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Corrélation entre la réponse au stress et la virulence: implication des régulateurs PrlS/PrlR et MucR chez la bactérie Brucella melitensis
No full textAdaptation and stress response rely on the coordination of several molecular actors involved in stimuli perception, signal integration or the establishment of the adaptative response. In pathogenic bacteria, the regulatory mechanisms are essential to ensure an successful infectious process. Under certain conditons, the response of the bacteria leads to biofilm formation which are often associated with resistance mechanisms.
During its lifetime, B. melitensis might be facing changing environmental conditions sometimes harmful. Mutants altered in Quorum Sensing system form bacterial clusters structurally similar to biofilms. The study of these aggregates revealed that they were predominantly composed of exopolysaccharide (EPS). However, the conditions under which this EPS is produced by the wild type bacterium, its role and the genes encoding the enzymes responsible for its biosynthesis remained unknown. In this study, we demonstrated the formation of aggregates in response to salt stress by wild type Brucella spp. We showed that the formation of these bacterial clumps depends on the presence of a phosphorelay PrlS/PrlR and of the ionic strength of the growth medium. Our data, however, challenged the exitence of a production of an exopolysaccharide by Brucella spp. Finally, we studied the role of two regulators, the system PrlS/PrlR and the transcriptional regulator MucR in the formation of aggregates in response to salt stress and in the virulence of B. melitensis. Our data indicate that the system PrlS/PrlR, required for persistent infection in vivo, is involved in the response to salt stress and regulate actors probably required for aggregation. Moreover, MucR is a key regulator of stress response and is involved in intracellular survival of the bacteria. We showed that it acts as a repressor of flagellar gene expression and is required for growth of B. melitensis in hypersaline conditions. If MucR involvement in the regulation of EPS remains to be shown in B. melitensis, our data shows its role in the regulation of the structure of another major component of the bacterial surface, the lipopolysaccharide.L’adaptation ainsi que la réponse au stress dépendent de la coordination de différents acteurs moléculaires impliqués dans la réception de stimuli, l’intégration de signaux ou la mise en place de la réponse adaptative. Chez les bactéries pathogènes, les mécanismes de régulation sont essentiels pour assurer le bon déroulement du processus infectieux. Dans certaines conditions, la réponse mise en place par la bactérie mène à la formation de biofilms souvent associés à des mécanismes de résistance.
Sur son parcours, B. melitensis fait face à des conditions environnementales changeantes qui peuvent lui être néfastes. Des mutants altérés dans leur système Quorum Sensing forment des agrégats bactériens de structure similaire aux biofilms. L’étude de ces agrégats a révélé qu’ils étaient majoritairement composés d’un exopolysaccharide (EPS). Cependant, les conditions dans lesquelles cet EPS est produit par la bactérie sauvage, son rôle et les gènes encodant les enzymes responsables de sa biosynthèse restaient inconnus. Au cours de notre travail, nous avons mis en évidence la formation d’agrégats en réponse au stress salin par des souches Brucella spp sauvages. Nous avons montré que la formation de ces agrégats dépend de la présence d’un phosphorelay PrlS/PrlR et de la force ionique du milieu. Nos données ont cependant remis en cause la production d’un exopolysaccharide par Brucella spp. Enfin, nous avons étudié le rôle de deux régulateurs, le système PrlS/PrlR et le régulateur transcriptionnel MucR dans la formation d’agrégats en réponse au stress salin ainsi que dans la virulence de B. melitensis. Nos données indiquent que le système PrlS/PrlR, requis pour la persistance de l’infection in vivo, est impliqué dans la réponse au stress salin et régule probablement les acteurs nécessaires à l’agrégation. Par ailleurs, MucR est un régulateur clé de la réponse au stress et est impliqué dans la survie intracellulaire de la bactérie. Nous avons montré qu’il agit comme un répresseur de l’expression des gènes flagellaires et qu’il est requis pour la croissance de B. melitensis en conditions hypersalines. Si l’implication de MucR dans la régulation d’un EPS reste à démontrer chez B. melitensis, nos données montrent son rôle dans la régulation de la structure d’un autre composant majeur de la surface bactérienne, le lipopolysaccharide.(DOCSC03) -- FUNDP, 201
La conclusion des contrats par voie électronique. Etude de droit burkinabè, à la lumière des droits européen, belge et français
No full textn/aLes contrats conclus par voie électronique possèdent certaines caractéristiques qui les distinguent des contrats formés dans le monde traditionnel. Il s'agit de l'immatérialité et de la rapidité des échanges, de l'éloignement des parties contractantes, de l’automatisation du processus de conclusion des contrats et de l’opacité des réseaux électroniques. Ces caractéristiques ont donné naissance à un mode technique particulier de conclusion des contrats, régi par des règles juridiques particulières tant en droit burkinabè qu’en droits européens, belge et français. Ces règles propres aux contrats électroniques constituent ce qu’on peut appeler le « droit spécial de contrats électroniques ». Le postulat de ce dernier est que celui qui utilise l’outil électronique pour faire des propositions de contrat se trouve en position de force vis-à-vis de son cocontractant. En droits burkinabè, européen et belge des contrats électroniques, le premier est qualifié de « prestataire de services » et le second est nommé « destinataire du service ». En droit français, ces deux parties sont respectivement désignées par les notions de « professionnel » et de « destinataire de l’offre ».
