Repositório Científico de Acesso Aberto da ULisboa
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Confluências comparatistas: vozes e mundos em diálogo
No full textContra os muros do ódio, da intolerância e da uniformização avassaladora do pensamento, este livro, intitulado Confluências Comparatistas: Vozes e Mundos em Diálogo, celebra a constituição de uma comunidade de jovens estudiosos que se debruçam sobre a Literatura Comparada como saber transversal, aberto à diferença e à diversidade na ótica de reconhecimento, entendimento e respeito pelo Outro na sua singularidade. Contra a desvalorização das Humanidades, esta publicação combate a homogeneização das práticas da aldeia global e dá voz à pluralidade literária e à complexidade dos contextos culturais e das especificidades dos povos num sonho utópico de interação, diálogo e harmonia. Além disso, constrói também a metáfora do ritual de passagem, norteada pela viagem formativa de transcendência. Ao publicar os seus estudos, os jovens investigadores concluem uma fase do seu percurso de aprendizagem e integram-se no mundo interrogante do Comparatismo, pautado pelo diálogo incessante de textos, culturas e cosmovisões, para além das fronteiras linguísticas, culturais, geográficas e políticas.Este trabalho é financiado por fundos nacionais através da FCT – Fundação para a Ciência e a Tecnologia, I.P., no âmbito do projeto UIDB/00509/2020info:eu-repo/semantics/publishedVersio
Introduction. Thresholds: a manifold space
No full textIntroduction do the volume "Dedans, dehors et à travers: perspectives littéraires et comparatistes sur le seuil = In, out and through: literary and comparative perspectives on thresholds"In 2018, within the framework of a long-standing and fruitful collaboration between the Centre for Classical Studies and the Centre for Comparative Studies of the University of Lisbon, we organized an international conference on the topic of “thresholds in literature and the arts”. The call for papers for this volume followed a few months later. The essays that the reader finds here represent a fraction of the proposals we received, selected through double-blind peer reviews.
What triggered this double initiative – the conference and the volume – was the desire to explore the density and breadth of the notion of the threshold by addressing it from different perspectives, bringing together researchers from different areas – areas of research but also geographical areas – and with different methodologies. Undoubtedly we were also lured, at least at the beginning, by the naive hope – an unavowed wishful thinking, if you prefer – of working out a clear-cut definition of what a threshold is. And yet, we were also, or quickly became, aware that the question “what is a threshold?” is far more complex and difficult to answer that it may seem.
This critical introduction to the volume emphasizes two crucial, closely intertwined, features of our project, one concerning the main theme, the other concerning its editorial development and final outcome. As far as the first aspect is concerned, the strong symbolical charge of the threshold, combined with the variety of its manifestations, its multifaceted nature and even its essential ambiguities, makes it a ubiquitous motif and a useful prism through which delve into, and compare, different cultures and forms of art. At the same time, the richness and semantic stratification of the threshold, in the context of a multidisciplinary publication such as this one, materializes in an extremely broad and elaborate pattern of echoes and connections: each essay can be read in association with several others, depending on the reader’s perspective and main interests, and every combination will help to cast light on a particular facet of our theme. The thematic groups and discussion of this long introduction seek to highlight some of these connections and some of the question they raise. We are confident that the reader will find plenty of other intriguing paths that unfold from these thresholds.This work is financed by national funds through the FCT - Foundation for Science and Technology, I.P., within the scope of the projects UIDB/00509/2020 and UIDP/00509/2020info:eu-repo/semantics/publishedVersio
The altarpiece of the chapel of Saint Anne’s Shelter in Diu: uncovering an important artwork of the former Portuguese India (turn of the 17th century)
No full textDiu Island (India) was a Portuguese territory for more than four centuries until its integration into India in 1961. Portuguese influence can be seen in many buildings and works of art on the island, although many of these are in danger of deteriorating or vanishing altogether. The altarpiece in the chapel of Saint Anne’s Shelter is a poor-
ly conserved work which remains almost unknown. Overlooked by art historians, this important work of art is probably the oldest remaining painting in Diu, directly linked to Goa and Portugal, exemplifying the journey of art forms between Europe and Asia. This article intends to understand the context in which the altarpiece was produced, and its influences and origins. The history of the building where the altarpiece stands is also important, as it likewise reveals the altarpiece’s history and context in Diu.info:eu-repo/semantics/publishedVersio
Formulation and device combo for nose to brain drug delivery
No full textTese de mestrado, Engenharia Farmacêutica, 2022, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia.A nível mundial, o número de pessoas afetadas por perturbações neurológicas ronda um milhar de milhão. Para fazer face a este crescente número de pessoas afetadas têm-se desenvolvido novos fármacos e medicamentos. Contudo, existem dificuldades na administração dos mesmos com ação no Sistema Nervoso Central, devido à complexidade do cérebro e da barreira hematoencefálica. Esta barreira, para além de impedir a entrada de substâncias patogénicas, também dificulta a passagem de fármacos da corrente sanguínea para o cérebro, dificultando a sua ação.
