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メラトニンの網膜における神経保護作用の検討
Get PDF1.ラット網膜内メラトニン含量の測定
ラット網膜のメラトニン含量をHPLCおよび電気化学検出器(東ソー,EC-8020)を用いて測定した。Eicompak MA-5ODSカラムを使用して25%メタノール,25℃の条件で標準物質を流し,100pgまでメラトニンを検出することができた。ブラウンノルウエーラットを用いて網膜内メラトニン含量が最大となる暗期間の中間時点(午前2時)において暗赤色光下で網膜を摘出しメラトニン含量の測定を行ったが,検出限界以下であった。5mg/kgのメラトニンの腹腔内投与20分後の網膜内メラトニン含量は約15ng/mg proteinであった。
2.メラトニン合成酵素(serotonin-N-acetyltransferase,NAT)のmRNA量の測定
ラットのNATcDNA塩基配列から1対のプライマーを設定し(5'-ATCTCAGTCTCGGGTACCTG-3'および3'TGTCACCGACGACTGGGTTC-5'),ラット網膜から抽出したpolyA-RNAを鋳型としてRT-PCRを行った。目的の462塩基対のDNA断片が増幅され,RT-PCR産物の直接DNAシークエンスを行いNATcDNAに一致することが確認された。
3.ラット網膜光障害モデルの作成とメラトニン腹腔内投与の神経保護効果
ケタラールおよびセラクタールによる全身麻酔下でラットの片眼に光ファイバーにより30分間光照射(角膜面照度20,000lx以上)を行った。1週間後,眼底中央に円形の網膜変性巣が観察され,網膜電図のa,b波の減弱傾向がみられた。光照射10分前に5mg/kgのメラトニンの腹腔内投与を行った場合,網膜変性は明らかに抑制された。研究課題/領域番号:10770923, 研究期間(年度):1998 – 1999出典：「メラトニンの網膜における神経保護作用の検討」研究成果報告書 課題番号10770923
（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所））
（https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-10770923/)を加工して作成金沢大学附属病院research repor
網膜神経節細胞特異的な免疫毒素を用いた新しい緑内障モデルの確立
Get PDF免疫毒素硝子体内注入モデルの作成
アポトーシスによる細胞死を来たすリボゾーム不活性化タンパクであるSaporinと網膜神経節細胞(GC)に特異的なThy-1,に対する抗体を結合した免疫毒素(OX7-SAP)5μgをBrown Norwayラットの片眼の硝子体内に投与した。対照として抗ヒトIgG抗体10μg、抗Thy-1抗体2.5μgおよびSaporinを硝子体内投与した。
1)硝子体内投与7日後に眼球摘出し、4%パラフォルムアルデヒドで固定し、網膜の凍結切片を作成した。OX7-SAP、抗ヒトIgG抗体、抗Thy-1抗体を投与した眼には、著明な網膜障害はみられなかったが、Saporin 5μgあるいは0.5μgを投与した眼には、特に視細胞に著明な変性がみられた。Saporinが視細胞に取り込まれる際の結合タンパクの同定を試みたが困難であった。
2)抗Thy-1抗体とFITC標識による免疫染色において、OX7-SAP投与眼においてのみ網膜神経節細胞層(NFL)の蛍光の減弱がみられた。
3)硝子体内投与1ヶ月後、走査レーザー検眼鏡(SLO)にて投与眼のNFLの反射の減弱がみられた。1)、2)、3)からOX7-SAPのラット硝子体内投与によって、GC選択的な網膜障害モデルを作成できる可能性が示された。
他のGC障害モデルとの比較
慢性高眼圧モデルは、トノペンなど種々の方法を試したが、眼圧測定の信頼性が低かったため評価できなかった。網膜虚血再灌流モデルでは、1週後にSLOにてびまん性で顕著なNFLの脱落がみられた。視神経挫滅モデルでは、1週後にはSLOにて明らかなNFLの変化はみられなかったが、2週目以降進行性でびまん性のNFLの脱落がみられた。今後、SLOなどを用いて免疫毒素硝子体内注入モデルと他のGC障害モデルでのNFLやGCの障害過程やそれに対する神経保護の可能性を明らかにしていく予定である。研究課題/領域番号:14770945, 研究期間(年度):2002-2003出典：「網膜神経節細胞特異的な免疫毒素を用いた新しい緑内障モデルの確立」研究成果報告書 課題番号14770945
（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所））
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ウサギ硝子体手術モデルにおける抗酸化剤による網膜神経保護の検討
Get PDFウサギ硝子体手術光障害モデルの作成
塩酸ケタミンおよび塩酸キシラジンによる全身麻酔下で有色家兎の片眼に手術用顕微鏡下で潅流ポートを縫着(背側の角膜輪部から約3mm後方)し,眼内潅流液(オペガードMA)による静水圧(トノペンで測定)を負荷した。別にポートを作成し、硝子体切除を施行せずに眼内照明用光ファイバーで種々の条件で眼底に光照射を行った。光障害は倒像鏡、フルオレセインおよびインドシアニングリーン蛍光眼底造影にて観察した。手術用光源(キセノン、ほぼ可視光領域のみ透過)の出力(ファイバー先端と照度計受光面との距離と照度で推定)がより大きい場合、あるいは照射時間がより長い場合に光障害が強くなった。また、同一の照射条件でも眼底中央部には周辺部と比べて強い光障害がみられた。これには光受容細胞密度が眼底中央部でより高いことが関係すると考えられた。眼内潅流液による静水圧を変化させた場合、通常の眼圧(15mmHg)と比べて高眼圧(40mmHg)において強い光障害がみられた。汎用レーザー血流計を用いて網膜近傍で同一部位(網膜血管の存在しない光照射予定部位)の眼底血流を測定したところ40mmHgでは15mmHgに比べて著明に眼底血流が減少した。したがって脈絡膜血流が通常より減少した場合に豊富な脈絡膜血流による組織冷却効果が低下し光障害が強くなると考えられた。
ウサギ硝子体手術光障害モデルにおける光障害の抑制
