Ehime University Institutional Repository

梶原, 綾乃

山本, 和博

胡, 柏

Japanese

地方移住の実態とあるべき支援策

土居, 波留加

若林, 良和

女性就農者ネットワークの課題と対策 -愛媛県の「さくらひめネットワーク」に関する実態分析ー

高嶋, 賢二

岡本, 佑弥

胡, 光

伊方町で発見された愛媛県最古の四国遍路日記

TSUBAMOTO, Takehisa

English

Intraspecific variations of the astragalar and calcaneal sizes in living Japanese monkey (Macaca fuscata)

愛媛大学図書館

2018年度版愛媛大学図書館年報 : あゆみ

渡邉, 敬逸

WATANABE, Hiromasa

地理空間データを用いた無住化集落の特定方法の試行:愛媛県を事例として

Ehime University (愛媛大学)博士(医学)thesi

関谷, 慶介

SEKIYA, Keisuke

（第７号様式） 
 
学位論文審査結果の要旨 
 
   氏     名  関谷 慶介 
 
 
 
 
 
   審 査 委 員 
 
 
 
 
                                      
 
                                      
 
                                      
 
                                      
 
                                      
 
論  文  名 
 
一酸化炭素中毒後遅発性脳症はマイクログリアの減少と神経栄養因子の分泌低下により起こる 
 
審査結果の要旨 
（はじめに） 
 一酸化炭素（CO）中毒は、急性期には高濃度で意識障害を起こし死に至る。しかし、急性期
の中毒症状から回復しても、数日から数週後に遅発性脳症（DE）と言われる神経障害を呈する
ことがある。臨床的に DE では脱髄が認められ、近年、他の脱髄性疾患や神経変性疾患と同様に、
脳内の免疫担当細胞であるマイクログリア（MG）の活性化が原因の一端である可能性が報告さ
れた。しかし、その詳しいメカニズムは不明であり、低酸素脳症との違いも明らかでない。今回
申請者は、DE の免疫学的、病態生理学的なメカニズムと、低酸素性脳症との違いの解明を試み
た。 
（方法） 
 8週齢の雄性Wistarラットを用い、ルームエアー暴露をコントロール群として、CO群
（1000ppmのCOを40分間吸入させた後に3000ppmのCOを最長で20分間吸入）、低酸素群（O2
濃度8%40分にO2濃度4%20分）の3群に振り分けた。低酸素群における酸素濃度は、CO群の動
脈血液ガス分析から得られたO2Hbの値をもとに決定した。その後3週間に渡り、受動的回避実
験で長期学習行動への影響を調べた。また、海馬組織を用い定量的リアルタイムPCR、Western 
Blotting、免役沈降法、フローサイトメトリー、免疫組織化学等の手法を用い検討した。 
関谷 慶介 
 
（結果） 
 受動的回避実験では、暴露 7 日以降に CO 群においてのみ有意な変化が認められた。オリゴ
デンドロサイト（OL）マーカーの解析では、CO 群、低酸素群共に 3 日以降に MBP、GSTπ等
の mRNA およびタンパク質が減少しており、脱髄が示唆された。特に CO 群では 21 日後まで
継続していた。また、CO 群では OL 前駆細胞（OPCs）のマーカーである NG2 も低下していた
ことから、成熟ミエリンだけでなく前駆細胞も減少していることが示唆された。神経細胞マーカ
ーmRNA 発現は、CO 群で有意に低下していた。MG との関連では、CO 吸入群のみ MG マー
カーmRNA およびタンパク質が低下していた。さらにフローサイトメトリー分析では、MG の
細胞数が CO 群でのみ減少していた。免疫組織化学では、CO 群では MG の突起はちぎれ、数も
減少していた。一方、低酸素群では MG は活性化し、細胞膜上に NG2 の発現を認めた。CO 群
での海馬神経細胞は、コントロール群、低酸素群よりも減少していた。海馬組織内 mRNA の発
現では、IGFs、FGF-2、HGF などの神経栄養因子が CO 群においてのみ減少していた。MG 細
胞を選択的に回収し各神経栄養因子 mRNA の発現を比較したところ、CO 群では有意に減少し
ていたが、低酸素群では逆に IGF-1 および HGF の mRNA の発現が有意に増加していた。CO
群の海馬組織では、切断型カスパーゼ 3 及び BAK, BAD などの内因性アポトーシス促進因子
mRNA の発現上昇が認められた。 
（考察および結論） 
 低酸素群では CD11b+ / NG2+の活性化 MG が観察されたが、一方、CO 群では従来の DE 発
症仮説である MG の活性化は認められなかった。また、CO や低酸素暴露による海馬のアポトー
シス経路が異なることが示唆された。DE では、MG の減少により神経栄養因子の低下が起き、
結果として、神経細胞やミエリンの傷害などの病態と関連する可能性がある。今後、神経栄養因
子の補充が DE の治療となる可能性が示された。 
 
