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Papel dos NMDARs contendo GluN2B na atividade neuronal em rede e maturação sinática através da interação com EphA4
No full textDissertação de Mestrado em Investigação Biomédica apresentada à Faculdade de MedicinaSynapses are critical for neuronal communication and cognitive functions. Santiago Ramón y Cajal's work laid the foundation for understanding synapse structure. Dendritic spines that harbor these synapses exhibit high plasticity, and come in different types, with each one serving various functions in synaptic plasticity, vital for learning and memory. Receptors at these sites such as NMDA and AMPA receptors and their subunits take part in synaptic plasticity, along with shaping neuronal circuits, and their disruption entails the onset of neurodegenerative diseases like Alzheimer’s disease (AD) and autism spectrum disorder (ASD). EphA4 also plays a vital role in regulating dendritic spines, affecting network activity, spine structure, and the movement of AMPARs within synapses. Past research suggests decreased EphA4 levels in GluN2B knockout (KO) mice cortical neurons, though its precise function remains uncertain. We propose that EphA4 forms a signaling complex with NMDARs, specifically through the GluN2B subunit, potentially contributing to the effects on network activity and synapse development, in the absence of the GluN2B subunit. Our study seeks to achieve four main objectives: characterize spine structure and network activity in GluN2B KO cultures, analyze EphA4 expression and activity within these cultures, evaluate EphA4's effects on neuronal branching, and explore the interaction between EphA4 and NMDARs.Multi-electrode array analysis (MEA) revealed that cortical cultures from GluN2B KO cultures showed increased firing rates, bursts, and erratic bursting patterns compared to wild-type (WT) cultures, indicating altered network activity. Additionally, KO neurons exhibited more immature dendritic spines with a higher density of filopodia-like spines, while WT neurons had more mature, mushroom-like spines, revealing the preponderant role of GluN2B in spine maturation. EphA4 expression was found to be reduced in KO neurons, suggesting its involvement in spine maturation. Immunoprecipitation (IP) assays also disclose an interaction between EphA4 and GluN2B-containing NMDARs (GluN2B-NMDARs), possibly impacting spine development and network activity, which may be different with age.Overall, these findings deepen our knowledge of how GluN2B-NMDARs and EphA4 collaboratively impact network activity and synapse maturation, revealing a novel interaction mechanism with broad implications for synaptic processes.As sinapses são críticas para a comunicação neuronal e funções cognitivas. O trabalho de Santiago Ramón y Cajal lançou as bases para a compreensão da sua estrutura. As espinhas dendríticas que abrigam essas sinapses exibem alta plasticidade e podendo ser classificadas em diferentes tipos, cada uma desempenhando diversas funções na plasticidade sináptica, vital para a aprendizagem e memória. Os recetores sinápticos, como os recetores NMDA e AMPA e as suas subunidades, participam na plasticidade sináptica, juntamente com a formação de circuitos neuronais, e a sua disfunção está associada ao aparecimento de doenças neurodegenerativas como a doença de Alzheimer (DA) e a perturbação do espetro do autismo (PEA). O recetor EphA4 também desempenha um papel vital na regulação das espinhas dendríticas, afetando a atividade da rede neuronal, a sua estrutura e o tráfego dos recetores AMPA nas sinapses. Trabalhos anteriores descreveram níveis reduzidos de EphA4 em neurónios corticais de murganho sem a subunidade GluN2B (KO), embora sua função precisa permaneça incerta. Neste estudo, propomos que o recetor EphA4 forma um complexo de sinalização com recetores NMDA, especificamente através da subunidade GluN2B, exercendo influência na atividade da rede neuronal e no desenvolvimento de sinapses. O nosso estudo divide-se em quatro objetivos principais: caracterizar a estrutura das espinhas dendríticas e a atividade da rede neuronal em culturas GluN2B KO; analisar a expressão e atividade de EphA4 nessas culturas; avaliar os efeitos do EphA4 na ramificação neuronal; e explorar a interação entre EphA4 e os recetores NMDA.Os nossos resultados revelam que culturas corticais de murganho de GluN2B KO mostram taxas de disparo e padrões de disparo erráticos e aumentados em comparação com as culturas selvagens (WT), indicando uma atividade da rede neuronal alterada. Além disso, os neurónios KO exibem espinhas dendríticas mais imaturas, enquanto os neurónios WT apresentam espinhas mais desenvolvidas, revelando o papel preponderante do GluN2B na maturação destas estruturas. Verificou-se que a expressão de EphA4 está reduzida nos neurónios KO, sugerindo seu envolvimento na maturação das espinhas dendríticas. Os ensaios de imunoprecipitação (IP) também expuseram uma interação entre EphA4 e recetores NMDA contendo GluN2B (GluN2B-NMDARs), sugerindo que este complexo está envolvido no desenvolvimento das espinhas dendríticas e na atividade da rede neuronal, sendo que este efeito pode potencialmente estar associado à idade.No geral, estas descobertas aprofundam o nosso conhecimento de como GluN2B-NMDARs e EphA4 impactam colaborativamente a atividade da rede neuronal e a maturação das sinapses, revelando um novo mecanismo de interação com amplas implicações para os processos sinápticos.FC
Innovative dressings for chronic wound treatment
No full textTrabalho de Projeto do Mestrado em Engenharia Biomédica apresentado à Faculdade de Ciências e TecnologiaA pele é o maior órgão do corpo humano e tem a função de barreira contra agressões externas do meio ambiente estando por isso sujeita a lesões internas e externas na forma de feridas. O processo de cicatrização de feridas pode ser comprometido quando o sistema imunológico está enfraquecido ou em situações de feridas graves. Nestas situações, é comum o aparecimento de infeções que dificultam e atrasam o processo de cicatrização por longos períodos de tempo. Os pensos para feridas são amplamente utilizados para auxiliar o processo de cicatrização do corpo, com o objetivo de obter e criar um ambiente propício à recuperação rápida e completa da pele, evitando o aparecimento de infeções. Neste trabalho, foram sintetizadas espumas de poliuretano (PU) funcionalizadas com dois líquidos iónicos (LI) da família dos amónios quaternários visando obter biomateriais com propriedades antimicrobianas intrínsecas. As espumas de poliuretano foram sintetizadas utilizando diferentes quantidades de líquido iónico, tendo sido também testada a adição do comonómero polietilenoglicol por forma a aumentar a biocompatibilidade das espumas. Foi ainda testada a influência do anião do LI nas propriedades das espumas recorrendo ao líquido iónico comercial T2EG (T2EG-ES) e líquido iónico modificado obtido pela troca iónica do anião etilsulfato do LI comercial pelo anião cloreto (T2EG-Cl). Para a síntese das espumas foram utilizados um poliol comercial biodegradável e obtido de fontes naturais (Emerox 14550) e isocianatos não aromáticos e pouco voláteis ((poli(hexametileno diisocianato) e a isoforona)), seguindo um processos de síntese relativamente simples. As espumas sintetizadas foram caracterizadas