Matsumoto Dental University Repository
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Enhanced bone-forming activity of side population cells in the periodontal ligament.
application/pdfRegeneration of alveolar bone is critical for the successful treatment of periodontal diseases. The periodontal ligament (PDL) has been widely investigated as a source of cells for the regeneration of periodontal tissues. In the present study where we attempted to develop an effective strategy for alveolar bone regeneration, we examined the osteogenic potential of side population (SP) cells, a stem cell-containing population that has been shown to be highly abundant in several kinds of tissues, in PDL cells. Isolated SP cells from the rat PDL exhibited a superior ability to differentiate into osteoblastic cells compared with non-SP (NSP) and unsorted PDL cells in vitro. The mRNA expressions of osteoblast markers and bone morphogenetic protein (BMP) 2 were significantly upregulated in SP cells and were further increased by osteogenic induction. To examine the boneforming activity of SP cells in vivo, PDL SP cells isolated from green fluorescent protein (GFP)-transgenic rats were transplanted with hydroxyapatite (HA) disks into wild-type animals. SP cells exhibited a high ability to induce the mineralized matrix compared with NSP and unsorted PDL cells. At 12 weeks after the implantation, some of the pores in the HA disks with SP cells were filled with mineralized matrices, which were positive for bone matrix proteins, such as osteopontin, bone sialoprotein, and osteocalcin. Furthermore, osteoblast- and osteocyte-like cells on and in the bone-like mineralized matrices were GFP positive, suggesting that the matrices were directly formed by the transplanted cells. These results suggest that PDL SP cells possess enhanced osteogenic potential and could be a potential source for cell-based regenerative therapy for alveolar bone.journal articl
音楽が疼痛閾値に与える影響
松本歯科大学博士(歯学)2013甲第153号application/pdf【目的】音楽を聞いている時は痛みの認知程度が低下する事が知られているが、客観的な手法をもとに明らかにはされていない。そこで本研究では、音楽を聞くことにより疼痛閾値はどの程度変化するか、また侵害刺激に反応していた帯状回の神経活動は音楽を聞くことにより変化するかを検討した。 【方法】 被験者45名を対象に前腕内側と足首内側に電極を貼り知覚・痛覚定量分析装置(Pain Vision®PS-2100N:ニプロ株式会社)を用いて、無条件時と3種類の音楽(ポップス・バラード・クラシック)を聞かせたときの知覚閾値(最小感知電流値)と疼痛閾値(痛み対応電流値)を測定し比較検討した。さらに、口腔内測定用の電極を舌・頬粘膜・上顎歯肉・下顎歯肉に置き、上記と同様に無条件時と3種類の音楽を聞かせたときの疼痛閾値を測定し比較検討した。また、被験者8名を対象にPain Visionから流れる電流80μAを侵害刺激として足首内側に与えた時の帯状回の神経活動を機能的磁気共鳴装置(fMRI)で調べ、無条件時と3種類の音楽を流している時の活動状態を比較した。 【結果と考察】 前腕の知覚閾値では無条件と3種類の音楽による4条件下での有意差は認められなかったが、前腕の痛覚閾値、足首の知覚閾値、足首の痛覚閾値では4条件下での有意差が認められた(Friedman test:順にp <0.001、p <0.05、p <0.01)。また口腔内4箇所においても4条件下での有意差が認められた(Friedman test:p <0.01)。各部位のそれぞれの2条件をWilcoxon signed-ranks testを用いて比較した場合、前腕知覚閾値ではポップスとバラード、ポップスとクラシックの間に有意差が認められ、痛覚閾値ではクラシックと他3条件の間に有意差が認められた(2条件間のうち後者が前者に比較して閾値が上昇)。足首知覚閾値では無条件とポップス、無条件とクラシック、バラードとクラシックの間に有意差が認められ、痛覚閾値では無条件とバラード、無条件とクラシック、ポップスとバラード、ポップスとクラシックとの間に有意差が認められた。舌の疼痛閾値は無条件とバラード、無条件とクラシック、ポップスとクラシックの間に有意差が認められ、頬粘膜の疼痛閾値は無条件とバラード、無条件とクラシック、ポップスとバラード、ポップスとクラシックの間に有意差が認められ、上顎歯肉では無条件とバラード、無条件とクラシック、ポップスとバラードの間に有意差が認められ、下顎歯肉では、無条件とバラード、無条件とクラシック、ポップスとクラシックの間に有意差が認められた。fMRIの実験では、侵害刺激に反応を示した帯状回での神経活動がポップスを聞くことにより2名、バラードを聞くことに1名、クラシックを聞くことにより2名の被験者において減弱した。これらの結果より、バラードやクラシックのようなスローテンポの曲を聞くことは疼痛緩和に非常に有効であることが示唆された。これは音楽の気分や感情に与える心理的作用と痛覚伝導系への抑制作用によるものだと考えられた。doctoral thesi
