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Expansion of hematopoietic stem cells from umbilical cord blood in roller bottles.
Get PDFTesis (Doctorado en Ciencias en Biología Molecular)"Los transplantes de progenitores hematopoyéticos de sangre de cordón umbilical son empleados en una variedad de padecimientos hematológicos y oncológicos cada vez con más frecuencia. En la mayoría de los casos, el número de progenitores hematopoyéticos encontrados en una unidad de cordón umbilical es insuficiente para transplantar a pacientes adultos. El objetivo de este trabajo es ofrecer una perspectiva sobre las opciones para derrotar ésta limitante y proponer una alternativa de cultivo in vitro para incrementar los progenitores hematopoyéticos de sangre de cordón umbilical. En primer lugar se presenta una revisión concerniente a la expansión in vitro de los progenitores hematopoyéticos y posteriormente se ofrece una investigación original sobre el uso de un sistema de frascos giratorios para su cultivo y expansión en ambientes con y sin dióxido de carbono. Los resultados de la expansión de células hematopoyéticas en frascos giratorios muestran que éste sistema es una alternativa operacional y económicamente viable para la expansión de progenitores hematopoyéticos, permitiendo una expansión de entre 15 y 20 veces en la mayoría de las condiciones probadas. Además, se reporta el uso del medio de cultivo L-15 para el cultivo o expansión de progenitores, que mejora la expansión y que podría simplificar el cultivo de células hematopoyéticas en gran escala.""Umbilical cord blood stem cell transplants are a current treatment in several hematological and cancer conditions. In most cases the hematopoietic stem cell content in a cord blood unit is low and this limits their use in adult patients. The objective of this work is to offer a perspective about the options to overcome this issue and propose a culture alternative to increase the hematopoietic stem cells in vitro. We present a review on the in vitro expansion of hematopoietic stem cells alternatives and an original investigation based on the use of a roller bottle system to culture hematopoietic stem cells in both CO2 and CO2 free atmosphere. In most conditions tested, the expansion system allowed a 15-20 fold expansion of hematopoietic progenitors, demonstrating that the roller bottle system is functional economically and operationally. We report a novel use of the culture media L-15 to expand hematopoietic progenitors, using this media may simplify the large scale culture systems for stem cells.
Estimation of hydrogen production in genetically modified E. coli fermentations using an artificial neural network
Get PDF"Biological hydrogen production is an active research area due to the importance of this gas as an energy carrier and the advantages of using biological systems to produce it. A cheap and practical on-line hydrogen determination is desired in those processes. In this study, an artificial neural network (ANN) was developed to estimate the hydrogen production in fermentative processes. A back propagation neural network (BPNN) of one hidden layer with 12 nodes was selected. The BPNN training was done using the conjugated gradient algorithm and on-line measurements of dissolved CO2, pH and oxidation-reduction potential during the fermentations of cheese whey by Escherichia coli ΔhycA ΔlacI (WDHL) strain with or without pH control. The correlation coefficient between the hydrogen production determined by gas chromatography and the hydrogen production estimated by the BPNN was 0.955. Results showed that the BPNN successfully estimated the hydrogen production using only on-line parameters in genetically modified E. coli fermentations either with or without pH control. This approach could be used for other hydrogen production systems.
Surface and physicochemical characterization of phosphates vivianite, Fe2(PO4)3 and hydroxyapatite, Ca5(PO4)3OH
Get PDF"Hydroxyapatite is a calcium phosphate in the apatite group. It has numerous applications due to its particular properties including the sorption of metallic ions. This makes it useful for the treatment of contaminated groundwater and for soil decontamination. The least expensive source of hydroxyapatite for synthesis is bovine bone, since this is a waste material. Vivianite is an iron phosphate which has received little study. Like hydroxyapatite, it has particular properties. This paper describes the method of obtaining these phosphates; calcium phosphate from bovine bone, and iron phosphate by synthesis. Also described are the methods of purifying the materials and characterization of these two phosphates by X-ray diffraction, infrared analysis, thermogravimetric and differential scanning calorimetric analysis, scanning electron microscopy, and surface area by the BET method. Physicochemical characteristics of hydroxyapatite obtained from bovine bone are described, and preliminary results are presented of an investigation into whether hydroxyapatite and iron phosphate are suitable as a permeable reactive barrier for the treatment of metallic and radionuclide contaminants.
