68199 research outputs found
Sort by
Desenvolvimento de um Medicamento de Terapia Avançada para o tratamento de lesões da cartilagem do joelho
No full textRelatório de Estágio do Mestrado em Patologia Experimental apresentado à Faculdade de MedicinaSince 1994, Autologous Chondrocyte Implantation (ACI) has been performed in Europe, initially by placing a suspension of cells in an articular cartilage defect that was occluded with periosteum and subsequently combining the cells with a matrix, which serve as a skeleton to place cells into the defect. This approach has been authorized by the European Medicines Agency (EMA), and it is referred to as second- and third-generation ACI, namely Matrix-Assisted Chondrocyte Implantation (MACI). For small defects of 1 or 2 cm², other treatment options, such as surgical treatments (microfractures or mosaicplasty) present some effectiveness; however, for lesions larger than 2 cm², they are not effective, even in the short term. Due to this constrain, ACI was used to treat this type of lesions in Portugal between 2000 and 2008, with good results. However, the technique was no longer used after the transposition of the European Union legislation to Portugal (Law 12/2009, March 26), due to issues related to the cell laboratory certification required for the cell processing. Chondrocyte transplantation-based cartilage repair necessitates efficient expansion of chondrocytes. So, it is essential to know the cell culture conditions that influence the cell behavior, to optimize the cell expansion. Variable such as the culture surface, growth factors added to the medium, or the medium itself are critical in guiding the cell's behavior. Thus, the aim of the study was to optimize culture conditions for the best cell expansion of chondrocytes. Using a chondrocytes primary cell culture acquired from PromoCell®, the cell culture conditions were optimized. Two cell culture media were tested (MEM-α and DMEM/F-12) and three initial cell densities (1x10^3, 5x10^3, 1x10^4 cells/cm²). The cells morphology, cell number, cell proliferation, and cell viability were evaluated using light microscopy and the trypan blue exclusion assay. The matrix production and redifferentiation capacity (after 14 or 21 days) were evaluated using the Alcian Blue staining. The obtained cells along the passages, were also used to create a cell bank. Addiocionally, a primary cell culture from a donor who underwent total knee arthroplasty/prosthesis was established. The chondrocytes were isolated from a cartilage sample and expanded in a monolayer for two passages, cultured in complete MEM-α medium. The cells number, viability, matrix production, morphology, and redifferentiation were evaluated. With the results obtained throughout the study, it was possible to observe that in P1 redifferentiation is easily observed than in P7, which is in monoculture making any observation and conclusions difficult. To this day, MEM-α is a widely used medium in MSC cell cultures and reduced to cell washing steps in chondrocyte cultures. In agreement with the literature, chondrocytes cultured in MEM-α at all densities and DMEM/F-12 at densities of 5×10^3 cells/cm^2 and 1×10^4 cells/cm^2, showed a higher DT at the higher densities, than those cultured at lower densities. With our results, we show that MEM-α, allow a clinically relevant number of cells and can be used as the main medium throughout the chondrocyte culture. Adequate limits to the cells number of passages were also evaluated, so as to ensure no significant morphological changes and in order to achieve the desired cell quantity for clinical implantation. In conclusion, we shown, for the first time, that both MEM-α and DMEM/F-12 are appropriate cell culture media for chondrocyte expansion. Other key points were defined, which enabled us to begin designing the manufacturing process of a MACI product, named Criocyte. In addition to the laboratory steps, the fulfillment of a specific hospital exemption for the final product in order to comply with the required quality aspects, in accordance with both Portuguese and European Union regulations, was also executed. Further studies should focus in evaluate the defined cell culture conditions in a larger number of samples and to assess options to improve the expansion performance, three-dimensional cell cultures and the use of scaffolds.Desde 1994, o Implante Autólogo de Condrócitos (ACI) tem sido realizado na Europa, inicialmente através da colocação de uma suspensão de células num defeito que foi ocluído com periósteo e, posteriormente, combinando as células com uma matriz, que serve como um esqueleto para colocar as células no defeito. Esta abordagem já foi autorizada pela Agência Europeia de Medicamentos (EMA), sendo designada por ACI de segunda e terceira geração, implantação de condrócitos auxiliados por matriz (MACI). Para pequenos defeitos de 1 ou 2 cm², outras opções de tratamento, como tratamentos cirúrgicos (microfraturas ou mosaicoplastia) apresentam alguma eficácia; no entanto, para lesões maiores que 2 cm², não são eficazes, mesmo a curto prazo. Devido a este constrangimento, o ACI foi utilizado para tratar este tipo de lesões em Portugal entre 2000 e 2008, com bons resultados. No entanto, a técnica deixou de ser utilizada após a transposição da legislação da União Europeia para Portugal (Lei 12/2009, de 26 de março) devido a questões relacionadas com a certificação do laboratório de células necessária para o processamento das mesmas. A reparação da cartilagem com base no transplante de condrócitos necessita de uma expansão eficiente dos condrócitos. Assim, é essencial conhecer as condições de cultura celular que influenciam o comportamento das células, para otimizar a expansão celular. Por exemplo, a superfície de cultura, os fatores de crescimento adicionados ao meio e o próprio meio são fundamentais para orientar o comportamento das células. O objetivo do estudo foi otimizar as condições de cultura para a melhor expansão celular dos condrócitos. Utilizando uma cultura de células primárias de condrócitos adquirida da PromoCell®, as condições de cultura celular foram otimizadas. Dois meios de cultura foram testados (MEM-α e DMEM/F-12) e três densidades celulares iniciais (1x10^3, 5x10^3, 1x10^4 células/cm²). A morfologia celular, número de células, proliferação celular e viabilidade celular foram avaliados usando o microscópio e o