Chung Hwa University of Medical Technology
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MST3 inhibits water reabsorption to prevent hypertension development
No full text口試委員審定書
致謝 Ⅰ~Ⅱ
中文摘要 Ⅲ~Ⅳ
英文摘要 Ⅴ~Ⅵ
目錄 1~3
第一章 背景
一、Ste20 (sterile 20)激酶家族的分類 4~5
二、MST 家族蛋白的功能 5~6
三、Mammalian Ste-20 like kinases 3 (MST3) 激酶的功能 6
四、與MST3同屬GCK家族中的功能 7~8
五、鈉與水的吸收與高血壓的關係 8~9
六、選擇對高鹽敏感的自發性高血壓鼠作為研究MST3是否與高血壓有關的動物模式 9
第二章 材料與方法
一、細胞培養 (cell culture) 10~14
二、免疫組織化學染色(IHC) 14~18
三、Western blot 18~22
四、聚合酵素鏈鎖反應(PCR) 22~23
五、Tg(Transgenic mice)老鼠 24~25
六、TILL Photonics 25~27
第三章 結果
一、MST3在腎臟的分佈 28
二、用Western blot的方式再度驗證，IHC所看到的結果 29
三、細胞含有大量MST3是否能抵抗高鹽及高尿素的高滲透壓 29~30
四、細胞內鈉離子的變化 30~31
五、以高鹽飼料餵食老鼠，查證活化態MST3對鈉與水的再吸收的影響 31~32
六、測量活化態的MST3的轉殖鼠與MST3野生型老鼠中餵食高鹽飼料時，ENaC之變化 33
七、活化態的MST3的轉殖鼠與MST3野生型老鼠中，餵食正常與高鹽飼料APQ2的差別 33~34
第四章 結論 35
第五章 討論 36~37
文獻參考 38~41
圖 42~53
Fig1. Expression of MST3 in the renal cortex, outer medulla, inner medulla of mice by immunohistochemistry. 42~44
Fig2. Expression of MST3 of the renal cortex, outer medulla, inner medulla of 3 and 12-week-old SHR or WKY by western blot. 45
Fig. 3. MST3 makes cell resistant to NaCl induced perturbing effects of hyperosmolality. 46~47
Fig4. MST3 attenuates the elevation of intracellular concentration of Na induced by hyperosmotic NaCl solutions. 48
Table I. Tg mice compared with WT mice on high salt diet has large increase Na excretion (P=0.0279) resulting in volume expansion. 49
Fig5. Urine Na excretion of MST3 Tg mice is elevated compared with that of WT B6 mice. 50~51
Fig6. The increase of AQP2 expression in MST3 Tg B6 mice fed with high salt diet apparently lower than MST3 WT B6 mice. 52~53
附錄 54~55[[abstract]]調控血壓的因子很多，其中經由鈉離子於腎小管的再吸收而控制細胞外液體積，是調控血壓的重要方式之一。許多激酶扮演調控鈉離子之再吸收及血壓的重要角色。這些激酶至少包括了Proline-alanine -rich Ste20-related protein kinase(SPAK)和With-no-lysine kinases (WNKs)。
經由酵素免疫組織化學染色(IHC)及西方墨點法(Western blotting)顯示，我們發現一種Ste20激酶mammalian Ste20 kinase 3(MST3)最主要表現在老鼠的腎臟髓質之集尿管(collecting duct)中的principle cell，而且在spontaneously hypertensive rats(SHR)的principle cell中，MST3表現量明顯比Wistar-Kyoto strain rats(WKY)對照組老鼠少，而MST3的減少，在principle cell中的apical site更加明顯。當細胞培養在氯化鈉所造成之高滲透壓培養基(900, 1200 mosmol/Kg H2O)時，表現WT MST3的3B5細胞比表現kinase dead MST3(K53R)的3B5較不易死亡。但當細胞培養在尿素(urea)所造成之高滲透壓培養基(900, 1200 mosmol/Kg H2O)時，表現WT MST3的3B5細胞與表現kinase dead MST3(K53R)的3B5之死亡程度與速度並無差異。表示MST3能控制鈉離子之進出而並不控制urea之進出細胞。
另外，大量表現活化態MST3(T178E MST3)的基因轉殖性老鼠中，尿液的排鈉與排水比表現野生型MST3的老鼠多，顯示MST3可能藉由此保護老鼠免於發生高血壓的作用。而在餵食高鹽飼料時AQP2(aquaporin 2)的表現量在MST3基因轉殖性老鼠(Tg)比MST3野生型老鼠還少，表示MST3基因轉殖性老鼠透過AQP2排水功能是比野生型老鼠較佳。因此，我們發現MST3可能以透過抑制水的再吸收的方式而保護老鼠免於發生高血壓。
The regulation of sodium reabsorption by the distal kidney is fundamental to blood pressure control. Multi-gene kinase network is central to the regulation of renal Na(+) excretion and can result in renal sodium retention and hypertension. The kinase network minimally includes the Ste20-related proline-alanine-rich kinase (SPAK) and the with-no-lysine kinases (WNKs). Here we shows that a STE20-related kinase, mammalian Ste20 kinase 3 (MST3) has an important effect on the relationship between pressure and sodium and water excretion.
Immunohistochemistry and western blot reveal that the expression of MST3 protein was located mainly in the medulla. Lower amounts of MST3 can be stained from principal cells of the collecting duct of spontaneously hypertensive rats (SHR) than Wistar-Kyoto strain (WKY) rats. The degree of which was augmented with prominent apical site of collecting duct. Our studies have also shown that 3B5 cells expressing WT-MST3 persists to NaCl induced perturbing effects of hyperosmolality compared to 3B5 cells expressing kinase dead MST3.
Also, the excretion of sodium from urine was higher with its volume increased in MST3 transgenic mice on high salt diet compared to WT-MST3 mice on same diet. The AQP2 expression level was marked increased in MST3 WT mice fed with high seat diet. However, AQP2 was not significantly decreased in MST3 Tg mice compared to that in MST3 WT mice fed with high salt diet. Our results demonstrated that MST3 may control the hypertension development by inhibiting the AQP2 expression
Characteristics of a cobalt-based phosphate ion-selective sensor for evaluation and its biological application
No full text第一章、 緒論
1-1研究背景………………………………………………………………………………...-1-
1-2 研究目的與動機…………………………………………………………………...-4-
1-3 論文架構…………………………………………………………………...................-10-
第二章、 理論分析與探討
2-1前言………………………………………………………………….................................-12-
2-2離子選擇電極.............................................................................................................-12-
2-3磷酸生物感測器......................................................................................................-17-
第三章、 實驗方法與材料
3-1材料.....................................................................................................................................-21-
3-2晶片表面處理…………………………………………………………….................-23-
3-3量測系統………..……………………………………………………….......................-24-
3-4儀器與器材……..………………………………………………….............................-25-
3-5溶液製備…………………………………………………………….............................-26-
3-5.1 不同濃度之磷酸溶液配置………………………………….……-26-
3-5.2 磷酸溶液不同pH值之配置………………………………..……-27-
3-5.3 磷酸溶液不同DO之製作……………………...………..……..…-28-
3-5.4 陰離子干擾配置 …………………………………………………….…-29-
3-5.4.1 chlorine ion……………………………………………………...…-29-
3-5.4.2 sulfate ion………………………………………………………...…-30-
3-5.4.3 acetate ion …………………………………………………….……-31-
3-5.4.4 nitrate …………………………………………………………………-32-
3-6實驗步驟
3-6.1 磷酸鹽離子選擇感測器之製作………………………………-33-
3-6.2 磷酸感測器量測之預前處理………………………………..….-34-
3-6.3 磷酸感測器之最佳檢測範圍……………………………...……-35-
3-6.4 磷酸感測器之存活時間………………………………………...…-35-
3-6.5 磷酸感測器之反應時間……………………………………...……-36-
3-6.6 磷酸感測器浸泡於10-4 M溶液不同時間之量測…..-36-
3-6.7 磷酸感測器pH 4~11及pH 7.5、8、8.5之干擾.…-37-
3-6.8 磷酸感測器離子干擾………………………………………………..-38-
