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Structural characterization of Plasmodium falciparum CTP : phosphocholine cytidylyltransferase and fragment-based drug design approach for targeting phospholipid biosynthesis pathway
No full textÀ l’heure actuelle, le paludisme reste un problème de santé majeur et demeure une des maladies parasitaires les plus menaçantes. Parmi les cinq espèces de malaria infectant l’homme, Plasmodium falciparum est la forme la plus mortelle. Lors de la phase érythrocytaire de son cycle de vie, causant tous les symptômes du paludisme, P.falciparum utilise les phospholipides pour créer les membranes nécessaires au développement de cellules filles. Chez P. falciparum, la phosphatidylcholine est principalement obtenue grâce à la voie de synthèse de novo, dite voie de Kennedy. Dans cette voie de biosynthèse, la seconde étape catalysée par la CTP:phosphocholine cytidylyltransferase [EC 2.7.7.15] est limitante et apparait essentielle pour la survie du parasite murin P. berghei lors de la phase sanguine. Les objectifs de mon travail de thèse ont été de caractériser structuralement cette enzyme et d’identifier des effecteurs, principalement grâce à des approches de « fragment-based drug design » (FBDD). Ainsi, la première structure cristalline du domaine catalytique de l’enzyme (PfCCT) a été déterminée avec une résolution de 2.2 Å. De plus, les structures de trois complexes enzyme-substrat (en présence de CMP, de phosphocholine ou de choline) et d’un complexe enzyme-produit (CDP-Choline) ont été déterminées. Ces structures cristallographiques apportent des informations détaillées sur la poche de liaison de l’enzyme et elles ont révélé des informations sur le mécanisme de la réaction catalytique à l’échelle atomique. La seconde partie de ma thèse présente les méthodes développées pour identifier des inhibiteurs potentiels de la PfCCT. Une approche de FBDD a été utilisée pour identifier et sélectionner de petites molécules (fragments, PM<300 Da) se liant à la PfCCT. Diverses techniques biophysiques (fluorescence-based thermal shift assay, différence de transfert de saturation par RMN, dénaturation chimique isotherme) ont permis la sélection de 23 fragments à partir du criblage d’une bibliothèque (~ 300 molécules). En parallèle, un criblage in silico de plus grandes bibliothèques de fragments (environ 15 000 composés) a permis d’identifier 100 fragments “hits”. Enfin, 5 composés déjà connus pour inhiber la croissance parasitaire (Malaria Box fournit par Medecines for Malaria Venture) ont été sélectionnés pour leur inhibition de l’activité de la PfCCT recombinante. L’ensemble de ces données ouvre la voie pour l’élaboration de futurs composés ciblant la PfCCT et inhibant la biosynthèse de phosphatidylcholine chez P. falciparum.Malaria remains a major global health problem and the most threatening parasitic disease. Among the 5 malaria species that affect humans, Plasmodium falciparum is the most deadly form. During its life cycle, in erythrocytic stage, which causes all the malaria symptoms, P. falciparum relies on phospholipids to build the membranes necessary for daughter cell development. Approximately 85% of parasite phospholipids consist of phosphatidylcholine (PC) and phosphatidylethanolamine (PE) synthesized by the parasite through the de novo Kennedy pathways. In the pathway of phosphatidylcholine biosynthesis, the second step catalyzed by CTP:phosphocholine cytidylyltransferase [EC 2.7.7.15] is rate limiting and appears essential for the parasite survival at its blood stage. In this PhD thesis I focus on the structural characterization of this enzyme and the identification of effectors mainly by fragment-based drug design approach (FBDD). The first reported crystal structure of the catalytic domain of the enzyme target (PfCCT) has been solved at resolution 2.2 Å. Four other crystal structures of PfCCT in complex with substrates (CMP, phosphocholine and choline) or product (CDP-choline) have been determined. These structural data give detailed images of the binding pocket and reveal the enzyme structures at all catalytic steps that provide crucial information on the catalytic mechanism at atomic level. The second part of the project present the methods developed to identify potential PfCCT inhibitors. A FBDD approach was used in order to identify and select small molecules (fragments, MW< 300 Da) binding to the PfCCT. A combination of biophysical techniques (fluorescence-based thermal shift assay, saturation transfer difference NMR and isothermal chemical denaturation) allowed the selection of 23 fragment hits from the screenings of fragment library (~ 300 molecules). In parallel in silico screening of larger fragment libraries (~15,000 compounds) resulted in 100 selected hits. Finally, 5 compounds already known to inhibit parasite growth (Malaria Box from Medicines for Malaria Venture) were selected for their inhibition of the recombinant PfCCT activity. The results obtained within this thesis brought important knowledge and structural insights on the catalytic mechanism of PfCCT. Taken together, these results pave the way for future structure-based drug design to target PfCCT and to inhibit the essential phosphatidylcholine biosynthesis in P. falciparum