Oxidative stress response to menadione and cumene hydroperoxide in the opportunistic fungal pathogen Candida glabrata
Get PDF"Candida glabrata is an opportunistic fungal pathogen that can cause severe invasive infections and can evade phagocytic cell clearance. We are interested in understanding the virulence of this fungal pathogen, in particular its oxidative stress response. Here we investigated C. glabrata, Saccharomyces cerevisiae and Candida albicans responses to two different oxidants: menadione and cumene hydroperoxide (CHP). In log-phase, in the presence of menadione, C. glabrata requires Cta1p (catalase), while in a stationary phase (SP), Cta1p is dispensable. In addition, C. glabrata is less resistant to menadione than C. albicans in SP. The S. cerevisiae laboratory reference strain is less resistant to menadione than C. glabrata and C. albicans; however S. cerevisiaeclinical isolates (CIs) are more resistant than the lab reference strain. Furthermore, S. cerevisiae CIs showed an increased catalase activity. Interestingly, in SP C. glabrata and S. cerevisiae are more resistant to CHP than C. albicans and Cta1p plays no apparent role in detoxifying this oxidant.
Producción de una vacuna comestible en sistemas vegetales contra el virus sincicial respiratorio
Get PDFTesis (Maestría en Ciencias en Biología Molecular)"Las enfermedades infecciosas, principalmente las respiratorias, son un campo importante en el desarrollo de las vacunas, debido a los altos costos de hospitalizan que se generan de ellas; el virus sincicial respiratorio (VSR) es el principal patógeno de este tipo de enfermedades en niños; asimismo, es uno de los principales patógenos de vías respiratorias en ancianos. Actualmente no existe una vacuna para prevenir su infección. El presente trabajo se enfoca al desarrollo de una vacuna comestible contra VSR en plantas. Se generaron vectores para transformación nuclear de lechuga y tabaco, así como para cloroplastos de tabaco conteniendo epítopos de los genes F y G de VSR. Se transformaron genéticamente plantas de tabaco y lechuga por medio de Agrobacterium tumefaciens portando los genes nativos de las proteínas F y G de VSR y dos genes sintéticos optimizados para plantas: uno codifica para un polipéptido que contiene dos adyuvantes, tres epítopos de la proteína F y un epítopo de la proteína G unidos por péptidos conectores y el otro codifica para un péptido similar al cual se le ha eliminado el epítopo de la proteína G. Además se inició la transformación de cloroplastos de tabaco por el método de biobalística con genes sintéticos. Al igual que los utilizados para la transformación nuclear uno contiene tres epítopos de la proteína F y uno de G mientras que el otro solo contiene los de la proteína F. Para la transformación nuclear de lechuga se logró regenerar callos con las construcciones de los genes sintéticos y del gen nativo G, mientras que en el caso de tabaco, con el gen sintético que contiene los cuatro epítopos, se logró regenerar plantas completas a las que se les verificó la integración del transgén por PCR y se confirmó la antigenicidad por un ensayo inmunoenzimático (ELIZA) con anticuerpos específicos contra la proteína F del VSR y también se obtuvieron callos resistentes al agente de selección de las construcciones con los genes nativos F y G. En la transformación de cloroplastos de tabaco se logró regenerar callos resistentes al medio de selección con las dos construcciones utilizadas (con y sin el epítopo del gen G). El tenes callos resistentes al agente de selección nos permite considerar la posibilidad de obtener plantas transgénicas y/o transplastómicas con las otras construcciones, trabajo a realizarse posteriormente. Este es el primer trabajo donde se han incluido cuatro diferentes epítopos de regiones antigénicas del VSR y se han introducido a plantas, además de demostrar que son funcionales in vitro, lo cual es el primer paso para un trabajo futuro de funcionalidad in vivo. Las diversas construcciones generadas nos permitirán comparar si los niveles de expresión de la proteína con los genes sintéticos son similares o superiores a las construcciones con los genes nativos, además del tipo de respuesta inmune (Th1 o Th2) que se genere en pruebas en