3-6.9 磷酸感測器於DO 2、4、8.6、10 mg/L之干擾………….-39-
3-6.10 磷酸鹽離子選擇感測器之隨機溶液試驗……………..-39-
3-6.11 磷酸離子選擇感測器在磷酸溶液中回收率測定...-40-
3-6.12 磷酸鹽離子選擇感測器於人體尿液之檢測………...-41-
第四章、 結果與討論
4-1磷酸感測器之校正………………………………………………………………-42-
4-2磷酸感測器之檢測範圍………………………………………………………-42-
4-3磷酸感測器之反應時間………………………………………………………-43-
4-4磷酸感測器之存活時間………………………………………………………-43-
4-5磷酸感測器浸泡於10-4 M溶液不同時間之量測……………..-44-
4-6磷酸感測器在pH 4~11及pH 7.5、8、8.5之干擾……………….-44-
4-7磷酸感測器之離子干擾………………………………………………………-45-
4-8磷酸感測器之DO干擾………………………………………………………..-46-
4-9磷酸鹽離子選擇感測器之隨機溶液試驗…………………………-46-
4-10磷酸離子選擇感測器在磷酸溶液中回收率測定…..………-47-
4.11磷酸鹽離子選擇感測器於人體尿液之檢測…………………..-48-
第五章、結論………………………………………………………………………………………………..-49-
第六章、參考文獻………………………………………………………………………………………..-51-
附錄………………………………………………………………………………………………………………-58-[[abstract]]磷酸鹽的檢測在環境與農業是非常重要的一環，例如以農作物的肥料來控制磷的供應量。此外人體尿液或血清的磷酸鹽濃度可作為甲狀旁腺功能亢進症，維生素 D缺乏和範可尼綜合徵臨床診斷的重要參考因子。鈷可作為磷酸鹽離子選擇性感測器之材料，首先鈷的表面浸泡於去離子水，並在金屬表面形成氧化鈷。鈷為基礎的磷酸鹽離子選擇性感測器表面跟三種形式的磷離子(如H2PO4- , HPO42-, 和 PO43-)產生反應，而使磷酸鹽離子具感測度。本研究專注於開發和評估技術。校準曲線，在pH 8.0每個濃度斜率為33.1 mV和R2值0.98。其他磷酸鹽離子選擇性感測器的特點包括檢測範圍，反應時間，耐侵蝕，壽命，以及pH值，離子和溶解氧（DO）之干擾。磷酸鹽離子選擇性感測器是一個非常有用的工具，可作為日常生活、醫學應用及環境污染磷酸鹽的監測。
關鍵字: 磷酸感測器, 鈷電極, 離子選擇微電極
Phosphate measurements, which are of considerable importance in many environmental applications, control the amount of phosphorus supplied to crops as fertilizer. Clinical diagnosis of hyperparathyroidism, vitamin D deficiency, and Fanconi syndrome, based on specific phosphate concentrations (such as urine or serum), is also highly critical. Cobalt as phosphate ion-selective sensor materials should first present the surface of the cobalt in deionized water, and that the metal surface of cobalt oxide. The cobalt-based phosphate ion-selective sensor respond to all three forms of phosphate ions, namely, H2PO4- , HPO42-, and PO43-. This research focused on development and evaluation techniques. The calibration curve at pH 8.0 had a slope of 33.1 mV and a R2 value of 0.98. Other characteristics of this phosphate ion-selective sensor include detection limit, response time, corrosion, life time, interference with pH, ions and dissolved oxygen (DO). The phosphate ion-selective sensor is a highly useful tool for in situ measurement of phosphate and in everyday applications involving environmental pollution and medicine.
Keywords: Phosphate sensor, Cobalt electrode, Ion-selective micr
The inhibitory effects of protocatechuic acid on UVB-induced melanogenesis and collagen degeneration
No full text口試委員會審定書
碩博士論文電子檔案上網授權書
謝 誌 .............................................I
中文摘要 ...........................................IV
英文摘要 ...........................................VI
目 錄 .............................................XI
圖 目 錄 ..........................................XII
第 一 章 緒論 .......................................1
第 二 章 文獻整理 ...................................3
2.1 人體皮膚結構與功能 ..............................3
2.1.1 表皮層 .......................................3
2.1.2 真皮層 .......................................4
2.1.3 皮下組織 ....................................5
2.2 紫外線對皮膚的影響 ..............................5
2.3 短期紫外線對皮膚的影響 ...........................7
2.3.1 紅斑反應(erythema) ...........................7
2.3.2 色素沉澱(pigmentation) .......................7
2.3.3 皮膚組織的改變 ................................7
2.3.4 免疫抑制 .....................................8
2.4 長期紫外線對皮膚的影響 ...........................9
2.4.1 皮膚光老化(skin photoaging) ..................9
2.4.1.1 基質金屬蛋白酶之介紹 ........................11
2.4.1.2 基質金屬蛋白酶對皮膚光老化之調控 ..............13
2.4.2 皮膚光癌化(photocarcinogenesis) ..............13
2.5 紫外線對皮膚細胞外間質之影響 .....................14
2.5.1 細胞外間質(Extracellular matrix) .............14
2.6 紫外線對膠原纖維之影響 ...........................15
2.7 紫外線對彈性纖維之影響 ...........................16
2.8 紫外線對於葡萄糖胺聚合醣之影響 ....................17
2.9 紫外線照射引發黑色素生合成 .......................17
2.10 黑色素的生成及調節 .............................19
2.10.1 黑色素生成(Melanogenesis)之機轉 ..............20
2.10.2 黑色素體的形成及轉移 ..........................22
2.10.3 黑色素的調控機制 .............................22
2.11 洛神葵之背景介紹 ...............................28
2.11.1 洛神花之產地與型態 ...........................28
2.11.2 洛神花之性狀與已知成分 ........................29
2.12 原兒茶酸(protocatechuic acid，PCA) ............30
第 三 章 實驗架構 ...................................32
第 四 章 實驗材料與方法 ..............................34
4.1 實驗儀器與實驗藥品 ..............................34
4.1.1 實驗儀器設備 .................................34
4.1.2 實驗藥品試劑 .................................36
4.2 實驗細胞株來源及培養基配 .........................39
4.2.1 細胞株培養基配製 ..............................39
4.2.2 細胞培養 .....................................40
4.2.3 冷凍細胞 .....................................40
4.2.4 解凍細胞 .....................................41
4.3 實驗方法 .......................................41
4.3.1 細胞數之計數 ..................................41
4.3.2 細胞毒性試驗 ..................................42
4.3.3 紫外線B對於HaCaT、A375及WS1細胞株之傷害 .........43
4.3.4 不同濃度之原兒茶酸對於紫外線B曝照HaCaT、A375及
WS1細胞株之傷害(曝照後給藥) ....................43
4.3.5 流式細胞儀 ....................................44
4.3.6 Tyrosine hydroxylase 活性試驗 .................45
4.3.7 細胞內黑色素含量試驗 ...........................46
4.3.8 HaCaT、A375及WS1細胞蛋白質萃取 .................48
4.3.9 西方墨點法(Western Blotting) ..................48
4.3.9.1 蛋白質標準品檢量線製作 ........................48
4.3.9.2 樣本處理 ...................................48
4.3.9.3 鑄膠(SDS-PAGE) .............................49
4.3.9.4 電泳(electrophoresis) ......................49
4.3.9.5 轉漬(Transfer) .............................50
4.3.9.6 免疫墨點法(Immunoblot) ......................50
4.3.10 Gelatin/Casein zymography試驗 ...............51
4.3.11 酪胺酸酶活性膠體分析(Tyrosinase zymography) ...51
4.3.12 HaCaT、A375及WS1細胞RNA萃取 ..................52
4.3.13 轉cDNA ......................................53
4.3.14 即時定量聚合酶鏈反應 ..........................53
4.3.15 膠體電泳位移分析法(EMSA) ......................54