Com o objetivo de ultrapassar os desafios inerentes à administração de fármacos com ação no Sistema Nervoso Central, são consideradas diferentes vias de administração, tais como a via intraparenquimatosa e intratecal. No entanto, estas vias são invasivas e possuem riscos de infeção associados. Recentemente, têm sido propostas vias de administração alternativas a estas, como é o caso da via nasal para administração de fármacos com ação cerebral. Devido à absorção eficiente e à permeabilidade da mucosa nasal, esta via de administração permite a passagem de fármacos para o cérebro, contornando a barreira hematoencefálica. Contudo, apesar da cavidade nasal ser facilmente acessível e apresentar uma densa rede de vasos sanguíneos que poderão facilitar a absorção e permeação dos fármacos, existem moléculas que, devido às suas propriedades físico-químicas, apresentam dificuldades de absorção e permeação. Para além disso, existe a necessidade de as formulações administradas apresentarem além de excipientes compatíveis com o próprio fármaco, compatibilidade com a mucosa nasal, de forma a facilitar a absorção e evitar a decomposição. A clearance mucociliar e o tempo de residência na cavidade nasal são também fatores a considerar numa administração eficiente por via nasal.
Não é ainda consensual a via que o fármaco, quando administrado na cavidade nasal, segue para ter um efeito terapêutico no cérebro. Por um lado, alguns autores defendem a incorporação dos fármacos nos nervos olfactório e/ou trigémino sendo que o fármaco é transportado no interior deste(s). Contudo, há também alguns autores a defenderem que este transporte é feito pelos espaços existentes entre estes nervos (olfactório e trigémino) e as células circundantes, por exemplo as células sustentaculares. Apesar da indefinição no mecanismo de permeação, parece existir uma concordância de que os fármacos podem seguir eventualmente mais do que uma das vias.
Tendo isto em consideração, esta dissertação centrou-se no desenvolvimento de formulações em pó, com aplicações no Sistema Nervoso Central, por administração nasal. Com o intuito de aumentar o conhecimento sobre esta via de administração, avaliou-se a deposição aerodinâmica das formulações produzidas, recorrendo a um modelo da cavidade nasal. Este modelo que tem como objetivo a mimetização da deposição de fármacos in vivo é feito de alumínio e consiste numa réplica da cavidade nasal obtida por tomografia computacional.
Dessa forma, este estudo iniciou-se pela escolha de fármacos mais apropriados para os objetivos propostos, considerando a respetiva massa molar, solubilidade e aplicações terapêuticas para outras vias de administração. De entre as possibilidades, a escolha recaiu sobre o Itraconazol. Procedeu-se igualmente à escolha dos excipientes (aminoácidos e polímero) para realizar estudos de supersaturação. Estes estudos tiveram como principal objetivo compreender, de entre os excipientes estudados, qual ou quais seriam os mais promissores para inibir a precipitação do Itraconazol no fluido nasal, mantendo-o no estado supersaturado durante um período prolongado. De entre os aminoácidos selecionados (L-Leucina, L-Arginina, L-Glutamato, L-Glutamina, L-Triptofano), a L-Glutamina, foi a que apresentou uma maior capacidade de manter o Itraconazol solúvel em fluido nasal durante um período mais longo. O polímero estudado, HPMC, demonstrou uma capacidade elevada de inibir a precipitação do Itraconazol em fluido nasal, durante o intervalo de tempo estudado. Dessa forma, produziram-se pós de formulações com diferentes proporções de Itraconazol com um ou com ambos os excipientes.
As formulações foram produzidas por secagem por atomização (Spray Drying), de forma a produzir partículas com as propriedades desejadas, através do ajuste dos parâmetros de processo. Este método é considerado relativamente simples e permite que exista um controlo do tamanho de partícula, possibilitando a secagem de diferentes fármacos/formulações dissolvidos em diferentes solventes.