Dans les rapports juridiques ainsi définis, l'étude montre que le droit des contrats électroniques donne naissance à un processus de formation du contrat différent de celui du droit commun des contrats. D’abord, le droit burkinabè des contrats électroniques, à l’image du droit français en la matière, infléchit les conditions classiques de formation des contrats que sont l’offre et l’acception. Une telle analyse pourrait valoir également en droit belge, notamment dans les relations entre professionnels et consommateurs. En outre, le droit burkinabè des contrats électroniques prolonge le moment de la formation de ceux-ci. Ce prolongement est le fait de l’obligation imposée au prestataire de services d’accuser réception de la commande et du droit de rétractation qui permet à son bénéficiaire de renoncer, dans certains cas, au contrat au bout d’un certain délai. D’une part, l’analyse du mécanisme de l’accusé de réception de la commande à la lumière des caractéristiques du contrat conclu par voie électronique conduit à admettre que celui-ci ne peut être considéré comme formé qu’à la communication de l’accusé de réception de la commande. Ainsi, l’existence du contrat électronique suppose sa confirmation par le prestataire de services. D’autre part, l’analyse du régime juridique et de la finalité du droit de rétractation incline à penser que la formation du contrat électronique, dans les cas où un tel droit existe, n’est définitive qu’en l’absence de renonciation de celui-ci pendant le délai de rétractation. Ainsi, la formation du contrat électronique suppose que le bénéficiaire du droit de rétractation confirme le contrat en s’abstenant de se rétracter. Il en résulte que le contrat électronique se conclut selon les étapes suivantes : une offre émise par le prestataire de services ou le professionnel, une acceptation exprimée par le destinataire du service, une confirmation de la commande par le prestataire de services (ou le professionnel) et, le cas échéant, une confirmation du contrat par le bénéficiaire du droit de rétractation. Dans un tel schéma, le moment ultime de la formation du contrat est fixé rétroactivement à la réception de l’accusé confirmatif de la commande. Quant au lieu de la formation du contrat électronique, il ne devrait pas être déterminé par les critères classiques de réception ou d’émission qui génèrent des solutions imprévisibles dans l’environnement électronique ; il convient de le fixer au lieu d’établissement, plus précisément au lieu d’établissement du destinataire du service. L’étude montre que ces conclusions peuvent, avec des variations, être retenues en droits français et belge.
En définitive, il y a lieu de retenir que le processus de conclusion du contrat électronique est soumis à un régime juridique original. Il est alors concevable de parler de contrats électroniques pour désigner, non pas des contrats distincts par la nature juridique de leurs prestations, mais des contrats dont le processus de conclusion est particulier.(DOCDROI00) -- FUNDP, 201
Spectroscopie diode laser : étude des élargissements collisionnels de raies d’absorption des molécules CS2 et CO2
No full textThe aim of this thesis was to study the collisional broadening coefficients of absorption lines of carbon disulfide and carbon dioxide molecules in the presence of
perturber gases. The measurements have been realized using a high resolution tunable
diode laser spectrometer.
We have measured and analyzed the collisional broadening coefficients of absorption lines in the nu3 vibrational band of 12C32S2 and in the nu3-nu1 vibrational band of
12C16O2 diluted in helium, neon and krypton. The collisional broadening coefficients of the absorption lines of the nu2 vibrational band of 13C16O2 have been also studied in the presence of nitrogen and oxygen.
The collisional widths have been determined by fitting the Voigt, the Rautian and the Galatry profiles. The latter models take into account the effect of narrowing of the
Doppler profile by molecular confinement (Dicke effect). The consideration of the interaction of collisions on the Doppler effect substantially improves the quality of fits. The spectral parameters derived from these fits are thus more precise. From the
collisional widths obtained for each line studied at 4 or 5 pressures, collisional broadening coefficients have been determined by linear regression.
As the measurements have been realized at different temperatures (from 173 to 576 K), the temperature dependence of collisional broadening coefficients has been determined for each line understudy.
Our results have both fundamental and applied interests. They will allow a better
understanding of the intermolecular interactions in the gas phase and the determination of the molecular interaction potentials involved in the process of collisions. The collisional parameters are also important to complete the atmospheric databases as HITRAN, GEISA or CDSD.L’objectif de cette thèse était d’étudier les coefficients d’élargissement collisionnel de raies d’absorption des molécules de disulfure de carbone et de dioxyde de carbone en présence de gaz perturbateurs. Les mesures ont été réalisées à très haute résolution avec un spectromètre diode laser accordable en fréquence.