4.3.15.1 DNA probe製備 .............................54
4.3.15.2 鑄膠(Negative-TBE PAGE) ...................54
4.3.15.3 樣品處理 ...................................54
4.3.15.4 電泳(electrophoresis) .....................55
4.3.15.5 轉漬(Transfer) ............................54
4.3.15.6 免疫墨點法(Immunoblot) .....................56
第 五 章 實驗結果 ....................................57
第 六 章 討論與結論 ..................................71
參 考 文 獻 .........................................78
圖 表 ..............................................94
附 圖 ..............................................118[[abstract]]紫外線照射會導致許多皮膚疾病，且長期暴露於紫外線中亦會造成皮膚細胞之損傷。近年來，使用植物萃取物當作抗紫外線之成分儼然已蔚為風潮。原兒茶酸(PCA)富含於蔬菜水果等食物中，具抗氧化之功效，並且於體外試驗及活體試驗中證實其具有預防癌症生成及抑制腫瘤細胞生長之功效。然而，針對PCA對美容保健之化學預防活性的研究甚少。於本研究中，欲探討PCA抗紫外線引起皮膚皺紋及黑色素生成之研究。其結果顯示，於不產生細胞毒性濃度下的PCA具有抑制人類角質細胞株(HaCaT)受紫外線促進黑色素生成之功效。於即時定量PCR及西方墨點法實驗中證實，PCA抑制黑色素生成機制起始因子p53及POMC的表現量而抑制黑色素生成。本實驗也證明PCA得以抑制UV照射A375細胞後誘發之MC1-R表現量，進而抑制誘發黑色素生成因子與受器結合，細胞質中的MITF亦會受到PCA影響，使其降低轉錄進入細胞核內，最終導致生成黑色素之關鍵蛋白TRP-1及TRP-2的含量受到抑制，達到減緩黑色素生成之功效。PCA亦可抑制WS1細胞受到UVB誘發之基質金屬蛋白酶(MMP)含量，並增加前-膠原蛋白(Pro-collage)的含量，進而達到抗皺之功效。結果顯示，PCA得以阻斷UVB誘導之p53/POMC訊息路徑及MMP生成，與黑色素生成及皺紋的形成具相關性。總而言之， PCA或許得以開發成新的具有化學預防活性之美容保健產品。
Ultraviolet radiation (UV) is the cause of many skin diseases, and UV exposing on long-time could cause the injury of skin cells. The use of phytonutrient as anti-UV agents has gained considerable importance in recent years. Protocatechuic acid (PCA) is discussed to represent antioxidative food components in a human diet rich in fruits and vegetables, and has been shown to prevent carcinogenesis or antitumor growth in vivo and in vitro. However, the studies involved in chemopreventive activity of beauty and health care of PCA are poorly few. In this study investigations were conducted to examine the mechanisms of the anti-UVB activity of PCA. Thus, this research will be investigated that the chemopreventive activities, including whitening and anti-wrinkle, of PCA and its molecular mechanisms. The results of melanin content assay revealed that PCA inhibited UVB-promoted melanogenesis of human HaCaT keratinocytes under non-cytotoxic concentrations. The PCA-inhibited Initiation Factor melanin formation mechanism and induction appeared to be a consequence of p53 and pro-opiomelanocortin (POMC) inactivation measured by real time-PCR and Western blotting. This experiment also proved to inhibit the UV irradiation PCA A375 cells show induced amount of MC1-R and inhibit melanin production induced by receptor binding factor,and then cytoplasm of the MITF PCA will also be affected, to reduce transcription to enter the nucleus, and ultimately lead to the generation of melanin of the key protein TRP-1 and TRP-2 levels was inhibited, the effect to slow down melanin production. Furthermore, the UVB-induced an increased expression of matrix metalloproteinase (MMP) and pro-collage were reversed by the treatment of PCA in WS1 cells. Our data imply that PCA treatment led to the blockage of UVB-induced p53/POMC signaling and MMP production was related to melanogenesis and wrinkle formation, respectively. All these results suggested that PCA may be useful to develop a new chemopreventive agent in beauty and health care
Characteristics of carbonyl compounds emitted from repeated frying processes and variations of frying oil qualities
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誌謝
摘要
Abstract
總目錄
表目錄
圖目錄
第1章 研究背景
1-1. 前言
1-2. 研究目的
1-3. 文獻探討
1-3-1. 油脂之種類與使用量
1-3-2. 各國之油炸用油品質標準
1-3-3. 烹調產生醛、酮類化合物之性質
1-3-4. 排放量推估
第2章 研究材料與方法
2-1. 研究架構
2-2. 研究方法與步驟
2-2-1. 油炸條件
2-2-2. 油品中TPC及AV之採樣與分析方法
2-2-3. 油炸之煙道廢氣中Carbonyls之採樣
2-2-4. Carbonyls之樣本分析方法
2-2-5. 煙道廢氣之carbonyls EF推估方法
2-2-6煙道廢氣之carbonyls 排放量推估公式
第3章 研究品質保證與控制
3-1. 檢量線品質控制
3-1-1. 檢量線製作
3-1-2. 實驗品質控制
第4章 結果與討論
4-1. 重複油炸過程之油品品質變化情形
4-2. 重複油炸七天之煙道廢氣中Carbonyls濃度變化情形
4-3. 重複油炸七天之煙道廢氣中Carbonyls ER及EF
4-4. 重複油炸之煙道廢氣中Carbonyls濃度與油品品質之相關性
4-5. 重複油炸煙道廢氣中Carbonyls之排放特徵（ER及EF）與油品品質相關性
4-6. 重複油炸煙道廢氣中Carbonyls排放量之推估
4-6-1. 棕櫚油之TPC作為標準之情形
4-6-2. 棕櫚油之AV作為標準之情形
4-6-3. 不同油品品質質規範之Carbonyls排放量比較
第5章 結論
第6章 建議
參考文獻
表目錄
表 1. 2008~2012年世界供應植物油之民生消費量 (USDA, 2012)
表 2. 油脂加熱後之劣敗產物
表 3. 各國油脂品質標準與法規
表 4. 二十種Carbonyls之名稱、化學式、分子量、結構式
表 5. 二十種 Carbonyls之碳數、蒸氣壓、沸點
表 6. IARC對Carbonyls之致癌分類
表 7. ACGIH對Carbonyls之致癌分類
表 8. 文獻回顧
表 9. 二十種Carbonyls空白試驗樣本結果
表 10. 二十種Carbonyls方法偵測極限 (MDL)
表 11. 二十種 Carbonyls 回收率
表 12. 重複油炸七天之TPC與AVs變化情形
表 14. 重複油炸後其醛酮化合物之排放速率 (ER)
表 15 重複油炸後其醛酮化合物之排放係數 (EF)
表 16 棕櫚油重複油炸之Carbonyls年排放量（kg/年)
圖目錄
圖 1. 醛、酮類化合物形成機制
圖 2. 研究架構圖
圖 3. 總極性物質直讀儀
圖 4. 酸價滴定法
圖 5. 實驗系統
圖 6. 煙道採樣系統
圖 7. TPC、AV與油炸時間之線性迴歸分析
圖 8. TPC與AV之線性迴歸分析
圖 9. 總醛酮化合物濃度與油炸時間之線性迴歸分析
圖 10. 低碳數、高碳數醛酮化合物與油炸時間之線性迴歸分析
圖 11. 總醛酮化合物ER與油炸時間之線性迴歸分析
圖 12. 低碳數醛酮化合物ER與油炸時間之線性迴歸分析
圖 13. 高碳數醛酮化合物ER與油炸時間之線性迴歸分析
圖 14. 總碳數醛酮化合物EF與油炸時間之線性迴歸分析
圖 15. 低碳數醛酮化合物EF與油炸時間之線性迴歸分析
圖 16. 高碳數醛酮化合物EF與油炸時間之線性迴歸分析
圖 17. 總醛酮化合物與TPC、AV線性迴歸分析
圖 18. 低碳數醛酮化合物與TPC、AV之線性迴歸分析
圖 19. 高碳數醛酮化合物與TPC、AV之線性迴歸分析
圖 20. 總醛酮化合物ER與TPC、AV線性迴歸分析
圖 21 低碳數醛酮化合物ER與TPC、AV線性迴歸分析
圖 22. 高碳數醛酮化合物ER與TPC、AV線性迴歸分析
圖 23. 總醛酮化合物 EF與TPC、AV之線性迴歸分析
圖 24. 低碳數醛酮化合物 EF與TPC、AV之線性迴歸分析
圖 25. 高碳數醛酮化合物 EF與TPC、AV之線性迴歸分析
圖 26. Carbonyls檢量線[[abstract]]本研究探討食用油重複油炸後煙道廢氣中醛酮類化合物濃度（carbonyl compounds, carbonyls）、油品酸價值 （acid value, AV）及油品總極性物質含量 (total polar compounds, TPC)之變化情形。本研究選取廣被業者使用之食用油（棕櫚油）及食物（馬鈴薯薯條）進行重複油炸，油溫設定為180℃，每日油炸四小時且連續油炸七天。油炸設備設有包圍型氣罩，上方置有排油煙機及廢氣排放管道，油炸時以冷凝系統配合吸收液進行carbonyls採樣，以滴定法量測AV，並以總極性物質分析儀量測TPC。研究結果發現：（1）棕櫚油重複油炸第七天，其AV已超過國內衛生署食品衛生處所制訂之標準值。（2）棕櫚油重複油炸第四天，其TPC已超過國內衛生署食品衛生處所制訂之標準值。（3）TPC及AV會隨著油炸時間增加而增加，且油炸時間足以預測油品內TPC及AV，進而預測油品應更換時間。（4）棕櫚油重複油炸七天之煙道廢氣中Total carbonyls及高碳數carbonyls濃度、排放率、排放係數皆隨油炸時間增加而下降，然而低碳數carbonyls卻相反。（5）油品品質（TPC與AV）與carbonyls之排放率及排放係數均有良好之線性相關性，表示可以油品品質推估carbonyls之排放率及排放係數，進而計算carbonyls之排放量。（6）以TPC作為油品品質規範所估算之Total carbonyls平均排放量高於以AV作為油品品質規範所估算之平均排放量。綜合本研究之結果，建議TPC較適合作為油品品質監測之指標。低碳數carbonyls之排放量會隨油炸時間增加而增加，且低碳數carbonyls大多被國際癌症研究署及美國政府工業衛生師協會歸類為確定致癌或疑似致癌之污染物，故應重視重複油炸過程低碳數carbonyls之排放情形。