tendo em conta as suas propriedades de capacidade de sorção de água, porosidade, permeabilidade ao vapor de água, condutividade elétrica, capacidade de libertação e permeação de um antibiótico, toxicidade e atividade antimicrobiana. As propriedades antimicrobianas das espumas de poliuretano catiónicas sintetizadas foram avaliadas em relação às bactérias gram-positivas e gram-negativas S. aureus e P. aeruginosa, respetivamente. Foi ainda avaliado o potencial das espumas para monitorização da ferida através de mudanças de cor do penso consoante o pH da ferida.Os resultados mostraram que foi possível a funcionalização das espumas de PU com ambos os líquidos iónicos testados. As espumas funcionalizadas apresentam maior capacidade de sorção de água, maior porosidade e maior taxa de transmissão de vapor de água. A condutividade elétrica das espumas aumentou com a diminuição da porosidade das mesmas. A capacidade de impregnação das espumas com um antibiótico aumentou com o aumento da capacidade se sorção de água das espumas. Foi possível obter cinéticas de libertação controlada de antibiótico durante períodos de pelo menos 8 horas. Evidenciou-se ser possível a monitorização do estado da ferida pela mudança de cor do penso em resultado das variações de pH que a ferida apresenta em casos de infeção. A atividade antimicrobiana contra as bactérias gram-positivas S. aureus revelou ser maior para as amostras de espuma de PU com maior quantidade de líquido iónico usado na sua síntese. Já a toxicidade das espumas de PU, foi menor nas espumas sintetizadas com o líquido iónico comercial T2EG contendo o anião etilsulfato e o comonómero polietilenoglicol. De um modo geral, os resultados obtidos para as espumas funcionalizadas com líquidos iónicos foram promissores, provando que a presença de LIs melhora variadas propriedades do material e deve continuar a ser estudado, principalmente para uma melhor avaliação da atividade antimicrobiana e redução da toxicidade associada.The skin is the largest organ of the human body and serves as a barrier against external environmental aggressions, making it susceptible to both internal and external injuries in the form of wounds. The wound healing process can be compromised when the immune system is weakened or in cases of severe wounds. In these situations, infections commonly arise, complicating and delaying the healing process for extended periods of time. Wound dressings are widely used to assist in the body's healing process, aiming to create an environment conducive to rapid and complete skin recovery while preventing infections.In this work, polyurethane (PU) foams functionalized with two quaternary ammonium-based ionic liquids (ILs) were synthesized to obtain biomaterials with intrinsic antimicrobial properties. The polyurethane foams were synthesized using different quantities of ionic liquid, and the addition of the comonomer polyethylene glycol was also tested to increase the biocompatibility of the foams. The influence of the IL's anion on the foam properties was investigated using the commercial ionic liquid T2EG (T2EG-ES) and a modified ionic liquid obtained by ion exchange of the ethyl sulfate anion of the commercial IL with the chloride anion (T2EG-Cl). For the foam synthesis, a biodegradable commercial polyol derived from natural sources (Emerox 14550) and non-aromatic, low-volatile isocyanates (poly(hexamethylene diisocyanate) and isophorone) were used, following a relatively straightforward synthesis process.The synthesized foams were characterized based on their properties of water sorption capacity, porosity, water vapor permeability, electrical conductivity, antibiotic release capacity, toxicity, and antimicrobial activity. The antimicrobial properties of the synthesized cationic polyurethane foams were evaluated against the gram-positive and gram-negative bacteria S. aureus and P. aeruginosa, respectively. The potential of the foams for wound monitoring through color changes of the dressing according to the wound's pH was also assessed.The results showed that functionalization of the PU foams with both tested ionic liquids was successful. The functionalized foams exhibited higher water sorption capacity, greater porosity, and increased water vapor transmission rate. The electrical conductivity of the foams increased with decreasing porosity. The foam's impregnation capacity with an antibiotic increased with the foam's water sorption capacity. Controlled release kinetics of the antibiotic for periods of at least 8 hours were achieved. It was possible to monitor the wound's status by the dressing's color change due to variations in pH that the wound presents in cases of infection. The antimicrobial activity against the gram-positive bacteria S. aureus was higher for the PU foam samples with a higher amount of ionic liquid used in their synthesis. The toxicity of the PU foams was lower in foams synthesized with the commercial ionic liquid T2EG containing the ethyl sulfate anion and the comonomer polyethylene glycol.Overall, the results obtained for the foams functionalized with ionic liquids were promising, proving that the presence of ILs improves various characteristics of the material and should continue to be studied, particularly for a better evaluation of antimicrobial activity and reduction of associated toxicity
PESQUISA DE INIBIDORES DE SIALIDASES FÚNGICAS
No full textDissertação de Mestrado em Química Medicinal apresentada à Faculdade de Ciências e TecnologiaAs alergias respiratórias desde sempre foram afetando a população mundial, podendo apresentar formas mais graves como asma severa que pode ser fatal. Grande parte dos fungos responsáveis por estas alergias são fungos filamentosos. Um destes fungos é Alternaria alternata, para o qual 3% da população em Portugal tem sensitização. Num estudo prévio, a análise proteómica deste fungo mostrou uma grande expressão de sialidase, uma enzima responsável por clivar ácidos siálicos, que são monossacarídeos com nove carbonos que se ligam a glicoconjugados nas membranas da célula. O ácido siálico está presente em grande abundância nas vias respiratórias e em agentes patogénicos, as sialidases participam nos processos de adesão, colonização e infeção destes tecidos, sendo por isso um importante alvo terapêutico.Os principais objetivos desta tese foram tentar caracterizar a sialidase de A. alternata, determinando a sua atividade e localização, assim como sintetizar quimicamente compostos que inibam a sua atividade. Foram realizados ensaios de atividade que permitiram observar maior atividade da sialidase nos esporos do que nas hifas e também que a enzima parece ser intracelular, pois apresenta maior atividade nas frações intracelulares. Também se observou atividade em vesiculas extracelulares, provando que esta é transportada por vesiculasextracelulares para fora da célula.Foi testado um inibidor da sialidase do vírus Influenza, o Oseltamivir, um fármaco clinicamente usado e ainda quatro derivados de chalconas que foram previamente sintetizados. O oseltamivir apresentou uma resposta dependente da concentração, o IC50 determinado foi de 4,6 mM, um valor cerca de 3000 vezes superior ao IC50 da sialidase do vírus Influenza. Quanto aos derivados de chalconas, estes não mostraram qualquer atividade inibitória na sialidase de A. alternata. Por outro lado, foi