teste de exclusão com Trypan Blue). A produção de matriz e a capacidade de rediferenciação (analisada após 14 dias ou 21 dias) foram avaliados usando a coloração de Alcian Blue. Além disso, foi estabelecida uma cultura de células primárias de um dador que foi submetido a uma artroplastia/prótese total do joelho. Os condrócitos foram isolados de uma amostra de cartilagem e expandidos numa monocamada durante duas passagens, cultivados em meio MEM-α completo. Foram avaliados o número de células, a viabilidade, a produção de matriz, a morfologia e a rediferenciação. Com os resultados obtidos ao longo do estudo, foi possível observar que em P1 a rediferenciação é facilmente observada do que em P7, que se encontra em monocultura dificultando quaisquer observações e conclusões. Até hoje, o MEM-α é um meio amplamente utilizado em culturas de células MSC e reduzido a etapas de lavagem celular em culturas de condrócitos. Em concordância com a literatura, condrócitos cultivados em MEM-α em todas as densidades e DMEM/F-12 nas densidades de 5×10^3 cells/cm² e 1×10^4 cells/cm², apresentaram maior DT nas densidades mais altas do que aquelas cultivadas em densidades mais baixas. Com os nossos resultados, mostramos que o MEM-α, permite um número clinicamente relevante de células e pode ser usado como meio principal durante toda a cultura de condrócitos. Foram também avaliados limites adequados para o número de passagens das células, de modo a garantir que não há alterações morfológicas significativas e de forma a atingir a quantidade celular desejada para implantação clínica. Em conclusão, demonstrámos, pela primeira vez, que tanto o MEM-α como o DMEM/F-12 são meios de cultura de células adequados para a expansão de condrócitos. Outros pontos-chave foram definidos, o que nos permitiu começar a projetar o processo de fabricação de um produto MACI, chamado Criocyte. Para além das diligências laboratoriais, foi também executada a obtenção de uma isenção hospitalar específica para o produto final, de forma a cumprir os aspetos de qualidade exigidos, de acordo com as normas portuguesas e da União Europeia. Estudos futuros devem centrar-se na avaliação das condições de cultura de células definidas num maior número de amostras e na avaliação de opções para melhorar o desempenho de expansão, culturas celulares tridimensionais e a utilização de matrizes
EXPERIÊNCIA VIVIDA NA DOENÇA RESPIRATÓRIA AVANÇADA: CONTRIBUIÇÕES PARA A PROMOÇÃO DA DIGNIDADE
No full textDissertação de Mestrado em Cuidados Continuados e Paliativos apresentada à Faculdade de MedicinaLong-term conditions, such as Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD), can expose people to existential suffering that threatens their dignity. By exploring the meaning of the experience of dignity, a phenomenon closely linked to the preservation of personal identity, it is possible to uncover elements that allow a better understanding of people living with COPD. Although the available evidence points to the need to investigate personal identity in chronic illness, there are no known studies in Portugal that have addressed the lived experience of COPD, nor studies that analyse the meanings attributed to human dignity, notably in the advanced stages of the disease. Therefore, this qualitative study aims to understand the lived experiences of patients with advanced COPD in relation to human dignity. An interpretative phenomenological approach based on lifeworld existentials was conducted to explore and understand the world of the lived experience. Twenty individuals with advanced COPD (GOLD [Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease] stages III and IV) were selected using a purposive sampling strategy. Data collection was carried out between June 2021 and December 2021, trough in-depth narrative interviews. For data analysis, we opted for the Van Manen’s phenomenology of practice using WebQDA software (Universidade de Aveiro, Aveiro, Portugal). The sample was mainly composed by males (n = 15) with an average age of 66.85±7.21 years (Min. 58; Max. 82). The time since COPD diagnosis ranged from 4 to 11 years (M = 5.9; SD = 2.04), and the majority were in stage III (n = 14). The existential experience of dignity was understood, in essence, as “a small candle flame that doesn’t go out!”. Four intertwined constituents illuminated the phenomenon: “Lived body–balancing between sick body and willingness to continue”; “Lived relations–balancing between self-control and belongingness”; “Lived Time–balancing between past, present and a limited future”; and “Lived space–balancing between safe places and non-compassionate places”. The access to experiences allowed to know how existential life phenomena are experienced during the final phases of the COPD trajectory and provided ethical awareness of how dignity is lived. The development of ethical awareness enables healthcare professionals to act as moral agents in the provision of ethical and safe care, based on a balance between places (physical environment and organizational culture), people (attitudes and behaviors of professionals and the “others”) and processes (care activities) with a view to value-based health care. More research is needed to investigate innovative approaches to manage complex care in advanced COPD, in order to contribute to an informed and centered practice on promoting human dignity.A Doença Pulmonar Obstrutiva Crónica (DPOC), enquanto condição prolongada, pode expor as pessoas ao sofrimento existencial e desta forma ameaçar a dignidade humana. Ao explorar o significado da experiência de dignidade, fenómeno intimamente ligado à preservação da identidade pessoal, é possível desocultar elementos que permitem uma melhor compreensão da pessoa que vive com DPOC. Embora a evidência disponível aponte para a necessidade de investigar a identidade pessoal na doença crónica, não são conhecidos estudos em Portugal que tenham abordado a experiência vivida da DPOC, nem tão pouco estudos que analisassem os significados atribuídos à dignidade humana, designadamente nas fases avançadas da doença. Com efeito, este estudo qualitativo visou compreender a experiência vivida das pessoas com DPOC avançada, com enfoque na dignidade humana. Recorreu-se a uma abordagem fenomenológico-interpretativa inspirada nos constituintes do mundo-vida. Foram recrutadas vinte pessoas com DPOC avançada (GOLD [Global Initiative for Chronic Obstrutive Lung Disease] estadios III e IV) através de uma técnica de amostragem intencional. A colheita de dados foi realizada entre junho de 2021 e dezembro de 2021 através de entrevistas narrativas em profundidade. Para a análise dos dados optou-se pela fenomenologia da prática proposta por Van Manen com recurso ao software WebQDA (Universidade de Aveiro, Aveiro, Portugal). A amostra foi composta, maioritariamente, por homens (n = 15) com uma média de idades de 66.85±7.21 anos (Min. 58; Máx. 82). O tempo de diagnóstico da DPOC variou entre 4 e 11 anos (M = 5.9; DP = 2.04), e a maioria dos participantes encontrava-se no estadio III (n = 14). A experiência da dignidade foi compreendida, na sua essência, como “uma pequena chama de vela que não apaga!”