
も示された．この手法を用いることによって，再現性の良い RNA 抽出が困難であったイチゴやキュウリ
においても，組換え ALSV あるいは植物 mRNA を再現性良く検出することが可能となった．また，本手法
では植物からの核酸抽出に広く用いられている液体窒素が不必要であるため，特に開発途上国における
植物ウイルス病の診断に有用であると考えられる． 
 
以上のように得られた成果は，新興感染症の原因病原体であるクリニウイルス属に属する BPYV のゲ
ノム構成に関する問題点を解決するとともに，その遺伝子機能を解明する方途を提供するものである．
本研究で得られた知見はクリニウイルス属の病原性に関する今後の研究に大きく寄与するとともに，本
研究で開発された核酸抽出法は，基礎研究のみならず，植物ウイルス病診断の効率化に大きく貢献する
ものと考えられ，評価される． 
 
本論文の公開審査会は平成２８年８月６日に香川大学農学部において開催された．申請者が論文内容
について発表した後，質疑応答が行われた．同日引き続いて論文審査委員会をあらためて開催し，審査
を行った．これらの結果から本論文は博士（農学）の学位を授与するに値すると審査委員全員一致して
判定した． 
 


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