iniciada a síntese de inibidores de sialidases com o intuito de determinar a especificidade da sialidase de A. alternata. Para tal, tentou-se sintetizar ácido siálico, um precursor do Neu5Ac2en e do Kdn2en, que são inibidores específicos de sialidases e de sialidases fúngicas chamadas Kdnase, respetivamente.Contudo não foi possível finalizar esta síntese, devido a baixos rendimentos, apenas conseguindo obter um percursor de ácido siálico; uma vez que não se obteve acido siálico não foi possível prosseguir para a síntese dos inibidores pretendidos. Contudo, foi possível otimizar a sua síntese química de acordo com a literatura descrita, tendo-serealizado uma tentativa de síntese por via enzimática.Em suma, com este trabalho foi possível estudar pela primeira vez a sialidase de A. alternata, e foram feitos grandes progresso na otimização da síntese química de inibidores de sialidases, os quais poderão ter uma aplicação relevante na prevenção da colonização das vias aéreas superiores por A. alternata, e consequentemente, prevenção de sintomas de alergia provocados por este fungos.Respiratory allergies have always affected the world's population; serious forms such as severe asthma that can be fatal to the patients. Most of the fungi responsible for these allergies are filamentous fungi. One of these fungi is Alternaria alternata, to which 3% of the population in Portugal is sensitized. In a previous study, proteomic analysis of this fungus showed high expression of sialidase, an enzyme responsible for cleaving sialic acids, which are nine-carbon monosaccharides that bind to glycoconjugates in cell membranes. Sialic acids are present in great abundance in the airways; in pathogenic agents, sialidases participate in the processes of colonization and infection of these tissues, thus being an important therapeutic target.The main objectives of this thesis were centred in the characterization of the A. alternata sialidase, determining its activity and location, as well as to chemically synthesize compounds that inhibit its activity.Activity assays showed that the sialidase activity is higher in spores than in hyphae and that the enzyme appears to be intracellular, as the intracellular fractions showed higher activity. The sialidase activity was also observed in extracellular vesicles, proving that these structures transport sialidase out of the fungal cell.Oseltamivir, an inhibitor of the Influenza virus sialidase, clinically used, and four chalcone derivatives previously synthesized, were tested to determine their inhibitory activity against A. alternata sialidase. Oseltamivir showed a concentration-dependent response, with a IC50 of 4.6 mM, a value about 3000 times higher than the IC50 of the sialidase of the Influenza virus. In contrast, the chalcone derivatives did not show any inhibitory activity on A. alternata sialidase.On the other hand, the synthesis of sialidase inhibitors was initiated to determine the specificity of the A. alternata sialidase. For this, sialic acid was synthesized, a precursor and Neu5Ac2en and Kdn2en which are specific inhibitors of sialidases and of the fungal sialidase termed Kdnase, respectively.However, it was not possible to obtain this compound, only obtaining a precursor of the sialic acids, because of the low produced yields, and therefore it was not possible tocontinue with the synthesis of the intended inhibitors. Nevertheless, it was possible to optimize its chemical synthesis according to the described literature and an attempt was also made to synthesize it enzymatically.In conclusion, with this work it was possible to study the sialidase of A. alternata for the first time, and great progress was made in optimizing the chemical synthesis of sialidase inhibitors, which may have a relevant application in the prevention of colonization of the upper airways by A. alternata, and consequently, prevention of allergy symptoms caused by this fungus.FCTFC
3D printing of biomedical devices for external use
No full textTrabalho de Projeto do Mestrado em Engenharia Biomédica apresentado à Faculdade de Ciências e TecnologiaO avanço da tecnologia tem permitido a evolução em diferentes áreas, principalmente no âmbito biomédico. A produção de novos dispositivos biomédicos e de substituição de outros já existentes, tem sido objeto de estudo de vários investigadores ao longo dos últimos anos, com o objetivo de ter dispositivos mais eficientes, personalizados, com melhor aspeto visual e melhor custo de fabrico. As ortóteses, que são muito importantes nos processos de reabilitação de fraturas ósseas, fazem parte desse grupo de dispositivos que foram estudados nos últimos anos.Um dos maiores problemas atuais a nível mundial é a produção excessiva de plásticos. Neste contexto, a redução na quantidade de matérias primas e a respetiva reciclagem são vias para combater este problema. A produção de um dispositivo eficiente, capaz de ser reciclado e utilizando materiais 100% reciclados parece ser uma boa abordagem para uma contribuição válida.O principal objetivo é avaliar a produção de dispositivos biomédicos externos em polímeros reciclados e recicláveis, recorrendo ao fabrico aditivo (impressão 3D) usando a tecnologia de fabricação por filamento fundido (FFF). O dispositivo a ser fabricado é uma ortótese para punho-mão. A impressão 3D permite uma maior sustentabilidade do que outras formas de fabrico, pois cerca de 97% do material utilizado é incorporado no componente, logo vai gerar muito pouco desperdício. Adicionalmente, e para a aplicação pensada para o presente trabalho não necessita de moldes e tem a grande vantagem de produzir dispositivos completamente personalizados. Os materiais testados incluem o poli (ácido láctico) natural (PLA), o poli (ácido láctico) reciclado azul (PLARA) e o poli (ácido lático) reciclado branco (PLARB). Para todos os materiais poliméricos foram avaliadas as propriedades químicas e térmicas dos filamentos comerciais. Nos provetes impressos foram avaliadas a capacidade de sorção de suor artificial e as propriedades mecânicas, especificamente a resistência ao impacto.Através dos ensaios mecânicos de impacto foi possível inferir que o material que possui melhores propriedades mecânicas para a produção da ortótese é o PLA, por ter absorvido maior quantidade de energia. Já em relação a capacidade de sorção os provetes que apresentaram resultados mais promissores foram do PLARA.Este estudo forneceu indicações favoráveis quanto ao sucesso de utilizar a impressão 3D, especificamente a tecnologia FFF a partir de materiais poliméricos reciclados e recicláveis para fabricar ortóteses.The advancement of technology has allowed an evolution in different areas, mainly in the biomedical scope. The production of new biomedical devices and replacement of existing ones has been the subject of study by several researchers over the last few years, with the aim of having more efficient, personalized devices, with better designs and better manufacturing cost. Orthoses, which are very important in bone fracture rehabilitation processes, are part of this group of devices to be studied in recent years.One of the biggest current problems worldwide is the excessive production of plastics. In this sense, recycling emerges as one of the solutions to combat this problem. The production of an efficient device capable of being recycled seems be a good alternative for the mentioned problem.The main objective is to evaluate the production of external biomedical devices in recycled and recyclable polymers, using the manufactured additive (3D printing), especifically the fused filament fabrication technology (FFF). The device to be fabricated is a wrist-hand orthosis. 