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The Effects of Selenium Supplement on Proteomic Expression and Antioxidant Capacity in Aged Mice Kidney
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目錄 ii
圖目錄 vi
表目錄 vii
致謝 viii
中文摘要 ix
Abstract
第一章緒論 13
第一節前言 13
第二節文獻回顧 15
一、老化對生理狀況之影響 15
1.老化對生物體抗氧化之影響 15
二、老化對腎臟之影響 17
1.腎臟與老化之關係 17
2.腎臟老化之功能影響 17
3.老化相關之腎臟蛋白質介紹 19
三、硒與腎臟老化相關之研究 21
1.硒之介紹 21
2.硒之攝取量 21
3.硒之化學形式 21
4.硒的消化、吸收及代謝 24
5.硒之功效 24
6.與硒相關之腎臟蛋白質介紹 25
四、蛋白質體學之介紹 26
1.蛋白質體學 (proteomics) 之定義 26
2.蛋白質體學之研究工具 27
第三節研究目的與設計 30
一、研究目的 30
二、研究設計 31
三、實驗設計說明 32
第二章材料與方法 32
一、動物飼養 32
二、飼料之製備 33
三、動物犧牲 35
四、血樣收集 35
五、組織均質 35
六、蛋白質測定 36
七、組織中TBARS測定 37
八、組織中Catalase活性之測定 39
九、組織中GPx活性之測定 40
十、組織中SOD活性之測定 41
十一、蛋白質體學分析 42
1.腎臟組織均質液之透析 42
2.腎組織蛋白質萃取與收集 43
3.蛋白質回溶 44
4.蛋白質測定 (2-D Quant kit) 44
5.第一維：等電點聚焦(isoelectric focusing, IEF) 45
6.平衡作用(equilibration) 47
7.第二維：SDS膠體電泳 48
8.膠體染色 50
9.膠體影像處理及比對 52
10.膠片保存 52
11.膠內酵素消化 (in gel digestion) 52
12.蛋白質身分鑑定 53
十二、免疫轉印法 42
1.SDS膠體電泳 54
2.蛋白質免疫轉印法 58
3.酵素免疫染色法 60
4.膠體染色 61
5.膠體乾片製作 62
第三章結果與討論 63
一、硒對老化鼠腎組織抗氧化系統之影響 63
1.硒對動物生長及組織重之影響 63
2.硒對體內氧化壓力之影響 63
3.硒對體內抗氧化系統改善之狀況 64
二、硒對老化鼠腎組織蛋白質體的影響 65
1.硒補充對腎臟蛋白質體之影響 65
2.硒補充對腎臟蛋白質體之Delta(3,5) - delta(2,4) – dienoyl - CoA isomerase表現量影響 70
第四章總結及未來展望 84
第五章參考文獻 85[[abstract]]隨年齡增長，腎功能退化，其中氧化傷害增加為導因之一。硒為人體必需微量礦物質，為抗氧化酵素glutathione peroxidase 所必需，本研究目的在利用蛋白質體學探討硒補充對老齡小鼠腎組織蛋白質表現之影響。使用兩種硒來源：以sodium selenite 作為無機硒的來源，以selenium yeast 作為有機硒的來源，採用64週BALB/c雄鼠，依體重隨機分成三組，分別餵食不同實驗飼料：控制組(OC)、無機硒組(SE；0.5mg/kg diet)、有機硒組(SY；0.5mg/kg diet)，另以6週齡之年輕鼠作為年輕控制組(YC)。餵食7週後犧牲取血漿及腎組織。結果顯示，有機硒(SY)與無機硒(SE)補充均可降低腎組織均質液中TBARS含量，其中以無機硒作用較為明顯。兩種形式硒的補充均可明顯改善腎組織體內酵素性抗氧化系統包括SOD、GPx及Catalase活性。餵食三種試驗飼料七週後之小鼠腎臟 Catalase 活性之結果。結果顯示 OC 組 Catalase 活性明顯低於 YC 組 (p<0.05)，而硒補充組 Catalase 活性均明顯高於 OC 組 (p<0.05)。
GPx活性部分，由結果得知 OC 組GPx 活性明顯低於 YC 組 (p<0.05)。硒補充的兩組可以增加GPx活性，但仍較YC組為低。
再來SOD 活性，結果發現OC 組腎臟 SOD 活性略低於 YC 組。且SE及SY組腎臟SOD活性高於OC組，但未達統計上顯著差異。
二維式電泳法分析，結果發現，OC組腎組織均質液2D電泳圖譜中，顯著高於YC組且補充SE明顯較低者，有9個蛋白質點，包括有actin cytoplasmic 2、vacuolar adenosine triphosphatase subunit A、gamma-actin、peroxiredoxin-1、Atp5b protein、ester hydrolase C11orf54 homolog、prohibitin、haptoglobin precursor、Delta(3,5)-delta(2,4)-dienoyl-CoA isomerase、Stress-70 protein等；這些蛋白質點中補充SY較OC組低者則有6個蛋白質點，經質譜儀分析鑑定其蛋白質身份，其中包括有actin cytoplasmic 2、vacuolar adenosine triphosphatase subunit A、gamma-actin、Atp5b protein、prohibitin、haptoglobin precursor、Delta(3,5)-delta(2,4)-dienoyl-CoA isomerase、Stress-70 protein等，表示這些腎臟蛋白質會因老化增加表現，膳食補充硒則可以抑制其增加，顯示硒補充會影響腎臟老化可能相關的蛋白質。