This study was to assess the variations of carbonyl compounds (carbonyls), acid value (AV), and total polar compounds (TPC) used repeatedly in frying processes. We selected the most commonly used oil (palm oil) and food (potatoes), and fried at 180°C. The frying processes were conducted for continuously 4 hours a day, 7 days a week. The experimental fryer was equipped with an enclosed hood, intake and exhaust ducts. We used condenser system and absorption solution to sample carbonyls, titration to test AV, and polar compound tester to measure TPC. The results showed that: (1) the levels of AV were over the current standard of Food and Drug Administration, Department of Health, Taiwan, after the 7-day repeated frying processes of palm oil; (2) TPC were over the current regulatory standard after the 4-day repeated frying processes of palm oil; (3) TPC and AV increased with the increasing frying time which can be predicted by the duration to replace used frying oil; (4) total carbonyls, high-carbon carbonyl concentrations, emission rate, emission factor decreased with the increasing frying time after the 7-day repeated frying processes of palm oil, in contrast to low-carbon carbonyls; (5) a good linear correlation between oil quality (TPC and AV) and emission rates and factor of carbonyls which indicated the oil quality can be used to estimate emission rates and factor of carbonyls; (6) the estimated average emissions of total carbonyls by estimating TPC higher than AV as oil quality standards. In conclusion, TPC is more suitable as an indicator to monitor oil quality. Emissions of low-carbon carbonyls, classified as carcinogenic pollutant by IARC and ACGIH, increased with frying time. Further investigations should focus on the emission scenarios of low-carbon carbonyls in repeated frying processes
The Development Of Detecting Technique To Identify The Races Of Xanthomonas campestris pv. campestris
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英文摘要…………………………………………………………………….…1
中文摘要………………………………………………………………….……2
壹、 前人研究…………………………………………………………..……3
一、 十字花科黑腐菌介紹………………………………………...…3
二、 病原菌診斷…………………………………………………...…4
三、 病原致病系統………………………………………………...…5
四、 生物資訊學…………………………………………………...…6
貳、 材料與方法…………………………………………………………..…7
一、材料……………………………………………………………………..…7
二、染色體DNA的抽取………………………………………………………7
三、聚合酶酵素連鎖反應…………………………………………………..…8
四、PCR產物之純化……………………………………………………….…8
五、PCR產物與質體之接合作用………………………………………….…8
六、核酸轉型作用………………………………………………………….…9
七、DNA定序與引子組設計…………………………………………………9
八、生物資訊分析………………………………………………………….…9
參、結果………………………………………………………………………10
一、第三型分泌系統相同病原菌不同基因之多序列比對…………………10
二、第四型分泌系統相同病原菌不同基因之多序列比對……………….…10
三、第四型纖毛基因相同病原菌不同基因之多序列比對……………….…10
四、virB1基因序列之分析與應用…………………………………………..11
五、virB4基因序列之分析與應用…………………………………………..11
六、virB10基因序列之分析與應用…………………………………………12
七、virB11基因序列之分析與應用…………………………………………12
八、virD4基因序列之分析與應用………………………………………….13
九、第四型纖毛pilA基因序列之分析與應用………………………………13
十、XCC病原菌基因race typing分析表……………………………………14
肆、討論………………………………………………………………………15
伍、參考文獻…………………………………………………………………18
陸、圖表………………………………………………………………………25
表一 本研究所使用XCC菌株名稱、宿主、生理小種及來源……………25
表二 本研究所使用引子之名稱及其核酸序列………………………….26
表三 XCC str.B100和ATCC 33913兩條序列比對結果………………..27
表四 XCC初步type表…………………………………………………….29
圖一 virB1引子組進行PCR增幅XCC染色體DNA之結果……………30
圖二 多序列比對軟體ClustalW分析virB1結果…………………………31
圖三 virB4引子組進行PCR增幅XCC染色體DNA之結果……………32
圖四 多序列比對軟體ClustalW分析virB4結果…………………………33
圖五 virB10引子組進行PCR增幅XCC染色體DNA之結果………….34
圖六 多序列比對軟體ClustalW分析virB10結果………………….…….35
圖七 virB11引子組進行PCR增幅XCC染色體DNA之結果………….36
圖八 多序列比對軟體ClustalW分析virB11結果…………………….…37
圖九 virD4引子組進行PCR增幅XCC染色體DNA之結果………..…38
圖十 多序列比對軟體ClustalW分析virD4結果…………………………39
圖十一 pilA引子組進行PCR增幅XCC染色體DNA之結果……….…40
圖十二 多序列比對軟體ClustalW分析pilA結果……………………..…41
圖十三 pilA引子組進行PCR分析pattern之結果………………….……42
圖十四 pilD引子組進行PCR分析pattern之結果………………….……43
圖十五 pilMN引子組進行PCR分析pattern之結果………………….…44
圖十六 avrA2引子組進行PCR分析pattern之結果[[abstract]]Xanthomonas屬之植物病原菌為世界性的植物病害，係台灣地區常見之植物病原菌，造成許多經濟性蔬果之重要病害。其中之十字花科黑腐病菌Xanthomonas campestris pv. Campestris (XCC)主要感染十字花科作物如蕓苔屬(Brassica)、阿拉伯芥(Arabidopsis)等，並造成十字花科黑腐病，其具致病性差異的生理小種早已存在於XCC。在XCC生理小種的研究上，Fargier 及Manceau已成功利用六個鑑別品種，將黑腐病菌之菌株分為9個生理小種（race 1～9）。植物病原菌在感染宿主前利用分泌系統將蛋白質通過內膜及外膜分泌至特定細胞，需要養分的取得、毒性分子的表現等；本研究擬利用生物資訊學比對分析XCC中致病系統中相關之基因，希望能從致病系統篩選致病基因出可鑑別生理小種間之些微差異。本次研究中從NCBI Genomes資料庫中匯出Xanthomonas campestris pv. campestris str. B100及ATCC33913等菌株分泌系統之毒力基因與無毒基因序列，做為XCC生理小種的分析依據。本研究已篩選出8個基因可用於生理小種的鑑別，分別為pilA 、pilD 、pilMN、avrA2及4組vir基因。本研究進一步利用上述基因進行PCR選殖，將本研究的Race5’、Race6、Race6’和Race7做出區分。本研究發現pilA基因可輔助鑑定Race 6與Race 6’的差異，此外XCC不同之生理小種可依據本研究利用上述基因來做初步之區別。
Xanthomonas genus is considered to be one of the most important diseases of crucifers worldwide. Economically, the most important of X. campestris pv. campestris (XCC) causes a serious disease, black rot on crucifers that results in reduced yield and crop quality. The pathogenicity differences in the races already exist in the XCC. In the XCC pathogenic variants research, Fargier and Manceau success using six differential cultivars to differentiate the XCCs into nine physiological races. In this study, we will utilize bioinformatics from NCBI to screen the genes that could be used to identify the differences between the races. This study from the NCBI Genomes database to export the plant pathogen Xanthomonas campestris pv. campestris, the str. B100, and ATCC33913 strains secrete virulence genes and avirulence gene sequence analysis as the XCC Physiological Races basis. This study have been screened out of the eight genes can be used for the identification of physiological races. The genes pilA, pilD, pilMN, avrA2 and four vir gene would be used to differentiate the Race5’, Race6, Race6’ and Race7 in the preliminary judgment of races
Production of polyclonal antiserum against Cucurbit chlorotic yellows virus coat protein and application for diagnosis.