3D printing is a sustainable technology, considering that the amount of waste produced is very low, as 97% of the raw material is incorporated into the device. Moreover, for the particular application aimed in this work it does not require molds and has the great advantage of producing completely customized devices.Materials tested include natural poly(lactic acid) (PLA), blue recycled poly(lactic acid) (PLARA) and white recycled poly(lactic acid) (PLARB). For all polymeric materials, the chemical and thermal properties of commercial filaments were evaluated, as well as the ability to absorb artificial sweat and the mechanical properties of printed specimns.Through the mechanical impact tests, it was possible to infer that the material that has the best mechanical properties for the production of the orthosis is PLA, as it absorbed a greater amount of energy. Regarding the sorption capacity, the specimens that presented the most promising results were from PLARA.This study provided favorable indication about the success of using 3D printing and recycled polymeric materials to manufacture orthoses
A relação entre memórias afiliativas precoces e preocupações dismórficas: O papel da vergonha, do autocriticismo, e da autocompaixão
No full textDissertação de Mestrado em Intervenções Cognitivo-Comportamentais em Psicologia Clínica e da Saúde apresentada à Faculdade de Psicologia e de Ciências da EducaçãoLiterature highlights early experiences of abuse and neglect as a risk factor for Body Dysmorphic Disorder (BDD). However, it has not yet been established the potential link between the absence of memories of positive affiliative experiences with dysmorphic symptomatology. The present study aimed to explore in which way the recall of early memories of warmth and safeness may be related to the severity of dysmorphic concerns, through the mediating role of self-criticism, self-compassion, and shame. The study sample comprised 422 adult participants (107 males and 305 females) from the general population fluent in the Portuguese language. Results showed that fewer affiliative memories were associated with higher levels of self-criticism and lower levels of self-compassion, which in turn were associated with higher levels of shame and higher levels of dysmorphic symptomatology. Results also confirmed the mediator effect of self-criticism, self-compassion, and shame, on the relationship between the recall of early affiliative memories and the severity of dysmorphic symptomatology, accounting for 35% of its variance. The path model was invariant among male and female participants. Though the obtained data are preliminary, these findings may open new avenues for research, and carry relevant clinical implications by supporting the pertinence of a compassion-focused Therapy (CFT) based intervention targeted to individuals presenting dysmorphic symptomatology, who tend to have higher levels of shame and self-criticism.A literatura destaca as experiências de abuso e negligência na infância enquanto fator de risco para a Perturbação Dismórfica Corporal (PDC). Contudo, ainda não foi investigada a potencial relação entre a ausência de memórias de experiências afiliativas positivas e a sintomatologia dismórfica. O presente estudo visou explorar de que forma a recordação de memórias precoces de calor e segurança se pode relacionar com a severidade das preocupações dismórficas, através do papel mediador do autocriticismo, da autocompaixão, e da vergonha. A amostra deste estudo foi constituída por 422 participantes adultos da população geral (107 homens e 305 mulheres) fluentes em língua portuguesa. Os resultados revelaram que menos memórias afiliativas se associaram a níveis mais elevados de autocriticismo e a níveis mais baixos de autocompaixão que, por sua vez, se associaram a níveis mais elevados de vergonha e de sintomatologia dismórfica. Os resultados confirmaram, ainda, o efeito mediador do autocriticismo, da autocompaixão, e da vergonha, na relação entre a recordação de memórias afiliativas precoces e a severidade da sintomatologia dismórfica, sendo responsável por 35% da sua variância. Adicionalmente, o modelo testado revelou-se invariante. Embora preliminares, os resultados obtidos podem ter implicações relevantes para a investigação e prática clínica, suportando a pertinência de uma intervenção baseada na Terapia Focada na Compaixão (TFC) em indivíduos que apresentem sintomatologia dismórfica
Nova interação entre Neurexina e recetores do tipo NMDA num contexto de desenvolvimento neuronal.
No full textDissertação de Mestrado em Biologia Celular e Molecular apresentada à Faculdade de Ciências e TecnologiaO correto alinhamento entre as membranas pré- e pós-sinápticas na sinapse é essencial para a libertação de neurotransmissores na fenda sináptica e para a ligação destas moléculas aos respetivos receptores. Estes processos são críticos para a formação, maturação e consolidação da sinapse. Este alinhamento das duas membranas é assegurado por proteínas de ambos os lados da sinapse. Exemplo disso é a interação entre a Neurexina (Nrxn), a Neuroliguina (Nlgn) e o recetor de N-metil-D-aspartato (NMDAR). Devido às suas implicações em diferentes doenças neurológicas, como a esquizofrenia e a perturbação do espetro do autismo, é considerada uma das interacções transsinápticas mais importantes em sinapses imaturas e maduras, sendo por isso o foco deste projeto. Embora estas proteínas tenham sido sempre descritas como parte de um tricomplexo, neste trabalho nós desáfiamos este modelo. Com base em resultados obtidos anteriormente que mostraram uma diminuição nos níveis de Nrxn2α em neurónios do córtex que não expressavam a subunidade GluN2B - knockout (KO) de NMDAR-GluN2B, sem alterações nos níveis de Nlgn2, questionámos a necessidade da Nlgn como uma molécula intermediária neste complexo, levando a uma possível interação exclusivamente mediada por Nrxn e NMDAR. Por este motivo, neste estudo, propomos investigar esta interação bidirecional com maior detalhe, examinando os domínios envolvidos e a co-distribuição das diferentes isoformas de Nrxn bem como as subunidades NMDAR-GluN2B e -GluN2A em neurónios em cultura de rato e murganho, durante o desenvolvimento. O nosso trabalho revelou que Nrxn1α e Nrxn3α reorganizam-se, favorecendo uma maior interação com NMDAR-GluN2A, em neurónios de córtex com 14 dias in vitro. Contrariamente, Nrxn2α não mostra preferência por nenhuma subunidade na mesma idade, exibindo, no entanto, preferência por NMDAR-GluN2B em neurónios mais maduros. Os neurónios NMDAR-GluN2B KO mostraram uma distribuição aumentada de clusters de Nrxn, sugerindo um mecanismo compensatório envolvendo as outras isoformas de Nrxn.O estudo caracteriza ainda os domínios de interação de Nrxn e NMDAR-GluN2B, confirmando a natureza extracelular da sua ligação. Curiosamente, a interação entre Nrxn e NMDAR-GluN2B demonstrou requerer a presença de sulfato de heparano, um mecanismo desconhecido até ao momento. Este resultado sugere que