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The ELISPOT assay for the detection and enumeration of 00 7 immunoglobulin-, antibody-, and/or cytokine- secreting cells
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Immunomodulation by diet : individual differences in sensitivity in layer hens
No full textEnhancing relevant immunity of production animals to achieve more robust animals is receiving more and more attention. Several epidemics have hit production animals recently and with devastating consequences, but enhancing diseases resistance increasingly provides new opportunities. Furthermore, welfare and health of production animals is becoming a more and more consumer driven topic. Several routes are being used to approach the possibility of enhancing immunity such as selective breeding, enriched and altered housing conditions, vaccination programs, diet supplementation with immune stimulating components, and other management procedures. Disease susceptibility has been shown to be related to stress reactivity, which in turn is related to differences in HPA axis reactivity. Interestingly, independent of selection criteria used, the extremes of various selection procedures result in a recurrent dichotomy in HPA axis reactivity, either being hyperresponsive or hyporesponsive to stress. Animals with a hyperresponsive HPA axis show greater environmental sensitivity, while the hyporeactive animals are more intrinsically regulated. Often, research on immunomodulation is performed with compromised animals and/or exaggerated supplementation of dietary components in one generation of animals, but epigenetics by definition seems to be the mechanism for mothers to prepare their offspring for the environment they will be born into. Enhancing immunity through normal diet in uncompromised animals is rarely investigated, let alone over generations. In this thesis the aim was to induce immunomodulation through diet in selection lines of chicken that have previously been selected on their antibody response to sheep red blood cells over two generations of chicken. First, potential HPA axis differences were examined in these selection lines to establish their environmental sensitivity, whereafter immunomodulation through normal diet was investigated in humoral and cellular parameters of immunity. As humoral immunocompentence was not easily modulated, an immune trigger was used to detect potential differences in humoral reactivity. The selection lines showed differential sensitivity to immunomodulation by diet in both generations, suggesting that adaptation to environmental factors may be a line-specific (genetically based) process, with differential neuroendocrine regulation. Most interestingly, the second generation showed effects of the diets in all the selection lines, albeit in different manners. It is concluded that normal diet can cause immunomodulation, mainly in animals with hyper HPA axis reactivity, and that introducing such practices may be more beneficial when mothers are treated, as all offspring showed immunomodulation, irrespective of selection line. While genetic background and/or epigenetic processes on neuroendocrine and immune regulation of the individual form the framework wherein individual immunomodulation by diet can take place, environmental conditions determine if the modulation is beneficial or not. <br/
Pathogenetics mechanisms in celiac disease
No full textLa tesi di Dottorato, svolta presso il Dipartimento di Farmacologia Sperimentale, redatta in lingua inglese ed intitolata “PATHOGENETICS MECHANISMS IN CELIAC DISEASE” ha riguardato lo studio dei meccanismi molecolari coinvolti nella patogenesi della Celiachia.
I risultati della ricerca, condotta nel primo anno, ci hanno permesso di dimostrare che il fattore di trascrizione nuclear factor-B (NF-B) è attivato nella mucosa intestinale di pazienti celiaci indicando un ruolo per IB- nel regolare la persistente attivazione di NF-B in questa patologia. Le cellule epiteliali delle cripte e le cellule mononucleate della lamina propria di pazienti celiaci risultavano positive per p65 rispetto ai pazienti celiaci in remissione e di controllo. Inoltre, l'attivazione di NF-B era correlata con l'espressione della monossido d’azoto sintasi inducibile (iNOS) e della cicloossigenasi-2 (COX-2), enzimi che catalizzano la sintesi di monossido d’azoto (NO) e prostaglandine pro-infiammatorie.
Queste osservazioni potrebbero essere di una certa rilevanza clinica poichè una sostenuta attivazione di NF-B nella mucosa intestinale di pazienti celiaci conduce ad una prolungata induzione dell'espressione di geni pro-infiammatori perpetuando in tal modo il processo infiammatorio cronico.
I risultati della ricerca, condotta nel secondo e terzo anno, ci hanno permesso di approfondire alcuni meccanismi dell’interazione diretta della gliadina (un peptide del glutine) con i macrofagi murini RAW 264.7 stimolati con IFN-. In particolare, la gliadina in associazione con IFN- incrementava la produzione di NO, l’espressione della iNOS, l’attività di legame dei fattori di trascrizione NF-B, IRF-1 (interferon regulatory factor-1) e STAT-1 (signal transducer and activator of transcription-1 al DNA rispetto all’IFN- da solo. Questi effetti erano inibiti significativamente da pirrolidina ditiocarbammato, genisteina e tirfostina B42, rispettivamente, inibitori dell’attivazione di NF-B, IRF-1 e STAT-1. Approfondendo questi studi, è stato possibile accertare che la gliadina era in grado di aumentare i livelli di mRNA e l’attività del promotore del gene della iNOS nei macrofagi RAW 264.7 stimolati con IFN-per 1, 6 e 24 ore Questi effetti erano inibiti significativamente da genisteina e tirfostina B42 a 1 ora e da pirrolidina ditiocarbammato a 6 e 24 ore. E’ interessante osservare che le cinetiche di inibizione dell’espressione del gene della iNOS da parte di pirrolidina ditiocarbammato, genisteina e tirfostina B42 erano correlate con l’induzione dei livelli di mRNA dei fattori di trascrizione NF-B/p65, IRF-1 e STAT-1.
Questi risultati suggeriscono che la gliadina può modulare l’espressione del gene della iNOS come co-segnale con l’IFN- attraverso IRF-1 e STAT-1 nelle fasi precoci e NF-B nelle fasi tardive dell’induzione.
In conclusione, le nostre osservazioni possono contribuire ad una maggiore comprensione dei meccanismi molecolari della patogenesi della celiachia delineando nuove vie per il trattamento di questo disordine