Com o intuito de compreender as propriedades físico-químicas fundamentais das formulações produzidas e de que forma isso poderia ter impacto na deposição no modelo da cavidade nasal, procedeu-se a uma caracterização analítica das mesmas em que foram estudados os seguintes parâmetros: morfologia, tamanho, presença de solventes residuais e conteúdo em água. Em relação ao tamanho de partícula e à morfologia não se observaram diferenças significativas entre as várias formulações produzidas. Para além disso, não foram detetadas quantidades significativas de solventes residuais nem água, nas diferentes formulações.
Depois de produzidos os pós, procedeu-se ao estudo da sua deposição utilizando o modelo da cavidade nasal. Realizaram-se estudos preliminares no sentido de perceber quais as condições e quais variáveis que possuem um maior impacto na deposição. A partir destes concluiu-se que o ângulo de atuação, o fluxo de inalação utilizado e o revestimento do modelo da cavidade nasal eram variáveis críticas no processo. Tendo em conta essas variáveis, definiu-se um modelo matemático, DoE, para realizar os estudos com as formulações produzidas.
De entre as formulações produzidas foi selecionada para continuação dos estudos a formulação que continha na sua composição ambos os excipientes em estudo (L-Glutamina e HPMC), e avaliou-se a sua deposição na cavidade nasal. Prosseguiram-se os estudos indicados pelo modelo matemático. No entanto, observou-se acumulação da formulação dentro da cápsula e consequente dificuldade na sua dispersibilidade para fora da mesma, aquando da atuação do dispositivo de administração, MIAT®, impossibilitando a análise dos resultados. Considerando este desafio, surgiram diferentes questões relacionadas com a formulação, mas também com o próprio dispositivo de administração e, por isso, foram avaliadas possíveis soluções. Primeiramente, surgiu a questão da possibilidade de existirem interações entre as partículas da própria formulação ou entre a formulação e a cápsula. Com o intuito de perceber se estas possíveis interações poderiam ser a razão para a acumulação da formulação dentro da cápsula, alterou-se a composição da formulação. Adicionou-se manitol à formulação com os dois excipientes (ITZ/HPMC/L-Glutamina), utilizada nos estudos anteriores. A adição deste açúcar teve como objetivo o transporte das partículas da formulação, de reduzidas dimensões, para fora da cápsula, de forma a ser possível a sua deposição no modelo da cavidade nasal. Contudo, observaram-se resultados semelhantes aos obtidos sem manitol, ou seja, a mistura não dispersou para fora da cápsula. Colocando como hipótese de a retenção do pó na cápsula ser derivada a um mau funcionamento do dispositivo de administração, prosseguiram-se os estudos utilizando um segundo dispositivo de administração, do mesmo fornecedor, testando as restantes formulações produzidas com Itraconazol. No entanto, não se observaram diferenças significativas na dispersão de pó para fora da cápsula, comparativamente aos testes anteriores.
A partir dos diferentes estudos compreendeu-se que, apesar das formulações utilizadas não dispersarem facilmente da cápsula, tanto as propriedades da formulação como as características do dispositivo de administração são cruciais para uma administração adequada. Para além disso, obteve-se ainda conhecimento acerca dos parâmetros chave e variáveis que influenciam a deposição no modelo da cavidade nasal. Contudo, são necessários estudos adicionais para a compreensão da administração por esta via.Worldwide, millions of people are affected by neurological disorders with an imperious demand to overcome and decrease these numbers. The development of new drugs and drug products are key strategies to reduce and treat these diseases. However, brain and blood brain barrier (BBB) complexity difficult the progresses in brain drug delivery area. Recently, nose to brain (N2B) drug delivery is presented as a potential alternative route for delivering drugs to the brain, alternatively to the common routes of administration. Despite this administration route seems to ease the drug passage from nose to the brain by circumventing the BBB, more studies are required to understand all the mechanisms associated. In this way, this dissertation focused on the development of formulations for N2B applications. Therefore, the aerodynamic deposition of these formulations was evaluated using a nasal geometry model, intending to gain knowledge on the N2B drug delivery area.
In the first part of this work, supersaturation studies were carried out aiming to understand what would be the most auspicious excipient to increase drug dissolution in nasal mucus. Considering the excipients selected, the most promising formulations were produced using spray drying and physicochemical characterized. For the most propitious formulations, performance characterization tests were conducted aiming to understand what would be the variables that most impact powder deposition in Alberta Idealized Nasal Inlet (AINI) and in which way this deposition occurs.