o sulfato de heparano regula as interações de Nrxn e permite explorar possíveis interações diretas entre Nrxn e outras proteínas, como NMDAR-GluN2B. Assim, este projeto lança um novo olhar sobre a complexa interação entre Nrxn e NMDAR-GluN2B na função e alinhamento sináptico, desafiando modelos anteriores e destacando a necessidade de mais pesquisa sobre as especificidades dessa interação, e os seus efeitos em diferentes regiões cerebrais e etapas do desenvolvimento. Os nossos resultados contribuirão para uma melhor compreensão da formação, maturação e plasticidade das sinapses, com implicações para futuros estudos que explorem alvos terapêuticos para doenças neurológicas.The interaction between the pre- and postsynaptic membranes at the synapse is essential for the release of neurotransmitters in the synaptic cleft and the efficient binding of these molecules to the receptors on the opposite side. These processes are critical for the formation, maturation and consolidation of the synapse and require the alignment of the two opposing membranes, which is ensured by proteins on both sides of the synapse. An example of this is the interaction between Neurexin (Nrxn), Neuroligin (Nlgn) and the N-methyl-D-aspartate receptor (NMDAR). Due to its implications in different neurological disorders such as schizophrenia (SCZ) and autism spectrum disorder (ASD), it is considered one of the most important transsynaptic interactions in immature and mature synapses and is therefore the target of this project. Although these proteins have always been described as part of a tricomplex, in this work we challenge this model. Based on our previous results showing a decrease in Nrxn2α levels in NMDAR-GluN2B knockout (KO) neurons but without changes in Nlgn2 levels, we question the need for Nlgn as an intermediate molecule in this complex, leading to a possible interaction exclusively mediated by Nrxn and NMDAR. Therefore, in this study, we propose to investigate this two-way interaction in more detail by examining the domains involved and the co-distribution of the different Nrxn isoforms and the NMDAR-GluN2B and -GluN2A subunits in rat and mouse cortical neurons, in a developmental context. Our experiments revealed that Nrxn1α and Nrxn3α reorganize in dendrites, favoring enhanced interplay with NMDAR-GluN2A, at 14 days in vitro. In contrast, Nrxn2α shows no preference for either subunit at the same early stages. At mature synapses, however, Nrxn2α exhibits a preference for NMDAR-GluN2B. Surprisingly, NMDAR-GluN2B KO neurons showed an increased distribution of Nrxn clusters, suggesting a compensatory mechanism of specific Nrxn isoforms.Furthermore, the study characterizes the interacting domains of Nrxn and NMDAR-GluN2B, confirming the extracellular nature of their connection. We show the interaction between Nrxn and NMDAR-GluN2B requires the presence of heparan sulfate. This result suggests that heparan sulfate regulates Nrxn interactions and provides insight into possible direct interactions between Nrxn and other proteins, such as NMDAR-GluN2B. Thus, this project sheds new light on the complex interplay between Nrxn and NMDAR-GluN2B in synaptic function and alignment, challenging previous models and highlighting the need for further research on the specifics of this interaction and its effects in different brain regions and developmental stages. Our results will contribute to a better understanding of synapse formation, maturation and plasticity and have implications for future studies exploring therapeutic targets for neurological diseasesFCTOutro - IBRO Return Home Fellowship 2021Outro - NARSAD Young Investigator Grant (2021 BBRF Young Investigator Grant 29902
Extração de lenhina através do uso de fluídos magnéticos
No full textDissertação de Mestrado em Engenharia Química apresentada à Faculdade de Ciências e TecnologiaFerrofluids are colloidal suspensions composed of coated magnetic nanoparticles in a liquid medium. They are easily tunable and have been employed in several types of microextractions to eliminate tedious post-extraction separation steps. In this study, for the first time, ferrofluids were used to extract lignin from fibers obtained from a thermomechanical treatment of Spruce wood (known as Asplund fibers). Before the delignification, different combinations of coatings and solvents, including, bio-based, and deep eutectic solvents, were investigated according to their colloidal stability. This evaluation began with a preliminary visualization experiment using a strong magnet to ascertain the homogeneity of the ferrofluid. Subsequently, an analysis of the hydrodynamic diameter of the nanoparticles and their zeta potential was conducted. Following the analysis, an ethylene glycol (EG)-based ferrofluid with 10 % m/m iron oxide particles coated with citric acid (EG-FF 10 % solids) showed the best results, despite having a relatively large average diameter of 220.2 nm. Nevertheless, this value might be exaggerated due to the higher viscosity of EG and the possible irregular shape of the nanoparticles.Additionally, the heat generated by the ferrofluids in the presence of an alternating magnetic field was also exploited. Temperature plays a crucial role in cleaving the β-O-4 bonds, process that requires a substantial amount of energy. From the experiments, EG-FF 10 % solids reached 92 ºC under a circulating current in a hollow copper coil, generating a magnetic field with approximately 25 mT. Unfortunately, this temperature was found to be insufficient for the lignin removal processes, which typical are performed around 130 ºC. Therefore, an additional experiment EG-FF 15 % solids was also conducted, and, in under 5 min, the temperature rose to 150 ºC, showcasing the efficiency of the heat induced by the ferrofluids. Finally, five batch extractions were performed, each lasting one hour, using acidified and non-acidified EG (acids act as catalysts in delignification processes), as well as two different solvent to wood ratios (10:1 and 20:1 in a mass ratio). The best results obtained were achieved with the non-acidified EG-based ferrofluid and a 20:1 solvent to wood ratio, resulting in a delignification rate of 54.16 ± 2.74 %, and a residual lignin content of 12.34 ± 1.10 %. Afterwards, the ferrofluid was separated from the pulp with a particle retrieval efficiency of 63.79 ± 4.93 %, indicating some particle loss. One of the reasons for such is the adsorption of the particles into the lignocellulosic matrix via esterification reactions between the carboxylic groups of the citric acid and the hydroxyl groups present in the lignin carbohydrate complexes. From two of the batches, the particles were recycled and evaluated through an FTIR analysis. The spectra showed no changes in the composition of the particles even after one delignification experiment.Ferrofluidos são dispersões coloidais constituídas por nanopartículas magnéticas revestidas dispersas num meio líquido. Estes são facilmente sintonizáveis e podem ser aplicados em diversos tipos de microextrações eliminando etapas de separação de fases pós-extração. Na presente tese, pela primeira vez, ferrofluidos foram utilizados na extração de lenhina de fibras obtidas através do tratamento termomecânico de madeira de Abeto (conhecidas como fibras de Asplund). Anteriormente à deslignificação, diversas