. Quatro constituintes interligados iluminaram o fenómeno: “Corpo vivido – equilíbrio entre o corpo doente e a vontade para continuar”; “Relações vividas – equilíbrio entre o autocontrolo e o sentido de pertença”; “Tempo vivido – equilíbrio entre o passado, o presente e um futuro limitado”; e “Espaço vivido – equilíbrio entre lugares seguros e lugares não compassivos”. O acesso às experiências desvelou como os constituintes existenciais são experienciados durante as fases finais da trajetória da DPOC e proporcionou a consciência ética de como a dignidade é vivida. O desenvolvimento da consciência ética capacita os profissionais de saúde para agirem como agentes morais na prestação de cuidados éticos e seguros, tendo por base o equilíbrio entre os lugares (ambiente físico e cultura organizacional), as pessoas (atitudes e comportamentos dos profissionais e dos “outros”) e os processos (atividades de cuidado) na procura por uma saúde baseada em valores. Com efeito, são necessários mais estudos para investigar abordagens inovadoras que permitam a gestão de cuidados complexos na DPOC avançada, a fim de contribuir para a uma prática informada e centrada na promoção da dignidade humana
The Protection of Works Used by Artificial Intelligence, in Particular by ChatGPT
No full textDissertação de Mestrado em Ciências Jurídico-Forenses apresentada à Faculdade de DireitoArtificial intelligence systems, one of which ChatGPT, have been the focus of great attention in the European Union. Among the various problems that have arisen in connection with these systems, the ones relating to copyright stand out. Hence the reason for this brief dissertation. In it we will explore the use by AI systems of works protected by copyright, with a special focus on ChatGPT. We'll start by looking at the concepts of artificial intelligence and ChatGPT. Moreover, we shall then move on to the subject of intellectual property, which includes copyright, where we can't help but analyse current European and American legislation, with a special emphasis on the transposition of the Directives in the Member States of the European Union, Portugal and Germany. Furthermore we will also take a look at the practical implications of this matter, particularly in the courts, as a result of the conflict of interests between copyright holders and providers of artificial intelligence systems. Finally, we end with a mention of the possible solutions through the use of licences and a conclusion in which we explain the need for a legal framework capable of bringing together divergent interests, as well as promoting technological innovation in Europe, in order to prevent it from becoming a disadvantageous space for those seeking to create and innovate in the field of artificial intelligence, while at the same time preventing them from resorting to other spaces outside the European Union, namely the United States of America.Os sistemas de inteligência artificial, entre os quais se encontra o ChatGPT, têm estado em grande foco na União Europeia. Dos vários problemas que têm surgido, ligados a estes sistemas, destacam-se os relativos aos direitos de autor. Sendo eles a razão de ser desta breve dissertação. Nela iremos explorar a utilização por sistemas de IA de obras protegidas por direitos de autor, com especial enfoque no ChatGPT. Começaremos com uma abordagem dos conceitos de inteligência artificial e de ChatGPT, passando depois à temática da propriedade intelectual com eles relacionada, que integra os direitos de autor. Aqui não podemos deixar de fazer uma análise sobre a legislação atual portuguesa, europeia e norte-americana, com uma especial menção à transposição das Diretivas em Portugal e na Alemanha. Veremos também as implicações práticas que esta problemática tem, nomeadamente nos tribunais, fruto do conflito de interesses entre titulares de direitos de autor e prestadores de sistemas de inteligência artificial. Finalizaremos com a referência à possibilidade de soluções através do uso de licenças e à necessidade de um quadro jurídico capaz de fazer convergir entre si os interesses conflituantes, assim como promover a inovação tecnológica na Europa, de modo a impedir que esta se torne um espaço desvantajoso para aqueles que procurem criar e inovar no campo da inteligência artificial, e ao mesmo tempo evitar que tenham de recorrer a outros espaços situados fora da União Europeia, nomeadamente nos Estados Unidos da América
E-Commerce: Strategic Management and Best Practices (The Lifecooler Case)
No full textRelatório de Estágio do Mestrado em Marketing apresentado à Faculdade de EconomiaThis study investigates the impact of e-commerce on the specific case of the company Lifecooler, a former leader in the tourism experiences market in Portugal. The main objective is to analyze the management strategies and best practices adopted to improve its online presence and increase competitiveness. A mixed methodology was used to support the implemented strategies, through bibliographic justification and quantitative data analysis obtained from Google Analytics, including sales, click-through rates, and views, comparing them with data from the previous year to understand the real impact of e-commerce strategies. To obtain a more complementary approach, a qualitative survey was conducted among the company's employees to understand their perceptions of brand identity and consistency, product quality and innovation, customer experience, and e-commerce platform management. The results emphasized the importance of implementing SEO techniques and improving the user experience for e-commerce success. The surveys highlighted the importance of a customer-focused