From the different variables and parameters studied it was understood that, despite the used formulations did not easily disperse from the capsule, the combination formulation-device is crucial for an appropriate N2B drug delivery. Moreover, it was achieved a better understanding on AINI method and the key parameters for its use. Further studies on the topic are suggested.Hovione FarmaCiencia S
Modelling Rett syndrome with 3D cardiac models derived from patient-specific human induced pluripotent stem cells
No full textTese de Mestrado, Engenharia Biomédica e Biofísica, 2023, Universidade de Lisboa, Faculdade de CiênciasA Síndrome de Rett (RTT) é uma perturbação rara do neurodesenvolvimento causada
maioritariamente por mutações no gene que codifica a proteína MeCP2, localizado no cromossoma X.
Embora seja uma doença genética, as mutações que causam a RTT são praticamente todas esporádicas,
com menos de 1% dos casos sendo hereditários. A incidência da RTT é mais elevada em indivíduos do
sexo feminino, aproximadamente 91% dos casos reportados, afetando cerca de 1 em cada 10 000 a 23
000 mulheres mundialmente. Estes doentes podem apresentar uma ampla gama de sintomas,
determinados pela localização, tipo e gravidade da mutação, ou, no caso dos indivíduos do sexo
feminino, também pela inativação do cromossoma X. A doença progride em quatro fases e resulta
principalmente em perturbações graves do desenvolvimento e função cerebrais, mas também numa
miríade de problemas não neurológicos, nomeadamente anormalidades cardíacas, respiratórias,
gastrointestinais, metabólicas e ósseas. Efetivamente, quase todos os aspetos da vida destes doentes são
afetados, desde a sua capacidade de falar, andar, comer e até de respirar normalmente. Dada a gravidade
dos sintomas, a expectativa de vida das pessoas com RTT é reduzida, havendo uma maior incidência de
morte súbita, cerca de 26% das mortes. Tem-se especulado que o intervalo QT corrigido (QTc)
prolongado, um parâmetro que representa um prolongamento da repolarização cardíaca, poderá
potenciar estas mortes súbitas verificadas nos doentes RTT. Apesar desta conexão, ainda é desconhecido
se um intervalo QTc prolongado nestas pessoas será um efeito direto da doença no coração ou um efeito
secundário das manifestações do sistema nervoso.
Dada a raridade e a natureza multissistémica da RTT, a modelação com precisão dos fenótipos
associados a esta doença, assim como o desenvolvimento de terapias para estes doentes, tem provado
ser desafiante. Os modelos animais têm contribuído significativamente para a superação destas
limitações. No entanto, a sua relevância clínica é afetada pelas diferenças entre espécies e a diversidade
de fenótipos entre doentes dificilmente pode ser modelada usando essas estratégias. Mais recentemente,
as características das células estaminais pluripotentes humanas (hPSCs), nomeadamente a sua
capacidade de autorrenovação e o seu potencial para se diferenciarem em qualquer tipo de célula do
corpo humano, têm despertado um entusiasmo geral para o desenvolvimento de novos modelos de
doenças humanas. De facto, com o aumento do conhecimento sobre este tipo de células, as hPSCs têm
surgido como uma alternativa promissora para o estudo da RTT, através de modelos alternativos que
mimetizam com maior precisão a gravidade e as características da doença. Uma vez que as mutações no
MeCP2 afetam especialmente diferentes estágios de desenvolvimento e função cerebrais,
independentemente do tipo de modelo utilizado, as anormalidades neurológicas têm sido a componente
da doença mais investigada. Por outro lado, muito poucos estudos recapitulam a RTT noutros órgãos
afetados, como o coração. Neste contexto, apenas modelos animais, maioritariamente de murganho, têm
sido utilizados para o estudo da componente cardíaca da RTT até à data.
Desta forma, este projeto teve como objetivo modelar, pela primeira vez, a RTT com modelos
cardíacos 3D derivados de células estaminais pluripotentes induzidas (hiPSCs) específicas de doentes,
assim como identificar alterações derivadas da doença que pudessem contribuir para fornecer novos
alvos para estratégias terapêuticas para a RTT. Para tal, o estudo foi dividido em duas partes principais.
A primeira parte teve como objetivo estudar as alterações derivadas da RTT no processo de
diferenciação cardíaca, após otimização da diferenciação de hiPSCs em cardiomiócitos (CMs) como
agregados 3D, usando tanto linhas celulares mutadas como saudáveis. A segunda parte centrou-se no
estudo de alterações morfológicas dos agregados de CMs derivados de hiPSCs RTT, tendo-se explorado
as diferenças na arquitetura estrutural e composição celular dos agregados 3D de CMs. Para além destes aspetos de organização macroestrutural, foram também estudadas as alterações microestruturais dos
sarcómeros dos CMs.