combinações de surfactantes e solventes, incluído de base biológica e solventes eutéticos profundos, foram investigados de acordo com a estabilidade coloidal exibida. Primeiramente, esta avaliação foi realizada por um teste visual preliminar que utiliza um íman forte de forma a averiguar se o ferrofluido mantinha apenas uma fase. Após essa análise, o diâmetro hidrodinâmico das nanopartículas e o seu potencial zeta foram averiguados. Como resultado, o ferrofluido baseado em etilenoglicol (EG) com 10 % m/m de partículas de óxido de ferro revestidas por ácido cítrico (EG-FF 10 % sólidos) apresentou melhores resultados, apesar do relativamente grande diâmetro hidrodinâmico médio de 220.2 nm. Ainda que o valor obtido seja elevado, este pode ter sido exagerado devido à viscosidade significativa do EG e à possível irregularidade na forma das nanopartículas. Adicionalmente, o calor gerado pelos ferrofluidos na presença de campos magnéticos alternados também foi explorado. A temperatura apresenta um papel crucial na quebra das ligações β-O-4, processo que necessita de uma quantidade substancial de energia. Através das experiências realizadas, o EG-FF 10 % sólidos atingiu 92 ºC sob um campo magnético de cerca de 25 mT, gerado por uma bobina de cobre oca onde circula uma corrente elétrica. Infelizmente, esta temperatura não é suficiente para processos de remoção de lenhina, onde tipicamente são utilizadas temperaturas maiores que 130 ºC. Assim, como experiência adicional, testou-se também EG-FF 15 % sólidos e, em menos de 5 min, a temperatura subiu até aos 150 ºC, demonstrando a eficiência do calor induzido pelos ferrofluidos. Por fim, cinco extrações descontínuas foram realizadas, durante uma hora cada, utilizando EG acidificado e não acidificado (ácidos atuam como catalisadores no processo de deslignificação), bem como dois rácios diferentes entre solvente e fibras de madeira (10:1 e 20:1 em base mássica). Os melhores resultados foram alcançados com o uso de EG-FF 10 % sólidos, sem acidificação e um rácio de 20:1, resultando numa remoção de lenhina de 54.16 ± 2.74 % e um conteúdo de lenhina residual de 12.34 ± 1.10 %. Após a extração, o ferrofluido foi separado da polpa com uma eficiência de recuperação de partículas de 63.79 ± 4.93 %, o que indica alguma perda das mesmas. Uma das razões é a adsorção de partículas na matriz lignocelulósica através de reações de esterificação entre os grupos carboxílicos livres do ácido cítrico e dos grupos hidroxilos presentes nos complexos lenhina-carboidratos. Para duas das extrações descontínuas, as partículas foram recicladas e avaliadas através de uma análise FTIR. Os espetros não demonstraram alterações nas partículas, mesmo após uma deslignificação
Washing of Mononitrobenzene with Water Rich in Nitrophenols
No full textDissertação de Mestrado em Engenharia Química apresentada à Faculdade de Ciências e TecnologiaO mononitrobenzeno (MNB) é obtido através da nitração do benzeno, tendo como subprodutos, para além do dinitrobenzeno, os nitrofenóis, mais especificamente o 2,4-dinitrofenol (DNF) e o 2,4,6-trinitrofenol (TNF). O MNB, que na indústria química é um produto intermediário, deve cumprir as especificações requeridas pelas suas utilizações a jusante. Assim, o MNB que sai dos nitradores é submetido à purificação por um processo de lavagem por extração-reativa em meio alcalino, onde são removidos os nitrofenóis. A água de lavagem resultante, rica em nitrofenóis, e que representa um perigo para a saúde humana e para os ecossistemas, tem como fim a incineração, mas, dado o seu elevado teor em água, é antes submetida a um processo de concentração. Neste trabalho, estudou-se a possibilidade de suprimir a etapa de concentração de nitrofenóis, por alteração das condições operatórias da lavagem alcalina, garantindo a especificação da corrente de entrada no incinerador.Estando previsto que um dos parâmetros a alterar seja a temperatura de operação do lavador, recorreu-se a amostras de água rica em nitrofenóis com diferentes concentrações, para avaliar a temperatura de formação de cristais de nitrofenóis e a sua dissolução. Confirmou-se a influência da composição da água rica nos dois fenómenos. Tanto a temperatura de formação de cristais como a de dissolução aumentaram com o aumento da concentração de nitrofenóis. Para uma amostra de água de lavagem numa concentração habitual nesta indústria, com concentração em NFs de 9.8, as temperaturas obtidas foram de 0.58 para a formação muito significativa de cristais e 0.90 para a sua total dissolução. Já para uma concentração de cerca de 31.4, estas mesmas temperaturas foram 1.00 e 1.13, respetivamente. A eficiência de extração do lavador do processo também foi avaliada ao longo de um dia operação, através da recolha e caracterização de amostras das correntes de entrada e saída. Registou-se uma maior eficiência de lavagem do dinitrofenol face ao trinitrofenol. A influência da variação da concentração de nitrofenóis, tanto na água de lavagem como no MNB, foi estudada em ensaios de extração realizados em laboratório. Verificou-se que o aumento da quantidade de nitrofenóis na água de lavagem conduziu a uma, pouco significativa, diminuição das eficiências de extração, sendo esta variação mais evidente para o TNF. Atualmente o primeiro lavador alcalino opera à temperatura de 1.17 e pretendeu-se estudar a viabilidade de um aumento de temperatura em 0.17 para evitar a formação de cristais de nitrofenóis, se o lavador vier a trabalhar com concentração em NFs mais elevada. Recorrendo ao Aspen Plus V12.1, e assumindo uma proporção 9:1 da mistura MNB/benzeno, obteve se um intervalo para a temperatura de ebulição de 142 °C (bubble-point) a 204 °C, (dew-point). Este foi um primeiro passo de um estudo mais aprofundado que permita garantir estarem reunidas condições de operação em segurança utilizando apenas um lavador alcalino no processo e enviar o efluente para incineração.Mononitrobenzene (MNB) is obtained by the nitration of benzene, having nitrophenols (NFs) as by-products: 2,4-dinitrophenol (DNF) and 2,4,6-trinitrophenol (TNF), in addition to dinitrobenzene. Mononitrobenzene, which is an intermediate in the chemical industry, must meet the specifications required for its downstream uses. Thus, the MNB that comes out of the nitrators undergoes a reactive extraction process in alkaline medium, where the nitrophenols are removed. The resulting washing water, rich in nitrophenols and an hazard for human health and ecosystems, is incinerated. Due to its high water content, it is first subjected to a concentration process. In this work, we studied the possibility of suppressing the nitrophenol concentration step by changing the operating conditions of the alkaline washing, guaranteeing the specification of the inlet current in the incinerator.Since it is expected that one of the parameters to be changed is the operating temperature of the washer, samples of water rich in nitrophenols with different concentrations were used to assess the temperature of crystallization and dissolution of the nitrophenols. The influence of the composition of the water rich in nitrophenols on both phenomena was confirmed. Both the crystal formation and dissolution temperatures increased with increasing nitrophenol concentration. For a sample of washing water at a usual concentration in this industry, with