approach, the need for innovation, and internal communication for the company to maintain its market relevance. The conclusions suggest that by adopting this customer-centric approach and leveraging available digital tools, Lifecooler can increase its online visibility, as well as retain customers and boost sales. Keywords: e-commerce, SEO, user experience, strategic management, LifecoolerEste estudo investiga o impacto do e-commerce no caso específico da empresa Lifecooler, antiga líder no mercado de experiências turísticas em Portugal. O principal objetivo é analisar as estratégias de gestão e as melhores práticas adotadas para melhorar a sua presença online e aumentar a competitividade.Foi utilizada uma metodologia mista para fundamentar as estratégias implementadas, através da justificação bibliográfica e da análise de dados quantitativos obtidos do Google Analytics, incluindo vendas, taxas de cliques e visualizações, comparando-os com os dados do ano anterior para perceber o impacto real das estratégias de e-commerce. Para obter uma abordagem mais complementar, foi realizado um inquérito qualitativo aos colaboradores da empresa, para compreender as suas perceções sobre a identidade e consistência da marca, qualidade e inovação dos produtos, experiência do cliente e gestão das plataformas de e-commerce.Os resultados vieram ressalvar a importância das implementações de técnicas de SEO e melhorias na experiência do utilizador para o sucesso do e-commerce. Já os inquéritos destacaram a importância de uma abordagem focada no cliente, na necessidade de inovação e na comunicação interna para a empresa manter a sua relevância no mercado.As conclusões sugerem que, ao adotar esta abordagem preocupada com o cliente e alavancar as ferramentas digitais disponíveis, a Lifecooler pode aumentar a sua visibilidade online, mas também fidelizar os clientes e impulsionar as vendas
Determinants of Performance of Portuguese Wholesale Food Companies
No full textRelatório de Estágio do Mestrado em Contabilidade e Finanças apresentado à Faculdade de EconomiaThis report was prepared as part of the Curricular Internship carried out at Quinta de Jugais – Comércio e Produtos Alimentares, Lda. During the internship, a set of accounting and tax activities were conducted under the support and guidance of the host entity's supervisor.In the business world, it is essential to understand and grasp why some companies succeed while others do not. Thus, identifying the factors that influence company performance is highly relevant for managers, investors, consultants, and others (Pantea et al., 2014).Therefore, this study aims to analyze which factors, and how they influence the performance of Portuguese companies, particularly those engaged in the wholesale trade of other food products. The study focuses on this group of companies because it is an important sector for the Portuguese economy and the main economic activity of the host entity.Based on a sample of 168 Portuguese companies operating in the wholesale trade of other food products from 2017 to 2022, a panel data methodology was adopted, specifically the random effects model and the GMM system (Generalized Method of Moments) estimation method, to achieve the primary objective.The results obtained allow us to conclude that the internal characteristics of companies, as well as macroeconomic factors and aspects of corporate governance, are important determinants of the performance of companies engaged in wholesale trade of other food products. The only variables that influence company performance are general liquidity, which has a positive impact, and employee expenses, which have a negative impact.Furthermore, we can conclude that asset profitability and equity profitability are relevant in explaining company performance, and depending on the performance measure used, variations in the sign and significance of the independent variables are observed, which suggests that the determinants of performance may vary depending on the perspective of different stakeholders.O presente relatório foi elaborado no âmbito do Estágio Curricular realizado na Quinta de Jugais – Comércio e Produtos Alimentares, Lda. No decorrer do mesmo, foram realizadas um conjunto de atividades contabilistas e fiscais sob o apoio e orientação do supervisor da entidade de acolhimento.No mundo empresarial é fundamental entender e perceber a razão pela qual algumas empresas têm sucesso e outras não. Assim, identificar os fatores que influenciam o desempenho das empresas tem uma grande relevância para os gestores, investidores, consultores, entre outros (Pantea et al., 2014). Deste modo, o presente trabalho visa analisar quais os fatores e de que modo é que estes influenciam o desempenho das empresas portuguesas, particularmente das que se dedicam ao comércio por grosso de outros produtos alimentares. O estudo recai sobre este conjunto de empresas, porque é um setor importante para a economia portuguesa e é o setor de atividade económica principal a que se dedica a entidade de acolhimento. Com base numa amostra de 168 empresas portuguesas que atuam no setor do comércio por grosso de outros produtos alimentares, entre o período de 2017 a 2022, foi adotada uma metodologia de dados em painel, mais especificamente o modelo de efeitos aleatórios e o método de estimação GMM system (Generalized Method of Moments), de forma a alcançar o objetivo primordial.Os resultados obtidos permitem concluir que as características internas das empresas, bem como, os fatores macroeconómicos e aspetos da corporate governance são importantes determinantes do desempenho das empresas que se dedicam ao comércio por grosso de outros produtos alimentares. As únicas variáveis que influenciam o desempenho das empresas são a liquidez geral, que tem um impacto positivo, e os gastos por funcionário, que tem um impacto negativo. Para além disso, podemos concluir que a rendibilidade dos ativos e a rendibilidade dos capitais próprios são relevantes para explicar o desempenho das empresas e dependendo da medida de desempenho utilizada verifica-se variações de sinal e de significância das variáveis independentes, o que sugere que os determinantes do desempenho podem variar conforme a perspetiva dos diferentes stakeholders
Aplicação dos métodos metabarcoding de DNA ambiental terrestre: O caso da biodiversidade de insetos em plantações de Eucalyptus globulus em Portugal.