最後在二維式電泳鑑定出來的蛋白質身分中，選擇較高score值Delta(3,5)-delta(2,4)-dienoyl-CoA isomerase(簡稱ECH1)，進行western blot。結果顯示，OC組腎臟的Delta(3,5) - delta(2,4) – dienoyl - CoA isomerase表現量明顯高於YC組，給予硒補充，SE、SY組腎臟Delta(3,5)-delta(2,4)-dienoyl-CoA isomerase表現量有明顯下降，表示不同形式硒補充後可減少elta(3,5)-delta(2,4)-dienoyl-CoA isomerase表現量。所以根據以上的結果發現，硒的補充可以改善因老化所引起的氧化反應及蛋白質表現量的影響。
Selenium is an essential trace element and an integral part of many proteins with catalytic and structural functions. Se exists naturally in inorganic and organic forms. There are various bioavailability and protective effects between these two forms. The purpose of this study was to understand the effects of organic and inorganic selenium compounds on proteomic expression and oxidative stress in aged mice kidney. The 64-weeks old male BALB/c mice were used as animal model. Mice were divided into 3 groups：(1) old control group (OC group; 0.1 mg Se equivalent/kg diet)；(2) inorganic selenium group (selenite, SE group; 0.5 mg Se equivalent/kg diet)；(3) organic selenium group (selenium yeast, SY group; 0.5 mg Se equivalent/kg diet).In addition, the 10-weeks young male BALB/c mice was added as the young control group (YC group; 0.1 mg Se equivalent/kg diet). The mice were fed the test diets for 7 weeks. These result suggested that thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) levels in kidney showed significantly increase in OC group compared with YC group. TBARS levels significantly decreased in SE and SY group compared with OC group in kidney. Catalase levels in kidney showed significantly increase in YC group compared with OC group. Catalase levels significantly decreased in OC group compared with SE and SY group in kidney. GPx levels in kidney showed significantly increase in YC group compared with OC group.Selenium supplementation can increase the GPx activity of two groups, but still YC group. Return SOD activity was found the OC group kidney SOD activity was slightly lower than the YC group.SE and SY groups kidney SOD activity and higher than the OC group, but not statistically significant difference.