Nous avons mesuré et analysé les coefficients d’élargissement collisionnel des raies d’absorption des bandes vibrationnelles nu3 de 12C32S2 et nu3-nu1 de 12C16O2 dilués dans de l’hélium, du néon et du krypton. Les coefficients d’élargissement collisionnel de raies de la bande vibrationnelle nu2 de l’isotopologue 13C16O2 ont aussi été étudiés en présence d’azote et d’oxygène.
Les largeurs collisionnelles ont été déterminées par ajustements des profils de
Voigt, de Rautian et de Galatry. Les deux derniers modèles prennent en compte l’effet de rétrécissement du profil Doppler par confinement moléculaire (effet Dicke). Cette prise en considération des interactions des collisions sur l’effet Doppler améliore
considérablement la qualité des ajustements. Les paramètres spectraux issus de ces
ajustements sont donc plus précis. A partir des largeurs collisionnelles obtenues pour
chaque raie étudiée à 4 ou 5 pressions, les coefficients d’élargissement collisionnel ont été déterminés par régressions linéaires.
Les mesures ayant été réalisées à différentes températures (de 173 à 576 K), la
dépendance en température des coefficients d’élargissement collisionnel a été déterminée pour chaque raie étudiée.
Nos résultats ont un intérêt à la fois fondamental et appliqué. Ils permettront en
effet de mieux comprendre les interactions intermoléculaires en phase gazeuse et de
déterminer les potentiels d’interaction moléculaire qui participent au processus de
collisions. Les paramètres collisionnels sont également importants pour compléter les
bases de données atmosphériques comme HITRAN, GEISA ou CDSD.(DOCSC01) -- FUNDP, 201
Rôle du système de sécrétion de Type IV dans la formation de biofilms chez Caulobacter crescentus
No full textBacteria have always been considered as individual cells, not being capable of complex behaviors. This simplistic view of bacterial life has evolved and today it is known that bacteria are able to communicate with each other (Quorum Sensing) and live together (biofilms).
Biofilm is defined as a community of bacteria attached to a surface and surrounded by an extracellular matrix produced by the bacteria themselves. This matrix is composed of various elements such as exopolysaccharides, proteins or DNA. Interest in the study of biofilms has become increasingly important due to their involvement in many issues related to public health. Indeed, biofilms confer increased resistance to bacteria in the face of physical forces, treatment with antibiotics and even against the host immune system. This resistance is multifactorial mainly due to the presence of the extracellular matrix of biofilms containing structural proteins and enzymes that allow the formation and maintenance of these "cities of microbes." At present, the mechanisms that regulate the secretion of this matrix component substrates are unknown.
In this work, we demonstrated that in the aquatic bacteria, Caulobacter crescentus, Type IV secretion system (T4SS), often known as a virulence factor in many pathogenic bacteria such as Brucella melitensis, Bordetella pertussis and Agrobacterium tumefaciens, was involved in proteins secretion allowing the formation of biofilms. One such protein is an enzyme of the Krebs cycle, isocitrate dehydrogenase whose activity appears to be important in the early stages of development of biofilms.
Interestingly, our model can be extrapolated to other bacteria with different lifestyles as Sinorhizobium meliloti and in lesser effect, A. tumefaciens, suggesting conservation of function of the T4SS throughout evolution.
Our results suggest for the first time the presence of an active secretion process controlling biofilm formation and also a new role for the T4SS.Les bactéries ont toujours été considérées comme des cellules individuelles, n’étant pas capables de comportements complexes. Cette vision simpliste de la vie bactérienne a évolué et aujourd’hui, on sait les bactéries capables de communiquer entre elles (Quorum Sensing) et de vivre en association (biofilms).
Le biofilm est défini comme une communauté de bactéries attachée à une surface et entourée d’une matrice extracellulaire produite par les bactéries elles-mêmes. Cette matrice est composée de différents éléments tels que des exopolysaccharides, des protéines ou de l’ADN. L’intérêt porté à l’étude des biofilms est devenu de plus en plus important depuis la prise de conscience de leur implication dans de nombreux problèmes liés à la santé publique. En effet, les biofilms confèrent aux bactéries une résistance accrue face à des forces physiques, aux traitements par des antibiotiques et même face au système immunitaire de l’hôte. Cette résistance multifactorielle est notamment due à la présence de la matrice extracellulaire des biofilms qui contient des protéines structurales et des enzymes qui permettent la formation et le maintien de ces « cités de microbes ». A l’heure actuelle, les mécanismes qui régissent la sécrétion de substrats composant cette matrice sont inconnus.