No full textDissertação de Mestrado em Recursos Biológicos, Valorização do Território e Sustentabilidade apresentada à Faculdade de Ciências e TecnologiaInsects play a crucial role in maintaining the health of the ecosystems, with pollinators being particularly important for the reproduction of many plant species and the production of food crops. However, the decline of insect populations due to habitat loss, climate change, and pesticide use highlights the urgent need for efficient and rapid monitoring methods. Methods based on environmental DNA (eDNA) emerged as a promising tool for biodiversity assessment, offering a non-invasive, cost-effective, fast and comprehensive approach to studying insect communities. This internship report explores the application of eDNA vegetation samples for insect biodiversity monitoring, with a focus on pollinator species. The study involved sampling Eucalyptus globulus flowers in two distinct phases, with two plots sampled in each phase. Analyses of eDNA from these samples provide insight into the composition and dynamics of insect populations in E. globulus plantations, demonstrating the potential of eDNA as a valuable tool in biodiversity monitoring and conservation efforts. This internship was conducted at the Global Biosciences Center (GBC), at SGS Portugal. SGS provided all of the the theoretical and practical training necessary for eDNA analyses of various types of samples. The internship had the purpose of providing expertise in both field sampling and laboratory processing for a better understanding of this complex methodology, as well as the engagement in various projects, all of which involved eDNA metabarcoding analyzes.Os insetos desempenham um papel vital na manutenção da saúde dos ecossistemas, sendo os polinizadores particularmente importantes para a reprodução de muitas espécies de plantas e para a produção de alimentos. No entanto, o declínio das populações de insetos devido à perda de habitat, às alterações climáticas e à utilização de pesticidas destaca a necessidade urgente de métodos de monitorização eficientes e rápidos. Métodos baseados em DNA ambiental (eDNA) emergiram como ferramentas promissoras para a avaliação da biodiversidade, oferecendo uma abordagem não invasiva, económica, rápida e abrangente para estudar comunidades de insetos. Este relatório de estágio explora a aplicação do eDNA na monitorização da biodiversidade de insetos, com foco em insetos polinizadores. O estudo envolveu amostragem de flores de Eucalyptus globulus em duas fases distintas, com dois locais amostrados em cada fase. Análises baseadas no eDNA extraído destas amostras fornecem informações sobre a composição e a dinâmica das populações de insetos nas plantações de E. globulus, demonstrando o potencial do eDNA como uma ferramenta valiosa na monitorização da biodiversidade e nos esforços de conservação. Este estágio foi realizado no Global Biosciences Center (GBC), da SGS Portugal. A SGS forneceu todo o treinamento teórico e prático necessário para análises de eDNA de diversos tipos de amostras. O estágio teve como objetivo proporcionar conhecimentos tanto em amostragem de campo como em processamento laboratorial para uma melhor compreensão desta complexa metodologia, bem como o envolvimento em diversos projetos, todos envolvendo análises de metabarcoding de eDNA
Development and Translation to Good Manufacturing Practice of an Therapy Medicinal Product for the Treatment of Knee Cartilage Injuries
No full textDissertação de Mestrado em Biotecnologia Farmacêutica apresentada à Faculdade de FarmáciaOver the last few years, regenerative medicine has undergone a paradigm shift, focusing on the development of personalized therapies. Specifically, in the case of repairing knee cartilage injuries, pioneering approaches have been adopted to enhance existing therapeutic strategies. Knee cartilage injuries are common conditions that affect the joint, resulting in pain, inflammation, and loss of mobility, which can significantly impair patients' quality of life. Treating these injuries is challenging, involving both conservative and surgical approaches aimed at relieving symptoms and restoring joint function. However, complete cartilage regeneration remains a challenge in orthopedics.Autologous chondrocyte implantation (ACI) has emerged as a promising technique in Europe, offering an effective alternative for treating cartilage injuries larger than 2cm², where other treatment options fail to provide satisfactory results.The use of this technique was common until the European Regulation No. 1394/2007 came into force, classifying Advanced Therapy Medicinal Products (ATMPs) as medicines, requiring compliance with Good Manufacturing Practices (GMP - the portuguese equivalent is BPF), which restricts the application of the technique. The future of ACI depends on adapting to these requirements, ensuring quality and effectiveness in the treatment of cartilage injuries.In this context of regulatory changes, this work explores the innovative field of ATMPs, with a specific focus on the use of autologous chondrocytes to address the complex challenges associated with knee cartilage injuries. By leveraging the regenerative potential inherent to patient-specific therapies, this study not only investigates transformative methodologies to optimize the effectiveness of personalized therapies but also focuses on translating these methodologies into GMP.To this end, quality data for this ATMP was analyzed. The production of glycosaminoglycans (GAGs) by chondrocytes cultured in monolayers was assessed, confirming that these chondrocytes remain healthy up to passage 6. To validate the functional capacity of the chondrocytes in producing extracellular matrix, a cell potency assessment was conducted using micropellet culture. Droplets of 10μL and a density of 8.8x10⁵cells/cm² were the optimal conditions that allowed for the most uniform pellet formation.Cell stability studies were conducted at an intermediate product stage, aiming to identify the most suitable albumin for integrating this ATMP. Although subject to further testing, Recombumin® Elite appeared to be superior in maintaining cell viability.After optimizing these aspects, tests were conducted for the final product formulation based on the TisseelLyo® medicine. In this regard, the viability of the chondrocytes retained in this medicine was evaluated using fluorescence microscopy, showing a high number of viable cells.Cell losses were assessed throughout the entire ATMP formulation process, as well as during the maximum expected shipping time, demonstrating a minimal number of cells lost. The