 
 平成 31 年 1 月 7 日に開催された公開審査会では、申請者は英語で提出論文や関連領域につい
て発表した。その後、審査委員より、１）研究に至った動機や臨床的 CO 遅発性脳症との関連に
ついて、２）個体差や DE と低酸素脳症との違いについて、３）超急性期での CO 暴露による変
化について、４）DE でミクログリアが障害される原因について、５）DE での病理学的特徴に
ついて、６）3 週以後の慢性期の影響について、７）治療での神経栄養因子の役割について、な
ど多くの質問が行われた。本論文はすでに一流国際誌に受理されており、審査委員は，申請者が
本論文関連領域に対して学位授与に値する十分な見識と能力を有することを全員一致で確認し，
本論文が学位授与に値すると判定した。 


Carbon monoxide poisoning-induced delayed encephalopathy accompanies decreased microglial cell numbers: Distinctive pathophysiological features from hypoxemia-induced brain damage

黒木, 香奈

KUROKI, Kana

 
 
（第３号様式）     
 
 
学 位 論 文 要 旨 
 
 
 
            氏   名 黒木 香奈 
 
 
 
            論 文 名 掌蹠膿疱症の「無菌性膿疱」におけるマイクロバイオームの解析 
 
 
 
 
 
 
 
学位論文要旨     
  掌蹠膿疱症は手掌、足底に多発する膿疱を主徴とする慢性皮膚疾患で、性別、喫煙、病巣感染、
金属アレルギーなど様々な悪化因子が報告されており、IL-8 や IL-17 などのサイトカインとの
関連についても報告されているものの、いまだその病態は不明である。掌蹠膿疱症は水疱、膿疱、
紅斑、苔癬化などの特徴的な皮疹を認める。掌蹠膿疱症は、その形成過程により、水疱期、水疱
内膿疱期、膿疱期の３つのフェーズに分けられる。掌蹠膿疱症で生ずる膿疱は細菌培養検査陰性
であり、「無菌性膿疱」と言われている。しかし、この場合の「無菌」とは感染によらない膿疱
であるということであり、細菌培養検査で検出できるような生きた細菌、培養で増える細菌が存
在しないということは言えるが、培養出来ない細菌、死菌が膿疱内に含まれている可能性は残る。
しかし、細菌培養検査では全ての細菌を培養することは出来ないため、この点についてはこれま
で詳細に検討されてこなかった。そこで我々は、掌蹠膿疱症の「無菌性膿疱」は実際には無菌で
はなく、培養検査で検出しえない細菌が存在するのではないかという仮説をたて、近年次世代型
シーケンサーの開発に伴い盛んに行われるようになった、16S rRNA シーケンス法を用いて、細
菌叢解析を行うに至った。16S rRNA シーケンス法の開発により、細菌叢を網羅的に解析するこ
とが出来るようになったことで、皮膚領域においては、皮膚表面だけではなく毛包や脂腺の細菌
叢解析が行われ、さらには、これまで無菌と考えられてきた真皮内にも細菌が存在するというこ
とが報告されている。この技術を用いて我々は掌蹠膿疱症の早期病変である水疱内膿疱の内容液
より、サンガーシーケンス法と 16S ribosomal RNA シーケンス法による細菌叢解析を行った。同
時に、手掌・足底に水疱の多発を生じる異汗性湿疹についても水疱内容液の細菌叢解析を行った。
陰性コントロールとして、掌蹠膿疱症の水疱内膿疱 
 