液状化検体細胞診固定液で保存された口腔粘膜細胞RNAの安定性
application/pdfWe evaluated the stability of RNA stored in liquid–based cytology (LBC) medium for long periods. Specimens were taken from the five volunteers using LBC preparation methods. Experimental samples were preserved at one day, three days, seven days, one month, two months and three months in the medium at room temperature. The RNA was routinely extracted from each specimen, and amplified using human β–actin after reverse transcription method. In all cases, 186 bp β–actin bands were successfully detected until seventh days. However, the detection of RNA was impossible in some cases of one–month, two–month and three–month groups. These results suggest that the LBC method is superior in the preservation of RNA.journal articl
小児に発症した下顎骨のGarré 骨髄炎のエックス線学的検討
application/pdfWe report a case of Garré osteomyelitis of the mandible involving a child. The patient was a 12–year–old girl with symptoms of swelling and pain of the left face. She presented to our hospital with asymmetrical swelling and tenderness and redness from the left cheek to the lower jaw, and tenderness of the left submandibular lymph nodes. Panoramic radiography revealed a well–demarcated radiolucent lesion that continued to the periodontal space of the second molar of the left mandible and was surrounded by a diffuse osteosclerotic area. In addition, cone beam CT images showed an onion peel–like periosteal reaction on the buccal side of the left mandible near this radiolucent lesion. A diagnosis of cellulitis of the left cheek and Garré osteomyelitis of the mandible was determined based on clinical and imaging findings. A cephem antibiotic (D.I.V.) and oral antibacterial drugs were started to improve inflammation. The symptoms promptly improved on the 4th day after the starr of treatment. It was reported that conservative therapy is appropriate treatment to repair tissues from the viewpoint of jaw development as well as the process of tooth formation in children. An early diagnosis based on specific findings like an onion peel appearance on imaging is required for effective treatment of osteomyelitis of the mandible in childhood.journal articl
Molecular analysis of potassium ion channel genes in sudden death cases among patients administered psychotropic drug therapy: Are polymorphisms in LQT genes a potential risk factor?
松本歯科大学博士(歯学)2013甲第152号application/pdfPsychotropic drugs can pose the risk of acquired long QT syndrome (LQTS). Unexpected autopsy-negative sudden death in patients taking psychotropic drugs may be associated with prolonged QT intervals and life-threatening arrhythmias. We analyzed genes that encode for cardiac ion channels and potentially associated with LQTS, examining specifically the potassium channel genes KCNQ1 and KCNH2 in 10 cases of sudden death involving patients administered psychotropic medication in which autopsy findings identified no clear cause of death. We amplified and sequenced all exons of KCNQ1 and KCNH2, identifying G643S, missense polymorphism in KCNQ1, in 6 of the 10 cases. A study analysis indicated that only 11% of 381 healthy Japanese individuals carry this polymorphism. Reports of previous functional analyses indicate that the G643S polymorphism in the KCNQ1 potassium channel protein causes mild IKs channel dysfunction. Our present study suggests that administering psychotropic drug therapy to individuals carrying the G643S polymorphism may heighten the risk of prolonged QT intervals and life-threatening arrhythmias. Thus, screening for the G643S polymorphism before prescribing psychotropic drugs may help reduce the risk of unexpected sudden deaththesi