Biochemical and biophysical characterization of the two Plasmodium falciparum cytidylyltransferases, key enzymes of the malaria phospholipid metabolism
No full textLe paludisme est causé par l'infection et la destruction des érythrocytes par les parasites protozoaires appartenant au genre Plasmodium. Au cours de son développement dans l'érythrocyte,Plasmodium falciparum requiert la biosynthèse massive de membranes dont les principaux constituants lipidiques sont des phospholipides. La phosphatidylcholine (PC) et la phosphatidyléthanolamine (PE) représentent à elles deux environ 80 % des lipides membranaires et l'inhibition de leur biosynthèse est létale pour le parasite. La PC et la PE sont synthétisées par le parasite, principalement via les voies de novo dépendantes de la CDP-choline et de la CDP-éthanolamine (ou voies de Kennedy) en utilisant respectivement la choline et l'éthanolamine comme précurseurs. Ces travaux de thèse se focalisent sur les deux enzymes CTP:phosphocholine etCTP:phosphoéthanolamine cytidylyltransférase (PfCCT et PfECT, respectivement), catalysant les étapes limitantes des voies de Kennedy. Chez Plasmodium, les CCT et ECT possèdent deux domaines cytidylyltransférases (CT) portant l'activité catalytique, séparés par une longue région de liaison. Pour la CCT, cette duplication est retrouvée seulement chez trois organismes, tous faisant partie du phylumdes Apicomplexes : Babesia, Theileria et Plasmodium, alors que la présence de deux domaines CT estune caractéristique retrouvée chez toutes les ECT étudiées à ce jour. La première partie de ce travail de thèse concerne la caractérisation biochimique et l'inhibition la PfCCT Nous avons montré que les deux domaines CT de la PfCCT sont actifs à l'inverse de la PfECT pour laquelle seul le domaine CTN-terminal est catalytiquement actif. A la suite d'un criblage virtuel basé sur la structure de l'enzyme,nous avons identifié un composé princeps capable d'inhiber l'activité de la PfCCT in vitro, la synthèse de PC et la croissance parasitaire. Ce premier composé actif (haut µM) représente une base pour l'optimisation future de nouveaux composés plus efficaces. Dans la deuxième partie de cette thèse,nous avons déterminé le mécanisme catalytique, la spécificité de liaison des ligands et l'organisation structurale de la PfECT grâce à la combinaison d'approches biochimiques et biophysiques. L'ensemble des résultats présentés dans ce manuscrit apportent un éclairage important concernant le fonctionnement de ces deux cibles potentielles et constituent des étapes essentielles à l'élaboration d'une approche thérapeutique.Malaria is caused by the infection and destruction of red blood cells by protozoan parasitesbelonging to the genus Plasmodium. During its intra-erythrocytic development, Plasmodiumfalciparum requires massive biosynthesis of membranes which are mainly composed of phospholipids.Phosphatidylcholine (PC) and phosphatidylethanolamine (PE) together represent about 80% of thetotal membrane lipids and inhibition of their biosynthesis leads to parasite death. PC and PE aresynthesized by the parasite's machinery mainly through the de novo CDP-choline and CDPethanolamine(Kennedy) pathways using respectively choline and ethanolamine as precursors. Thisstudy focuses on the rate limiting steps of these pathways catalyzed by CTP:phosphocholine andCTP:phosphoethanolamine cytidylytransferases (PfCCT and PfECT, respectively). In Plasmodiumspecies, both CCT and ECT contain two catalytic cores (CT domains) separated by a long linker.Interestingly, for CCT this feature is found only in three organisms, all from the phylum ofApicomplexa: Babesia, Theileria and Plasmodium, whereas the presence of two CT domains is ageneral feature in all ECTs known so far. The first part of this work consists in the biochemicalcharacterization of PfCCT and the investigation of its druggability. We showed that both PfCCT CTdomains are active and display similar kinetic parameters while only the N-terminal CT domain wasactive in PfECT. Subsequent to an in silico structure-based screening of compounds libraries, weidentified a PfCCT inhibitor able to inhibit PC synthesis as well as P. falciparum growth in vitro in thehigh µM range. This compound represents a first step toward the optimization of future more potentcompounds. In the second part of this study, we investigated the catalytic mechanism of PfECT anddeciphered its interactions with its ligands using biochemical, biophysical and structural approaches.Collectively, these results bring new insights into the biochemical and structural properties of thesetwo keys enzymes of the phospholipid metabolism in P. falciparum and pave the way for their futuredevelopment as potential drug target