Lors de ce travail, nous avons démontré que chez la bactérie aquatique, Caulobacter crescentus, le système de sécrétion de Type IV (T4SS) souvent connu comme facteur de virulence chez de nombreuses bactéries pathogènes telles Brucella melitensis, Bordetella pertussis et Agrobacterium tumefaciens, était impliqué dans la sécrétion de protéines permettant la formation de biofilms. Une de ces protéines est une enzyme du cycle de Krebs, l’isocitrate déhydrogénase dont l’activité semble être importante aux étapes précoces du développement des biofilms.
De manière intéressante, notre modèle peut être extrapolé à d’autres alpha-protéobactéries avec des modes de vie distincts comme Sinorhizobium meliloti et à moindre mesure, à A. tumefaciens, suggérant une conservation de la fonction du T4SS à travers l’évolution.
Nos résultats proposent pour la première fois la présence d’un phénomène actif de sécrétion contrôlant la formation de biofilms et également un nouveau rôle pour le T4SS.(DOCSC03) -- FUNDP, 201
Etude des effets de l'hypoxie cyclique et du TNFalpha sur les cellules endothéliales : Activation du facteur NF-kappaB et d'un phénotype pro-inflammatoire et pro-angiogénique
No full textCycling hypoxia, which is periods of hypoxia followed by reoxygenation, is a hallmark of solid tumors that originate from the instability of the tumor blood flow. Cycling hypoxia may influence cancer cell as well as endothelial cell physiology and is described to favour survival and pro-angiogenic phenotype in endothelial cells. However, the molecular mechanisms underlying these effects remain largely unknown. The hypoxia-reoxygenation cycles are thought to induce oxidative stress in the tumor vasculature that could activate an anti-oxidant response in endothelial cells. Solid tumors are also characterized by a pro-inflammatory environment generated by cancer and immune cells, the major pro-inflammatory mediator being TNFα. In this work, we investigated the specific effects of cycling hypoxia, compared to continuous hypoxia and normoxia, on the activation of Nrf2 and NF-κB pathways in EA.hy926 endothelial cells and HUVEC by tBHQ and SIN-1, or TNFα respectively. We showed that cycling hypoxia inhibited Nrf2 response to tBHQ or SIN-1 by up-regulating the Nrf2 inhibitor Bach1. On the other hand, cycling hypoxia increased the activation of NF-κB initiated by TNFα in endothelial cells, probably by slowing down the negative feedback loop engaged by newly synthesized IκBα. The pro-inflammatory response initiated by TNFα was further enhanced by cycling hypoxia as both IL-8 and ICAM-1 were overexpressed at gene and protein levels. Furthermore, cycling hypoxia fostered elevated IL-6 secretion independently of gene regulation. Silencing of p65 and of HIF-1α expression with targeting siRNA highlighted the implication of NF-κB, but not of HIF-1, in the up-regulated secretion of IL-6 and the accumulation of ICAM-1. Finally, we showed that cycling hypoxia induced a strong increase in the migratory ability of EA.hy926 endothelial cells, suggesting an effect toward a pro-angiogenic phenotype. Endothelial cells exposed to cycling hypoxia and stimulated with TNFα thus seem to participate to the development of a pro-inflammatory environment potentially beneficial for tumor growth and metastasisL'hypoxie cyclique, définie comme une succession de périodes d'hypoxie et de réoxygénation, est un phénomène couramment observé dans les tumeurs solides et lié à l'instabilité du flux sanguin tumoral. L'hypoxie cyclique conditionne les cellules tumorales, mais aussi les cellules endothéliales, pour les rendre plus résistantes à l'apoptose et plus susceptibles de participer à la progression de la tumeur, notamment en favorisant un phénotype angiogénique. Cependant, les mécanismes moléculaires responsables de ces effets restent largement inconnus. Il est généralement admis que les cycles d'hypoxie-réoxygénation induisent des dommages oxydatifs dans les vaisseaux tumoraux susceptibles de déclencher une réponse anti-oxydante et pro-inflammatoire dans les cellules endothéliales. Le microenvironnement tumoral est également caractérisé par une réponse inflammatoire engendrée par les cytokines inflammatoires produites par les cellules tumorales et immunitaires, le TNFα jouant un rôle majeur en tant que médiateur inflammatoire. Dans ce travail, nous avons étudié les effets spécifiques de l'hypoxie cyclique, en comparaison à l'hypoxie continue et à la normoxie, sur l'activation des voies Nrf2 et NF-κB par le tBHQ et le SIN-1, ou le TNFα respectivement, dans les cellules endothéliales EA.hy926 et HUVEC. Nous avons ainsi montré que l'hypoxie cyclique diminue l'activation de Nrf2 induite par le tBHQ ou le SIN-1 en augmentant l'abondance nucléaire de Bach1, un inhibiteur de Nrf2. Par ailleurs, l'hypoxie cyclique augmente l'activation de NF-κB induite par le TNFα dans les cellules endothéliales, probablement en différant la boucle de rétroaction négative enclenchée par la synthèse d'IκBα. La réponse inflammatoire initiée par le TNFα est également amplifiée par l'hypoxie cyclique puisque l'IL-8 et ICAM-1 sont surexprimés à la fois au niveau génique et au niveau protéique. De plus, l'hypoxie cyclique induit une augmentation de la sécrétion d'IL-6 induite par le TNFα de façon indépendante de l'expression génique. L'inhibition de l'expression de p65 et de HIF-1α par siRNA a permis de montrer l'implication de NF-κB, mais pas de HIF-1, dans l'augmentation de la sécrétion d'IL-6 et dans l'accumulation d'ICAM-1. Enfin, nous avons montré que l'hypoxie cyclique induit une nette augmentation de la capacité de migration des cellules endothéliales EA.hy926, suggérant une implication de l'hypoxie cyclique dans l'établissement d'un phénotype pro-angiogénique. Les cellules endothéliales exposées à l'hypoxie cyclique et stimulées avec du TNFα semblent donc participer à la mise en place d'un environnement pro-inflammatoire potentiellement favorable à la croissance tumorale et à la formation de métastases.