ratones. Por otro lado el contar con construcciones con y sin el epítopo G nos ayudará a determinar si la presencia de antígenos de esta proteína altera el balance de la respuesta inmune (Th1/Th2) generado.""Respiratory tract infections are a leading cause of morbidity and mortality world-wide and an important area for vaccine development based on the high costs associated to their treatment. Respiratory syncytial virus (RSV) is the most important pathogen leading to hospitalizations in young children but is also important in elderly people. Although RSV has been well recognized for more than 40 years, an effective vaccine is not yet available. The current work focused on the expression of antigenic peptides derived from RSV in plants as a first step for the development of an edible vaccine. Vectors for nuclear transformation of lettuce and tobacco were obtained as well as for tobacco chloroplast transformation, harboring antigenic sequences of the F and G genes of RSV. Tobacco and lettuce plants were transformed by co-cultivation with Agrobacterium tumefaciens containing the native genes of the F and G proteins from RSV, and two synthetic genes optimized for their expression in plants. One of these genes encodes for two adyuvants and three epitopes from the F protein and an additional epitope from the G protein fused by linkers. The peptides were selected based on their theoretical antigenicity. The second synthetic gene is similar to the first one, but the G epitope was deleted. Also, tobacco chloroplast transformation was started by biolistic assay with plasmids designed for homologous recombination. A biolistic vector including three epitopes of the F protein and one of the G protein fused by linkers was used; in addition another vector that lacked the G epitope was used. This strategy will allow us to compare the immunological responses of immunized mice with different compositions of recombinant protein. As for the nuclear transformation of lettuce, it was possible to regenerate calli that contain the native G gene, as well as calli that contain the synthetic genes (F-G and F alone). In regards to the nuclear transformation of tobacco, adult plants transformed with the synthetic genes (F and G) were obtained and the presence of this gene was corroborated by a PCR assay. The functionality of the protein produced in plants was demonstrated based on the results of an in vitro immunoassay. The ELISA was carried out with specific monoclonal antibody against the F protein of RSV.
Producción de las proteínas antiangiogénicas: vasostatina, vasoinhibina y sus quimeras en Escherichia coli y su actividad biológica
Get PDF"La formación de nuevos vasos sanguíneos a partir de la vasculatura pre-existente se conoce como angiogénesis, participa en la reparación de tejidos y en respuestas inflamatorias. En condiciones normales existe un balance entre factores pro- y antiangiogénicos. Sin embargo, un desequilibrio en este proceso, conlleva en algunas circunstancias a una hiperproliferación de vasos sanguíneos, determinantes en patologías como el cáncer, la retinopatía diabética y en enfermedades cardiovasculares. Por estas implicaciones clínicas, ha despertado un interés considerable la búsqueda de nuevos agentes antiangiogénicos endógenos y sus mecanismos de acción. Las vasoinhibinas (VI) y la vasostatina (VS) son inhibidores naturales de la angiogénesis, que corresponden a fragmentos de grandes proteínas que por si mismas han perdido su capacidad angiogénica, derivan del extremo amino terminal de la prolactina (PRL) y de la calreticulina (CALR), respectivamente. El propósito del presente estudio fue llevar a cabo la producción de los fragmentos recombinantes activos: VI, VS y sus quimeras, vasoinhibina-vasostatina (VI-VS) y vasostatina-vasoinhibina (VS-VI) en Escherichia coli. Las proteínas recombinantes fueron expresadas en E. coli BL21SI mediante el vector de expresión pET12a, fueron analizadas en SDS-PAGE y cuantificadas por densitometría y western blot. Todas las proteínas fueron purificadas por cromatografía de afinidad en columnas de níquel. La producción de cada una de las proteínas a nivel de matraz fue de (mg/L): VS 6.87, VI 0.65, VS-VI 3.77 y VI-VS de 3.06, a nivel de biorreactor fue de (mg/L): VI 2.02, VS_VI 4 y VI_VS 0.39, lo que indica que la producción de las proteínas en este trabajo fue más eficiente en matraz que en biorreactor, no así para VI en donde su producción en biorreactor se vio incrementada, esto sugiere que es necesario optimizar las condiciones de cultivo a este nivel con el fin de mejorar la expresión de las proteínas recombinantes. Los resultados obtenidos mostraron que cada una de estas proteínas recombinantes, y sus quimeras, contienen los fragmentos activos antiangiogénicos, cuyo blanco biológico son las células endoteliales al mostrar un bloqueo en la proliferación de células endoteliales coronarias estimulada por sustancias vasoactivas como la Bradicidina. Estos hallazgos abrirán nuevas líneas de investigación en el desarrollo de novedosas herramientas biológicas en las terapia angiogénica.""The formation of new blood vessels from the existing vasculature is known as angiogenesis, play a key role during wound healing process, tissues growth and inflammatory responses. In normal conditions a balance between pro- and antiangiogenic factors exist, however, a desbalance in this process, leads to, in some circumstances, an hiperproliferation of blood vessels, important in pathological diseases such as cancer, vasoproliferative retinopathies, rheumatoid arthritis and cardiovascular diseases. By these clinical implications, a considerable interest in search of novel antiangiogenic factors and its action mechanisms has awaked. The vasoinhibins (VI) and vasostatin (VS) are fragments released from Nterminal end of the human prolactin (hPRL) and calreticulin (CALR), respectively, those fragments are natural antiangiogenics. The aim of this study is the production of active recombinant fragments: VI, VS and their fusion proteins, vasostatin_vasoinhibin (VS_VI) and vasoinhibin-vasostatin (VI_VS). The recombinant proteins were expressed in Escherichia coli BL21SI with the expression vector pET12a, the protein production were analyzed by SDS-PAGE, and Western blot quantification at bioreactor and flask level, also we quantified by densitometry in flask level. All proteins were purified by nickel affinity chromatography; the biological activity was evaluated in coronary endothelial cells (CEC). The protein production at flask level was (mg/L): VS 6.87, VI 0.65, VS-VI 3.77 and VI-VS 3.06; and at bioreactor level was (mg/L): VI 2.02, VS_VI 4.0 and VI_VS 0.39. In this study the protein production is more efficient in flask than bioreactor level, nevertheless, VI was able to improve its production at bioreactor level. We need optimize culture conditions at bioreactor level to improve the production of recombinant proteins. The results show that each recombinant proteins contain the active corresponding antiangiogenic fragments, whose biological target are endothelial cells that show an inhibition proliferation stimulated by vasoactive substances like Bradykinin (BK), fact that will open new lines of investigation for the development of novel biologic tools in the angiogenic therapy.
A dynamic parameter estimator to control chaos with distinct feedback schemes
Get PDF"A dynamic strategy is proposed to estimate parameters of chaotic systems. The dynamic estimator of parameters can be used with diverse control functions; for example, those based on: (i) Lie algebra, (ii) backstepping, or (iii) variable feedback structure (sliding-mode). The proposal has adaptive structure because of interaction between dynamic estimation of parameters and a feedback control function. Without lost of generality, a class of dynamical systems with chaotic behavior is considered as benchmark. The proposed scheme is compared with a previous low-parameterized robust adaptive feedback in terms of execution and performance. The comparison is motivated to ask: What is the suitable adaptive scheme to suppress chaos in an specific implementation? Experimental results of proposed scheme are discussed in terms of control execution and performance and are relevant in specific implementations; for example, in order to induce synchrony in complex networks.
Biosorption of chromiun(III) bye agro-waste materials: characterization, sorption-desorption studies, mechanism and adsorption kinetic experiments.