The Role of Metabolomics in Antiparasitic Drug Discovery
No full textMetabolomics involves the global measurement of small molecule metabolites in a biological system and allows the comprehensive investigation of metabolic pathways in pathogenic parasites. Metabolomics studies have enabled the discovery of novel aspects of parasite metabolism that constitute attractive drug targets, and have elucidated metabolic targets of antiparasitic compounds. This chapter provides an introduction to parasite metabolomics and describes metabolomics methods suitable for kinetoplastid and apicomplexan parasites. Several examples are provided describing applications of metabolomics to understand the mechanisms of action and resistance for a range of antiprotozoal compounds. This unbiased elucidation of drug mechanisms with metabolomics will facilitate the discovery and development of new drugs for parasitic diseases of global importance.</p
Attacking blood-borne parasites with mathematics
No full textCentral carbon metabolism is important to cells as it supplies free energy in the form of ATP and the building blocks for new cells. Parasites harvest many of the components they require from their hosts, but they still have to generate ATP themselves, making the metabolic pathways that generate ATP essential to the parasites' survival and thereby potential target pathways for antiparasitic drugs. Metabolic networks often consist of many components that interact with each other via nonlinear kinetics.The behavior of the network arises from the interaction of the components within and outside the network. To understand network behavior, experimental measurements on the components should be integrated through computational approaches. In this chapter, we present an overview of how experiment-driven mathematical models have provided insights on important aspects of parasite metabolism and have aided in elucidating potent antiparasitic drug targets within metabolism.</p
Study of the CTP : phosphocholine cytidylyltransferase of Plasmodium falciparum as a potential antimalarial therapeutic target
No full textL’agent causal du paludisme est un parasite protozoaire à cycle intracellulaire obligatoire, du genre Plasmodium. Plasmodium falciparum est l’espèce responsable de la majorité des décès liés au paludisme et, de ce fait, la plus redoutable. La phase symptomatique de la maladie correspond à la phase intra-érythrocytaire. La multiplication intra-érythrocytaire du parasite nécessite la synthèse d’une quantité considérable de membranes afin d’assurer la formation des nouveaux organites et de la membrane plasmique des cellules filles. C’est pour répondre à ce besoin que le parasite utilise sa propre machinerie métabolique produisant les phospholipides (PL) indispensables à sa multiplication. Parmi les différents PL de ces membranes, la phosphatidylcholine (PC) est le plus abondant. La principale voie pour la synthèse de PC chez P. falciparum est la voie de novo de Kennedy. L’étape la plus importante dans cette voie est la deuxième étape enzymatique catalysée par la CTP:phosphocholine cytidylyltransférase (CCT). D’une part, cette enzyme constitue l’étape limitante c’est-à-dire régulant le flux donc le taux de synthèse de PC, d’autre part de précédents travaux du laboratoire (Deschamps et al.) ont montré que la CCT est essentielle à la survie du parasite murin P. berghei. La première partie de ce travail de thèse concerne la génération et la caractérisation du knockout conditionnel de la CCT chez P. falciparum. Nous avons montré que la PfCCT est essentielle pour la survie du parasite au stade sanguin. La structure tridimensionnelle du domaine catalytique C-terminal de la PfCCT(581-775) résolue au laboratoire (Guca et al.) présente une très faible activité enzymatique. Dans la deuxième partie de ce travail de thèse, nous avons produit différentes constructions du domaine catalytique C-terminal de la PfCCT incluant les acides aminés : 581 à 795, 581 à 787, 581 à 779 et 581 à 772 dans le but d’optimiser à la fois la cristallogenèse et l’activité d es fragments protéiques. Après les étapes de production et de purification de ces différentes constructions, les études d’activité ont permis d’identifier la délétion en acides aminés