(DOCSC03) -- FUNDP, 201
Etude des voies de réponse aux stress dans des macrophages humains différenciés en cellules spumeuses en présence de différents types de LDL, en hypoxie et en normoxie
No full textClinical outcomes of atherosclerosis are often due to plaque rupture. This phenomenon tends to occur in developed and unstable plaques and is favoured by death of macrophage-derived foam cells. During plaque development the death of foam cells also contributes to the formation of the necrotic core and a large necrotic core is one of the features of unstable plaques. As the death mechanisms of foams cells contribute to plaque development as well as to clinical outcomes, it is a subject of major concern. However, the study of these death phenomenons is hampered by the fact that the environment of foam cells is particularly complex and difficult to reproduce in vitro. Indeed, these cells are exposed to a variety of oxidized/modified lipoproteins, subject to massive cytokine stimulation and can be exposed to low oxygen tension. This latest, also called hypoxia, is an environmental condition well known to modulate different cellular mechanisms such as lipid storage, inflammation and death processes. If the effects of hypoxia on tumor cells are well studied, the effects of hypoxia on foam cells in atherosclerosis are still largely unknown. The aim of our work is to compare the effects of two different types of oxidized LDL on lipid load, on unfolded protein response (UPR) and on death processes in macrophages-derived foam cells as well as to study the effects of hypoxia on these mechanisms.
In this work we used two different types of oxidized/modified LDL to generate foam cells out of THP-1 derived macrophages. As the physiological relevance of the traditional copper sulphate oxidized LDL is still a matter of debate it is of interest to settle new experimental models. Hence, in parallel to copper sulphate oxidized LDL or Ox-LDL, we used LDL oxidized with myeloperoxidase (MPO), a peroxidase found to be present and active in atheroma. In contrast to Ox-LDL which are oxidized both on lipidic and proteic moieties, the LDL oxidized by MPO called Mox-LDL, are only modified on apoB. In the first part, we established the experimental conditions giving rise to a marked foam cell phenotype with both types of LDL. We determined that a 72 hours incubation in the presence of 100 µg/ml with Ox-LDL or Mox-LDL led to heavily loaded cells. The cells incubated in the presence of Mox-LDL displayed a larger lipid load than the cells incubated with the same concentration of Ox-LDL for the same period of time. Then, we studied the effect of hypoxia on lipid load of cell incubated with Ox-LDL or Mox-LDL. The incubation of macrophages with Ox-LDL or Mox-LDL under hypoxia (1 % O2) did not influence the lipid load. In the second part, stress-induced pathways were investigated. Both Ox-LDL and Mox-LDL triggered the UPR, but in a different way. While the cells incubated for 72 hours in the presence of Ox-LDL displayed pronounced UPR with marked eIF2α phosphorylation and pronounced XBP-1 splicing, the cells incubated for 72 hours in the presence of Mox-LDL presented low level eIF2α phosphorylation and moderate XBP-1 splicing. The cells incubated with these two types of LDL under hypoxia showed less pronounced markers of UPR, suggesting a protective effect of this environmental condition. We also showed that both types of LDL were cytotoxic after 72 hours of incubation, the Mox-LDL to a larger extent than the Ox-LDL. Cells incubated in the presence of Ox-LDL and to a larger extent with Mox-LDL, showed markers of apoptosis (PARP cleavage, α-fodrin cleavage, caspases 3 and 7 cleavage). With both types of LDL, the amount of apoptotic markers was decreased when the cells were incubated under hypoxia, again suggesting a protective effect of low oxygen tension. As we evidenced that hypoxia induced the overexpression of different chaperones, such as Grp78, Grp94 and ERO1, we hypothesized that the protection provided by hypoxia partly depended on these proteins.