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口試委員審定書
授權書....................................................................................................Ⅱ
中文摘要..................................................................................................Ⅲ
英文摘要..................................................................................................Ⅴ
致謝......................................................................................................Ⅶ
壹、 前人研究.......................................................................................... 1
貳、 材料與方法........................................................................................ 8
一、 病毒植物材 ........................................................................................8
二、 病葉組織中病毒之分離................................................................................8
三、 病毒核酸片段之反轉錄與增幅(RT-PCR) ..................................................................8
四、 CP基因之選殖...................................................................................... 9
五、 CP基因之定序......................................................................................10
六、 CP基因核酸序列之分析...............................................................................10
七、 質體製備. ........................................................................................10
八、 基因表現載體之構築. ...............................................................................11
九、 蛋白質表現及純化. .................................................................................11
十、 蛋白質表現之分析. .................................................................................12
十一、 抗體之製備. ......................................................................................13
十二、 抗體免疫球蛋白. ...................................................................................13
十三、 抗體磁珠之製備. ...................................................................................14
十四、 免液磁珠PCR...................................................................................... 14
十五、 病毒純化. ........................................................................................15
十六、 電子顯微鏡觀察. ...................................................................................15
十七、 免疫組織化學染色. .................................................................................16
叁、結果與討論 . ..........................................................................................18
一、 田間洋香瓜受CCYV病毒感染後在病葉上所產生之典型病徵.................................................... 18
二、 CCYV病毒純化前後利用電子顯微鏡所觀察之病毒型態.........................................................18
三、 利用RT-PCR分離不同樣品之鞘蛋白基因所得到之電泳分析圖. ..................................................19
四、 不同選殖株之鞘蛋白基因序列之比對分析. .................................................................19
五、 pQE-CCYV-CP基因之選殖示意圖..........................................................................20
六、 選殖株在中鞘蛋白基因在不同pQE表現載體中之蛋白質表現..................................................... 20
七、 鞘蛋白基因以IPTG誘導後所得到之蛋白質表現結果........................................................... 20
八、 選殖株pQE31-CCYV-CP之蛋白質表現及其Western blot分析.................................................. 21
九、 利用CP抗體對pQE31-CCYV-CP之全蛋白所進行之Western blot分析............................................. 21
十、 洋香瓜被CCYV感染後莖部細胞組織之免疫染色分析.............................................................21
十一、 利用引子組CP-F及CP-R對不同之樣品所進行之檢測分析. .......................................................22
肆、 參考文獻. ........................................................................................... 23
伍、 圖表..................................................................................................40
圖一、 田間洋香瓜受CCYV病毒感染後在病葉上所產生之典型病徵........................................................ 41
圖二、 CCYV病毒純化前後利用電子顯微鏡所觀察之病毒型態............................................................ 42
圖三、 利用RT-PCR分離不同樣品之鞘蛋白基因所得到之電泳分析圖....................................................... 43
圖四、 不同選殖株之鞘蛋白基因序列與NCBI資料庫中之鞘蛋白基因序列之多序列比對分析. .................................... 44
圖五、 不同選殖株之轉譯蛋白序列與NCBI資料庫中之鞘蛋白序列之多序列比對分析. ......................................... 45
圖六、 pQE-CCYV-CP基因之選殖示意圖............................................................................ 46
圖七、 選殖株在中鞘蛋白基因在不同pQE表現載體中之蛋白質表現結果分析. ................................................47
圖八、 選殖株pQE31-CCYV-CP中鞘蛋白基因以IPTG在不同時間之誘導後所得到之蛋白質表現結果.. ..............................48
圖九、 選殖株pQE31-CCYV-CP之蛋白質表現及其Western blot分析......................................................49
圖十、 利用CP抗體對pQE31-CCYV-CP/M15之全蛋白所進行之Western blot分析............................................50
圖十一、洋香瓜被CCYV感染後莖部細胞組織切片以鞘蛋白抗體所進行之免疫染色分析...........................................51
圖十二、利用引子組CP-F及CP-R對不同處理之樣品所進行之RT-PCR檢測分析.................................................52
表一、 本實驗所使用引子之代號及其核酸序列.. .................................................................... 53[[abstract]]台灣地處於亞熱帶，氣候相當適合瓜類栽種，使瓜類作物在台灣是屬於重要的經濟作物之一。我國每年瓜類作物的栽種面積大約有23,000公頃以上，主要栽培區域以台南市、嘉義縣、雲林縣為主。通常病害發生是作物生長的限制因子之一，其中包括病毒、細菌及真菌等所產生之病害。在2009年在台南、雲林地區發現瓜類作物出現大量黃化現象，經研究發現與2004年發生於日本的瓜類退綠黃化病毒(Cucurbit chlorotic yellows virus, CCYV)相同，但因當時此病毒並沒有造成嚴重的損失，所以沒有受到重視。目前此病毒病害已造成瓜類作物受到嚴重經濟影響，因此希望可以利用在洋香瓜作物中CCYV病毒鞘蛋白基因，經基因重組後在表現系統中生產出蛋白質，並進一步製造抗血清，期待未來可用於瓜類退綠黃化病毒病之檢測。本研究利用CCYV病毒鞘蛋白基因製造抗血清，根據選殖株pGEMT-CP/DH5α基因定序之結果得知鞘蛋白基因之核酸長度為735bp，此基因轉譯成蛋白質時可產生245個胺基酸且其分子量為28kDa。為大量生產鞘蛋白故將鞘蛋白基因重組至選殖株pQE31-CP/M15中，此蛋白質表現分析證實此選殖株可穩定表現在pQE系統中，經大量純化後也成功製造出鞘蛋白之抗血清，並可實際應用於瓜類退綠黃化病毒病之免疫磁珠檢測及免疫組織染色的分析上。
Taiwan is located in the subtropics, the climate quite favor to the melon growing, yields this crop becoming to the one of important economic crops in Taiwan. The annual melon crop planted area about 23,000 hectares, the main cultivation area consist of Tainan City, Chiayi County, Yunlin County. Usually the occurrence of disease is one of the limiting factors of crop growth, which are including viruses, bacteria and fungi diseases. In 2009 , one virus disease was discovered from Tainan City and the Yunlin County, the crop appear the massive etiolation on the tissues of the crop. After the investigation, this virus was identical to Cucurbit chlorotic yellows virus isolated from 2004, in Japan (CCYV). At that time, researchers didn’t pay attention to this virus disease.