In addition, protein expression in kidney from organic and inorganic selenium-treated mice was also compared using two dimensional electrophoresis. There are 9 protein spots density significantly difference among four groups. Particularly, all spots protein expression of OC group images was showed significantly increase than YC group, but all spots protein expression of SE and SY group images was showed significantly decrease than OC group. The identity of the differentially expressed proteins may help us understand the mechanism of selenium administration. In conclusion, selenium antioxidant properties would be beneficial in ameliorating the age-associated oxidative state
The Study of Chinese Herbs Used for Sun Protection in Cosmetics
No full text中文摘要.....................................................................2
英文摘要.....................................................................3
目錄.........................................................................4
圖目錄.......................................................................8
表目錄.......................................................................10
第一章、緒論
1.1 研究動機.................................................................11
1.2 研究目的.................................................................11
第二章、研究背景
2.1 紫外線與皮膚的關係
2.1.1紫外線之介紹............................................................13
2.1.2紫外線對皮膚的傷害.......................................................18
2.1.3長期紫外線對皮膚的傷害...................................................19
2.1.4光老化現象等級..........................................................20
2.1.5皮膚組織的改變..........................................................22
2.2 皮膚的生理構造
2.2.1 皮膚的構造...........................................................23
2.2.2 皮膚的層次..........................................................................23
2.2.3 皮膚的生理功能........................................................24
2.2.4 皮膚的分類...........................................................27
2.3 防曬的定義
2.3.1 防曬能力的評估方法....................................................28
2.3.2 防曬劑的種類.........................................................31
2.3.3紫外線吸收劑具環境荷爾蒙作用............................................33
2.3.4紫外線吸收劑能引起過敏與突變............................................33
第三章、實驗大綱
3.1實驗藥品..................................................................37
3.2實驗儀器..................................................................39
3.3實驗步驟..................................................................40
3.3.1 稀乙醇抽提...........................................................40
3.3.2紫外光吸光能力(UV/Vis光譜分析).........................................41
3.3.3細胞毒性試驗(Cytotoxic Assay).........................................42
3.3.4細胞存活率試驗(MTT assay kit).........................................43
3.3.5重金屬含量試驗........................................................44
3.3.6化粧品中微生物檢驗.....................................................47
3.3.7防曬係數分析..........................................................47
第四章、結果與討論
4.1吸光能力測試(UV/Vis光譜分析)...............................................49
4.2細胞毒性(LDH)試驗及細胞存活率(MTT).........................................65
4.3重金屬含量檢測............................................................70
4.4化粧品中微生物檢測.........................................................71
4.5防曬係數分析..............................................................72
第五章、結論.................................................................73
第六章、參考資料..............................................................75[[abstract]]本研究著重在中草藥植物萃取液之防曬成份之探討與應用以應用在化粧品配方之評估，本研究選擇20種於文獻記載指出具防曬美白及抗氧化作用之中草藥，進行紫外光吸收測試，並從中篩選出松樹皮、黃芩、薑黃水萃液均具有吸收紫外光區光線之能力，然而其中又以松樹皮水萃取物吸收光譜能力表現最佳。
加入不同濃度之松樹皮萃取液進行細胞存活率(MTT)及細胞毒性試驗(LDH)，發現人類表皮細胞(HS-68) 在濃度3%之松樹皮萃取液中細胞存活率最高且細胞毒性低，將此一濃度之樣品加入乳液中進行防曬係數測試，其防曬係數可達SPF8.81。
將實驗結果實際運用在化妝品配方中，評估體外試驗結果與產品實際運用效果之差異性，結果顯示松樹皮萃取液具有作為化妝品防曬劑的潛力。
This research investigates herb extracts as a potential sun screen ingredient in cosmetics. As cited in this experiment twenty herbs were tested for their sun protection and whitening factor as well as their anti-oxidizing properties.
Pine bark, scutellaria, and turmeric extract showed viable results in ultraviolet ray absorption, in particular pine bark extract showed the most significant viability in spectrum absorption spectroscopy (spectrophotometer or spectrometer).
By testing of MTT assay kit (MTT) and Cytotoxic Assay (LDH) in different concentrations of the pine bark extract, it was found that the cells in the epidermis (HS-68) had the highest survival rate and lowest toxicity levels in 3% concentration pine bark extract. Adding the same concentration of the extract into emulsion to test out its sun protection factor consequently yielded a SPF 8.81.