The autophagy which is described to be triggered by ER stress such as UPR was finally studied. We evidenced that the cells incubated with both types of oxidized LDL displayed increased features of macroautophagy, without influence of hypoxia. We hypothesized that even if Ox-LDL and Mox-LDL triggered autophagy, the purpose of the process is different for each type of LDL. While autophagy would be protective and would prevent apoptosis in the cells incubated in the presence of Ox-LDL, it may be lethal and act in synergy with apoptosis to induce cell death in the cells incubated in the presence of Mox-LDL.
Altogether, these results show that foam cells can be obtained with macrophage incubation with different types of oxidized LDL. However, the foam cells obtained with the different oxidized LDL displayed different stress associated signaling pathways. To unravel these different signaling pathways as well as to understand the effects of hypoxia on these signaling pathways in foam cell is important to design and improve future therapeutic strategies.A l’origine des manifestations cliniques létales des plaques athéromateuses figure souvent le phénomène de rupture. Celui-ci est favorisé par la mort de macrophages spumeux, phénomène qui engendre aussi la formation du cœur nécrotique. Le contexte dans lequel les cellules spumeuses meurent est particulièrement complexe. Il implique la présence de particules lipoprotéiques oxydées et/ou modifiées de diverses manières, un contexte inflammatoire intense ainsi que de l’hypoxie. Les effets de cette condition environnementale sont multiples et incluent notamment la modulation de la réponse inflammatoire et des phénomènes de mort ainsi que des effets sur la charge lipidique. Si l’hypoxie est bien étudiée dans le contexte des tumeurs, ses effets sur les macrophages dans l’athérosclérose sont peu compris.
Durant ce travail, nous avons d’abord mis au point un modèle expérimental permettant l’acquisition d’un phénotype spumeux par l’utilisation de deux types de LDL oxydées/modifiées. Nous avons ensuite étudié en parallèle la réponse UPR et les phénomènes de mort cellulaire dans les cellules spumeuses générées avec chaque type de LDL, ainsi que les effets de l’hypoxie sur ces processus.
La question de la relevance physiologique des traditionnelles LDL oxydées au sulfate de cuivre étant toujours en suspens, il est judicieux d’avoir à notre disposition d’autres modèles pour l’étude de la pathologie de l’athérosclérose. C’est pourquoi nous avons utilisé deux types de LDL oxydées/modifiées pour transformer en cellules spumeuses des macrophages différenciés à partir de THP-1. En plus des LDL traditionnelles oxydées au sulfate de cuivre ou Ox-LDL, nous avons utilisé des LDL oxydées par la myéloperoxydase (MPO) ou Mox-LDL. Contrairement aux Ox-LDL qui présentent des oxydations sur la fraction lipidique et protéique, les Mox-LDL sont uniquement modifiées sur la fraction protéique des particules, et ce, essentiellement par l’HOCl produit par la MPO. Bien que ces LDL soient encore peu répandues, de nombreux arguments indiquent que la MPO est un candidat sérieux aux processus de modification des LDL in vivo.
Nous avons donc défini les conditions d’obtention d’un phénotype spumeux avec les deux types de LDL oxydées/modifiées. Ces conditions sont une incubation de 72 heures en présence de 100 µg/ml de LDL et permettent l’obtention d’une charge lipidique prononcée avec les deux types de LDL. Nous avons constaté qu’à concentration égale et sur la même durée d’incubation, les Mox-LDL induisent une charge lipidique plus prononcée que les Ox-LDL. Nous avons montré que l’incubation de macrophages en présence de différents types de LDL oxydées/modifiées sous hypoxie (1 % O2) n’influence pas la charge lipidique. En étudiant la réponse UPR, nous avons constaté que les Ox-LDL et les Mox-LDL étaient toutes deux capables d’induire cette réponse. Cependant, les deux types de LDL n’induisent pas une réponse équivalente. Alors qu’après 72 heures d’incubation en présence de Ox-LDL les cellules présentent une réponse UPR prononcée avec une phosphorylation d’eIF2α abondante et une quantité accrue du messager de XBP-1S, les cellules incubées 72 heures en présence de Mox-LDL ne présentent qu’une faible phosphorylation d’eIF2α et un accroissement moindre de l’abondance du messager de XBP-1S. Les cellules incubées en présence de ces deux types de LDL en hypoxie présentent des marqueurs de la réponse UPR moins prononcés, ce qui suggère un effet protecteur de l’hypoxie. Nous avons ensuite montré que les Ox-LDL et les Mox-LDL sont toutes deux toxiques et induisent la mort des macrophages par apoptose. Cependant, alors que les Ox-LDL n’induisent qu’un faible niveau d’apoptose, les Mox-LDL induisent un niveau élevé. Les cellules incubées en présence de Ox-LDL et de Mox-LDL sous hypoxie présentent des marqueurs d’apoptose fortement réduits par rapport aux cellules incubées en normoxie, ce qui confirme l’hypothèse d’un effet protecteur de cette condition environnementale. La protection apportée par l’hypoxie pourrait être due à une surexpression de diverses chaperonnes aux effets protecteurs (Grp78, Grp94 et ERO1) induite par l’hypoxie.
