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抗原特異的T細胞のクロノタイプ解析を利用した新規マイナー組織適合抗原の同定
Get PDF平成14年末にドナーリンパ球輸注(DLI)を行った慢性骨髄性白血病患者について、抗原特異的なT細胞の増殖の有無を調べたところ、これまでの4例と同様に、DLI後8週の末梢血においてBV11陽性T細胞クローンの一過性増殖が認められた。このT細胞はCD4陽性であった。このT細胞がDLIによって患者に移入されたものか、あるいは元々患者の流血中に存在していたものかを明らかにするため、T細胞クロノタイプ特異的なreal-time PCRを用いてT細胞の定量を試みている。一方、この患者のBV11陽性T細胞クローンについては、類似のクロノタイプを持つ既知のT細胞クローンを見出し得なかったため、以前の研究で同定した多型接着分子がマイナー組織適合抗原(minor histocompatibility antigen, mHa)として機能するか否かを検討した。平成14年度の研究により、多型接着分子の一つCD62LがGVHD方向に不一致である場合に限り、白血病の再発率が有意に低下することが明らかとなった。症例を追加した本年度の研究により、HLA-A24陽性例のみを対象とした解析でも同様の結果が得られた。そこで、CD62Lの多型部位を含む9種類のペプチドを作成し、GVHD方向に不一致を示すHLA-A24陽性患者5例の移植後T細胞を、ペプチドでパルスした樹状細泡で刺激したところ、一部のペプチドがインターフェロン産生を誘導した。また、そのペプチドの一つCD62L^を用いて骨髄T細胞を繰り返し刺激したところ、ペプチド特異的な細胞傷害活性を有するCD8陽性T細胞株が樹立できた。このペプチドとHLA-A24によるテトラマーを作製したところ、ペプチド特異的なCD8陽性T細胞の中にテトラマー陽性細胞が検出された。以上から、CD62L^はHLA-24拘束性のmHaとして機能している可能性が示された。研究課題/領域番号:14657243, 研究期間(年度):2002 – 2003出典：「抗原特異的T細胞のクロノタイプ解析を利用した新規マイナー組織適合抗原の同定」研究成果報告書 課題番号14657243
（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所））
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再生不良性貧血に対するサイクロスポリンの作用機序の解明
Get PDF研究課題/領域番号:03771854, 研究期間(年度):1991出典：研究課題「再生不良性貧血に対するサイクロスポリンの作用機序の解明」課題番号03771854
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再生不良性貧血患者の造血傷害性T細胞が認識するHLA-DR2結合ペプチドの同定
Get PDF予定していた造血傷害性T細胞クローンの認識するペプチドの同定は,T細胞クローンの維持が困難となったため,方針を変更し,HLA-DRB1^*501陽性のシクロスポリン(CyA)依存性再生不良性貧血(再不貧)の骨髄で優勢に増殖しているT細胞クロノタイプと,再不貧患者末梢血リンパ球におけるheat shock protein (hsp)70の発現について検討した.輸血歴のないCyA依存性の2症例において,クローン性増殖を示すT細胞のVβファミリーのうち,両例に共通していたのはVβ15のみであった.そこで輸血既往のある2例を加えた4症例について,骨髄Vβ15cDNAのCDR3領域のアミノ酸配列を決定したところ,2例において類似のモチーフ(DLTXGP)を持つクローンがそれぞれ全体の72%,18%に検出された.したがって,免疫機序による再不貧では,このような共通のCDR3モチーフに対応した抗原が発症に関与している可能性が示唆された.一方,造血傷害性T細胞クローンの対応抗原の検索過程で,CyA反応性の患者の末梢血単核細胞では,hsp70が容易に誘導されるこが観察された.そこで,hsp70の発現亢進が再不貧の免疫機序と関係しているか否かを明らかにするため,再不貧を含む血液疾患患者の末梢血リンパ球中のhsp70の発現をフローサイトメトリーとウェスタンブロッティングを用いて検討した.in vitroでの熱ショックによるリンパ球中のhsp70の誘導は,健常人,骨髄異形成症候群,CyA無効の再不貧患者などでは検出されなかったが,CyA反応性の再不貧患者では全例のリンパ球に検出された.hsp70の発現はT細胞,非T細胞の両者に認められたがT細胞に優位であった.したがって,T細胞にhsp70の発現をもたらすような抗原刺激が再不貧発症の免疫機序に関与していることが示唆された.研究課題/領域番号:08671223, 研究期間(年度):1996出典：研究課題「再生不良性貧血患者の造血傷害性T細胞が認識するHLA-DR2結合ペプチドの同定」課題番号08671223
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Going Beyond Counting First Authors in Author Co-citation Analysis
Get PDFThe present study examines one of the fundamental aspects of author co-citation analysis (ACA) - the way co-citation
counts are defined. Co-citation counting provides the data on which all subsequent statistical analyses and mappings
are based, and we compare ACA results based on two different types of co-citation counting - the traditional type that
