Ehime University Institutional Repository

Ehime University (愛媛大学)博士（理学）thesi

柳, 宗悦

（第６号様式）
学位論文審査の結果の要旨
氏  名 柳 宗悦
審査委員
主  査   北村 真一       
副  査   井上 幹生       
副  査   畑 啓生        
論 文 名
Studies on early infection dynamics and control methods of the beko disease in Seriola
spp. 
審査結果の要旨  
近年、ブリ養殖の黎明期から知られている「べこ病」が、四国や九州において再興感
染症として深刻な被害をもたらしている。本病に罹患したブリは、筋肉内に白色の寄生
虫のシストが形成され 、シスト崩壊 時に体 表 が凸凹する のが典型的 な症状である 。近
年の問題点は、本病がブリのみならずカンパチやヒラマサの稚魚でも発生が認められ、
発症魚種が拡大していること、重篤感染により、種苗の成長不良や大量死がみられこと、
成魚に至っても寄生痕跡が残るため、商品価値が低下することなどが挙げられる。被
害 の 拡 大 を 招 い て い る 最 大 の 要 因 は 、 本 病 の 原 因 微 胞 子 虫 で あ る Microsporidium 
seriolae の魚体内・環境海水中における動態が不明なため、対策が立てられないこと
である。そこで本論文では、べこ病の早期診断技術の開発、感染初期動態の把握に向
け た疫 学 調 査 、 治 療 薬 の探 索 お よ び 治 療 薬 の実 用化 に 向 け た 屋 外試 験 を 行 っ て い
る。
第一章は緒言であり、本病および原因虫に関する研究史が詳細に述べられている。
第二章では、定量 PCR（qPCR）法およびループ媒介等温増幅法（LAMP）法による、
M. seriolae の検出法を確立した。検出限界を調べたところ、筋肉 25 mg 中に、qPCR 法
では標的遺伝子が 1.4 コピー以上、LAMP 法では 100 コピー以上存在すれば本虫を検
出できることを明らかにした。新たに開発した qPCR 法および LAMP 法は、本虫を定量
的に検出するために、迅速かつ高感度な方法であることが示された。
第三章では、べこ病の初期感染動態を把握するため、海面生簀で飼育したブリの体
側筋における M. seriolae のシストの出現状況と遺伝子量を、剖検と第二章で開発した
qPCR により調べた。また、飼育海域の海水中の M. seriolae 遺伝子量も定量した。その
結果、海水から 102～103 コピー /L 程度の M. seriolae 遺伝子が継続して検出される場
合、高い確率で感染が成立することを明らかにした。また、水温上昇期においては、ブ
リを生簀に入れて、約 2 週間で体側筋中に M. seriolae 遺伝子が検出され、その後、約
1 週間でシスト形成に至ることも見出した。さらに、これまでに、本虫の感染は、春季か
ら夏季に起こると考えられてきたが、冬季（11 月から 1 月）においても感染が確認され、
感染時期は従来考えられていたよりも長いことも明らかにした。
第四章では、M. seriolae に自然感染させた個体を供試魚として、室内試験により、市
販の動物用・水産用医薬品の本虫のシスト形成の予防または軽減効果を調べた。薬剤
は、フェバンテル（FBT）を含む 9 種類の化合物を供試した。ブリに様々な用量の薬剤
を経口投与し、体側筋の M. seriolae 感染を qPCR と剖検で確認した。その結果、シスト
が形成される前の感染初期のブリおよびカンパチ稚魚に対して、FBT 3 mg/kg を 3 日
間あるいは 5 日間連続経口投与することにより、体側筋における本虫の増殖とシスト形
成が抑制されることを見出した。
第五章では、第四章の結果で、べこ病の発症抑制に有効性が示された FBT の経口
投与を野外試験で再検証した。FBT を 0、1、3、5、10 mg/kg、5 日間投与した試験では、
10 mg/kg 群のブリで死亡率、シスト検出率、シスト形成の進行が有意に低下することを
明らかにした。第四章の結果と比較して、連続的に M. seriolae の感染を受ける野外試
験では、再感染の可能性が低い室内試験に比べ、より多くの投与量が必要であること
が明らかにされた。また、FBT 10 mg/kg 5 日間投与＋2 日休薬を 15 回繰り返した反復
投 与 が 、 シ ス ト の 形 成 を 完全 に 抑 制 す る こ と も 明 ら か に し た 。 一 連 の 試 験 結 果 か ら 、
FBT 10 mg/kg の経口投与はブリ類のべこ病防除に極めて有効であることが示された。
 最終章では、本研究を総括している。
以上、本論文では、従来は有効な対策がなかったブリ類のべこ病における診断法お
よび治療法の確立に成功した。ここで得られた結果は、寄生虫学、魚病学、水産学な
どの幅 広い研究 分野 の発展 に貢献す るも のと考え られる。よっ て、本論文 は博士（ 理
学）の学位論文に値することを認める。