有色家兎の片眼に上記のように光障害を眼底の一ヶ所に作成し、薬剤を腹腔内投与し30分後に同一条件で同一眼の他の部位に光障害を作成した。メラトニンの溶媒(10%エタノール、2ml)の投与では同程度の光障害がみられたが、メラトニン(50mg/kg)の投与では光障害は著明に抑制された。メラトニン投与前後で眼底血流を測定したところほとんど変化はみられなかった。また、α-トコフェロール(200mg/kg)の投与によっても光障害は著明に抑制された。研究課題/領域番号:12771016, 研究期間(年度):2000-2001出典：「ウサギ硝子体手術モデルにおける抗酸化剤による網膜神経保護の検討」研究成果報告書 課題番号 12771016（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所））
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Going Beyond Counting First Authors in Author Co-citation Analysis
Get PDFThe present study examines one of the fundamental aspects of author co-citation analysis (ACA) - the way co-citation
counts are defined. Co-citation counting provides the data on which all subsequent statistical analyses and mappings
are based, and we compare ACA results based on two different types of co-citation counting - the traditional type that
only counts the first one among a cited work's authors on the one hand and a non-traditional type that takes into
account the first 5 authors of a cited work on the other hand. Results indicate that the picture produced through this non-traditional author co-citation counting contains more coherent author groups and is therefore considerably clearer. However, this picture represents fewer specialties in the research field being studied than that produced through the traditional first-author co-citation counting when the same number of top-ranked authors is selected and analyzed. Reasons for these effects are discussed
In vivo quantitative evaluation of optic nerve damage in animal models related to glaucoma by a ultrahigh-resolution optical coherence tomography
Get PDF我々が開発したラット専用光干渉断層計によってラット視神経挫滅モデルの網膜神経線維層厚の経時的変化を調べた。その結果、光干渉断層計による計測値の再現性は良好であり、組織切片での計測値と良好な相関がみられた。さらに、10回加算平均と網膜層厚自動計測プログラムを導入し、エンドセリン硝子体内投与モデルにおいて投与後に網膜内層厚が減少しそれに続いて網膜神経線維層厚が減少することを明らかにした。We examined the changes of the thickness of retinal nerve fiber layer in rat eyes after optic nerve crush by our optical coherence tomography which was optimized to rat eyes. The thickness value measured by the optical coherence tomography showed good repeatability and reproducibility, and was well correlated with that measured by histology. After introduction of multiple scan averaging and an auto-segmentation program, we disclosed that the thickness of the retinal nerve fiber layer decreases following the decrease in the thickness of the inner retinal layer in rat eyes after an intravitreal injection of endothelin-1.出典：研究課題「超高解像度光干渉断層計による緑内障関連動物モデルの視神経傷害の生体内定量的評価」課題番号20592035
（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所））
（https://kaken.nii.ac.jp/report/KAKENHI-PROJECT-20592035/20592035seika/）を加工して作成金沢大学附属病院眼科research repor
In vivo imaging and quantitative evaluation of rat retinal ganglion cells and retinal nerve fiber layer by scanning laser ophthalmoscopy