only counts the first one among a cited work's authors on the one hand and a non-traditional type that takes into
account the first 5 authors of a cited work on the other hand. Results indicate that the picture produced through this non-traditional author co-citation counting contains more coherent author groups and is therefore considerably clearer. However, this picture represents fewer specialties in the research field being studied than that produced through the traditional first-author co-citation counting when the same number of top-ranked authors is selected and analyzed. Reasons for these effects are discussed
造血障害性Tリンパ球の標的となる造血幹細胞抗原の同定
Get PDF研究課題/領域番号:04772080, 研究期間(年度):1992出典：研究課題「造血障害性Tリンパ球の標的となる造血幹細胞抗原の同定」課題番号04772080
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自己抗体による免疫担当細胞からのサイトカイン分泌増強を介した骨髄不全病態の解析
Get PDF平成20年度までの研究により、骨髄不全患者血清から精製した抗モエシンポリクローナル抗体が、単球が発現しているモエシンに結合し、ERK1/2を活性化することによってTNF-αの分泌を誘導することが明らかになった。この結果から、免疫担当細胞が発現しているモエシン蛋白が造血調節に関わっている可能性が示唆された。そこで、モエシン分子がin vivo造血にどのように関与しているかを明らかにするため、大阪大学月田研究室から供与されたモエシンノックアウト(KO)マウス胚を用いてこのマウスを生育させ、まず造血状態を評価した。その結果、野生型マウス(n=9)では白血球数が13453±4114/μLであったのに対し、モエシンKOマウス(n=10)では白血球数が3965±1565/μLと、野生型マウスに比べて有意に低値P<0.05)であった。モエシンKOマウスにおける白血球減少のメカニズムについては現在検討中である。また、このKOマウスを精製マウスモエシン蛋白で免疫することにより抗マウスモエシンモノクローナル抗体を作製し、抗モエシン抗体が野生型マウスのin vivo造血に及ぼす影響を検討する予定である。
また、肝炎後再生不良性貧血(肝炎後再不貧)における自己抗原を同定するため、肝炎後再不貧患者血清中の自己抗体を、肝細胞株Huh7の培養上清由来蛋白とウェスタンブロッティングを用いてスクリーニングした。その結果、肝炎後再不貧患者7例中4例(57%)の患者血清IgGが培養上清中の約70kDaの蛋白に対して反応した。そこで、この70kDaバンドを切り出して質量分析にかけたところ、この蛋白はHSP72であることが判明した。精製HSP72蛋白質とウェスタンブロッティングを用いて他の患者血清中の抗HSP72抗体を調べたところ、肝炎後再不貧12例中8例(67%)が陽性であったのに対し、自己免疫性肝炎4例、BもしくはC型肝炎5例ではすべて陰性であり、健常者29例中2例の陽性率は高々7%であった。以上の結果から、HSP72は肝炎後再不貧における自己抗原の一つと考えられた。研究課題/領域番号:19659243, 研究期間(年度):2007 – 2008出典：研究課題「自己抗体による免疫担当細胞からのサイトカイン分泌増強を介した骨髄不全病態の解析」課題番号19659243
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PIG-A遺伝子変異をマーカーとしたヒト造血幹細胞動態の解明
Get PDFヒト造血幹細胞の分化経路を明らかにすうため、多数の骨髄不全症例について、多血球系統におけるCD55-CD59-CD48-血球の観察を続けた。その結果、PMH形質の血球は、症例によって異なる、限られた血球系統の組み合わせを維持しながら、年余に渡って造血を支持し続けることが明らかになった。このように長期間造血を維持するという造血幹細胞としての性質を持ちながら、限られた系統にだけしか分化できない、という矛盾を説明するため、理化学研究所(横浜)の河本宏博士、中茎隆博士との共同研究により、ヒト骨髄における造血環境のモデルを作成した。これは、ヒト骨髄組織には、赤血球系、顆粒球・単球系、Tリンパ球、Bリンパ球のそれぞれの分化だけを支持する異なろ領域がモザイク状に重なって存在しており、どの領域に造血幹細胞が位置するかによって、その幹細胞から産生され続ける血球の系統が決定されるというものである。この仮説が正しいかどうかを検証するため、各血球系統の造血の場の広さ、位置、数を変数とし、バーチャルな造血モデルを作成したところ、ある条件下では、実際に観察された16種類の異なる血球系統の組み合わせハターンに近似した血球産生ハターンを再現できることが明らかになった。この結果はまもなく投稿予定である。
このモデルを証明するためには、ヒト生体内において分化系統が限られている患者のPIG-A変異幹細胞が、免疫不全マウスでは全血球系統に分化しうることを示す必要がある。これまでの検討により、PNH形質の血球分化の系統が限られていながら、PNH型顆粒球の割合が3%を超える症例を数名同定している。今後倫理審査での承認と患者の同意が得られれば、理化学研究所(横浜)石川文彦博士との共同研究により、本検討を実施する予定である。