a concentration in NFs of 9.8, the temperatures obtained were 0.58 for a very significant formation of crystals and 0.90 for their complete dissolution. For a concentration of about 28.6, these temperatures were 1.00 and 1.13, respectively.The extraction efficiency of the process washer was also evaluated over a day of operation through the collection and characterization of samples of the inlet and outlet streams. A higher washing efficiency of dinitrophenol compared to trinitrophenol was registered. The influence of variation in the concentration of nitrophenols, both in the washing water and in the MNB, was studied in extraction tests carried out in the laboratory. It was confirmed that the increase in the amount of nitrophenols in the washing water led to a minor decrease in extraction efficiencies, this variation being more evident for TNF.Currently, the first alkaline washer operates at a temperature of 1.17 and it was intended to study the feasibility of a temperature increase of 0.17 to avoid the formation of nitrophenols crystals if the washer were to work with higher concentration in NFs. Using Aspen Plus V12.1, and assuming a 9:1 ratio of MNB/benzene in the mixture, a boiling point 142 °C (bubble-point) and a dew-point of 204 °C were obtained. This was a first step in a more in-depth study to ensure that safe operating conditions are met, using only an alkaline washer in the process and sending the effluent for incineration
Diffuse Idiopathic Pulmonary Neuroendocrine Cell Hyperplasia (“DIPNECH”) - case report and review
No full textTrabalho Final do Mestrado Integrado em Medicina apresentado à Faculdade de MedicinaEste trabalho relata o caso de uma doente de 84 anos de idade seguida em consulta de Pneumologia desde 2017. Em 2010 iniciou queixas de tosse intermitente com expetoração mucóide, dispneia de esforço e sibilância, que se intensificaram progressivamente ao longo dos anos seguintes. Adicionalmente, foi identificada a presença de pequenos nódulos sólidos e um padrão de “atenuação em mosaico” em tomografia computorizada de alta resolução (TCAR). A doente não comportava comorbilidades relevantes para o quadro clínico atual e não apresentava antecedentes de tabagismo ou historial familiar de relevo. Ao exame objetivo evidenciavam-se alguns fervores basais em “velcro” e squeaks à auscultação pulmonar.Em consequência da clínica e dos resultados imagiológicos, procedeu-se a uma biópsia pulmonar por videotoracoscopia cirúrgica (VATS) que permitiu um enquadramento diagnóstico de Hiperplasia Difusa Idiopática Pulmonar de Células Neuroendócrinas (DIPNECH).Este trabalho relata o caso de uma doente de 84 anos de idade seguida em consulta de Pneumologia desde 2017. Em 2010 iniciou queixas de tosse intermitente com expetoração mucóide, dispneia de esforço e sibilância, que se intensificaram progressivamente ao longo dos anos seguintes. Adicionalmente, foi identificada a presença de pequenos nódulos sólidos e um padrão de “atenuação em mosaico” em tomografia computorizada de alta resolução (TCAR). A doente não comportava comorbilidades relevantes para o quadro clínico atual e não apresentava antecedentes de tabagismo ou historial familiar de relevo. Ao exame objetivo evidenciavam-se alguns fervores basais em “velcro” e squeaks à auscultação pulmonar.Em consequência da clínica e dos resultados imagiológicos, procedeu-se a uma biópsia pulmonar por videotoracoscopia cirúrgica (VATS) que permitiu um enquadramento diagnóstico de Hiperplasia Difusa Idiopática Pulmonar de Células Neuroendócrinas (DIPNECH).Este trabalho relata o caso de uma doente de 84 anos de idade seguida em consulta de Pneumologia desde 2017. Em 2010 iniciou queixas de tosse intermitente com expetoração mucóide, dispneia de esforço e sibilância, que se intensificaram progressivamente ao longo dos anos seguintes. Adicionalmente, foi identificada a presença de pequenos nódulos sólidos e um padrão de “atenuação em mosaico” em tomografia computorizada de alta resolução (TCAR). A doente não comportava comorbilidades relevantes para o quadro clínico atual e não apresentava antecedentes de tabagismo ou historial familiar de relevo. Ao exame objetivo evidenciavam-se alguns fervores basais em “velcro” e squeaks à auscultação pulmonar.Em consequência da clínica e dos resultados imagiológicos, procedeu-se a uma biópsia pulmonar por videotoracoscopia cirúrgica (VATS) que permitiu um enquadramento diagnóstico de Hiperplasia Difusa Idiopática Pulmonar de Células Neuroendócrinas (DIPNECH).Este trabalho relata o caso de uma doente de 84 anos de idade seguida em consulta de Pneumologia desde 2017. Em 2010 iniciou queixas de tosse intermitente com expetoração mucóide, dispneia de esforço e sibilância, que se intensificaram progressivamente ao longo dos anos seguintes. Adicionalmente, foi identificada a presença de pequenos nódulos sólidos e um padrão de “atenuação em mosaico” em tomografia computorizada de alta resolução (TCAR). A doente não comportava comorbilidades relevantes para o quadro clínico atual e não apresentava antecedentes de tabagismo ou historial familiar de relevo. Ao exame objetivo evidenciavam-se alguns fervores basais em “velcro” e squeaks à auscultação pulmonar.Em consequência da clínica e dos resultados imagiológicos, procedeu-se a uma biópsia pulmonar por videotoracoscopia cirúrgica (VATS) que permitiu um enquadramento diagnóstico de Hiperplasia Difusa Idiopática Pulmonar de Células Neuroendócrinas (DIPNECH).Este trabalho relata o caso de uma doente de 84 anos de idade seguida em consulta de Pneumologia desde 2017. Em 2010 iniciou queixas de tosse intermitente com expetoração mucóide, dispneia de esforço e sibilância, que se intensificaram progressivamente ao longo dos anos seguintes. Adicionalmente, foi identificada a presença de pequenos nódulos sólidos e um padrão de “atenuação em mosaico” em tomografia computorizada de alta resolução (TCAR). A doente não comportava comorbilidades relevantes para o quadro clínico atual e não apresentava antecedentes de tabagismo ou historial familiar de relevo. Ao exame objetivo evidenciavam-se alguns fervores basais em “velcro” e squeaks à auscultação pulmonar.Em consequência da clínica e dos resultados imagiológicos, procedeu-se a uma biópsia pulmonar por videotoracoscopia cirúrgica (VATS) que permitiu um enquadramento diagnóstico de Hiperplasia Difusa Idiopática Pulmonar de Células Neuroendócrinas (DIPNECH).This paper reports the case of an 84-year-old female patient, followed in a Pulmonology outpatient clinic since 2017. In 2010, she started presenting intermittent cough with mucoid sputum, exertional dyspnea and wheezing, which progressively evolved over the following years. In addition, high resolution computed tomography (HRCT) of the chest showed small solid nodules and a mosaic pattern of attenuation. The patient had no relevant comorbidities for the current clinical picture and no history of smoking or significant family history. Physical examination presented basal velcro crackles and squeaks at lung auscultation.Because of the clinical and imaging findings, a lung biopsy was performed by surgical video-thoracoscopy (VATS), which led to a final diagnosis of Idiopathic Diffuse Pulmonary Hyperplasia of Neuroendocrine Cells (DIPNECH).This paper reports the case of an 84-year-old female patient, followed in a Pulmonology