Em primeiro lugar, demonstrou-se ser possível diferenciar com sucesso hiPSCs RTT e saudáveis
em CMs como agregados 3D. A otimização do processo de diferenciação cardíaca para cada linha
celular foi realizada através da variação de dois parâmetros, nomeadamente do tamanho do agregado no
início da diferenciação e da concentração da molécula de baixo peso molecular CHIR99021, modeladora
da via de sinalização wingless integrated (Wnt). Os resultados obtidos sugerem que esses parâmetros
variam dependentemente da linha celular e não são um parâmetro de distinção entre linhas celulares
RTT e saudáveis. No entanto, foi possível observar alterações derivadas da RTT nesses agregados 3D
de CMs, incluindo diferenças no tamanho e grau de compactação dos agregados, sendo estes maior e
menor, respetivamente, nos agregados RTT.
Em segundo lugar, os agregados 3D de CMs derivados de hiPSCs RTT foram estudados face aos
agregados derivados de hiPSCs saudáveis, tendo-se avaliado a sua morfologia, bem como a estrutura
dos sarcómeros dos CMs. Além de CMs, outros tipos de células cardíacas naturalmente presentes in
vivo no coração humano também foram encontrados em minoria nos agregados diferenciados RTT e
saudáveis, incluindo células endoteliais e uma subpopulação de células progenitoras cardíacas. Tanto a
caracterização das cavidades dos agregados como a dos sarcómeros dos CMs revelou alterações
morfológicas dos agregados RTT comparativamente aos saudáveis. Os nossos resultados evidenciaram
uma percentagem muito maior da área dos agregados RTT ocupada por cavidades, comparativamente
com os controlos, não estando relacionada com o número de cavidades por agregado, parâmetro que foi
semelhante entre as condições. Verificou-se ainda uma variação na proporção de cavidades de acordo
com o seu tamanho entre agregados RTT e saudáveis, com os agregados RTT a apresentarem uma maior
proporção de cavidades de maiores dimensões. Foi possível demonstrar que estas disparidades
encontradas entre as cavidades dos agregados RTT e saudáveis não foram causadas por diferenças na
proliferação dos CMs. Este trabalho sugeriu ainda a existência de um comprometimento estrutural dos
sarcómeros dos CMs RTT, tendo-se verificado uma menor densidade de miofibrilhas, que se
encontravam mais pronunciadas perto do núcleo dos CMs, assim como um comprimento menor dos
sarcómeros, comparativamente com CMs saudáveis.
Futuramente, para além de mais replicados, será também fundamental utilizar linhas celulares
adicionais nas experiências, incluindo linhas hiPSCs derivadas de doentes com mutações associadas à
RTT diferentes, para a validação dos nossos resultados. Além disso, será necessário continuar a análise
das alterações derivadas da RTT nos agregados de CMs, nomeadamente para melhor compreender os
mecanismos associados às alterações morfológicas dos agregados, bem como às anomalias estruturais
dos CMs RTT. O processo de diferenciação cardíaca a partir de hiPSCs RTT e saudáveis deverá ser
caracterizado nomeadamente em termos de níveis de expressão génica dos principais genes envolvidos
quer na diferenciação cardíaca a partir de hPSCs, quer na maturação dos CMs. Relativamente à análise
morfológica das cavidades dos agregados, será interessante avaliar, entre outros, o nível de expressão
de HAND1 em agregados RTT e saudáveis, já que foi sugerido anteriormente a sua necessidade para a
auto-organização estrutural. Adicionalmente, para complementar o estudo da formação das cavidades
dos agregados, deverá ser realizado um ensaio de imunomarcação para o marcador apoptótico
CASPASE, de forma a compreender se a morte celular poderá ser um mecanismo associado à formação
das cavidades. Por outro lado, será relevante avaliar as alterações funcionais nos agregados RTT.
Através de uma análise do transiente de cálcio intracelular, deverão ser estimados parâmetros como a
duração da contração e frequência cardíaca, tanto em condições padrão, como sob exposição a
estimulação elétrica e química.
No entanto, a cultura de CMs por si só pode não permitir observar as anormalidades funcionais
cardíacas já descritas em humanos. Assim sendo, uma vez que os CMs e os neurónios sofrem comaturação durante a inervação do coração na embriogénese, o estudo das interações entre estes tipos celulares é essencial, principalmente na modelação de doenças multissistémicas como esta. Por este
motivo, numa outra fase, seria interessante co-cultivar CMs e neurónios do sistema nervoso autónomo,
ambos derivados de hiPSCs. Esta abordagem permitiria captar potenciais alterações funcionais dos CMs
RTT promovidas pelos neurónios RTT e desvendar informações sobre uma potencial interferência
anormal entre essas duas populações celulares que, até à data, permanecem desconhecidas.
