Ehime University Institutional Repository

田川, 靖紘

Japanese

過失の共同正犯について : 「加茂川溺死事件」から考える

石井, 隆志

中村, 依子

家山, 博史

松山市重信川水系における淡水産シジミ類の生態遺伝学的研究

BOGDAN, David

VERGIN, Ruth

English

Losing EIU (Education for International Understanding) : And the future of education at Ehime University

木村, 勢津

介護者と生涯学習 : 歌唱活動の場合

若林, 良和

地域資源としての民俗語彙による価値創出 : 浜言葉を活用したカツオのブランド化を事例として

藤原, 誠

山中, 亮

子どものスポーツクラブに関する研究 : 総合型地域スポーツクラブに着目して

西村, 勝志

愛媛大学の新たな挑戦 : 新学部(社会共創学部)の設置

谷本, 貴之

カーブドッチワイナリーのマーケティング戦略

吉田, 正広

イギリスにおける戦死者の追悼式典と赤いポピー : Great Pilgrimageの今

Ehime University (愛媛大学)博士(農学)thesi

石田, 萌子

ISHIDA, Momoko

（第３号様式）(Form No. 3) 
学  位  論  文  要  旨  
Dissertation Abstract 
 
 
氏名：  
Name 
石田 萌子  
学位論文題目：  
Title of Dissertation 
ホウレンソウ水溶性成分の機能性に関する研究  
 
学位論文要旨：  
Dissertation Abstract 
 
 
 
 
 
 
 
 
ホウレンソウには、カロテンやビタミン類、葉酸などの栄養素が豊富に含まれて
おり、これら成分による多様な保健機能が報告されている。多くの研究がルテイン
などのカロテノイドや糖脂質といった、脂溶性成分に集中しており、水溶性成分の
保健機能に関する報告は極めて少ないのが現状である。そこで、ホウレンソウの新
規の機能性成分に関する知見を得ることを目的として、水溶性成分の抗アレルギ
ー効果、および免疫賦活効果に着目して研究を行った。 
まず、アレルギー発症において重要なプロセスである、肥満細胞や好塩基球の脱
顆粒に対する効果を検討した。ホウレンソウ凍結乾燥粉末を 10 mM リン酸ナトリ
ウム緩衝液に懸濁して 4℃で 24 時間攪拌することで成分を抽出し、これを遠心し
て回収した上清をホウレンソウ水溶性抽出物 (SAE) として用いた。抗ジニトロフ
ェニル (DNP) -IgE で感作したラット好塩基球細胞株 RBL-2H3 細胞に SAE を作用
させた後、DNP-ヒト血清アルブミン (HSA) で抗原刺激することにより脱顆粒を誘
導した。その結果、SAE は RBL-2H3 細胞の生存に影響することなく脱顆粒を有意に
抑制した。このことから、SAE は肥満細胞や好塩基球の脱顆粒を抑制する抗アレル
ギー効果を有することが明らかになった。SAE に含まれる活性物質は、分子量 8,000
以上 14,000 以下の比較的熱に安定な、非タンパク質性物質であることが推察され
た。また、逆相クロマトグラフィーによる分画の結果、極性の高い画分に認められ
る 2 つのピーク成分が活性物質ではないかと推察された。続いて、SAE の脱顆粒抑
制効果の作用機序の解析を行った結果、脱顆粒シグナル伝達経路の上流に位置す
る Syk、および PI3K のリン酸化を下方制御することで、RBL-2H3 細胞の脱顆粒を
抑制することが示唆された。さらに、受動皮膚アナフィラキシー (PCA) モデルマ
ウス、およびスギ花粉症モデルマウスに対する SAE の経口投与により、アレルギー
症状の緩和効果が認められた。これらのことから、SAE は生体内においても抗アレ
ルギー効果を示すことが明らかになり、ホウレンソウ水溶性成分がヒトにおいて
も抗アレルギー効果を示す可能性が推察された。 
（第３号様式）(Form No. 3) 
続いて、自然免疫応答において重要な役割を担うマクロファージに対する賦活
効果について検討した。この検討では、SAE を分画分子量 14,000 の透析膜で透析
したものを透析 SAE (D-SAE) として用いた。D-SAE を添加した培地でマウスマク
ロファージ様細胞株 J774.1 細胞、およびマウス腹腔内マクロファージ (P-Mac) を
培養し、IL-6、および TNF-α産生に及ぼす影響を検討した。その結果、J774.1 細
胞、および P-Mac の両方において、サイトカイン産生の促進が認められた。リアル
タイム RT-PCR の結果から、D-SAE は遺伝子の転写活性を促進してサイトカイン産
生を活性化することが示唆された。また、D-SAE はマクロファージの貪食活性も促
進することが確認された。D-SAE がマクロファージを活性化する作用機序を解析し
た結果、D-SAE は、マクロファージ表面受容体である TLR4 の下流に存在する MAPK、
および NF-κB カスケードを上方制御することで、マクロファージを活性化するこ
とが明らかになった。また D-SAE は、TLR4 以外の受容体にも関与し、活性化して
いることが示唆された。D-SAE に含まれる活性物質について検討した結果、活性物
質は分子量 14,000 以上の熱に不安定な、タンパク質性物質であることが推察され
た。さらに D-SAE は、経口投与によってマウス体内においてもマクロファージを活
性化することが明らかになった。これらの結果から、ホウレンソウ水溶性成分はヒ
トにおいてもマクロファージに対する賦活効果を示すのではないかと推察された。 
本研究により、ホウレンソウ水溶性抽出物には、抗アレルギー効果を示す物質、
および免疫賦活効果を示す物質が含まれていることが明らかになった。その活性
物質はそれぞれ異なっており、抗アレルギー効果を示す物質は分子量 8,000 以上
14,000 以下の熱に安定な非タンパク質性物質であり、一方、免疫賦活効果を示す
物質は分子量 14,000 以上のタンパク質であることが示唆された。これらの結果か
ら、ホウレンソウ水溶性抽出物には花粉症などに対する抗アレルギー効果に加え、
感染症などに対する免疫活性の増強に貢献する新規性の高い成分が含まれること
が明らかになった。今後、活性物質の同定が必要であると考えられる。  


ホウレンソウ水溶性成分の機能性に関する研究

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