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Papel da quiescina/sulfidril oxidase 1 (QSOX1) na multimerização da fibronectina
Full text linkOrientadora : Profª. Drª. Lia Sumie NakaoOrientadora : Profª. Drª. Marcia Helena AppelTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 2013Inclui referênciasÁrea de concentração :BiologiaResumo: Quiescina/sulfidril oxidase isoforma 1b (QSOX1b) é uma enzima secretada, e catalisadora da oxidação de proteínas nascentes e mal dobradas. Esta oxidação induz a formação de pontes dissulfeto, que são cruciais para a conformação e estabilidade de diversas proteínas. A literatura propõe que a oxidação de proteínas intra e extracelular, ou aquelas de superfície celular, acarreta em mudanças no estado redox destes microambientes, e também em alterações conformacionais das micro e macroestruturas proteicas. Baseado nisso, tivemos como objetivo analisar o papel de QSOX1b recombinante de camundongo (mQSOX1b) como possível oxidase da fibronectina (FN), uma glicoproteína dimérica de matriz extracelular (MEC). Através das determinações de peróxido de hidrogênio e de tióis em ensaios cinéticos com mQSOX1b e FN reduzida (redFN), in vitro, constatamos que redFN é oxidada pela enzima. A constante de Michaelis menten medida foi de aproximadamente 456 nM (com uréia) e 290 nM (sem uréia). redFN, per se, auto fibrila, produzindo multímeros solubilizados por deoxicolato (DOC), contudo, verificamos que mQSOX1b acelera a formação destes multímeros. Estas estruturas fibrilares possuem massa molecular maior que 800 kDa, e são desfeitas por agentes redutores, mas não são desfeitas por DOC (2%), indicando que são mantidas por pontes dissulfeto. Os multímeros não afetam a interação de redFN com gelatina, como indicado por imunoensaio. Coatings com multímeros de FN (nativa e reduzida) não alteraram a capacidade adesiva de Rasm (células musculares lisas de aorta de rato), HeLa (células de câncer cervical, Henrietta Lacks) ou 3t3 (Fibroblasto de camundongo), contudo, a proliferação foi aumentada quando Rasm e HeLa foram incubados sobre natFN junto a mQSOX1b. Ao analisar a superexpressão da mQSOX1b sobre o estado redox da MEC e superfície celular nas linhagens Hek293t (células de rim de embrião humano para transfecção) e HeLa, pudemos constatar a promoção do estado mais oxidado para estes ambientes. Sendo assim, propomos para QSOX1b funções biológicas sobre a formação e remodelamento de componentes da MEC, aqui demonstrado especificamente sobre FN. Sendo assim, a presença de QSOX1 pode estar associada com o controle do crescimento e sobrevivência celular, tanto em situações fisiológicas quanto patológicas. Palavras chaves: Quiescina/Sulfidril Oxidase 1b (QSOX1b); Matriz extracelular (MEC); Fibronectina (FN); oxidação; estado redox.Abstract: Quiescin/Sulfhydryl Oxidase isoform 1b (QSOX1b) is a secreted enzyme, and
catalyzes the oxidation of nascent and misfolded proteins. This oxidation leads to the
formation of disulfide bonds which are critical to the conformation and stability of
various proteins. The literature suggests that oxidation of intra-and extracellular
proteins or those at cell surface leads to changes in the redox state of these
microenvironments, as well as conformational changes in the protein micro and
macrostructure. Based on that, we aimed to analyze the role of mouse recombinant
QSOX1b (mQSOX1b) as a possible oxidase for fibronectin (FN), a dimeric glycoprotein
of the extracellular matrix (ECM). In vitro, through enzyme kinetics assays and
measurement of thiols in the presence of mQSOX1b and reduced FN (redFN), we
found that redFN is oxidized by the enzyme. The KM values found were approximately
456 nM (urea) and 290 nM (without urea). FN multimers are also generated by auto
fibrillation and can be solubilized by deoxycholate (DOC), however, we found that the
QSOX1b accelerates the formation of these multimers. These fibrillar structures have
molecular mass greater than 800 kDa, and are lost in the presence of reducing agents
but not DOC (2%), indicating that multimers are maintained by disulfide bonds. The
multimers forms no affect the gelatin-redFN interaction, indicated by ELISA. Coatings
with multimers of FN (native and reduced FN) did not alter the adhesive capacity of
Rasm, HeLa or 3T3, however, the proliferation was increased when Rasm and HeLa
were incubated on natFN along mQSOX1b. Analyzing mQSOX1b overexpression
influence on the ECM redox state and cell surface protein thiols at HEK293T and HeLa
cells, we found more oxidized state for these environments. Therefore, we propose as
biological functions to QSOX1b the formation and remodeling ECM components, here
specifically FN. Thus, the presence of QSOX1 may be associated with cellular growth
and survival control, probably in physiological and pathological conditions.