Adicionalmente, seria também relevante recriar a heterogeneidade de células cardíacas presentes no
coração humano, através da geração quer de um microtecido cardíaco, quer de um organoide. Para além
de possivelmente possibilitarem o estudo da maturação celular e da função geral dos CMs em
comparação com o modelo saudável mais simples, permitiriam compreender se as principais etapas que
ocorrem durante o processo de desenvolvimento cardíaco na embriogénese, a forma como as diferentes
populações celulares são especificadas e a função dos CMs são ou não afetadas pela RTT.
Posteriormente, estes modelos poderiam ser ainda co-cultivados com neurónios, estabelecendo um
modelo neuro-cardíaco 3D complexo para o estudo desta doença.Rett syndrome (RTT) is a severe neurodevelopmental disorder caused by MeCP2 mutations,
resulting mainly in impaired brain development and function, but also in a myriad of non-neurological
problems, including cardiac abnormalities. Given the RTT multifaceted nature, it has been challenging
to accurately model the associated phenotypes and to develop therapies. RTT models mostly focus on
the neurological abnormalities, with few mimicking the cardiac problems. To date, only animal models
have been used to study the disease in the heart, but these do not faithfully mimic the phenotypic aspects
found in patients. Therefore, we developed, to the best of our knowledge, the first 3D cardiac model of
RTT derived from patient-specific human induced pluripotent stem cells (hiPSCs).
RTT and healthy hiPSCs were successfully differentiated into cardiomyocytes (CMs) as 3D
aggregates. However, RTT-derived alterations in these CM aggregates were verified, including
differences in their size and compaction degree, being higher and lower in the RTT aggregates,
respectively. Moreover, the characterization of the aggregate cavities and CM sarcomeres revealed
differences between conditions. A higher percentage of the RTT aggregate area was occupied by
cavities, which was unrelated to the number of cavities/aggregate, and the cavities presented a variable
size. This disparity between conditions was not driven by CM proliferation differences. Furthermore,
RTT CMs presented sarcomere structural impairment, with a lower density of myofibril, the presence
of which was more pronounced near the CM nucleus, and a shorter sarcomere length.
Subsequently, the analysis of RTT-derived changes to the CM aggregates will be continued, namely
to elucidate the mechanisms associated to the morphological alterations of the aggregates, and the
structural abnormalities of RTT CMs. Moreover, it will be fundamental to study potential RTT-derived
CM functional alterations. Additionally, co-culturing CMs with neurons, and recreating the
heterogeneity of cardiac cells present in the human heart with a cardiac microtissue and organoid, would
be crucial
Unravelling the factors that influence the ability of antiviral peptideporphyrin conjugates to translocate the blood-brain barrier
No full textTese de Mestrado, Biologia Molecular e Genética, 2023, Universidade de Lisboa, Faculdade de CiênciasOs vírus Zika (ZIKV) e dengue (DENV) têm o potencial para criar eventos epidémicos e
pandémicos. A sua principal forma de transmissão é a picada de mosquitos do género Aedes que estejam
infetados com os vírus. Os mosquitos Aedes já estão presentes em todos os continentes e o seu território
está a expandir-se devido às alterações climáticas. O ZIKV e o DENV são uma ameaça à saúde pública
global porque os mosquitos infetados têm a capacidade de gerar rapidamente surtos de doença e porque
estes vírus causam elevada morbilidade e mortalidade em fetos, crianças, grávidas, adultos e idosos.
O ZIKV e o DENV são vírus neurotrópicos, que têm a capacidade de atravessar a barreira
hematoencefálica (BHE), atacar o sistema nervoso central (SNC) e causar doenças neurológicas. Tanto
o ZIKV como o DENV podem causar síndrome de Guillain-Barré, encefalite e inflamação da medula
espinhal em adultos. Em mulheres grávidas, o ZIKV e o DENV são capazes de atravessar a barreira
hematoplacentária (BHP) e ser transmitidos verticalmente para o feto. No feto, o ZIKV pode causar
malformações congénitas, restrições de crescimento e microcefalia, enquanto que a infeção por DENV
durante a gravidez pode causar hemorragias e morte materna e fetal.
Atualmente, não existem vacinas licenciadas contra a doença causada por ZIKV e as duas vacinas
licenciadas contra a doença causada por DENV, a Dengvaxia e a Qdenga, não asseguram uma proteção
completa contra o vírus. Além disso, não existem antivirais licenciados, nem em ensaios clínicos, contra
ZIKV e não existem antivirais licenciados contra DENV, existindo apenas um antiviral em ensaios
clínicos de fase II contra o DENV, o JNJ-64281802 da Janssen.