The experimentation resulted in a practical application of the extract in the cosmetic formula. Assessment of in vitro tests revealed a differentiation in outcome, the results do show the pine bark extract can be used as cosmetic sunscreen
評估貝氏屬性挑選法對於具先驗分配的簡易貝氏分類器之效能影響
No full text[[abstract]]在資料探勘的分類技術中，簡易貝氏分類器由於運算速度快且分類正確率佳，已廣泛被應用。惟簡易貝氏分類器在進行分類時需使用資料檔中全部屬性，如此可能被某些冗餘屬性干擾分類結果，故為求得更佳的分類效果，會考慮加入屬性挑選的機制。而在眾多屬性挑選法中，由於貝氏屬性挑選法能有效地剔除多餘或不重要屬性，因此常被使用於簡易貝氏分類器中。另一方面，為了提高簡易貝氏分類器的分類正確率，一般會假設屬性的可能值服從先驗分配，例如狄氏分配或廣義狄氏分配。在過去的研究中，已有許多學者提出先驗分配的參數設定方法，但目前尚未有學者結合先驗分配與屬性挑選法兩種機制於簡易貝氏分類器進行評估。因此本研究將結合此兩種機制，提出兩項模式：模式一先使用貝氏屬性挑選法找出屬性集合，再加入先驗分配；模式二為每挑選出一個屬性就針對該屬性找出最適合的先驗分配，即屬性挑選結束時參數也同時設定完成。在實證部份則從UCI資料存放站上找出17個資料檔作分析，實驗結果顯示模式一搭配廣義狄氏分配時，整體而言相較於模式二及加入先驗分配但不作屬性挑選的簡易貝氏分類器正確率較高且較為穩定
健康飲食網站之設計與實現
No full text[[abstract]]近年來人民生活水準提升、生活模式改變，以致於造成生活作息不規律、飲食習慣失衡等現象，直至發現個人體重大幅上升或身體出現代謝不良等相關症狀時，才費盡心機減重。但此時對身體的傷害已經造成，所以維持個人理想體重，確保身體健康狀態，實不可掉以輕心。故此網站設計之理念，是希望透過一簡便的方式以計算每人每日食物之熱量，使用者可透過會員登入以記錄每天所缺乏或得增加的熱量有哪些，使欲維持理想體重者有所依循。希望藉由此網站，可讓使用者得知自己的飲食熱量，以及欲了解更多有關於飲食熱量或相關健康資訊者，可以更方便的查詢。網頁中除了可測量自己的飲食熱量外，也可以測量一天中的熱量是否過多或不足，以期使用者皆可藉由此網站調整符合個人正常的熱量飲食，繼而達到維持健康體態的目的
科技大學幼保系教育行銷之個案研究
No full text[[abstract]]本研究主要在了解A科技大學幼保系的行銷策略應用、困境和因應之道。本研究以南部地區一所科大幼保系為研究對象，針對行政主管、系教師及學生進行訪談，另輔以文件分析法，分析系招生會議記錄和文宣品。研究結果發現某科大幼保系以輔導學生銜接就業市場為定位策略，採取全面撒網式的市場目標策略。在組合策略中，最常運用推廣、產品、人員、服務品質和生產力策略，最劣勢為實體環境策略。在實施困境和因應策略上，以豐富核心產品內涵、舉辦以高職生為對象的全國性活動、爭取他系支援形成共同作戰態勢，以因應生源減少的困境；鼓勵教師和學生走出校園，提昇知名度來因應品牌弱勢；藉由頻繁的會議溝通和同儕相互分享與制衡，以提升團體凝聚力，因應人員策略的困境
Study of the inhibitory effect and mechanism of nobiletin on human malignant melanoma cells invasion/migration
No full text[[abstract]]本研究主要探討nobiletin是否可以有效地抑制RPMI-7951人類黑色素癌細胞的侵入及轉移能力，並進一步探討其分子作用機轉