Get PDFTesis (Doctorado en Ciencias Ambientales)"Los efluentes que contienen metales deben ser tratados antes de descargarlos a cuerpos receptores para evitar la contaminación de fuentes de agua y, por consiguiente, el riesgo a la salud humana asociado a la contaminación por metales. Algunos de los metales más tóxicos y peligrosos para los humanos, así como también otras formas de vida, son mercurio, cadmio, plomo, cromo, níquel, zinc y cobre. Estos metales son de interés particular debido a su toxicidad, tendencia a bioacumularse, y persistencia en la naturaleza. En particular, el cromo es cancerígeno y puede afectar el sistema inmune de los seres humanos. Además, recientemente se reportó que el cromo trivalente (Cr (III)) afecta la membrana de los eritrocitos de los seres humanos en mayor proporción que el cromo (VI). Los efluentes de cromo son generados de industrias tales como tenerías, recubrimientos metálicos, textil, acabados, entre otras. La adsorción puede ser utilizada para remover iones metálicos (e.g. Cr (III)) de soluciones acuosas. De hecho, muchos biosorbentes de bajo costo han sido investigados para remover metales del agua. Algunos ejemplos de estos materiales incluyen biomasa de algas marinas, quitina y quitosano, biomasa de microorganismos, materiales lignocelulósicos, etc. Estos biosorbentes tienen una capacidad de adsorción de metales razonable y están disponibles ampliamente en muchos países alrededor del mundo. Esta tesis se enfocó en la aplicación de desechos agrícolas tales como paja de sorgo (Sorghum bicolor), paja de avena (Avena monida), y bagazo de agave (Agave salmiana), como biosorbentes de Cr (III) de soluciones acuosas. Estos biosorbentes se caracterizaron química y físicamente por medio de técnicas tales como espectroscopia de infrarrojo, titulaciones ácido–base, extracción secuencial de fibras, área específica, volumen de poro, distribución de tamaño de poro, y densidad. Se realizaron estudios de adsorción/desorción en sistemas en lote y se propuso un mecanismo de adsorción de Cr (III). También se desarrollaron estudios de cinética de adsorción en un reactor de canastilla rotatoria.""Metal-containing effluents must be treated before discharge to avoid pollution of water sources and, consequently, health hazards associated to metal contamination. Some of the major toxic metal ions hazardous for humans, as well as other forms of life, are mercury, cadmium, lead, chromium, nickel, zinc and copper. These metals are of particular concern due to their toxicity, ioaccumulation, and persistence in nature. In particular, chromium is suspected of being carcinogenic and may affect the immune system of human beings. In addition, it has been recently reported that trivalent chromium (Cr (III)) affects human erythrocyte membranes in a higher extent in comparison with chromium (VI). Chromium effluents are generated from industries such as leather tannery, metal plating, textile, finishing, among others. Biosorption can be used to remove metals ions (e.g. Cr (III)) from aqueous solutions. Indeed, many low-cost biosorbents have been investigated for sequestering metals from water. Some examples of these materials include seaweed biomass, chitin and chitosan, microorganism biomass, lignocellulosic materials, etc. These biosorbents have a reasonable metal adsorption capacity and are widely available in many countries around the world. This thesis focused on the application of agro-waste materials such as sorghum straw (Sorghum bicolor), oats straw (Avena monida), and agave bagasse (Agave salmiana), as biosorbents of Cr (III) from aqueous solutions. These biosorbents were chemically and physically characterized by techniques such as infrared spectroscopy, acid–base titrations, sequential fiber extraction, surface area, pore volume, pore width distribution, and solid density. Sorption/desorption studies were conducted in batch systems and a sorption mechanism of Cr (III) was proposed. Also, adsorption kinetic studies of Cr (III) were performed by using a rotating basket reactor.
efecto de la temperatura y del potencial hídrico.