à l’origine de la perte d’activité. Ce travail servira de base pour l’identification de nouvelles constructions actives et cristallisables. Dans la troisième partie, nous avons réalisé différents criblages de molécules de faible ou très faible masse moléculaire afin de sélectionner des ligands de la PfCCT. Plusieurs molécules appartenant à des familles chimiques différentes et capables de se lier dans le site de la phosphocholine et/ ou d’inhiber la PfCCT ont été identifiées. Le criblage de molécules de très faibles masses moléculaires par cristallographie a abouti à la résolution de 23 structures de complexes PfCCT-ligands dont les coordonnées ont été déposées à la « Protein Data Bank ». L’ensemble des résultats de criblage apportent un éclairage crucial pour la conception rationnelle par l’approche p ar fragments et la validation de la poche phosphocholine du site actif comme une région accessible à des médicaments pouvant donc être ciblée.The causative agent of malaria is an intracellular protozoa parasite from the genus Plasmodium. In fact, Plasmodium falciparum is the stain responsible for the majority of the deaths. The symptomatic phase of malaria is due to the intra-erythrocytic cycle. The asexual multiplication in the intra-erythrocytic cycle requires a considerable quantity of cytoplasmic membrane synthesis in order to ensure the formation of new organelles and of the membranes of new daughter cells. To meet this need, the parasite uses its own metabolic machinery to produce the phospholipids (PLs) essential for its multiplication. Of the various PL present, phosphatidylcholine (PC) is the most abundant. The main pathway for the synthesis of PC by P. falciparum is the de novo Kennedy pathway. The most important step in this pathway is the second enzymatic step catalysed by CTP:phosphocholine cytidylyltransferase (CCT). This enzyme constitutes the limiting step of the pathway; it regulates the flow and therefore the rate of PC synthesis. Previous work in the laboratory (Deschamps et al.) has shown that CCT is essential for the survival of the murine parasite P. berghei. The first part of this thesis concerns the generation and characterisation of the conditional knockout of CCT in P. falciparum. We have shown that PfCCT is essential for the survival of the parasite at the blood stage. The three-dimensional structure of the C-terminal catalytic domain of PfCCT(581-775) solved in the laboratory (Guca et al.) shows very low enzymatic activity.In the second part of this thesis work, we produced different constructs of the C-terminal catalytic domain of PfCCT encompassing the amino acids: 581-795, 581-787, 581-779 and 581-772 with the aim of optimising both the crystallization and the activity of the protein fragments. After the production and purification steps of these different constructs, activity studies allowed the identification of the amino acid deletion respons ible for the loss of activity. This work will serve as a basis for the identification of new active and crystallizable constructs. In the third part, we performed different screens of low and very low molecular weight molecules in order to select ligands for PfCCT. Several molecules belonging to different chemical families and capable of binding to the phosphocholine site and/or inhibiting PfCCT were identified. The screening of very low molecular weight molecules by crystallography led to the resolution of 23 structures of PfCCT-ligand complexes whose coordinates were deposited in the Protein Data Bank. The overall screening results provide crucial insights for the rational design of the fragment approach and the validation of the phosphocholine pocket of the active site as druggable
Biochemical and cellular characterization of key enzymes of Plasmodium falciparum phospholipid metabolism
No full textLe développement du parasite Plasmodium falciparum, responsable du paludisme, nécessite la synthèse de phospholipides et plus particulièrement de phosphatidylcholine (PC) et phosphaditylethanolamine (PE) qui représentent environ 85% de la totalité des phospholidipes du parasite. Leur synthèse s'effectue principalement par les voies métaboliques de novo, voies de Kennedy, en trois étapes enzymatiques. Les enzymes CTP: phosphoethanolamine cytidylyltransferase (ECT) et CTP: phosphocholine cytidylyltransferase (CCT) catalysent les étapes limitantes des deux voies de biosynthèse de la PE et de la PC, respectivement. Ces deux enzymes sont essentielles à la survie du parasite murin, P. berghei et représentent ainsi des cibles thérapeutiques potentielles. La PfCCT est constituée de deux domaines cytidylyltranférases (CT) répétés alors que l'enzyme homologue chez l'homme est composée d'un seul domaine. En revanche, pour la