Get PDF走査レーザー検眼鏡(SLO)によるラット網膜神経線維層(RNFL)の観察と定量性の検討
Brown NorwayラットのRNFLは、SLOによって明瞭に観察された。SLOの共焦点口径を最小としてRNFLが観察される屈折値の幅(ΔF)を決定した。視神経挫滅モデル(片眼の視神経を眼窩内で30秒間挫滅)では、挫滅後2週目からΔFは有意に減少し、虚血再灌流モデル(片眼の前房に45分間160mmHgを負荷)では虚血後1週目からΔFは有意に減少した。対照眼のΔFは不変であった。また、両モデルにおいてSLO撮影後に網膜組織切片を作成しRNFLの厚み(NFLT)を定量したところ、SLOでのΔFと網膜組織切片でのNFLTは有意に相関した。したがって、SLOはラットRNFLを生体内で定量的に観察するのに有用である。
SLOによるラツト網膜神経節細胞体(RGC)の観察と定量性の検討
上丘に注入されたDiA(4-(4-(dihexadecylamino)styryl)-N-methylpyridinium iodine)によって逆行染色されたRGCは、SLO(フルオレセイン蛍光眼底造影用フィルター使用)によって明瞭に観察された。1眼1ヶ所の任意の設定部位においてSLOにて蛍光(+)細胞数を経時的に計測したところ、視神経挫滅後1週目から有意に細胞数は減少した。視神経挫滅前のSLO画像を白黒反転し、挫滅後のSLO画像と重ね合わせることによって新たに生じた蛍光点は、isolectin B4蛍光染色によってミクログリアに一致することが判明した。したがって、視神経挫滅後にSLOにおいて新たに生じた蛍光点を差し引いて蛍光(+)細胞数を定量したところ、網膜伸展標本でのRGC数とよく一致した。したがって、SLOはラットRGCを生体内で定量的に観察するのに有用である。1) In vivo imaging and quantitative evaluation of rat retinal nerve fiber layer (RNFL) by scanning laser ophthalmoscopy (SLO)
Methods: Fundus images of both eyes were recorded over time by SLO using an argon blue laser (488 nm) in unilateral optic nerve crush or ischemia-reperfusion model. The focused plane was sequentially moved by changing the refractive values in the SLO setting. The range of refractive values (AF) in which RNFL reflex was clearly observed was determined. The RNFL thickness in retinal sections was measured and compared to the DF value. Results: The QF value was unchanged 1 week after the crush, but then decreased significantly after the second week, while it decreased significantly from the 1st week after the ischemia-reperfusion. The OF value correlated significantly with the histologically determined RNFL thickness.
2) In vivo imaging and counting of rat retinal ganglion cells (RGCs) by SLO
Methods: RGCs of Brown Norway rats were retrogradely labeled bilaterally with the fluorescent dye, 4-(4-(dihexadecylamino)styryl)-N-methylpyridinium iodine (DiA). RGCs were imaged in vivo with a SLO using an argon blue laser and optical filter sets for fluorescein angiography, before and 1, 2, and 4 weeks after the crush. Fluorescent cells were also counted on retinal flatmounts. An image overlay analysis was performed to check cell positions in the SLO images over time. Lectin histochemical analysis was performed to determine the relationship of microglia to the newly emerged DiA fluorescence detected by image overlay analysis after the optic nerve crush. Results: Fluorescent RGCs were visible in vivo by SLO. RGC survival decreased gradually after the crush. Newly emerged DiA fluorescence detected by image overlay analysis corresponded to fluorescent cells morphologically different from RGCs in the retinal flatmount and was colocalized mostly with lectin-stained microglial processes. RGC counts by SLO were comparable to those by retinal flatmounts.