Get PDFTesis (Maestría en Ciencias Ambientales)"Poco es conocido sobre la germinación de especies desérticas ante un probable cambio climático, en el cual disminuirían las lluvias y aumentarían las temperaturas. En ambientes áridos y semiáridos la germinación de semillas es esporádica, debido principalmente a la baja disponibilidad de humedad en el suelo y a las temperaturas extremas. Así, es probable que la germinación de semillas de especies desérticas sea aún menor por efecto del cambio climático futuro. En esta investigación se realizaron dos experimentos, evaluando: (i) el efecto de distintos tratamientos de humedad del suelo y de temperaturas en la germinación de semillas de ocho especies útiles y/o en categoría de riesgo del sur del desierto chihuahuense, y (ii) el efecto de pre-tratamientos con altas temperaturas alcanzadas a nivel del suelo (40 y 70°C) durante una y dos semanas, en las mismas especies. Para evaluar la humedad del suelo se simularon potenciales hídricos (0, -0.2, -0.4, -0.6, -0.8 y -1.0 MPa) utilizando PEG-6000, mientras que las temperaturas utilizadas fueron 18, 25 y 32°C las cuales son temperaturas media, máxima media y máxima maximorum registradas para el mes de septiembre (mes de lluvias) en la región centro de San Luis Potosí, y 36°C, la cual sustituiría a la temperatura máxima maximorum ante un cambio climático. Las variables de respuesta analizadas son el porcentaje de germinación y el tiempo medio de germinación (t50). Los resultados obtenidos coinciden con los esperados por efecto de un posible cambio climático, disminuyendo en todas las especies su germinación, así como aumentando el tiempo medio de germinación, mientras las condiciones se fueron haciendo más extremas. Prosopis laevigata toleró un mayor número de tratamientos, germinando hasta 100% y con t50 de alrededor de un día en las cuatro temperaturas combinadas con disponibilidad de humedad tanto altas como bajas (desde 0 hasta -0.6 MPa). Esta especie podría tolerar mejor las condiciones de cambio climático, pudiendo así ser una especie predominante en los paisajes naturales en un futuro. El resto de las especies no lograron germinar con baja humedad disponible en ninguna temperatura. La germinación fue menor con alta temperatura (36°C) aún con alta disponibilidad de agua. Ninguna especie mostró efectos sobre el porcentaje de germinación en semillas pre-tratadas a 40 y 70°C.""Little is known about germination of desert species under climate change with less rainfall and higher temperatures. In arid and semiarid environments seed germination occurs sporadically, mainly as a result of low water availability and extreme temperatures. In the future as a result of climate change germination of desert plants might be rarer. There were two experiments in this study: (i) the effect of different soil moisture and temperature on seed germination of eight useful or threatened species in the south of the Chihuahuan desert, and (ii) for the germination of the same species, the effect of exposing seeds at high temperatures (40 and 70°C) for one and two weeks prior to germination. To evaluate soil moisture, water potentials (0, -0.2, -0.4, -0.6, -0.8 and -1.0 MPa) were simulated using PEG-6000. Temperatures used were 18, 25 and 32°C (mean, mean maximum and maximorum maximum) for the rainy month (September) in the center of San Luis Potosi. A higher temperature (36ºC) was also used as the predicted climate change maximorum maximum. Response variables were germination percentage and mean germination time (t50). Results coincide with expectations for climate change, with lower germination and longer t50 across species with drier and warmer conditions. Prosopis laevigata had high germination (up to 100% and t50 of 1 day) in the four temperatures studied and from high to low water availability (0 to 0.6 MPa). This species could germinate well under climate change and persist as dominant in future landscapes. The other species did not germinate with low water availability at any temperature. The highest temperature (36ºC) resulted in low germination even with high water availability. No species showed an effect on germination percentage for seeds pretreated at 40ºc and 70ºC.
Identificación y caracterización de genes de frijol (Phaseolus vulgaris L.) inducidos por estrés salino
Get PDFTesis (Doctorado en Ciencias en Biología Molecular)"El objetivo principal de esta investigación fue aislar e identificar genes inducidos por estrés salino en una variedad de frijol reportada como tolerante a estrés hídrico. Por lo tanto los pasos preliminares para alcanzar dicho objetivo fueron llevar a cabo un análisis comparativo entre la variedad Pinto Villa, tolerante a sequía, y la variedad Canario 60, sensible a sequía. Para iniciar este estudio, se
analizaron parámetros bioquímicos y fisiológicos como el contenido de poliaminas,
prolina, clorofila, así como el potencial hídrico de las hojas (Ψw) para caracterizar
la respuesta de estas variedades de frijol bajo el tratamiento con NaCl; obteniendo
que la variedad Pinto Villa fue la más tolerante a estrés salino en comparación con