インプラント材としてのTi-6Al-4V合金の変態温度と機械的性質の関係
松本歯科大学博士(歯学)2013甲第154号application/pdf[目的] インプラント治療の普及に伴い,インプラント体の破折が数多く報告されるようになった。破折原因の一つとしてインプラント材料自体の強度不足が考えられている. 現在インプラント材料としてはJIS第4種純チタンが主に使用されているが,耐力は500MPa,疲労強度は250MPa程度であるのに対し,チタン,アルミニウム,バナジウムの合金であるTi-6Al-4V合金の耐力は800MPa,疲労強度は650MPa程度と格段に大きく,破折しないインプラント材料として注目されている.工業界ではTi-6Al-4V合金の材質の向上を得るためには968℃で60分加熱し,溶体化処理を行った後、538℃で4時間加熱処理を、酸化防止のためにガス雰囲気中で行うことが指示されている.しかし,ガス雰囲気での熱処理には高額な装置を必要とする.したがって、大気雰囲気中で行うには、酸化を軽減するために加熱温度をできるだけ低くして,短時間での処理を検討する必要がある. 一方、Ti-6Al-4V合金は,500℃付近において変態が生じる.この温度を利用し,インプラント材料に,より適した材質に改良できる可能性がある.そこで,本研究は、Ti-6Al-4V合金を450℃,500℃,550℃,600℃,650℃で加熱処理を行い,引張強さ,耐力,伸び,硬さ,金属組織について検討し,さらにX線回折により析出物についての検討を行った. [材料ならびに方法] 実験には,Ti-6Al-4V合金(大同特殊鋼)直径5mm,長さ100mmを用い,以下の項目について検討した. 1)変態温度の測定:加熱速度0.3℃/minの条件で1000℃までの熱膨張. 2)熱処理:450℃,500℃,550℃,650℃,1時間 500℃,0.5,1.0,1.5,2時間. 3)引張強試験:引張り速度0.5mm/min,引張強さ,耐力,伸びの測定. 4)硬試験:試験片横断面の端から0.1mm,中間部の1.25mmと中心部のビッカース硬さ測定. 5)金属成分の面分析:試験片横断面の中間部位,XMA(JEOL)使用. 6)組織観察:試験片横断面の端,中間部,中心部,レーザー顕微鏡(オリンパス) 23 使用. 7)破断面の観察:引張試験後の破断面の観察,電子顕微鏡(JEOL)使用. 8)X線回折:直径8mmの棒材を厚さ1mmの板に流水下で削り出し,X回折装置(JEOL)使用. [結果および考察] 1.熱膨張試験より450℃から650℃の間に変態温度が存在することが判明した. 2.工業界の熱処理条件で処理したTi-6Al-4V合金の引張強さは,処理前と比較して12.7%増加,耐力は22%増加,硬さは46%増加したが,伸びは74%減少した. 3.低温で熱処理した試験片の引張り強さは500℃で処理した場合,処理前と比較して9.4%の増加で最大であった.耐力は500℃と550℃はほとんど差がなく24%の増加であった.硬さも500℃と550℃が8.4%の増加であった.500℃の伸びの減少は,わずか11.3%であった. 4.最も効果のあった500℃における加熱時間の影響は,60分加熱した試験片が引張り強さ,耐力,伸びにおいて,総合的に優れており、本法の有効性が確認された。 5.X線回折の結果から,熱処理の効果はTi3Al規則格子の析出と,軟質なβ相の増大との兼ね合いによるものと考えられた.doctoral thesi
ラット三叉神経節における支配領域による神経細胞局在の三次元構築
松本歯科大学博士(歯学)2013甲第155号application/pdf目的:三叉神経節は,眼神経,上顎神経,下顎神経の3枝に分枝し,その末梢枝は頭頚部で広範囲に分布している.三叉神経節内には,これらの神経細胞体が集まっており,それぞれの領域の細胞体の局在には神経節内で偏りがあることが知られている。しかしながら,これまでの報告における表現は統一性に欠け,詳細も不明である.そこで神経損傷マーカーのActivating transcription factor 3(ATF3)抗体を用いて三叉神経節内の神経細胞体の局在を3次元構築し,各神経切断群間で比較検討を行った。 方法:ラットの三叉神経において眼窩上神経,眼窩下神経,下歯槽神経,舌神経それぞれの切断群(各n=3)と,各神経に至るまでの組織の切開や剥離を加えて,目的の神経を切断しない対照モデル(各n=1)を作製し,ATF3の発現がピークとなる7日後に三叉神経節を摘出し,切片を作製した。これらの切片をATF3抗体と,神経細胞のみを染色するNewN抗体,すべての細胞の核を染色するDAPI抗体を用いた免疫組織化学に供し,光学顕微鏡下で画像データとしてコンピューターに取り込み,スライスごとに重ねて三叉神経節を復元するように三次元構築を行った。 結果と考察:ラット三叉神経節は二つに分岐しており,第1枝,第2枝から外側へ向かう枝が3枝となる。三叉神経節内における神経細胞体集団は,大きく二つの領域に分かれており,1つは第1枝,第2枝へ向かう枝の中(第1・2枝領域)に,もう一つは外側に向かう3枝への分岐部周辺(第3枝領域)に局在している。これら2つの領域は三叉神経節の上面側では融合しており(第2・3枝領域連続部),下面側では分離していた。眼窩上神経切断後のATF3陽性細胞の局在は,第1・2枝領域において内側に,眼窩下神経切断後のATF3陽性細胞は,第1・2枝領域ほぼ全域にあり,眼窩上神経細胞領域を含んでいた。下歯槽神経切断後のATF3陽性細胞は主に第3枝分岐部周辺に局在し,第2・3枝領域連続部では点在していた。また,第1・2枝領域においてATF3陽性細胞は広範囲に散在していた。舌神経切断後は下歯槽神経切断後とほぼ同じ領域でATF3陽性細胞局在が確認された.眼窩下神経と下歯槽神経,舌神経の各切断後のATF陽性細胞の局在は第2・3枝領域連続部で混在しており,各神経領域の境界は不明瞭であった.以上より,眼窩上神経と眼窩下神経の細胞局在は混在しており,さらに下歯槽神経と舌神経の細胞局在も混在していることが分かった.また,眼窩下神経細胞局在領 25 域と下歯槽神経や舌神経細胞局在領域との境界は不明瞭であった。今回の結果は,同じ神経節内における損傷した神経細胞が近接する非損傷の神経細胞に何らかの物質を伝達することが異所性感覚異常の発症のメカニズム解明の基礎データと考えられる。doctoral thesi