3) Conclusions: The SLO is useful for in vivo imaging and quantitative evaluation of rat RNFL and RGCs, and therefore may be a valuable tool for monitoring RNFL and RGC changes over time in various rat models of RGC damage.研究課題/領域番号:17591825, 研究期間(年度):2005-2006出典：「神経保護評価に向けた網膜神経節細胞の細胞体と軸索の生体内定量的観察法の確立」研究成果報告書 課題番号17591825
（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所））
（https://kaken.nii.ac.jp/report/KAKENHI-PROJECT-17591825/175918252006kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/)を加工して作成research repor
Analysis of structural changes in rat retinal layers by optical coherence tomography in glaucoma-related models
Get PDFラット専用光干渉断層計（OCT）がエンドセリン(ET-1)硝子体内注入モデルでの網膜各層の構造的変化の定量的評価と薬物による神経保護効果の判定に有用であるかを検討した。網膜障害を惹起する最小ET-1量は20 pmolであり、OCTによる網膜内層厚が網膜神経節細胞傷害をよく反映した。20 pmol ET-1による網膜障害に対するタフルプロスト1日１回点眼の神経保護効果を検討した結果、タフルプロストによりOCTでの網膜神経線維層厚、網膜内層厚および網膜伸展標本での網膜神経節細胞数の減少が有意に抑制された。我々のOCTがラット緑内障関連モデルにおける神経保護効果の検討に有用であることが示された。We examined whether our optical coherence tomography (OCT) for rat eyes is useful for quantitative evaluation of structural changes in the retinal layers in a model with intravitreal injection of endothelin-1 (ET-1) and for evaluation of neuroprotective effects of drugs. We found that the minimum dose of ET-1 to cause retinal injuries was 20 pmol, and that the thickness of the inner retinal layer was well correlated with the retinal ganglion cell loss. We further examined the effects of topical tafluprost applied once daily on the retinal injuries by 20 pmol ET-1 in a double blinded manner. Topical tafluprost reduced the thinning of the retinal nerve fiber layer and the inner retinal layer by OCT and retinal ganglion cell loss. These results indicate that our OCT system is useful for evaluation of neuroprotective effects in rat glaucoma –related models.研究課題/領域番号:23592557, 研究期間(年度):2011-2013出典：「ラット専用光干渉断層計による緑内障関連モデルにおける網膜各層の構造的変化の解析」研究成果報告書 課題番号23592557
（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所））
（https://kaken.nii.ac.jp/report/KAKENHI-PROJECT-23592557/23592557seika/)を加工して作成research repor
Variations on the Author
Get PDF“Variations on the Author” discusses two of Eduardo Coutinho’s recent films (Um Dia na Vida, from 2010, and Últimas Conversas, posthumously released in 2015) and their contribution to the general question of documentary authorship. The director’s filmography is characterized by a consistent yet self-effacing form of authorial self-inscription: Coutinho often features as an interviewer that rather than express opinions propels discourses; an interviewer that is good at listening. This mode of self-inscription characterizes him as an author who is not expressive but who is nonetheless markedly present on the screen. In Um Dia na Vida, however, Coutinho is completely absent form the image, while Últimas Conversas, on the contrary, includes a confessional prologue that moves the director from the margins to the center of his films. This article examines the ways in which these works stand out in the filmography of a director who offers new insights into the notion of cinematic authorship
Appropriate Similarity Measures for Author Cocitation Analysis
Get PDFWe provide a number of new insights into the methodological discussion about author cocitation analysis. We first argue that the use of the Pearson correlation for measuring the similarity between authors’ cocitation profiles is not very satisfactory. We then discuss what kind of similarity measures may be used as an alternative to the Pearson correlation. We consider three similarity measures in particular. One is the well-known cosine. The other two similarity measures have not been used before in the bibliometric literature. Finally, we show by means of an example that our findings have a high practical relevance.information science;Pearson correlation;cosine;similarity measure;author cocitation analysis
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