English

ブリ類のべこ病の感染初期動態把握と防除法に関する研究

森, 華菜

MORI, Haruna

Japanese

『初宝鬼島台』に反映された一九の社会観と貧福論

高橋, 勇介

TAKAHASHI, Yusuke

A Study on the Working Environment and Workers' Physical and Mental Health Issues

梶原, 克彦

KAJIWARA, Katsuhiko

Punishment of POWs who attempted to escape and POW diplomacy during the First World War

Ehime University (愛媛大学)博士(医学)doctoral thesi

平岡, 大輔

 
（第３号様式） 
 
 
 
 
 
学 位 論 文 要 旨 
 
 
 
            氏   名 平岡 大輔 
 
 
 
            論 文 名 血流下血栓形成能解析システム（T-TAS）を用いた全身性エリテマトー
デス患者におけるヒドロキシクロロキンの抗血小板作用に関する解析 
 
 
 
 
 
 
学位論文要旨 
【背景と目的】全身性エリテマトーデス（SLE）は、全身の臓器に症状が出現する自己免疫疾患
である。治療の進歩にも関わらず、SLE 患者の死亡率は健常者と比べ 2〜3 倍と高く、心血管疾患
（CVD）は死因の上位である。そのため、SLE 診療において CVD の予防は重要である。ヒドロ
キシクロロキン（HCQ）は、禁忌がない限り全ての SLE 患者に使用される標準的薬剤である。
HCQ は SLE 患者の血栓イベントを抑制するという報告があり、血小板凝集能検査における凝集
抑制効果がその裏付けとなっている。しかし、血小板凝集能検査は複数の点から非生理的であり
生体内反応を正確に反映していないとされ、実際に HCQ が抗血小板作用を有しているのか不明
である。また、抗血小板作用が得られる HCQ の用量も不明である。今回、我々が用いた血流下
血栓形成能解析システム（T-TAS）は、コラーゲンがコーティングされたマイクロチップに全血
を一定の流速で流し込み、圧曲線を記録することで、ずり応力による血栓形成を血流下で定量的
に解析できる装置である。T-TAS を用いて、生理的条件に近い環境下で HCQ の抗血小板作用を
評価することが本研究の目的である。 
【材料と方法】2022 年 12 月から 2024 年 1 月までに当院に通院した SLE 患者を対象とした。ACR 
SLE 分類基準（1997 年改訂）あるいは SLICC SLE 分類基準のいずれかを満たしていることを組
入基準とし、抗血小板薬使用中や活動性感染症・悪性腫瘍を合併している患者、妊娠・月経中の
患者は除外した。さらに、血小板数 ≤ 13 万/μL, ヘマトクリット <25%の患者も除外した。マイ 
 