Um dos principais desafios no desenvolvimento de antivirais contra ZIKV e/ou DENV é o facto de
estas moléculas terem de ser capazes de atravessar a BHE e/ou a BHP e combater infeções no SNC e/ou
no feto. Antes do início deste estudo, no laboratório onde o trabalho foi desenvolvido, foram concebidas
várias moléculas inovadoras com o propósito de atuarem como antivirais contra o ZIKV e o DENV no
SNC e/ou no feto. Estas moléculas baseiam-se na conjugação de uma porfirina com atividade antiviral
conhecida, a um pequeno péptido, com capacidade para translocar a BHE, sendo denominadas
conjugados de péptido-porfirina (CPP(s)). Foram escolhidas as moléculas de protoporfirina IX (PP) ou
mesoporfirina IX (MP) e uma sequência peptídica de entre quatro sequências peptídicas, P1, P3, P4 e
P5, que têm entre 7 e 10 resíduos de aminoácidos. Duas sequências peptídicas, P1 e P3 têm a capacidade
de atuar como transportadores de moléculas em modelos celulares in vitro da BHE e provêm da proteína
da cápside do vírus do dengue com serótipo 2. As outras duas sequências peptídicas, P4 e P5 são
derivadas da sequência P3.
Após a sua conceptualização, vários CPPs foram sintetizados e testados em relação à sua atividade
antiviral, citotoxicidade e capacidade de translocar um modelo celular da BHE e/ou da BHP. Sete CPPs
(PP-P1, PP-P3, P4-PP, P4-MP, P4-L-MP, MP-L-L-P3 e MP-P5) demonstraram ter atividade antiviral
contra pelo menos dois de um painel de quatro vírus com invólucro lipídico (ZIKV, DENV, vírus da
síndrome respiratória aguda grave coronavírus 2 e vírus da imunodeficiência humana), possuir baixa
citotoxicidade em linhas celulares endoteliais, neuronais, sanguíneas e placentárias, e ser capazes de
translocar modelos celulares in vitro da BHE e em alguns CPPs, também da BHP. Assim, o objetivo
principal deste estudo foi investigar, para os sete CPPs, a influência de vários fatores, como a sua
concentração, o tempo de incubação e a presença de proteínas do soro, na capacidade destes conjugados
de translocar modelos celulares humanos in vitro da BHE e da BHP.
Inicialmente, realizaram-se ensaios de translocação dos CPPs em modelos celulares humanos in
vitro da BHE, com um tempo de incubação de 24 horas, para estudar a influência da concentração dos
conjugados na sua capacidade de translocação e efeito na integridade da barreira. Os resultados
mostraram que a maioria dos CPPs translocam eficientemente um modelo celular humano in vitro da
BHE e simultaneamente causam menos dano à integridade da barreira a 10 μM. Seguidamente, realizaram-se ensaios para testar a influência do tempo de incubação na capacidade
de translocação dos conjugados. Os resultados mostraram que todos os CPPs atingem a capacidade
máxima de translocação do modelo in vitro da BHE com 24 horas de incubação. Posteriormente,
realizaram-se ensaios de translocação dos CPPs para estudar a influência da presença das proteínas do
soro na sua translocação. Os resultados mostraram que num modelo celular humano in vitro da BHE, na
presença de meio de cultura sem suplementação com soro fetal bovino (SFB), os CPPs P4-PP, P4-MP,
P4-L-MP, MP-L-L-P3 e MP-P5 têm uma menor percentagem de translocação e o PP-P1 e o PP-P3 têm
a mesma percentagem de translocação, quando comparados com os resultados obtidos na presença de
meio de cultura suplementado com SFB.
O soro tem na sua constituição albumina, uma proteína que se associa a fármacos e que ostransporta
no sistema circulatório até atingir o tecido alvo. A associação da albumina a porfirinas é conhecida e
uma vez que os resultados obtidos mostraram que a presença de SFB influencia a capacidade de
translocação dos CPPs, foram realizados estudos utilizando espectroscopia de fluorescência para
determinar se os CPPs se poderiam associar à albumina de soro bovina (ASB). Os resultados mostraram
que todos os CPPs se associam à ASB, sendo que o PP-P3 é o CPP com a menor constante de associação
à ASB, o que pode ocorrer devido à formação de agregados de PP-P3 de maiores dimensões na presença
de ASB do que na sua ausência. Subsequentemente, realizaram-se estudos utilizando a técnica de
dispersão dinâmica de luz para determinar a gama de tamanhos dos agregados de CPPs que se formam
em solução e se a presença de ASB influência o tamanho dos agregados dos CPPs. Os sete CPPs formam
agregados: o PP-P1 forma os agregados de maiores dimensões, com cerca de 1000 nm de diâmetro,
seguido pelos PP-P3, P4-PP e pelo P4-MP que formam agregados com dimensões com cerca de 700 nm
de diâmetro, pelo P4-L-MP e pelo MP-L-L-P3, que formam agregados com dimensões de cerca de 300
nm de diâmetro, e pelo MP-P5, que forma agregados com dimensões de cerca de 200 nm de diâmetro.