 
  氏名 黒木 香奈 
および異汗性湿疹の水疱の皮膚表面をアルコール綿で消毒した後に PBS を滴下し、これを回収し
たものを解析した。掌蹠膿疱症 43 例と異汗性湿疹 15 例について解析し、サンガーシーケンス法
では掌蹠膿疱症の水疱内膿疱より Staphylococcus 属や Propionibacterium 属、Streptococcus
属、Pyrinomonas 属の DNA が得られたが、異汗性湿疹の水疱からは細菌の DNA はほとんど得られ
なかった。16S ribosomal RNA シーケンス法では、掌蹠膿疱症の水疱内膿疱より多数の細菌 DNA
が得られ、門レベルでは Firmicutes、Proteobacteria、Actinobacteria、Bacteroidetes が、属
レベルでは Staphylococcus、Devosia、Streptococcus、Flavobacterium、Sphingopyxis、Ehydr
obacter、Pseudomonas の DNA が多くみられた。その中でも特に DNA 量の多かった Staphylococcu
s について注目し、掌蹠膿疱症患者の性別、罹病期間、水疱内膿疱採取部位、喫煙歴の有無にわ
けて、DNA 量に差がないかどうか検討した。すると、性別、罹病期間、水疱内膿疱採取部位の違
いと Staphylococcus 属の DNA 量とに有意な関連は認めなかったが、掌蹠膿疱症の喫煙群では、
禁煙群と比較し水疱内膿疱中に含まれる Staphylococcus 属の割合が有意に高いという結果が得
られた。掌蹠膿疱症の水疱内膿疱内に細菌の DNA が認められる理由については、これまでの報告
において、掌蹠膿疱症の膿疱が表皮内汗管部に形成されること、掌蹠膿疱症の水疱内膿疱液では、
ヒト汗を比較し抗菌ペプチドである LL-37 の濃度が高いこと、細菌叢は皮膚表面だけでなく、毛
包や脂腺、汗腺の深部にも存在するということが明らかとなっていることから、表皮内汗管の常
在菌が水疱内膿疱中にみられているのではないかと考察した。また、掌蹠膿疱症の喫煙群では非
喫煙群と比較し Staphylococcus 属の DNA が含まれている割合が高い理由については、これまで
の報告において、喫煙が Staphylococcus 属の形質に影響を与え、マクロファージによる殺菌に
耐性を得たり、溶菌耐性を得たり、抗菌ペプチドに対する耐性を得たりすることが明らかとなっ
ており、喫煙群では Staphylococcus 属のこれらの形質が変化することにより、水疱内膿疱中で
他の細菌と比較し増殖している可能性が考えられた。以上より、掌蹠膿疱症の「無菌性膿疱」に
は細菌の DNA が含まれていること、喫煙が Staphylococcus 属の増加に影響を及ぼす可能性があ
ることが示された。 
本研究は愛媛大学医学部および旭川医科大学の倫理審査委員会の承認を得ている。 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
キーワード（３～５） 
 
 
 
マイクロバイオーム 
掌蹠膿疱症 
無菌性膿疱 
 
 
 


The microbiome of the “sterile pustules in palmoplantar pustulosis"

Ehime University (愛媛大学)博士(農学)thesi

Muh, Ali Arsyad

 
 
（第５号様式）  
                        学位論文審査の結果の要旨 
 
    氏    名 Muh Ali Arsyad 
審 査 委 員 
       
 
         論  文  名 
Effects of olive leaf powder on muscle protein structure and heat-induced surimi gel property 
of fish red sea bream Pagrus major 
(オリーブ葉乾燥粉末が養殖マダイの筋肉タンパク質及びすり身加熱ゲルの性状に及ぼす影響) 
 
         審査結果の要旨 
 
 オリーブ（Olea europea）は世界各国で栽培されているが、日本でも 1908 年から本格的な栽培が始ま
った。オリーブの主要産物は果実であり、その果実の主な使用用途はオリーブオイルとピクルスの生産
である。一方、オリーブの葉の利用は、果実に比べると少なく、剪定で生じる葉のほとんどは廃棄され
ていた。しかし、オリーブ葉にはオリーブ特有のポリフェノールが多量に含まれ抗酸化力も強いことか
ら、近年ではオリーブ茶やオリーブ葉エキスとして食品に利用されている。香川県では、2008 年から、
オリーブ葉のもつ強い抗酸化力に着目して、養殖ハマチの飼料に乾燥したオリーブ葉粉末を添加して飼
育したオリーブハマチを開発した。このオリーブハマチの血合い肉は冷蔵保存しても変色（ミオグロビ
ンのメト化）が起きにくいことが報告されている。また、オリーブ葉乾燥粉末をアジの筋肉に直接添加
することで肉中の脂質やタンパク質の酸化が抑制されることが報告されている。以上のようにオリーブ
葉乾燥粉末はそれ自体が持つ高い抗酸化力により魚肉の酸化を抑制するのに有用であることが示されて
きたが、魚肉の主要成分である肉タンパク質の性状や加工特性にどのような影響を及ぼすかは明らかに
なっていなかった。 
 
本研究において申請者は、ハマチと並び代表的な養殖魚であるマダイを研究題材に用いて、乾燥した
オリーブ葉粉末を養殖マダイの飼料に加えたときの筋肉タンパク質の性状への影響（第３章）とマダイ
のすり身に加えたときの加熱ゲルの物性（第４章）を調べた。その結果、飼料にオリーブ葉乾燥粉末を
加えることでコラーゲンを主成分とする筋内膜の厚みが増すこと、すり身に添加することで加熱したす
り身ゲルの破断特性が向上することを明らかにした。 
 