 
氏名  平岡 大輔  
クロチップに全血を流し込み、マイクロチップが閉塞するまでの圧曲線を記録した。測定開始 10
分間の曲線下面積（PL-AUC10）を測定し、血栓形成能を定量評価した。EULAR 推奨の目標用量
である HCQ/実体重 5mg/kg をカットオフ値として、HCQ 使用者を 2 群に分け（HCQ/実体重 <5 
mg/kg 群と≥ 5 mg/kg 群）、HCQ 非使用者と合わせて 3 群で PL-AUC10 を比較した。さらに、健常
者全血に HCQ を添加し、HCQ 濃度と PL-AUC10 との関連も解析した。3 群間のノンパラメトリッ
クな連続変数の比較には Kruskal-Wallis 検定と Dunn 検定を、非線形関係の解析には restricted cubic 
splines（RCS）を用いた。HCQ 使用者の PL-AUC10 の下側三分位数以下を本研究における「明ら
かな抗血小板作用」と定義した。HCQ 非使用者と「明らかな抗血小板作用」を有する HCQ 使用
者との判別能の評価および、「明らかな抗血小板作用」が得られる HCQ 投与量のカットオフ値
の同定に ROC 曲線を用いた。本研究は、愛媛大学医学部附属病院の臨床研究倫理審査委員会に
よって承認されている。 
【結果】HCQ 非使用者と HCQ/実体重 <5 mg/kg 群の PL-AUC10 に差はなかったが、HCQ/実体重 ≥
5 mg/kg 群の PL-AUC10 は<5 mg/kg 群と比較し有意に低下していた（p=0.001）。次に、PL-AUC10
と HCQ/実体重との関係を RCS により解析したところ、PL-AUC10 は HCQ/実体重 約 4 mg/kg から
低下し 5.5 mg/kg あたりでプラトーに達することが判明した。また、HCQ 使用者において、ROC
曲線から得られる「明らかな抗血小板作用」のカットオフ値は HCQ/実体重 4.6 mg/kg で、感度
84.6%、特異度 80.8%、AUC は 0.83 であった。次に、健常人の全血を用いた HCQ 濃度と PL-AUC10
との関連解析では、HCQ 0 μg/mL と比較して 1、2、10 μg/mL における PL-AUC10は有意に低下し
ており（それぞれ p=0.037、p=0.009、p=0.014）、HCQ 濃度の増加に伴う PL-AUC10の低下傾向を
認めた。 
【結論】T-TAS を用いて生理的条件に近い環境下で HCQ の抗血小板作用を初めて見出した。HCQ
の抗血小板作用は、HCQ/実体重 約 4 mg/kg から検出され、約 5.5 mg/kg 以上ではプラトーに達す
ることが判明した。さらに、HCQ/実体重 >4.6 mg/kg で明らかな抗血小板作用が得られることも
見出した。本研究は、HCQ の血栓予防効果を裏付ける一つの根拠となり、SLE 患者の主な死因で
ある CVD の発症抑制を考慮した治療戦略の構築において、HCQ の適切な投与量を検討する際の
重要なエビデンスになると考えられる。 
 
 
 
キーワード（３～５） 
 
 
 
・全身性エリテマトーデス（Systemic lupus erythematosus; SLE） 
・ヒドロキシクロロキン（Hydroxychloroquine; HCQ） 
・心血管疾患（Cardiovascular disease; CVD） 
・血流下血栓形成能解析システム（Total Thrombus-formation Analysis 
System; T-TAS） 
 
 
 
 
 
 


血流下血栓形成能解析システム（T-TAS）を用いた全身性エリテマトーデス患者におけるヒドロキシクロロキンの抗血小板作用に関する解析

髙橋, 基泰

Takahashi, Motoyasu

Introduction to a commonative study of genealogical multilayered communities in early modern English society

城野, 明裕

 
（第３号様式） 
 
 
学 位 論 文 要 旨 
 
 
 
        氏   名 城野明裕 
 
 
        論 文 名 内側半月板不安定化マウスモデルにおける早期骨棘の 
画一的組織学的評価法の確立 
 
 
学位論文要旨 
【諸言】 
変形性膝関節症（OA）は超高齢社会における最も一般的な運動器疾患であり、健康寿
命を延ばすために OA の予防と治療は極めて重要である。現在、OA の治療にはヒアル
ロン酸注射などの保存的療法と人工関節置換術などの外科的療法がある。しかし、保
存的療法は主に対症療法であり、関節軟骨の自己再生や修復にはほとんど効果がない。
そのため、根本的な予防法や治療法の開発が強く望まれている。これらの目標を達成
するためには、OA の病態を解明する必要がある。MRI に基づく研究では、内側半月板
脱出（MME）が荷重分散機能の喪失を引き起こし OA の発症および進行に影響を与え
ることが示唆されている。最近の報告では、脛骨内側骨棘が MME と強く関連してい
ることが報告されており、さらには単純 X 線で写らない軟骨性の未熟な骨棘までもが
MME を引き起こす可能性が報告されている。骨棘は異常な機械的ストレスに対する身
体の防御反応であると理解されているが、骨棘が OA の発症や病態進行に与える詳細
なメカニズムは未だ不明であり、骨棘の形成メカニズムの解明は OA の治療及び予防
法の開発に繋がる可能性がある。しかし、一般的に基礎研究で利用される Destabilization 
of the medial meniscus (DMM: 内側半月板不安定化) マウスモデルは、評価者による観察
方法のばらつきがあり、特に骨棘の観察においてはその傾向が強い。我々は、DMM マ
ウスモデルの解析を行う中で、観察部位によって骨棘の大きさに違いがある事や従来
の骨棘成熟度スコアでは評価困難な切片がある事を認識していた。そこで、再現性の
ある骨棘評価方法の確立を目的とし、DMM マウスモデルにおける初期骨棘形成の特
徴の解析及び評価時の注意点を検証した。 
【対象•方法】 
12 週齢の雄 C57BL/6J に DMM を施行し、術後 0.5, 1, 2, 4 週で評価を行った。切片は冠
状断、10 µm 厚で作製した。脛骨内側関節面の出現を開始点、後十字靭帯の脛骨付着部
の出現を終了点として 100 µm 毎に切片を作製し、全ての切片で脛骨内側関節面辺縁の
骨棘を評価した。評価は Osteophyte Width、Osteophyte Area、Maturity Score、Modified 
Maturity Score を用いた。さらに、DMM による半月板の不安定性を確認するために、
 