一方、骨髄不全患者における微少PNH型血球を検出する方法として、昨年来検討してきた、液状fluorescent-labeled inactive toxin aerolysin(FLAER)とFACSCantoを用いる新たなPNH型検出方法は、技術移管が可能なレベルまでアッセイが確立されたたため、2010年12月10日特許を出願した(特願2010-275878)。研究課題/領域番号:21659236, 研究期間(年度):2009 – 2010出典：研究課題「PIG-A遺伝子変異をマーカーとしたヒト造血幹細胞動態の解明」課題番号21659236
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抗原ペプチド/MHC分子高結合性CTLの誘導を指標とした腫瘍抗原の同定
Get PDF白血病細胞では綱胞周期調節タンパクであるCDK2,CDK4タンパクが過剰発現しており,HLA-A^*2402健常者ではCDK2,CDK4タンパク由来のCDK2_,CDK4_ペプチドに対するT細胞の末梢性トレランスが不完全であることを昨年までに確認した.
HLA一致同種造血幹細胞移植(allo-SCT)ドナーの末梢血単核細胞から,magnetic beadsを用いて分離したCD8陽性ナイーヴT細胞を,CDK2_ペプチドをパルスしたA24-T2(CDK2_-T2)とCDK4_-T2で繰り返し刺激してCDK2_ペプチド特異的CTL(CDK2_-CTL)とCDK4_-CTLを誘導した後に,CDK2とCDK4タンパクを過剰発現している患者白血病細胞と,同じ患者由来でCDK2とCDK4タンパクを過剰発現していないEpstein-Barrウイルス形質変換B細胞株(EBV-LCL),ドナー由来のEBV-LCL,ドナー骨髄単核細胞(BMMC)に対するCDK2_-CTLとCDK4_-CTLの反応性を検討した.CDK2_-CTLとCDK4_-CTLは,白血病細胞と共培養するとIFNγを放出したが,患者由来のEBV-LCL,ドナー由来のEBV-LCL, BMMCと共培養してもIFNγを放出しなかった.この結果から,健常ドナー由来のCDK2_-CTLとCDK4_-CTLは患者白血病細胞とEBV-LCL細胞でのCDK2_とCDK4_の発現量の差を認識して,患者白血病細胞のみを特異的に傷害したことが明らかとなり,健常ドナーの末梢血中には白血病細胞が過剰発現している自己抗原CDK2_,CDK4_に対する抗原ペプチド/MHC分子高結合性CTLが存在していると考えられた.従ってallo-SCT後CDK2_及びCDK4_ペプチドワクチンを患者に投与して抗原ペプチド/MHC分子高結合性CTLを効率よく増殖させることが出来れば,移植片対白血病効果を誘導できる可能性が示唆された.さらにこの可能性を裏付けるために,CDK2_/HLA-A24マルチマー,CDK4_/HLA-A24マルチマーを用いて,allo-SCTを受けた患者末梢血中のCDK2_-CTLとCDK4_-CTLの有無と移植片対白血病効果との関連性を検討した.研究課題/領域番号:16659252, 研究期間(年度):2004 – 2005出典：「抗原ペプチド/MHC分子高結合性CTLの誘導を指標とした腫瘍抗原の同定」研究成果報告書 課題番号16659252
（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所））
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Variations on the Author
Get PDF“Variations on the Author” discusses two of Eduardo Coutinho’s recent films (Um Dia na Vida, from 2010, and Últimas Conversas, posthumously released in 2015) and their contribution to the general question of documentary authorship. The director’s filmography is characterized by a consistent yet self-effacing form of authorial self-inscription: Coutinho often features as an interviewer that rather than express opinions propels discourses; an interviewer that is good at listening. This mode of self-inscription characterizes him as an author who is not expressive but who is nonetheless markedly present on the screen. In Um Dia na Vida, however, Coutinho is completely absent form the image, while Últimas Conversas, on the contrary, includes a confessional prologue that moves the director from the margins to the center of his films. This article examines the ways in which these works stand out in the filmography of a director who offers new insights into the notion of cinematic authorship
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