L’étude de l’autophagie, connue pour pouvoir être déclenchée par les stress du RE, a ensuite révélé que les cellules incubées en présence des deux types de LDL présentent des signes d’une autophagie accrue en normoxie aussi bien qu’en hypoxie. Nous émettons l’hypothèse que l’origine et la fonction de l’autophagie dans les cellules incubées en présence de Ox-LDL et en présence de Mox-LDL seraient différentes. Alors que l’autophagie déclenchée dans les cellules incubées en présence de Ox-LDL s’avèrerait protectrice et limiterait le phénomène d’apoptose, celle déclenchée dans les cellules incubées en présence de Mox-LDL s’avèrerait délétère et agirait en synergie avec l’apoptose pour induire la mort des cellules.
L’ensemble de ces données montre que des cellules spumeuses peuvent être obtenues par l’incubation de macrophages en présence de différents types de LDL oxydées/modifiées. Les réponses aux stress et les voies de signalisation dans ces cellules spumeuses générées avec différents types de LDL oxydées/modifiées sont toutefois différentes. Par ailleurs, nous avons également montré que l’hypoxie pouvait avoir un impact considérable sur ces réponses, comme l’inhibition de l’apoptose par exemple.
L’étude de ces différentes voies de signalisation induites en réponse à différents types de LDL oxydées/modifiées ainsi que les effets de l’hypoxie sur celles-ci est importante pour l’élaboration et l’amélioration des futures approches thérapeutiques.(DOCSC03) -- FUNDP, 201
Economic Analysis of Legal Reforms with a Specific Emphasis on Women's Rights
No full textThe question of the role of modern law in triggering social change is of particular importance in societies where customs and norms support the marginalization of some social groups. The conventional view supported in the literature is that the success of the formal law is constrained by the system of informal rules and values which support the prevailing customs, and the law therefore appears as a ‘dead letter’. It has been, therefore, largely recognized that the custom often acts as a powerful hindrance to equity-increasing changes. The first two chapters of the thesis aim at mitigating this pessimistic scenario. We develop two models which formally show that a progressive legal reform can, under certain conditions, shift the conflicting custom in the direction intended by the legislator. Formal law then acts as an outside anchor that exerts a ‘magnet effect’ on the custom. We illustrate our insights using examples on inheritance, marriage, and divorce in Sub-Saharan Africa and India. In the second chapter, we also show analytically that, under certain conditions, a gradual reform better serves the interests of the marginalized. We therefore argue that radicalism in legal reform may defeat its own purpose.
One of the conditions to achieve the ‘magnet effect’ described in our models is the identification of agents with the new law. In the third chapter of the thesis, we focus on the adherence of agents to a pro-women legal reform in Morocco, the reform of the Family Code which is religious-inspired legislation. We use a unique database created from a survey we conducted in Morocco in 2008 to provide some evidence about the factors which drive conservative positions with respect to a progressive legal reform. In order to explain the identification of agents with the law, we mainly focus on three specific factors: education, location and religion. Contrary to what naïve beliefs would suggest – rural men with a low level of education and an intense religious practice express a lower support of the new Family Code –, we find that there is no straightforward relation between the three aforementioned factors (education, location and religion) and the support of the new legislation. Rather paradoxically, conservative positions are observed among educated people, when they are very religious.
Finally, in the last chapter, we use the same database as for chapter 3 in order to study intra-household decisions concerning children’s education. We focus on the religiosity of both spouses in order to understand how this could impact on the participation of mothers in decisions. We use a measure of the intensity of religious practice as a proxy of parents’ religiosity. We find a positive and significant correlation between the intensity of religious practice of the mothers and their participation in decisions concerning their daughters’ education. This result is essentially true for poorly or non-educated women which suggest that religion acts as a substitute to education. Religious faith motivates mothers to participate in decisions concerning their daughters’ education mainly and there exists a spillover effect that makes them more concerned with the education of their sons as well. We do not find a clear significant correlation between the intensity of the religious practice of the fathers and their wives’ participation in decisions concerning their children’s education. We essentially explain these main results by analyzing the action and the discourse of religious movements and associations active in Morocco.(DOCSESG00) -- FUNDP, 201
Identification et caractérisation d'une nouvelle multicopper oxydase chez Acidomyces acidophilus.