ECT, la présence de deux domaines CT est retrouvée chez toutes les espèces mais les analyses de séquences et de structures ont montré que des résidus importants du site catalytique liant le substrat n'étaient pas conservés dans le domaine CT C-terminal de la PfECT. Ce travail a eu pour but de déterminer les propriétés enzymatiques et les caractéristiques cellulaires de la PfECT et de la PfCCT. Les paramètres cinétiques de ces enzymes ont été quantifiés in vitro à l'aide protéines recombinantes ainsi que sur les enzymes endogènes à l'aide d'extraits parasitaires. Grâce à l'utilisation de protéines recombinantes ponctuellement mutées, nous avons montré que seul le domaine CT N-terminal de la PfECT est catalytiquement actif. Chez P. falciparum, la PfECT et la PfCCT sont exprimées tout au long du cycle intra-érythrocytaire du parasite. La PfECT est présente dans la fraction soluble du parasite alors que la PfCCT apparait aussi bien dans la fraction soluble qu'insoluble. Des expériences d'immunofluorescence ont montré que la PfECT est cytosolique. L'ensemble des résultats présentés apportent un éclairage important sur les fonctions et les propriétés de ces deux cibles potentielles et constituent les premières étapes indispensables à l'élaboration d'une approche thérapeutique.Phospholipids are essential for the growth and development of Plasmodium falciparum malaria parasite. Phosphatidylcholine (PC) and phosphatidylethanolamine (PE) are its major structural phospholipids. This study focused on CTP: phosphoethanolamine cytidylyltransferase (ECT) and CTP: phosphocholine cytidylyltransferase (CCT) that catalyzes the rate-limiting steps of the de novo Kennedy pathways for PE and PC biosynthesis respectively. Both ECT and CCT are essential in the rodent malaria parasite P. berghei and constitute potential chemotherapeutic targets to fight against malaria. PfCCT consists of two very similar cytidylyltransferase (CT) domains whereas the human enzyme consists of only one CT domain. The presence of two CT domains in ECT seems to be widespread in all the organisms. Sequence and structural analysis showed that the C-terminal CT domain of ECT lacks key residues in the substrate binding motif. This study aimed at unravelling the enzymatic properties and cellular characteristics of PfECT and PfCCT enzymes. In addition, these studies addressed the key question if C-terminal CT domain of PfECT is catalytically active. Kinetic parameters of the enzymes were evaluated in vitro on native proteins as well as on recombinant proteins, the latter being produced in bacterial system. Cellular characterisation studies using polyclonal antisera showed that PfECT and PfCCT are expressed throughout the intra-erythrocytic life cycle of the parasite. PfECT is found mainly in soluble form in the parasite while PfCCT is present in soluble as well as insoluble forms in the parasite. Furthermore, immunofluorescence studies for PfECT revealed that it is mainly cytosolic. To assess the contribution of each CT domain to overall PfECT enzyme activity, recombinant PfECT mutants were generated by site-directed mutagenesis. Kinetic studies on these mutants indicated that the N-terminal CT domain was the only active domain of PfECT. Collectively, these results bring new insights into the kinetic and cellular properties of the enzymes and will pave the way in developing a future pharmacological approach
Caractérisations biochimique et cellulaire de la choline et de l éthanolamine kinase de Plasmodium falciparum
No full textLe développement de Plasmodium falciparum, agent du paludisme, est indissociable d une production considérable de membranes par le parasite. Les biosynthèses de phosphatidylcholine (PC) et de phosphatidyléthanolamine (PE), principaux constituants de ces membranes, sont essentielles à la croissance du parasite au cours de son développement intraérythrocytaire, phase durant laquelle sont observés les symptômes cliniques de la maladie. Les travaux de cette thèse ont eu pour objectifs la caractérisation des premières enzymes des voies de synthèse de novo de PC et de PE chez P. falciparum, soit respectivement la choline kinase (PfCK) et l éthanolamine kinase (PfEK). Les paramètres cinétiques ont été déterminés sur les kinases recombinantes exprimées en système bactérien puis purifiées. La PfCK et la PfEK paraissent spécifiques de leur substrat respectif, à savoir la choline et l éthanolamine. Nous avons étudié l inhibition des kinases recombinantes par des composés analogues de substrat et par une nouvelle molécule antipaludique T3/SAR97276A, actuellement en essais cliniques de phase II. Chacune de ces enzymes est inhibée spécifiquement par l analogue de substrat. D autre part, T3, bien que conçu comme un analogue de choline, apparaît être un inhibiteur compétitif de la PfCK mais également de la PfEK. Nous avons immunisé des souris avec les protéines recombinantes purifiées. Au moyen des séra polyclonaux murins reconnaissant spécifiquement la PfCK ou la PfEK, nous avons montré que ces kinases sont localisées dans le cytoplasme de P. falciparum et sont exprimées à tous les stades du cycle érythrocytaire de ce parasite, particulièrement au stade matureMONTPELLIER-BU Pharmacie (341722105) / SudocSudocFranceF