Now, this virus disease has been caused on the melon crop was affected by a serious economic impact. In this study, we want to cloning and expression the coat protein gene from CCYV virus to produce antiserum to identify CCYV on the fields. The results of CP gene sequencing of strains pGEMT-CP/DH5α that the length of the nucleic acid of the CP gene 735bp gene, gene translated into protein of 245 amino acids and a molecular weight of 28 kDa. For the mass production of coat protein from the CP gene recombinant clone pQE31-CP/M15, the protein expression analysis confirmed that the CP gene can be stable expression in the pQE system. In this study, the antiserum of CP can be utilized to identify the chlorotic yellowing virus disease by immunoassay and Immunohistochemistry stain
To Evaluate Of Timeliness Of TBcID From Sputum Smear Results
No full text論文口試委員審定書 i
授權書 ii
中文摘要 iii-v
英文摘要 vi-vii
誌謝 viii-ix
論文目錄 x
圖表目錄 xiv
第一章 續論 1
第一節、研究背景 2
第二節、肺結核的病原與致病機轉 3
第三節、臺灣結核病流行病學 6
第四節、肺結核的傳染方式 7
第五節、結核病個案定義 8
第六節、分枝桿菌的生長特性 9
第七節、分枝桿菌的細菌學診斷及鑑定 11
第二章 研究目的 12
第三章 研究方法與材料 15
第一節、研究對象 15
第二節、研究方法 15
一、細菌學檢查 16
1、檢體處理： 16
(1)、檢體種類 16
(2)、材料與試劑 16
○1 試劑配製 16
○2 phosphate buffer 17
(3)、儀器 17
(4)、痰液檢體處理方法 17
2、MGIT管檢體接種及次培養接種 18
(1)、MGIT原理 18
(2)、材料 20
○1 液態培養基 20
○2 PANTA，OADC 20
○3無菌吸管 20
○4 廢液桶 20
(3)、儀器 20
(4)、MGIT試管接種方法 20
(5)、次培養接種 20
3、抗酸菌抹片處理 21
(1)、原理 21
(2)、檢體種類 21
(3)、材料 21
○1 顯微鏡、拭鏡紙、鏡油、95%酒精棉 21
○2 玻片、標籤 21
○3 Ziehl-Neelsen(ZN)染色液 21
(4)、儀器設備 21
(5)、Ziehl-Neelsen 染色法 22
二、TBcID檢測方式（免疫色層分析法） 23
1、原理 23
2、檢體種類 23
3、材料 23
4、儀器 23
5、檢測方法 23
6、相關流程 24
三、分子生物檢測方式（生物晶片分析法） 24
1、原理 24
2、檢體種類 25
3、材料與試劑 25
4、儀器 27
5、方法 28
(1)、檢體核酸萃取 28
(2)、核酸增幅放大 29
(3)、核酸雜交 30
(4)、洗滌及呈色 31
6、流程 32
7、分析結果 32
四、傳統生化鑑定檢測 33
1、Niacin試驗原理 33
（1）、檢體種類 33
（2）、試劑 33
（3）、方法步驟 34
2、硝酸鹽還原試驗原理 34
（1）、檢體種類 35
（2）、試劑 35
（3）、方法步驟 35
第三節、資料處理及統計方法 36
第四章 結果及討論 37
第一節、結核菌診斷方法 37
第二節、結核菌檢驗方法 37
第三節、結核病防治問題 38
第四節、研究結果 40
第五章 結論與建議 44
參考文獻 47
附錄圖、表 51
表一、抗酸菌抹片價數報告結果 51
表二、 TBcID陽性與分子生物檢測一致性比較 52
表三、TBcIDa結果與傳統鑑定結果比較 53
表四、分子生物結果與傳統鑑定結果比較 54
表五、TBcID檢測結果與分子生物結果比較 55
表六、結核菌抹片結果次數分配表 56
表七、報告平均天數結果次數分配表 56
表八、分子生物檢測與TBcID檢測報告天數比較 57
表九、分子生物檢測與TBcID檢測成本比較 57
圖一、研究設計圖 58
圖二、抗酸菌抹片報告圖片結果 59
圖三、TBcID陰性反應 61
圖四、TBcID陽性反應 61
圖五、免疫色層分析法檢測流程圖 62
圖六、分子生物(生物晶片)作業流程 63
圖七-1、圖片參考資料：晶宇生物科技有限公司 64
圖七-2、分子生物(生物晶片)檢測結果 65
圖八-1、TBcID/分子生物(生物晶片)檢測結果比較圖 66
圖八-2、TBcID/分子生物(生物晶片)檢測結果比較圖 66
圖九、結核菌抹片結果次數分配圖 67
圖十、抗酸菌抹片結果陰性與報告天數直方圖 67
圖十一、抗酸菌抹片結果Scanty與報告天數直方圖 68
圖十二、抗酸菌抹片結果1+與報告天數直方圖 68
圖十三、抗酸菌抹片結果2+與報告天數直方圖 69
圖十四、抗酸菌抹片結果3+與報告天數直方圖 69
圖十五、抗酸菌抹片結果4+與報告天數直方圖 70
圖十六、抗酸菌抹片結果與平均報告天數直方圖 70
圖十七、抗酸菌抹片結果/報告天數結果盒型圖 71[[abstract]]本研究分別利用快速鑑定 (免疫色層分析法 )為偵測結核菌群中獨有MPB-64抗原檢測方式及分子生物檢測方式(生物晶片) 為偵測結核菌群中獨有的IS6110 片段為探針之檢測方式，利用結核菌液態快速培養基陽性後、進行抗酸菌染片觀察為結核菌索狀形態後，若原始痰檢體之結核菌價數判斷菌落數分別為4+、3+、2+、1+、scanty、陰性，分別平均6.9、9.2、10.6、13.8、11.6、17.0天即可知道鑑定是否為結核桿菌群，而快速鑑定檢測方式(免疫色層分析法)之檢測發現敏感度、特異性、偽陰性、偽陽性、陽性預測值、陰性預測值、準確性分別為91.9%、98.2%、8.1 %、1.8%、96.6%、95.7%，96.0%；分子生物檢測方式(生物晶片)之檢測發現敏感度、特異性、偽陰性、偽陽性、陽性預測值、陰性預測值、準確性分別為95.9%、91.1%、4.0%、8.8%、85.6%、97.6%、92.9%，顯示分子生物檢測方式(生物晶片)在偽陽性比快速鑑定檢測方式(免疫色層分析法)高，兩者有顯著差異(8.8%vs 1.8%)(p0.05)；快速鑑定檢測方式(免疫色層分析法)其檢測方法簡單只需15分鐘，因此若X光臨床診斷非肺結核（支氣管肺炎、肺炎等），利用結核菌液態快速培養基陽性後、進行染片觀察結核菌索狀、高價數之結核菌在一週左右即可知道鑑定是否為結核桿菌群，操作快速，且不需任何儀器，成本相對較分子生物檢測方式(PCR)低廉，除了分子生物檢測方式(生物晶片)外，利用ICA檢測方式(免疫色層分析法)為提供臨床鑑定上良好之結核菌鑑定工具，以利臨床報告之參考依據。
In this study,we use both Immuno-chromatography (ICA) assay,which detects MPB-64 antigen of TB,and Nucleic acid amplification test,which detects IS 6110 gene of TB.The samples were processed with tuberculisos culture from MGIT,and checking cord formation by Ziehl-Neelsen stain,sequentially.The result shows that the time to identify takes 6.9,9.2,10.6,13.8,11.6,17.1 days while the smear of sputum was4+,3+,2+,1+,scanty and negative,respectively.
The sensitivity, specificity, false negatives (FN), false positives (FP), positive predictive value (PPV), negative predictive value (NPV), and accuracy of Immuno-chromatography assay were 91.9%, 98.2%, 8.1%, 1.8%, 96.6%, 95.7%, and 96.0%, respectively. On the other hand, Nucleic acid amplification test was 95.9%, 91.1%, 4.0%, 8.8%, 85.6%, 97.6%, and 92.9%, respectively.
According the results, the NAA had more false positives than ICA (8.8% v.s. 1.8%, p0.05).
Therefore, Immuno-chromatography assay (ICA) will be an excellent tool for MTB identification because of its rapidity, easiness, device-free, and lower cost. In strong smear-positive case, the identification results will be reported about 1 week by MGIT culture, checking cord formation, and ICA test. In conclusion, ICA could be a good choice other than NAA to provide tuberculosis diagnosis and identification
A comparative clonality study using polymerase chain reaction and flow cytometric Vβ repertoire for T-cell large granular lymphocytic lymphoproliferation
Get PDF口試委員會審定書…………………………………………………………i
授權書………………………………………………………………………ii
中文摘要 …………………………………………………………………iii
英文摘要 …………………………………………………………………iv
誌謝 ………………………………………………………………………vi
第一章 緒論 ………………………………………………………………1
第一節 研究背景介紹 ……………………………………………………1
第二節 血液學特徵(Hematologic features) …………………………………2
第三節 臨床表現(Clinical Preseentation) ……………………………………3
第四節 細胞免疫分型(immunophenotype) ………………………………… 3
第五節 單源性( Clonality) ………………………………………………… 4
第六節 自體免疫疾病( Autoimmune Disorders) …………………………… 5
第七節 相關疾病……………………………………………………………5
第八節 研究動機……………………………………………………………6
第二章 材料與方法 …………………………………………………….. 8
第一節 檢體來源 ………………………………………………………… 8
1-1 病患來源與檢體採檢 …………………………………………8
1-2 細胞分離與配置細胞懸浮液……………………………………8
第二節 實驗方法…………………………………………………………… 9
2-1流式細胞儀免疫分型(FC immumophenotype)及TCR Vb repertoires分析…………………………………………………………………9
2-1.1 T細胞免疫分型(T-cell immumophenotype) ………………9
2-1.2 TCR-Vβrepertoires分析 …………………………………10
2-1.3流式細胞分析儀細胞圏選及分析 …………………………11
2-1.4 TCR-Vβ表型分析 ………………………………………12
2-2 T細胞受器(T-cell receptor; TCR) 的基因重組(gene rearrangement)分析…………………………………………………12
2-2.1抽取DNA使用QIAamp DNA Blood Mini Ki …………… 12
2-2.2 TCR-G conventional PC ……………………………………13
2-2.3 TCR BIOMED2 PCR ………………………………………14