transport of the sample was also simulated during the expected shipping period and in an appropriate container. Despite the importance of maintaining temperature, the transport box was not effective in ensuring this condition during shipment.In accordance with the company's internal directives and GMP guidelines, the necessary documentation was developed for the subsequent release of this medicine. By integrating empirical evidence with regulatory knowledge, the study contributes to the advancement of personalized regenerative medicine, promising not only better clinical outcomes but also a significant improvement in the quality of life for patients affected by cartilage defects.Nos últimos anos, a medicina regenerativa sofreu uma mudança paradigmática, direcionada para o desenvolvimento de terapias personalizadas. No caso específico da reparação de lesões da cartilagem do joelho, adotaram-se abordagens pioneiras, no sentido de aprimorar as estratégias terapêuticas existentes.As lesões da cartilagem do joelho são patologias comuns que afetam a articulação, resultando em dor, inflamação e perda de mobilidade, o que pode comprometer significativamente a qualidade de vida dos doentes. O tratamento dessas lesões é desafiador, envolvendo abordagens conservadoras e cirúrgicas, com o objetivo de aliviar os sintomas e restaurar a função articular. Porém, a regeneração completa da cartilagem permanece um desafio na ortopedia.O implante autólogo de condrócitos (ACI) tem-se mostrado uma técnica promissora na Europa, como uma alternativa eficaz para o tratamento de lesões da cartilagem superiores a 2cm2, onde outras opções de tratamento falham em proporcionar resultados satisfatórios.O uso desta técnica foi comum até à entrada em vigor do Regulamento (CE) n.º 1394/2007, que enquadra os Medicamentos de Terapia Avançada (ATMPs) como medicamentos, exigindo conformidade com as Boas Práticas de Fabrico (BPF), o que restringe a aplicação da técnica.O futuro do ACI depende da adaptação a estas exigências, garantindo a qualidade e a eficácia no tratamento de lesões da cartilagem.Neste cenário de mudanças regulamentares, este trabalho explora o campo inovador dos ATMPs, com foco específico na utilização de condrócitos autólogos para enfrentar os desafios complexos associados às lesões na cartilagem do joelho. Ao aproveitar o potencial regenerativo inerente às terapias específicas para cada doente, este estudo não só investiga metodologias transformadoras para otimizar a eficácia das terapias personalizadas, mas também se concentra na translação dessas metodologias para as BPF.Para tal, foram analisados dados de qualidade deste ATMP. Foi avaliada a produção de glicosaminoglicanos (GAGs) pelos condrócitos cultivados em monocamada, confirmando que estes condrócitos permanecem saudáveis até a passagem 6. Para validar as capacidades funcionais dos condrócitos na produção de matriz extracelular, foi realizada uma avaliação da potência celular, através da cultura de micropellets. Gotículas de 10μL e densidade de 8.8x105 células/cm² foram as condições ótimas que permitiram a obtenção do pellet mais uniforme.Foram realizados estudos de estabilidade celular, numa fase intermédia do produto, visando identificar a albumina mais adequada para integrar este ATMP. Embora sujeita a testes adicionais, a Recombumin® Elite mostrou-se tendencialmente superior na manutenção daviabilidade celular.Após otimizados estes aspetos, foram realizados testes para a elaboração do produto final com base no medicamento TisseelLyo®. Neste sentido, foi avaliada a viabilidade celular dos condrócitos retidos neste medicamento, através do recurso a microscopia de fluorescência, tendo mostrado um elevado número de células viáveis.Foram avaliadas as perdas celulares durante todo o processo de formulação deste ATMP, bem como durante o tempo máximo previsto para o seu envio, evidenciando o reduzido número de células perdidas. Foi ainda simulado o transporte da amostra, durante o período de envio expectável e numa embalagem adequada. Apesar da importância da manutenção da temperatura, a caixa de transporte não foi eficaz em garantir essa condição adequada durante o envio.Em conformidade com as diretivas internas da empresa e as diretivas de BPF, foi desenvolvida documentação necessária para posterior libertação deste medicamento.Ao integrar evidências empíricas com conhecimento regulamentar, o estudo contribui para o avanço da medicina regenerativa personalizada, prometendo não apenas melhores resultados clínicos, mas também uma significativa melhoria na qualidade de vida dos doentes afetados por defeitos cartilaginosos
Detection and Quantification of drugs in fish roe by UHPLC-ToF-MS
No full textDissertação de Mestrado em Segurança Alimentar apresentada à Faculdade de FarmáciaThe increase in the world's population and life expectancy has also led to a global increase in the consumption of drugs, which are now recognised as emerging pollutants. Their potential adverse effects are a cause for concern because there is still a lack of effective methods for the treatment and disposal of waste and possible pharmaceutical contaminants in soil and water, thus bringing consequences for the environment, such as alterations in the life cycle of animals and microorganisms. The main origin of drugs in the environment is mainly due to their excretion, ineffective removal in sewage treatment plants and effluents from the pharmaceutical industry and agriculture, among other sources, leading to contamination in the aquatic environment. Due to the continuous introduction of drugs into ecosystems, aquatic organisms are often exposed throughout their life cycle, promoting an environmental impact. Although drugs are detected in low concentrations, they can cause toxicity because they are developed to promote a biological effect.The main aim of this study is to identify and quantify drugs by validanting a ultra-high performance liquid chromatography linked to a mass spectrometer with time-of-flight analyser (UHPLC-TOF-MS) methodology for fish roe. After validation, 45 samples of fish roe from different species namely, croaker (Argyrosomus regius), letter (Arnoglossus laterna), redhead (Chelidonichthys lucerna), hake (Merluccius merluccius), sand sole (Pegusa lascaris), turbot (Scophthalmus rhombus), white sole (Solea senegalensis) and pout (Trisopterus luscus) were analysed to investigate whether there is contamination and how this poses a risk to consumer health. Of the 45 samples, contamination was detected in 7 samples of two different species, in pout (Trisopterus luscus) and hake (Merluccius merluccius). Two drug residues were identified, clozapine