The Solution Structure of an AlcR-DNA Complex Sheds Light onto the Unique Tight and Monomeric DNA Binding of a Zn2Cys6 Protein
No full textAbstractBackground: In Aspergillus nidulans, the transcription activator AlcR mediates specific induction of a number of the genes of the alc cluster. This cluster includes genes involved in the oxidation of ethanol and other alcohols to acetate. The pattern of binding and of transactivation of AlcR is unique within the Zn2Cys6 family. The structural bases for these specificities have not been analyzed at the atomic level until now.Results: We have used NMR spectroscopy and restrained molecular dynamics to determine a set of structures of the AlcR DNA binding domain [AlcR(1–60)] in complex with a 10-mer DNA duplex. Analysis of the structures reveals specific interactions between AlcR and DNA common to the other known zinc clusters. In addition, the involvement of the N-terminal residues upstream of the AlcR zinc cluster in DNA binding is clearly highlighted, and the pivotal role of R6 is confirmed. Totally unprecedented specific and nonspecific contacts of two additional regions of the protein with the DNA are demonstrated. The differences with the available crystallographic structures of other zinc binuclear cluster proteins-DNA complexes are analyzed.Conclusions: The structures of the AlcR(1–60)-DNA complex provide the basis for a better understanding of some of the specificities of the AlcR system: the DNA consensus recognition sequence—usually the triplet CGG—is extended to five base pairs, AlcR acts as a monomer, and additional contacts inside and outside the DNA binding domain in the major and minor groove are observed. These extensive interactions stabilize the AlcR monomer to its cognate DNA site
Comprehensive Analysis of Parasite Biology: From Metabolism to Drug Discovery
No full textInternational audienc
Les différentes réceptions de l’art amérindien contemporain
No full textCet article ne s’adresse pas aux
spécialistes en art et encore moins à
ceux de l’art contemporain amérindien
puisqu’il postule que ces derniers ne sont
que peu nombreux. Comme son titre
l’annonce, ce sont les différents modes
de réception qui sont abordés. Découpés
en trois zones géographiques et linguistiques,
une différenciation est faite entre
le monde anglophone (sous-entendu
principalement nord-américain, y compris
le Québec anglophone), la France et
le Québec francophone. Trois postulats
sont discutés, se rapportant à ces trois
zones, dans l’ordre : la ghettoïsation, la
fascination et l’ignorance. Une tentative
de définir l’art contemporain amérindien
est faite d’entrée de jeu, mais c’est sur les
stéréotypes rattachés au mot « indien » qu’un regard plus détaillé est posé. Le
refus d’aborder le travail des artistes d’un
point de vue plus théorique et analytique
s’accorde avec ce qui découle des trois
postulats : la situation de l’art contemporain
amérindien ne lui permet pas d’être
regardée conformément aux travaux des
artistes car le monde (de l’art) occidental,
lui, n’a pas encore dépassé un certain
nombre de stéréotypes.The reader does not need to be a specialist
in Native Contemporary Art (NCA); in
fact the article states that specialists are
very few. As mentioned in its title, the article
will focus on diverse ways to look at NCA,
depending on the audience’s cultural ownership.
Three specific zones are highlighted
based on territorial and linguistic characteristics: anglophone world (mainly North
America including English speaking Quebec),
French speaking Québec and France. Three
statements are discussed in relation to the
three zones, in logical order : ghettoïsation,
ignorance and fascination. At the beginning
of the text, a definition of NCA is sketched,
although the main focus is on stereotypes
associated with the noun “Indian”. Because
of her three statements, the author resists
the temptation to discuss NCA in a more
theoretical and analytical way. It would be
nonsense to detail and analyze art pieces
when the audience is not yet ready, when said
audience has not yet overcome the cultural
stereotypes which inevitably avoid any receptivity.
Meanwhile, the text recognizes the
value of Native Contemporary Artists and
hopes the readers curiosity will be challenged
- …