第三節 統計方法 ………………………………………………………… 14
第三章 結果 …………………………………………………………… 15
第一節 病患實驗室數據 …………………………………………………15
第二節 T-LGL免疫分型異常表現(immunophenotypic aberrancy)數據 ……16
第三節 流式細胞分析TCR Vβ repertoires及T細胞受器的基因重組分析數據 …………………………………………………………………16
第四章 討論………………………………………………………………18
第五章 結論………………………………………………………………21
參考文獻 ……………………………………………………….……… 22
附錄 ……………………………………………………………………….25[[abstract]]顆粒性大淋巴球 (large granular lymphocyte; LGL) 佔周邊血液單核細胞 (peripheral blood mononuclear cells; PBMC) 的10-15%。這些細胞是中到大型的淋巴球，細胞核偏到一邊，細胞質內有藍色顆粒。 PBMC的LGL中有85%是CD3表面抗原陰性的自然殺手細胞（natural killer cell），另外15%是具CD3表面抗原的cytotoxic T細胞。LGL數目升高可能是良性增生，也可能是白血病（血癌）。藉由分析免疫表現型 (immumophenotype) 的異常表現 (aberrant immunophenotype) 和T細胞受器 (T-cell receptor; TCR) 的基因重組 (gene rearrangement) 可鑑別診斷良性T細胞 LGL細胞增生或T細胞 LGL白血病 (T-LGL leukemia)。在本研究中，我們收集25個LGL淋巴球增生 (LGL lymphoproliferation) 的病例，有17個病例是T細胞LGL白血病 (T-LGL leukemia)，8個病例是T細胞LGL淋巴球增生 (reactive LGL lymphoproliferation)。在本研究中，我們用聚合酶連鎖反應 (polymerase chain reaction; PCR) 法來分析TCR基因重組及flow cytometry (FC) 定量TCR-Vβ chain基因重組 (FC-Vβ repertoire)的表現，並比較PCR及FC-Vβ repertoire 此二種技術的敏感度和特異性。分析結果顯示PCR技術的敏感度為94% (16/17)，特異性為75% (6/8)，陽性預測值(positive predictive value; PPV)為89%，陰性預測值 (negative predictive value; NPV)為86%。FC-Vβ repertoire技術的敏感度為 59% (10/17)，特異性為88% (7/8)，PPV為91%，NPV 為50%。這項研究發現PCR的敏感度優於FC-Vβ repertoire技術，但是FC-Vβ repertoire 的特異性優於PCR技術。此二種技術有互補作用,有助於臨床診斷LGL淋巴球增生 (LGL lymphoproliferation) 的病例。
Large granular lymphocytes (LGLs) are medium to large-sized lymphocytes with abundant cytoplasm, eccentric nuclei and presence of azurophilic cytoplasmic granules. These LGL cells account for 10-15% of peripheral blood mononuclear cells (PBMC); 85% of these cells are surface CD3-negative natural killer (NK) cells and 15% are surface CD3-positive cytotoxic T-cells. Increased LGL in peripheral blood might be reactive or neoplastic; and the differential diagnosis between benign and neoplastic could be achieved by determination of immunophenotypic aberrancy and/or polymerase chain reactive (PCR)-based clonality assay of the T-cell receptor (TCR) gene rearrangement. In this study, we collected the specimens from 25 patients with increased LGL count (or LGL lymphoproliferation) including 17 cases of T-cell LGL leukemia and 8 cases of reactive LGL lymphoproliferation. We compared the diagnostic sensitivity and specificity of PCR-based clonality study and flow cytometric immunophenotyping with TCR-Vβ repertoire (FC-Vβ repertoire). We found that PCR-based clonality assay had a high sensitivity for detecting T-LGL leukemia (16/17 cases; 94%) and a modest specificity (6/8 cases; 75%). The positive predictive value (PPV) was 89% and negative predictive value (NPV) was 86%. On the other hand, the sensitivity of FC-Vβ repertoire was lower at 59% (10/17 cases), but the specificity was relatively high at 88% (7/8 cases). The PPV and NPV of FC-Vβ repertoire were 91% and 50%, respectively. Our study showed that PCR-based clonality study was more sensitive but less specific than FC-Vβ repertoire for the diagnosis of T-cell LGL leukemia. These two techniques are supplemental to each other and are useful for diagnosis
Alleviating effects of short-term fish oil intake on tear characteristics and dry eye symptoms
No full text簽名頁……………………………………………………………………i
誌謝…………………………………………………………………….ii
摘要……………………………………………………………………iii
Abstract……………………………………………………………….iv
目錄……………………………………………………………………..v
圖目錄…………………………………………………………………ix
表目錄…………………………………………………………………xi
第一章 前言…………………………………………………………….1
1.1 淚液來源分泌與淚液層介紹………………………………………1
1.1.1 淚液來源與分泌…………………………………………………1
1.1.2 淚液層……………………………………………………………3
1.2 乾眼症………………………………………………………………4
1.2.1 乾眼症的定義與分類…………………………………………….4
1.2.2 乾眼症的罹患率與風險因子……………………………………14
1.2.3 乾眼症的實驗診斷………………………………………………16
1.2.4 乾眼症的藥物治療與處置………………………………………17
1.2.4.1 乾眼症的治療…………………………………………………17
1.3 魚油…………………………………………………………………21
1.3.1 魚油的來源和成份配方…………………………………………21
1.3.2 魚油對全身性代謝的效應………………………………………24
1.3.3 魚油對乾眼的效應………………………………………………26
1.3.3.1 攝食omega -6 對乾眼的效應…………………………………26
1.3.3.2 攝食omega-3 對乾眼的效應…………………………………28
1.3.3.3 攝食omega-3 和omega-6 對乾眼的共伴效應………………29
1.4 研究動機與研究問題………………………………………………30
1.4.1 研究動機…………………………………………………………30
1.4.2 本研究要解答的問題……………………………………………31
第二章 材料與方法……………………………………………………34
2.1 魚油的來源與配方…………………………………………………34
2.2 食用方式……………………………………………………………34
2.3 受試者召募…………………………………………………………34
2.4 實驗設計與流程……………………………………………………35
2.5 樣本收集與量測方法………………………………………………36
2.5.1 淚液收集…………………………………………………………36
2.5.2 淚液滲透壓測量與相對淚液滲透壓變化值計算………………36
2.5.3 球結膜充血程度評估……………………………………………38
2.5.4 淚液試紙分析……………………………………………………40
2.5.5 淚液膜破裂時間分析(Tear film Break-Up Time; TBUT)……41
2.5.6 淚液生化值檢測…………………………………………………42
第三章 結果……………………………………………………………42
3.1 受試者基本資料……………………………………………………42
3.2 攝食魚油前後受試者雙眼的乾眼測試和相對淚液滲透壓平均值的
變化…………………………………………………………………43
3.3 攝食魚油前後受試者的乾眼測試和相對淚液滲透壓雙眼差異平均
值的變化……………………………………………………………44
3.4 以單隻眼睛為單位分析攝食魚油前後受試者雙眼的乾眼測試和相
對淚液滲透壓變化…………………………………………………46
3.5 攝食魚油前後受試者雙眼的乾眼測試和相對淚液滲透壓平均值的
分佈變化……………………………………………………………47
3.6 攝食魚油前後受試者雙眼的結膜紅腫程度的分佈變化…………50
3.7 攝食魚油前後雙眼的淚液試紙測試值差小於平均值族群的結膜
紅腫程度變化………………………………………………………51
3.8 攝食魚油前後受試者雙眼的乾眼測試和相對淚液滲透壓差異的分
佈情形………………………………………………………………52
3.9 攝食魚油前相對淚液滲透壓和其它乾眼測試值的相關性分析…53
3.10 攝食魚油前後相對淚液滲透壓和其它乾眼測試差值的相關性分
析…………………………………………………………………54
3.11 攝食魚油前後相對淚液滲透壓和其它乾眼測試差值與攝食魚油
後測試值的相關性分析…………………………………………55
3.12 以雙眼測試平均值分佈圖分析攝食魚油對於改善乾眼症狀的性
別差異……………………………………………………………56
3.13 以雙眼測試差值分佈圖分析攝食魚油對於改善乾眼症狀的性別
差異………………………………………………………………57
3.14 攝食魚油後淚液生化值與乾眼症狀檢測值的相關性…………58
第四章 討論……………………………………………………………60
第五章 結論與建議……………………………………………………64
參考文獻………………………………………………………………65[[abstract]]魚油雖然已經被廣泛用作心血管的保健，但是對於乾眼症的症狀改善功能，目前的文獻報告並沒有一致性。因此本研究大幅度修改魚油配方，看是否可以改善乾眼症狀。給予24 位自願受試者每日早晚各一顆魚油配方，成份包含有濃縮魚油504 毫克(20% EPA、50%DHA)。受試者於受試前和連續食用魚油配方三週後，檢測其乾眼症狀，包含淚液試紙測試、淚液膜破裂時間、結膜紅腫程度、和淚液滲透壓。同時測試淚液中的鈉離子、鉀離子、氯離子、澱粉酵素、三酸甘油脂等淚液生化值，並分析不同性別受試者是否有不同的乾眼症狀改善效果。結果顯示: 1.短期內攝食富含omega-3 必需脂肪酸魚油，可能對乾眼症提供部份症狀之緩解。2. 隨著攝食魚油配方，淚液滲透壓到第三週上升，因此未必能直接推論到長期的效應。3. 淚液滲透壓在淚液中包含鈉離子、鉀離子、氯離子、與三酸甘油脂。4. 實驗結果支持以淚液滲透壓當作較好的乾眼症狀診斷方法。5. 推論在攝食富含omega-3 必需脂肪酸後，眼睛有種未知的平衡系統，用以維持淚液滲透壓的恆定性。6. 淚液生理男女有別，特別是在淚液膜破裂時間上。本研究提供短期攝食魚油的功效數據，對後續研究提供良好的基礎資訊。