in 6 samples of pout with concentrations ranging between 22.1µg/kg and 35.4 µg/kg and gabapentin detected in one sample of hake in which the concentration obtained was 11.9 µg/kg. These results show that it is relevant to have drug residue monitoring and control programmes in place, as confirmation of drug contamination in fish roe can lead to bioaccumulation, raising additional food safety concerns.O aumento da população mundial e da esperança média de vida levou crescimento global no consumo de fármacos. Estas substâncias são atualmente reconhecidas como contaminantes emergentes, sendo os seus potenciais efeitos adversos motivo de preocupação, devido à falta de métodos eficazes para o tratamento e descarte de resíduos farmacêuticos no solo e na água. A principal origem dos fármacos no meio ambiente deve-se principalmente à sua excreção, à ineficácia da sua remoção nas Estações de Tratamento de Águas Residuais (ETARs) e aos efluentes de indústria farmacêutica e da agricultura, entre outras fontes, potenciando a contaminação no meio aquático. Esta situação pode ter consequências significativas para o meio ambiente, incluindo alterações nos ciclos de vida dos organismos. Devido à introdução contínua de fármacos nos ecossistemas, os organismos aquáticos estão frequentemente expostos, muitas vezes durante todo o seu ciclo de vida, levando a impacto ambiental. Apesar dos fármacos serem detetados em concentrações baixas, podem provocar toxicidade devido a serem desenvolvidos para promoverem um efeito biológico.Desta forma, o presente estudo tem como principal objetivo a validação de uma metodologia de cromatografia líquida de ultra resolução ligado a um espectrómetro de massa com analisador de tempo de voo (UHPLC-ToF-MS) para a deteção e quantificação de fármacos em ovas de peixe. Após validação, foram analisadas 45 amostras de ovas de peixe de espécies diferentes, nomeadamente de corvina (Argyrosomus regius), carta (Arnoglossus laterna), ruivo (Chelidonichthys lucerna), pescada (Merluccius merluccius), linguado da areia (Pegusa lascaris), rodovalho (Scophthalmus rhombus), linguado branco (Solea senegalensis) e faneca (Trisopterus luscus), para investigar se existe contaminação e de que forma esta corresponde um risco à saúde do consumidor. Das 45 amostras, foi detetado contaminação em 7 amostras de duas espécies diferentes, faneca (Trisopterus luscus) e pescada (Merluccius merluccius). Nestas amostras, e identificou-se clozapine em 6 amostras de ovas de faneca, com concentrações entre 22.1µg/kg e 35.4 µg/kg e gabapentina detetada numa amostra de ovas de pescada, em que a concentração obtida foi 11.9 µg/kg.Estes resultados demonstram que é relevante a existência de programas de monitorização e controlo de resíduos de fármacos pois a contaminação por fármacos nas ovas de peixe pode levar a uma bioacumulação levantando preocupações adicionais na segurança alimentar
Potential effect of flavored waters on oral health
No full textTrabalho Final do Mestrado Integrado em Medicina Dentária apresentado à Faculdade de MedicinaIntroduction: Dental erosion is an irreversible and chronic dental pathology, defined by the chemical dissolution of hard dental tissues by non bacterial acids. This condition presents a multifactorial etiology, with acids derived from extrinsic sources such as acidic diet being the main etiological factor. Flavored waters are sugar sweetened beverages based on water with fruit flavoring that can be flavored with plant extracts or aromatic substances and have or not gas. The present study aims to gather information from labels of a diversified and representative sample of flavored waters commercially available in Portugal, and to determine the pH of a sample of each of them, with the aim of assessing possible impacts on oral health, especially regarding dental erosion.Methods: Chemical analysis was performed on a sample of 20 flavored waters, 13 with gas and 7 without gas. The CRISON MicropH 2000 electrode was used to measure pH. All water samples remained sealed until the time of measurement, and the procedure was carried out at room temperature, conducting five measurements for each sample. Additionally, information regarding composition, nutritional declaration, and additional data of the water samples was obtained. Nutritional information gathering was based on direct label reading and Portuguese commercial websites.Results: The pH of flavored water samples without gas ranged from 3,01 ± 0,00 to 3,26 ± 0,08. For flavored waters with gas, after the degasification process, the pH ranged from 2,90 ± 0,00 to 4,54 ± 0,00. It was found that all analyzed waters contain fruit flavors and acidifiers/acidity regulators (citric acid) in their composition.Discussion and conclusion: The erosive potential of a beverage depends on variousfactors, primarily pH. All analyzed waters recorded a pH value <7, indicating acidic pH derived from added acids. pH values lower than the critical pH of 5,5 for enamel chemical dissolution were observed, suggesting that chronic exposure to these beverages leads to a decrease in intraoral pH, potentially inducing chemical dissolution of hard dental tissues. Despite the limitations of this study, flavored waters appear to have an erosive potential and play an important role in the etiology of dental erosion. It is crucial for dentists to adopt a preventive and educational approach.Introdução: A erosão dentária é uma patologia dentária irreversível e crónica, definida pela dissolução química de tecidos duros dentários por ácidos não bacterianos. Esta condição apresenta uma etiologia multifatorial, sendo os ácidos derivados de fontes extrínsecas, como a dieta ácida, o principal fator etiológico. As águas com sabor são bebidas açucaradas à base de água e com sabor a fruta que podem ser aromatizadas com extratos vegetais ou substâncias aromáticas e ter ou não gás. O presente estudo pretende recolher informações dos rótulos de uma amostra diversificada e representativa das águas com sabor comercialmente disponíveis em Portugal, e determinar o pH de uma amostra de cada uma delas, com o objetivo de avaliar possíveis impactos na saúde oral, especialmente no que diz respeito à erosão dentária.Métodos: Efetuou-se a análise química de uma amostra de 20 águas aromatizadas, 13com gás e 7 sem gás. Para medir o pH, utilizou-se o elétrodo CRISON MicropH 2000.Todas as amostras de água permaneceram fechadas até ao momento de medição, e oprocedimento foi realizado à temperatura ambiente, realizando cinco medições paracada amostra. Adicionalmente, obteve-se informação relativamente à composição,declaração nutricional e dados adicionais