la variedad Canario 60. En base a los resultados anteriores se decidió continuar el estudio construyendo una biblioteca sustractiva en la variedad tolerante de frijol Pinto Villa bajo estrés salino, a partir de la cual se identificaron 71 unigenes potencialmente inducidos bajo esta condición. Los genes identificados fueron clasificados en 8 categorías funcionales: genes relacionados a estrés (41 %), mantenimiento celular y desarrollo (22 %), transporte (10 %), fotosíntesis y cloroplasto (7 %), factores transcripcionales (6 %), señalización (4 %), fotorespiración (4 %) y otros (6 %). La expresión de ocho de estos genes aislados en la biblioteca sustractiva: el factor transcripcional ATHB-12, una proteína DNAJ de choque térmico, una LEA-18, la subunidad E de una ATPasa vacuolar, una dehidrina, una metalotioneina tipo 2, una S-adenosilmetionina sintasa y una acuaporina, fue analizada mediante ensayos de RT-PCR semicuantitativa tanto en la variedad tolerante de frijol Pinto Villa, a partir de la cual fueron aislados, como en la variedad sensible Canario 60, y de esta manera se confirmó su expresión diferencial. Los genes más sobreexpresados en Pinto Villa fueron el factor ATHB-12 y los que codifican a las proteínas ATPasa vacuolar, LEA-18 y S-denosilmetionina sintasa. En la biblioteca sustractiva de frijol bajo estrés salino, el unigen 31 corresponde a un fragmento de cDNA del gen S-adenosilmetionina descarboxilasa 1 (samdc1), el cual es parálogo al gen Pvsamdc2 de frijol descrito anteriormente por nuestro grupo de investigación. Posteriormente, nos dimos a la tarea de obtener el marco de lectura abierto del nuevo gen de samdc, utilizando oligonucleótidos diseñados en el unigen 31 (que incluye parte del UTR-5´ y 305 nt del marco de lectura abierta) y un oligonucleótido diseñado al final del marco de lectura abierta del gen Pvsamdc2. De esta manera, logramos aislar 1230 nt del cDNA del gen Pvsamdc1 con número de acceso GenBank EF580132. Dicho gen (Pvsamdc1), junto a otros genes de la biosíntesis de poliaminas (Pvadc, Pvsamdc2, Pvspds), aislados previamente por nuestro grupo, fueron analizados transcripcionalmente bajo estrés salino así como con otros tratamientos tales como frío, ácido abscísico y poliaminas exógenas. Con este experimento se pudo observar que la variedad Pinto Villa responde más activamente a la adición exógena de poliaminas respecto a Canario 60, y además que Pvadc, Pvsamdc1, Pvsamdc2 y Pvspds son genes que responden a ácido abscísico en las condiciones analizadas en el cultivar tolerante Pinto Villa.""The main goal of the present investigation was the isolation and identification of salt induced genes in a drought tolerant bean cultivar. The first step to achieve such objective was to conduct a comparative analysis in two bean cultivars, Pinto Villa and Canario 60, tolerant and sensitive to water stress respectively. Biochemical and physiological parameters like polyamine content, proline, chlorophyll, as well as leaf water potential (Ψw), were analyzed in order to characterize the response of both bean cutivars to NaCl treatment. The results demonstrated that the Pinto Villa cultivar has a major salt tolerance respect to Canario 60. Based on the above results we decided to continue the study with a Suppression Subtractive Hybridization (SSH) in the tolerant cultivar Pinto Villa under salt stress, from which 71 unigenes potentially induced by this condition were isolated. The identified genes were classified into 8 functional categories: genes related to stress (41 %), cell maintenance and development (22 %), transport (10 %), photosynthesis and chloroplast (7 %), transcriptional factors (6 %), signaling (4 %), photorespiration (4 %) and other (6 %). Eight of these genes isolated, the transcription factor ATHB-12, the heat shock protein DNAJ, the LEA-18, the E subunit of vacuolar ATPase, the dehydrin, the type 2 metallothionein, the Sadenosylmethionine-synthase and the aquaporin, were selected for expression assays by RT-PCR in both cultivars, the tolerant Pinto Villa, from which they were isolated, and the sensitive Canario 60 and thus confirmed their differential expression. The most induced genes in Pinto Villa were the factor ATHB-12 and those coding the vacuolar ATPase, LEA-18 and S-adenosylmethionine synthase proteins. In the bean SSH under salt stress, the unigene 31 corresponds to a cDNA fragment of the S-adenosylmethionine decarboxylase 1 (samdc1), which is a paralogous of the bean Pvsamdc2 reported previously by our group. Subsequently, we found the task of getting the open reading frame of the new samdc gene by using a forward primer designed on the unigene 31 (which includes part of the UTR-5' and 305 bases of the open reading frame) and a reverse primer at the end of the open reading frame of the gene Pvsamdc2. In this way we amplified a 1230 bases long cDNA fragment of the Pvsamdc1 gene, which was registered with the GenBank access number EF580132.