outpatient clinic since 2017. In 2010, she started presenting intermittent cough with mucoid sputum, exertional dyspnea and wheezing, which progressively evolved over the following years. In addition, high resolution computed tomography (HRCT) of the chest showed small solid nodules and a mosaic pattern of attenuation. The patient had no relevant comorbidities for the current clinical picture and no history of smoking or significant family history. Physical examination presented basal velcro crackles and squeaks at lung auscultation.Because of the clinical and imaging findings, a lung biopsy was performed by surgical video-thoracoscopy (VATS), which led to a final diagnosis of Idiopathic Diffuse Pulmonary Hyperplasia of Neuroendocrine Cells (DIPNECH).This paper reports the case of an 84-year-old female patient, followed in a Pulmonology outpatient clinic since 2017. In 2010, she started presenting intermittent cough with mucoid sputum, exertional dyspnea and wheezing, which progressively evolved over the following years. In addition, high resolution computed tomography (HRCT) of the chest showed small solid nodules and a mosaic pattern of attenuation. The patient had no relevant comorbidities for the current clinical picture and no history of smoking or significant family history. Physical examination presented basal velcro crackles and squeaks at lung auscultation.Because of the clinical and imaging findings, a lung biopsy was performed by surgical video-thoracoscopy (VATS), which led to a final diagnosis of Idiopathic Diffuse Pulmonary Hyperplasia of Neuroendocrine Cells (DIPNECH).This paper reports the case of an 84-year-old female patient, followed in a Pulmonology outpatient clinic since 2017. In 2010, she started presenting intermittent cough with mucoid sputum, exertional dyspnea and wheezing, which progressively evolved over the following years. In addition, high resolution computed tomography (HRCT) of the chest showed small solid nodules and a mosaic pattern of attenuation. The patient had no relevant comorbidities for the current clinical picture and no history of smoking or significant family history. Physical examination presented basal velcro crackles and squeaks at lung auscultation.Because of the clinical and imaging findings, a lung biopsy was performed by surgical video-thoracoscopy (VATS), which led to a final diagnosis of Idiopathic Diffuse Pulmonary Hyperplasia of Neuroendocrine Cells (DIPNECH).This paper reports the case of an 84-year-old female patient, followed in a Pulmonology outpatient clinic since 2017. In 2010, she started presenting intermittent cough with mucoid sputum, exertional dyspnea and wheezing, which progressively evolved over the following years. In addition, high resolution computed tomography (HRCT) of the chest showed small solid nodules and a mosaic pattern of attenuation. The patient had no relevant comorbidities for the current clinical picture and no history of smoking or significant family history. Physical examination presented basal velcro crackles and squeaks at lung auscultation.Because of the clinical and imaging findings, a lung biopsy was performed by surgical video-thoracoscopy (VATS), which led to a final diagnosis of Idiopathic Diffuse Pulmonary Hyperplasia of Neuroendocrine Cells (DIPNECH).This paper reports the case of an 84-year-old female patient, followed in a Pulmonology outpatient clinic since 2017. In 2010, she started presenting intermittent cough with mucoid sputum, exertional dyspnea and wheezing, which progressively evolved over the following years. In addition, high resolution computed tomography (HRCT) of the chest showed small solid nodules and a mosaic pattern of attenuation. The patient had no relevant comorbidities for the current clinical picture and no history of smoking or significant family history. Physical examination presented basal velcro crackles and squeaks at lung auscultation.Because of the clinical and imaging findings, a lung biopsy was performed by surgical video-thoracoscopy (VATS
Torcicolo Paroxístico Benigno na Infância – Acerca de Um Caso Clínico
No full textTrabalho Final do Mestrado Integrado em Medicina apresentado à Faculdade de MedicinaO Torcicolo Paroxístico Benigno da Infância é uma entidade diagnóstica rara que consiste em períodos de torcicolo que podem durar entre minutos a horas, comummente sem preferência de lateralidade. Os episódios podem acompanhar-se de irritabilidade, ataxia, sonolência ou sinais autonómicos. A doença é auto-limitada, com remissão sintomática por volta dos cinco anos de idade.A condição foi primeiramente descrita por Snyder em 1969. A sua prevalência estimada é de 1 em 1 000 000 de crianças. O sexo feminino aparenta ter maior probabilidade de apresentar a doença.Estão descritos cerca de 150 casos na literatura, embora a incidência real esteja provavelmente subrelatada. O conhecimento desta condição ainda provém, portanto, maioritariamente de séries de casos e relatos de casos. Neste trabalho relatamos o caso de uma criança com Torcicolo Paroxístico Benigno da Infância com preferência marcada para o lado direito. Embora estivessem cumpridos todos os critérios formais para o diagnóstico, a apresentação anormal foi causa de confusão. Este caso é digno denota pela raridade do diagnóstico e pela sua apresentação pouco comum. A preferência marcada pelo lado direito foi cause de particular confusão diagnóstica, uma vez que a doença é classicamente descrita como tendo episódios de distonia cervical de lateralidade variável.Os profissionais de saúde devem estar cientes da existência desta condição, cuja evolução é benigna e cuja frequência está provavelmente subrelatada, assim como possíveis apresentações anormais e correto encaminhamento terapêutico, de modo a evitar sofrimento para os doentes e para os pais com investigação diagnóstica desnecessária.Benign Paroxysmal Torticollis of Childhood is a rare entity consisting of periods of abnormal head-tilting, which may last from minutes to hours, usually without preference for one side. Irritability, ataxia, drowsiness, and autonomic signs may all accompany the episodes. The condition was first described by Snyder in 1969. Its estimated prevalence is less than 1 in 1 000 000 children. Females appear to be more likely to develop the condition. The condition is self-limiting and subsides at around five years of age. There have been around 150 cases described in the literature, though the disease is likely under-reported. Knowledge of this condition, therefore, still stems mainly from case series and case reports. Herein we report on a child with Benign Paroxysmal Torticollis of Childhood with a marked preference for the right side. Though all formal diagnostic criteria were met, the abnormal presentation was the cause of confusion. This case is noteworthy for the rareness of the diagnosis itself and for its unusual presentation. The marked preference for the right side was a cause of exceptional confusion as the disease is classically described as having episodes of cervical dystonia with no side preference. Physicians should be aware of this condition whose evolution is benign and whose frequency is probably underreported, as well as possible abnormal presentations and correct management, so as to avoid patient and parent distress with the unnecessary diagnostic investigation