das amostras de água. O levantamento erecolha das informações nutricionais teve por base a leitura direta do rótulo e o website de superfícies comerciais portuguesas.Resultados: O pH das amostras de água com sabor sem gás variou entre 3,01 ± 0,00e 3,26 ± 0,08. Para as águas com sabor com gás, após o processo de desgaseificação, o pH variou entre 2,90 ± 0,00 e 4,54 ± 0,00. Verificou-se que a totalidade das águas analisadas apresenta, na sua composição, aromas de fruta e acidificantes/reguladores de acidez (ácido cítrico).Discussão e conclusão: O potencial erosivo de uma bebida depende de vários fatores, principalmente do pH. Todas as águas analisadas registaram um valor de pH<7, ou seja, pH ácido derivado dos ácidos adicionados. Registou-se valores de pH inferiores ao pH crítico de 5,5 para a dissolução química do esmalte, pelo que a exposição crónica a este tipo de bebidas provoca uma diminuição no pH intraoral, podendo induzir a dissolução química dos tecidos duros dentários. Apesar das limitações deste estudo, as águas aromatizadas parecem ter um potencial erosivo e um papel importante na etiologia da erosão dentária, tornando-se crucial que o médico dentista adote uma atitude preventiva e educativa
Libertação de iões de cobalto de ligas metálicas biomédicas de Co-Cr, estudo in vitro
No full textTrabalho Final do Mestrado Integrado em Medicina Dentária apresentado à Faculdade de MedicinaIntrodução: Ligas metálicas de cobalto-cromo, compostas maioritariamente por cobalto (63%) e cromo (30%), na cavidade oral, estão sujeitas a fenómenos corrosivos e de desgaste; com consequente libertação de iões metálicos para o meio. Recentemente, o cobalto foi classificado como uma substância carcinogénica 1B, mutagénica 2 e tóxica para a reprodução 1B. O presente estudo in vitro tem como objetivo fazer um estudo comparativo entre os iões de cobalto libertados por ligas metálicas de Co-Cr, preparadas por fundição e selective laser melting (SLM) em meio oral simulado a diferentes pH.Materiais e métodos: Dezasseis amostras de ligas de cobalto-cromo SLM Remanium® Star CL da Dentaurum e dezasseis amostras de ligas de fundição Biosil® F da DeguDent de formato cilíndrico, com 3 mm de altura e 10 mm de diâmetro foram utilizadas neste estudo. As amostras metálicas foram lavadas com água destilada e álcool 96%, secas e pesadas numa balança de alta precisão antes e depois de 28 dias de teste. As ligas foram divididas em quatro grupos e imersas em diferentes meios (água destilada e saliva artificial com pH 4,0, 6,8 e 8,0). Os valores de pH foram medidos com um medidor de pH Radiometer PHM 240 e um elétrodo de pH, calibrado com soluções tampão de pH 4,0; 6,9 e 10,0. As medições de pH (4,0; 6,8 e 8,0) foram realizadas a 310.15K. Os tubos com as ligas metálicas imersas no meio correspondente a cada grupo foram colocados numa incubadora a 310.15K e agitação de 170 rotações por minuto. Aos 3 e 28 dias, 5 ml de meio foram coletados aleatoriamente e submetidos à análise em espectrometria de massa com plasma de emissão ótica e indutivamente acoplado. Resultados e conclusões: No que concerne à análise da variação da massa, todos os grupos, exceto o grupo controlo, em que as ligas obtidas por fundição foram submersas em água destilada (p=0,054), apresentaram ganhos de massa estatisticamente significativos, devido à formação de filmes passivantes à sua superfície. Quanto à libertação dos iões de cobalto, os resultados obtidos foram de encontro aos observados noutros estudos semelhantes, em que as ligas fundidas apresentam uma considerável maior libertação de iões, relativamente às ligas SLM e que se acentua ainda a pH ácido. Embora o cobalto seja um micronutriente essencial para o funcionamento do corpo humano, a sua libertação excessiva na cavidade oral pode causar efeitos adversos tais como reações de hipersensibilidade e alterações citotóxicas. Pelos resultados obtidos neste estudo a utilização de dispositivos protéticos obtidos por Selective Laser Melting deve ser preferencial uma vez que liberta menor quantidade de iões de cobalto que as ligas de Co-Cr fundidas.Introduction: Cobalt-chromium metal alloys are mainly composed of cobalt (63%) and chromium (30%), in the oral cavity, prosthetic devices are subject to corrosive and wear phenomena; with consequent release of metal ions into the medium. Recently, cobalt has been classified as a 1B carcinogen, 2 mutagen and 1B reproductive toxicant. The present in vitro study aims to carry out a comparative study between cobalt ions released by Co-Cr metal alloys, prepared by casting and selective laser melting (SLM) in a simulated oral environment with different pH.Materials and Methods: Sixteen samples of SLM Remanium® Star CL cobalt-chromium alloys from Dentaurum and sixteen samples of Biosil® F casting alloys from DeguDent with a cylindrical shape, 3 mm in height and 10 mm in diameter were used in this study. The metal samples were washed with distilled water and 96% alcohol, dried and weighed on a high-precision balance before and after 28 days of testing. The alloys were divided into four groups and immersed in different media (distilled water and artificial saliva with pH 4.0, 6.8 and 8.0). pH values were measured with a Radiometer PHM 240 pH meter and a pH electrode, calibrated with buffer solutions of pH 4.0, 6.9 and 10.0. pH measurements (4.0, 6.8 and 8.0) were carried out at 310.15K. The tubes with the metal alloys immersed in the medium corresponding to each group were placed in an incubator at 310.15K and shaking at 170 rotations per minute. At 3 and 28 days, 5 ml of medium were collected randomly and subjected to analysis in inductively coupled plasma optical emission and plasma mass spectrometry.Results and conclusions: Regarding the analysis of mass variation, all groups, except the control group, in which the alloys obtained by casting were submerged in distilled water (p=0.054), showed statistically significant mass gains, due to the formation of passivating films on its surface. Regarding the release of cobalt ions, the results obtained were in line with those found in other similar studies in which the cast alloys present a considerably greater release of ions, compared to the SLM alloys, and this is even more accentuated at acidic pH. Although cobalt is an essential micronutrient for the functioning of the human body, its excessive release in the oral cavity can cause adverse effects such as hypersensitivity reactions and cytotoxic changes. Based on the results obtained in this study, the use of prosthetic devices obtained by Selective Laser Melting should be preferred as they release fewer cobalt ions than casting Co-Cr alloys