第３章では、乾燥したオリーブ葉粉末を 8％添加した飼料と無添加の飼料をマダイ稚魚に給餌して 40
日間飼育した。オリーブ葉粉末を添加した飼料で飼育したマダイ（添加区）と無添加飼料で飼育したマ
ダイ（無添加区）の成長速度は最初の 20 日間では有意差がなかったが、40 日間飼育すると添加区の方
が無添加区より 12％体重が軽くなった。マダイ普通肉から、水溶性タンパク質、筋原線維タンパク質、
 
 
酸可溶性コラーゲンを抽出してSDS-PAGEで分子量を調べたところ、いずれのタンパク質とも添加区と無
添加区で分子量に違いはなかった。一方、両区の普通肉のタンパク質含量には大きな違いがあった。添
加区の酸可溶性コラーゲン量は、無添加区のものよりも 20 日間飼育時で 70％、40 日間飼育時で 120％
高かった。また、筋原線維タンパク質量も添加区の方が未添加区よりも 20 日間飼育時で 50％、40 日間
飼育時で 40％高かった。さらに、両区の違いは普通筋の構造にもみられた。顕微鏡観察の結果から、コ
ラーゲンを主成分とする筋内膜は添加区の方が無添加区よりも厚みがあった。これらのことより、オリ
ーブ葉乾燥粉末をマダイに給餌することで筋肉中のコラーゲン含量が高くなり筋内膜の構造の厚みが増
すことを明らかにした。 
 
第４章では、オリーブ葉乾燥粉末を添加したすり身加熱ゲルの物性を調べた。マダイ普通肉からすり
身を調製し、それにオリーブ葉乾燥粉末を 0～4.0％添加し、塩ずり後、円柱状ケーシングに詰めて加熱
ゲルを作製した。すり身加熱ゲルの破断応力はオリーブ葉乾燥粉末が 0～2.0%の範囲で濃度依存的に増
加し、破断歪率は 0～0.5%の範囲で濃度依存的に増加した。0.3％のオリーブ葉乾燥粉末を添加したすり
身ゲル（30℃保温後に 90℃加熱したゲル）は、無添加のものよりも破断応力と破断歪率がそれぞれ 80
％、50％高かった。走査型電子顕微鏡でゲルの表面を観察したところ、0.3％および 2.0％のオリーブ葉
乾燥粉末を添加したすり身ゲルの網目構造は無添加のものよりも緻密かつ高密であることが示された。
すり身ゲルからタンパク質を可溶化してSDS-PAGEしたところ、オリーブ葉乾燥粉末を添加したすり身ゲ
ルではSS結合以外の共有結合が形成されていることがわかった。この共有結合の結合様式は不明である
が、本章の結果は、すり身にオリーブ葉乾燥粉末を 0.3％添加することですり身ゲルの破断応力と破断
歪率を大幅に改善できること、またその改善効果にはSS結合以外の架橋結合が関与していることを明ら
かにした。 
 
 本論文は、オリーブ葉乾燥粉末をマダイに給餌することによって、普通肉中のコラーゲン含量が増え
筋内膜の厚みが増すことを明らかにした。筋内膜が厚くなることは、刺身の歯ごたえが強くなり、冷蔵
保存中の軟化も起きにくくなる可能性が考えられる。これらの結果はマダイの稚魚を使用して得られた
ものであり、出荷サイズの成魚でも同様な結果が得られるかは今後調べる必要があるが、仮に成魚でも
同様の結果が得られるとすれば、歯ごたえが良く軟化しにくい肉質をもった養殖マダイの開発が可能と
なることから、養殖業界においても有用な成果である。また、オリーブ葉乾燥粉末は魚肉タンパク質の
ゲル強度も改善できることから、水産練り製品の新たな物性改良剤として期待される。このように申請
者の研究成果は、水産飼料及び食品素材としてのオリーブ葉乾燥粉末の有用性を示すもので、博士論文
として高く評価できる。 
 
 本学位論文に関する公開審査会は、平成31年２月９日に愛媛大学農学部で開催され、論文の口頭発表
とそれに関する質疑応答が行われた。引き続き開催された学位論文審査委員会において本論文の内容に
ついて慎重に審査を行った結果、審査委員全員一致して博士（農学）の学位を授与するに値するものと
判定した。 


Effects of olive leaf powder on muscle protein structure and heat-induced surimi gel property of fish red sea bream Pagrus major

芦田, 能基

ASHIDA, Yoshiki

Prediction of Binding Mode of Aplysiatoxin with Protein Kinase C and Development of a Synthetically-accessible Aplysiatoxin Analog

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