氏名 城野明裕  
12 週齢の雄 C57BL/6J から膝関節を採取し、内側脛骨半月靭帯を切離して内側半月板
の変位を観察した。各グループ 5 匹ずつ、合計 20 匹のマウスデータを分析した。本研
究における動物実験は愛媛大学医学部の動物実験の倫理委員会の承認を得て、愛媛大
学動物実験指針に従って行った (承認番号 37A1-1/16)。 
【結果】 
開始点からの距離と 0.5, 1週のOsteophyte Width、2週のMaturity Score、1, 2週のModified 
Maturity Score との間に弱い負の相関を認めた。また、開始点からの距離と 2 週の
Osteophyte Width 、1, 2, 4 週の Osteophyte Area、2, 4 週の Maturity Score、2, 4 週の
Osteophyte Width の間に中等度の負の相関を認めた。さらに、開始点からの距離と 4 週
の Osteophyte Width、4 週の Osteophyte Are、4 週の Maturity Score、4 週の Modified 
Maturity Score の間に強い負の相関を認めた。各個体の Osteophyte Width、Osteophyte 
Area、Maturity Score、Modified Maturity Score の全切片の合計は、DMM 後 1〜2 週にか
けて大きく上昇した。内側脛骨半月靭帯切離による内側半月板の変位は前節・前角で
大きく中節以降では微小であった。 
【考察および結論】 
本研究の最も重要な知見は DMM マウスモデルにおける骨棘形成と成熟は観察部位に
よって異なるという事である。DMM マウスモデルの骨棘形成は膝関節の前方で大き
く、後方になるにつれて小さくなり、その特徴は DMM 後時間が経つにつれてより顕
著となった。DMM マウスモデルは内側半月脛骨靭帯を切離して内側半月板を不安定化
させるが、その不安定性は前節・前角で大きく中節以降では微小であったことから、半
月板の逸脱程度が膝関節前方で大きい事が骨棘形成の盛んな原因と考えられた。この
ように DMM マウスモデルは、観察部位によりばらつきがあり、再現性のある評価を
行うためには一定の部位で観察する事が重要だという事が分かった。今回の結果から、
前十字靭帯脛骨付着部の陥凹は切片作成中に非常に分かりやすい解剖学的ランドマー
クであり、この部位での骨棘は全評価部位のおおよそ平均値を示すことが分かった。
さらに、我々のもう 1 つの重要な発見は、骨棘形成の初期段階である滑膜肥厚を成熟
度スコアに含めることで、初期の骨棘成熟度評価において従来の成熟度スコアでは評
価困難な骨棘を評価出来たことである。今後は骨棘形成を阻害したマウスを作製し、
変形性膝関節症における骨棘の役割について解明する予定である。 
 
 
 
 
 
 
キーワード（３～５） 
 
 
 
変形性膝関節症 
骨棘 
DMM mouse model 
Maturity Score 
 


内側半月板不安定化マウスモデルにおける早期骨棘の画一的組織学的評価法の確立

中曽, 久雄

Is a legal system that does not recognize same-sex marriage contrary to the Constitution?

幸泉, 満夫

KOIZUMI, Mitsuo

A Consideration of the Early Period of Prehistoric Puffer Fishery around the Mutsu Bay, Aomori Prefecture, Brought by the Tsushima Warm Current: Aiming to the Establish of New Research Seeds Based on the Morphological Analysis.

永廣, 結衣

NAGAHIRO, Yui

社会生活における「話すこと・聞くこと」の学び―「質問で相手の思いに迫る」（中学校3年・光村図書）を例に―

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