No full textA new multicopper oxidase gene AaMco1 was identified from Acidomyces acidophilus, a pigmented extremophile ascomycete that was isolated originally from acidic water. Sequence analysis revealed that it encodes a 682 amino acid protein with an apparent molecular mass of 85 kDa as determined by denaturing SDS-PAGE. AaMco1 shows interesting characteristics: it has an N-terminal transmembrane helix and no signal peptide. To obtain an active and soluble protein, AaMco1 was truncated at its N-terminal to remove the transmembrane helix, but even in this form the protein was found in the insoluble fraction. AaMco1 and its truncated form were then denatured, purified and renatured before characterization. Structural analysis and protein characterization by enzymatic assays indicate that AaMco1 has ferroxidase activity and could be part of a new phylogenetic branch, the ascomycete MCO family, described for the first time here.Cette thèse s’est inscrite dans le cadre d’un travail appliqué plus large qui consiste à valoriser des sous-produits de l’agriculture en fibres alimentaires. Ces dernières peuvent être utilisées comme fibres dans l’alimentation humaine. Pour déstructurer les parois végétales, un cocktail de cellulases et d’hémicellulases est généralement nécessaire. Il faut également pouvoir éliminer la lignine, composé polymérique qui consolide les réseaux de cellulose et d’hémicellulose. Les laccases, qui font partie de la famille des enzymes multicopper oxydases, principalement fongiques, sont décrites pour oxyder et dépolymériser la lignine.
Un gène AaMco1 codant pour une nouvelle multicopper oxydase de 682 acides aminés a été identifié à partir du champignon acidophile Acidomyces acidophilus. La masse moléculaire de cette protéine, déterminée par SDS-PAGE, est de 85kDa. AaMco1 présente des caractéristiques intéressantes qui, manifestement, appartiennent à une famille de MCOs d’ascomycètes non encore décrite jusqu’à présent et pour laquelle aucune activité enzymatique n’avait encore été démontrée. L’analyse de sa séquence peptidique met en évidence la présence d’une hélice transmembranaire située à l’extrémité N-terminale et l’absence d’un peptide signal. Afin d’obtenir une protéine soluble et dans le but de caractériser l’enzyme par des essais enzymatiques, la protéine AaMco1 a été tronquée à l’extrémité N-terminale, au niveau de son hélice transmembranaire. Dans nos conditions et même sous sa forme tronquée, la protéine est retrouvée dans la fraction insoluble. La protéine AaMco1 a été dès lors dénaturée afin de l’extraire de la fraction membranaire, purifiée puis renaturée. Des essais enzymatiques sur la fraction purifiée et renaturée de la protéine AaMco1 ont mis en évidence que cette enzyme possède une activité ferroxydase.(DOCSC03) -- FUNDP, 201
Multistream Scheduling in Cellular Networks as a Coupled Optimization Problem
No full textCellular networks are more and more wide spread nowadays, moving from the current third generation UMTS to the forthcoming WiMAX and LTE 4G networks, promising ever increasing throughputs for new multimedia services. This thesis focuses on scheduling in these cellular networks, and proposes some multistream enhancements.
Indeed, an efficient allocation of the available radio resources is one of the key parameters to provide larger throughputs to an ever increasing amount of users. To improve efficiency, multistream transmissions, where multiple users are allowed to transmit simultaneously, have been suggested. The resource allocation problem therefore becomes coupled through interferences, which we have to minimize. Moreover, this problem has multiple contradictory objectives, such as throughput, fairness, or respect of QoS guarantees.
Both 3G's CDMA and 4G's OFDMA multiple access techniques are studied, for both SISO and MIMO transmissions. We have managed to decouple the resource allocation problem and limit interferences in CDMA through orthogonality factors, depending on users' channel dispersion in SISO, and on users' location in beamforming MIMO. As far as OFDMA is concerned, we have designed a priority-based scheduling algorithm which ensures some QoS guarantees, while remaining quite simple and requiring only a limited feedback, averaged over the full bandwidth. A MIMO extension of the algorithm, improving frequency reuse through a GoB strategy, has also been developed.
The problem of WiMAX burst mapping has been deeply investigated, and a new mapping algorithm, seriously reducing resource wastes, has been designed.(DOCSC06) -- FUNDP, 201
Essays in spatial autoregressive panel data models
No full textThe purpose of this dissertation is to improve the applied researcher's toolbox to estimate spatial autoregressive panel data models. The first chapter of the dissertation derives impacts of a change in explanatory variables on the dependent variable in a spatio-temporal specification. An empirical application based on cigarettes sales illustrates the use of these impacts and their interpretation. The second chapter derives specification tests to assess the relevance of spatial autocorrelation in a fixed effects panel data model and provides an empirical application of the developed tests devoted to the Feldstein-Horioka (FH) paradox. It is shown that the traditional FH model is misspecified due to the omission of spatial autocorrelation in the specification. Accounting for spatial autocorrelation reduces the paradox. The third chapter extends the Mundlak approach to spatial Durbin panel data models to allow consistent estimation of spatial panel data models by random effects. The approach consists in correcting for the possible correlation existing between regressors and individual effects. The proposed method is applied on the determinants of house prices among Belgian municipalities. Finally, spatial autoregressive models traditionally assume the linearity of spatial autocorrelation, meaning that one only has to estimate one spatial autoregressive parameter. The fourth chapter of the dissertation explorates the possibility of nonlinear spatial autocorrelation and suggests an application on the US presidential election in 2000.(DOCSESG00) -- FUNDP, 201