Fish oil has been used extensively for cardiovascular protection, whereas its use for dry eye symptom alleviation is not well-documented with consensus. This study used an improved formula and recruited 24 volunteers to take twice daily fish oil capsules containing 540 mg(20% EPA、50%DHA) for 3 weeks. After fish oil intake, the volunteers were examined for dry eye symptoms, including TBUT, Schirmer test, Bulbar Redness, and tear osmolarity, along with biochemical tear constituents of K, Cl, K, amylase, and TG. The data were used for comparison between groups of either gender or difference level of alleviations. The results showed that 1. Short-term fish oil intake may alleviate dry eye symptoms. 2. Tear osmolarity elevated at week3 after the intake, suggesting lng term change may be possible. 3. Tear osmolarity factors included K, Cl, K, and TG. 4. Tear osmolarity may be used as a better criterion for dry eye diagnosis. 5. Fish oil intake may trigger an unknown system to improve teat osmolarity homeostasis. 6. Gender-specific difference of tear characteristics exist. To conclude, this study provided the baselines data for further investigation on the use of fish oil for dry eye alleviation
Removal of the dye Orange II study by electro-oxidation and electro-coagulation technology
Get PDF目錄
中文摘要 I
英文摘要 III
誌謝 V
圖目錄 IX
表目錄 XI
第一章 緒論 1
1-1 研究緣起 1
1-2 研究目的 3
第二章 文獻回顧 4
2-1 染料與種類特性 4
2-1-1 化學結構式 4
2-1-2 以染色性質分類 6
2-2 染整廢水處理 8
2-3 染料廢水相關處理探 11
2-3-1 生物處理 11
2-3-2 化學處理 12
2-3-3 光觸媒處理 12
2-3-4 電化學處理 13
第三章 材料與方法 15
3-1 實驗設計 15
3-2 實驗流程 16
3-3 實驗步驟 17
3-3-1 研究條件改變—電壓 17
3-3-2 研究條件改變—pH值 18
3-3-3 研究條件改變—輔助電解液NaCl與NaBr之濃度 18
3-3-4 研究條件改變—Orange II濃度改變 19
3-3-5 參考電極之製備 20
3-4 實驗藥品與材料 21
3-3-1 染料Orange II 21
3-3-2 藥品與器材 22
3-5 實驗設備與分析儀器 23
3-6 數據分析 25
第四章 以電氧化法去除Orange II結果 26
4-1 不同電壓對於染料Orange II的影響 29
4-2 不同pH值對於染料Orange II的影響 32
4-3 不同染料Orange II濃度在固定電壓下變化情形 35
4-4 不同輔助電解液濃度對於染料Orange II的影響 39
4-5 以消耗相同電量條件對於染料Orange II的影響 42
4-6 以擬ㄧ階反應動學探討OrangeII去除 46
4-7 以SEM觀察ITO導電玻璃表面在反應前、後狀態 49
第五章 以電混凝法去除Orange II結果 53
5-1 前言 53
5-1-1 反應曲面法簡介 53
5-1-2 反應曲面法之最適化步驟 54
5-2 電混凝法 58
5-3 研究流程 59
5-4 研究方法建立 59
5-5 研究材料製備 61
5-6 反應曲面法數據分析 63
5-6-1 不同參數對Orange II去除率之影響 65
5-6-1-1 ANOVA分析-Orange II去除率 65
5-6-1-2 單一參數對於Orange II影響 68
5-6-1-3 固定兩研究變因對於Orange II影響 70
5-6-2 不同參數對單位能量去除Orange II (g)之影響 79
5-6-2-1 ANOVA分析-單位能量去除Orange II (g) 79
5-6-2-2 單一參數對於單位能量去除Orange II (g)影響 80
5-6-2-3 固定兩研究變因對單位能量去除Orange II (g)影響 84
5-6-3 以SEM觀測鋁片陽極表面變化情形 86
第六章 結論 93
參考文獻 95
圖目錄
圖3-1 實驗裝置設計圖 15
圖3-2 實驗流程圖 16
圖3-3 三極系統裝配圖 21
圖4-1 在不同Orange II濃度下之線性伏安掃描圖 26
圖4-2 不同電解液對Orange II去除比較 27
圖4-3 典型吸光度隨時間之變化 28
圖4-4不同電壓下Orange II去除率隨時間變化圖(0.1M NaCl) 29
圖4-5不同電壓下Orange II去除率隨時間變化圖(0.2M NaCl) 30
圖4-6不同電壓下Orange II去除率隨時間變化圖 31
圖4-7不同pH變化下Orange II去除率隨時間變化圖(電解液為 NaCl) 32
圖4-8 Orange II 去除率隨消耗電量變化圖 33
圖4-9不同pH變化下Orange II去除率隨時間變化圖(電解液為 NaBr) 34
圖4-9不同起始Orange II濃度下，去除率隨時間變化圖(電解液為 NaCl) 35
圖4-11 不同起始OrangeII濃度下，OrangeII去除率隨消耗電量變化 37
圖4-12不同起始Orange II濃度下，去除率隨時間變化圖 38
圖4-13 Orange II去除率隨著不同NaCl濃度的時間變化圖 39
圖4-14 Orange II去除率隨著不同NaBr濃度時間變化圖 40
圖4-15 Orange II 去除率隨著不同組合輔助電解質下隨時間變化圖 41
圖4-16 Orange II去除率隨著不同NaCl濃度消耗固定電量比較 42
圖4-17 相同電量消耗下Orange II 去除率在不同組合輔助電解液變化圖 43
圖4-18 ln(C/Co)對時間做圖 46
圖4-19 ITO導電玻璃表面在SEM下情形 49
圖4-20 ITO導電玻璃橫斷面在SEM下情形 51
圖5-1 實驗流程圖 59
圖5-1 電混凝研究裝置圖 62
圖5-3 單一因子對Orange II去除影響 68
圖5-4 固定條件為pH值與小鋁片克數 70
圖5-5 固定條件為電解液濃度與小鋁片克數 71
圖5-6 固定條件為電解液濃度與pH值 73
圖5-7 固定條件為電壓與小鋁片克數 75
圖5-8 固定條件為電壓與pH值 76
圖5-9 固定條件為電壓與電解液濃度 77
圖5-10 固定條件為電壓與pH值 78
圖5-11 單一因子對單位能量(Kwhr)去除Orange II (g)影響 82
圖5-12 固定兩研究變因對單位能量去除Orange II (g)影響 84
圖5-13 鋁陽極前處理後於SEM下表層情形 86
圖5-14 去除率最差與最佳之鋁陽極前反應後於SEM下表層情形 88
表目錄
表3-1 偶氮染料Orange II性質 22
表4-1 混合不同濃度電解液NaCl、NaBr，消耗10庫倫、20庫倫電量對OrangeII去除率比較 44
表4-2 改變OrangeII濃度，消耗10、20庫倫電量對OrangeII去除率比較 45
表4-3 不同電壓與電解液種類、濃度下K值與相關係數 47
表4-4 不同Orange II濃度與電解液種類、濃度下k值與相關係數 47
表4-5 不同電解液濃度與種類下K值與相關係數 48
表4-6 不同pH與電解液種類下K值與相關係數 48
表5-1 反應曲面法研究條件建立與參數分析 60
表5-2 反應曲面法研究條件建立後結果輸入 64
表5-3 ANOVA分析-Orange II去除率 65
表5-4 研究結果與迴歸公式所得結果比較 67
表5-5 ANOVA分析-消耗單位能量(Kwhr)去除Orange II (g) 79
表5-6 研究結果與迴歸公式所得結果比較 81[[abstract]]本研究分為兩部分，第一部份探討以某光電廠內切割所剩丟棄前之銦錫氧化物(ITO, Indium Tin Oxide)導電玻璃廢料作為陽極，並採用電氧化法去除人造染料Orange II之成效。研究中探討變因為電壓、電解液種類與濃度、pH及Orange II濃度，實驗結果顯示以NaCl為電解液時，pH值越接近酸性與增加溶液中NaCl濃度時，Orange II去除速率有明顯增加趨勢；以NaBr為電解液時，在各種不同條件下，其Orange II去除率均達95%以上，明顯高於單獨使用NaCl之情況。在實驗中發現ITO導電玻璃表面會生成一高分子膜，而高分子膜厚度越小，對於Orange II去除有較佳表現。在去除動力學方面，Orange II去除符合一階反應動力學模式，在所有k值中，最大k值為1.0091 (min-1)，其條件為0.2M NaBr電解液，通入6V電壓，5×10-5M Orange II濃度，pH=7。
第二部份為利用反應曲面法(RSM, Response Surface Methodology)配合電混凝法去除Orange II：以市售鋁板作為陰陽極，研究變因為電壓、電解液濃度、pH及小鋁片克數，探討對於Orange II去除效果之影響。在反應曲面法探討中，發現以pH值變化對於Orange II去除率有最大的影響；在鋁陽極表層腐蝕孔洞愈多和腐蝕面積愈大，Orange II之去除率較佳。
This thesis is divided into two parts. The first part investigates the effectiveness of electrooxidation on the removal of Orange II using indium tin oxide as the anode. The operating factors, such as, voltage, electrolyte type and concentration, pH and Orange II concentration, on the removal of Orange II were investigated in this study. The experimental results reveal that the removal rate increases with increasing NaCl concentration and decreasing solution pH for NaCl electrolyte. The removal rate is higher for NaBr electrolyte, reaching above 95%, than for NaCl electrolyte at every experimental condition. A polymeric film was found on the ITO anode after the thinner polymeric film leads to higer removal rate of Orange II. The removal rate follows the first order kinetics with an optimal rate coustaut k of 1.0091 min-1 at the condition of 0.2M NaBr electrolyte, 6V voltage, 5 × 10-5M Orange II and pH 7.
The second part uses response surface methodology ( RSM, Response Surface Methodology ) to investigate the removal of Orange II by electrocoagulation using aluminum anode. The operating factors such as applied voltage, electrolyte concentration, pH and small aluminum plate added into the solution, on the effectiveness of Orange II removal were discussed. We found the pH value change has the largest influence on Orange II removal rate; Orange II removal was faster when the amount of pitting hole increases and thus corrosion area on the aluminum anode was larger