Keywords: Quiescin/sulfhydryl oxidase 1b (QSOX1b), extracellular matrix (ECM),
fibronectin (FN); oxidation; redox state
Going Beyond Counting First Authors in Author Co-citation Analysis
Full text linkThe present study examines one of the fundamental aspects of author co-citation analysis (ACA) - the way co-citation
counts are defined. Co-citation counting provides the data on which all subsequent statistical analyses and mappings
are based, and we compare ACA results based on two different types of co-citation counting - the traditional type that
only counts the first one among a cited work's authors on the one hand and a non-traditional type that takes into
account the first 5 authors of a cited work on the other hand. Results indicate that the picture produced through this non-traditional author co-citation counting contains more coherent author groups and is therefore considerably clearer. However, this picture represents fewer specialties in the research field being studied than that produced through the traditional first-author co-citation counting when the same number of top-ranked authors is selected and analyzed. Reasons for these effects are discussed
QSOX (quiescina/sulfidril oxidase): Função biológica?
Full text linkOs mecanismos moleculares que controlam as funções proteicas têm sido um campo de ampla pesquisa e novos conhecimentos. Sabe-se já que há mecanismos de controle pela oxirredução de aminoácidos específicos em sítios proteicos sensíveis a tal modificação. A inserção de ligações dissulfeto, inter e/ou intracadeia, está entre essas modificações que podem ser responsáveis pelo controle funcional de diversas proteínas, como a insulina. As reações oxirredutases são catalisadas, principalmente, por membros da família PDI. A QSOX, uma quiescina/sulfidril oxidase, realiza a inserção de pontes dissulfeto em proteínas maduras e nascentes, por meio da redução do oxigênio molecular a peróxido de hidrogênio. O papel biológico dessa enzima permanece obscuro, contudo a literatura propõe a atuação em ambientes intra e extracelular, participando,por exemplo, do dobramento de moléculas da matriz extracelular, e possivelmente ativando vias de sinalização responsáveis pela sobrevivência celular. Nosso grupo de pesquisa tem como intuito desvendar alguns possíveis substratos e mecanismos biológicos dessa proteína in vitro
Variations on the Author
Full text link“Variations on the Author” discusses two of Eduardo Coutinho’s recent films (Um Dia na Vida, from 2010, and Últimas Conversas, posthumously released in 2015) and their contribution to the general question of documentary authorship. The director’s filmography is characterized by a consistent yet self-effacing form of authorial self-inscription: Coutinho often features as an interviewer that rather than express opinions propels discourses; an interviewer that is good at listening. This mode of self-inscription characterizes him as an author who is not expressive but who is nonetheless markedly present on the screen. In Um Dia na Vida, however, Coutinho is completely absent form the image, while Últimas Conversas, on the contrary, includes a confessional prologue that moves the director from the margins to the center of his films. This article examines the ways in which these works stand out in the filmography of a director who offers new insights into the notion of cinematic authorship
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