Na presença de ASB, em comparação com a gama de tamanhos dos agregados de CPPs que se formam
em solução na ausência de ASB, os CPPs PP-P1, P4-PP, P4-MP, P4-L-MP e MP-P5 formam agregados
de menores dimensões, enquanto o PP-P3 forma agregados de maiores dimensões e o MP-L-L-P3 forma
agregados com aproximadamente as mesmas dimensões.
A associação dos CPPs com a ASB e a diminuição do tamanho dos agregados em solução na
presença de ASB, que ocorre com alguns CPPs, são indicadores de que no sistema circulatório de um
organismo, os CPPs podem vir a ser transportados por albumina até à BHE e que, portanto, os CPPs
sejam capazes de translocar eficientemente as células endoteliais e chegar ao SNC. O PP-P3 é o CPP
menos promissor porque apesar de ter uma capacidade de translocação do modelo in vitro da BHE mais
elevada do que outros CPPs, é o CPP que forma os agregados de maiores dimensões na presença de
ASB. Os CPPs P4-PP, P4-MP, P4-L-MP e PP-P1 são promissores porque na presença de ASB formam
agregados de menores dimensões. O MP-L-L-P3 é também promissor porque não ocorre alteração do
tamanho dos agregados na presença de ASB. Contudo, o CPP mais promissor é o MP-P5, uma vez que
obteve os melhores resultados em todas as propriedades avaliadas. O MP-P5 é o CPP com a maior
percentagem de translocação da BHE a 10 μM, é o CPP mais rápido a translocar as células endoteliais,
é o CPP que tem a maior constante de associação à ASB, e é o CPP que forma os agregados de menores
dimensões em solução, que também diminuem de tamanho na presença de ASB.Zika virus (ZIKV) and dengue virus (DENV) can cross the blood-brain barrier (BBB) and attack
the central nervous system (CNS) causing neurological diseases. In pregnant women, they can cross the
blood-placenta barrier (BPB) and elicit maternal and foetal diseases.
To this day, there are no completely efficacious vaccines or licensed antivirals against ZIKV and/or
DENV. A main challenge in antiviral development is the creation of drugs that can cross the BBB and/or
the BPB, and fight infections in the CNS and/or in the foetus. To tackle this problem, prior to this study,
novel molecules named peptide-porphyrin conjugates (PPC(s)) were designed. PPCs are formed by
conjugating a porphyrin with antiviral activity to a peptide with BBB drug shuttle properties.
Seven PPCs (PP-P1, PP-P3, P4-PP, P4-MP, P4-L-MP, MP-L-L-P3 and MP-P5) showed potential
for their antiviral and translocation properties. Hence, the aim of this work is to unravel the influence of
factors such as concentration, time, and the presence of serum proteins on the seven PPCs translocation
of human in vitro cellular models of the BBB and/or the BPB. Additionally, the PPCs association with
bovine serum albumin (BSA), and the size of PPC aggregates in the presence and absence of BSA were
assessed.
The results showed that the seven PPCs efficiently translocate an in vitro BBB model and cause the
lowest damage to the integrity of the barrier at 10 μM, also, they reach the maximal percentage of
translocation after an incubation of 24 hours with cells. The translocation in medium without serum of
MP-P5, P4-PP, P4-MP, P4-L-MP, and MP-L-L-P3 is decreased, and of PP-P1, and PP-P3 is unchanged.
The seven PPCs bind to BSA, and form aggregates in solution in the absence of BSA. The presence of
BSA affects the size of the aggregates of all the PPCs, except for MP-L-L-P3
Tibetan buddhism, psychedelics and altered states of consciousness : comparing the Bardo Thodol to the typical dmt “trip” and near-death experience
No full textIn this dissertation the typical experience provided by the psychedelic compound N,N-dimethyltryptamine (or DMT, which is believed to be released in the organism at the moment of death) and the psychological phenomena of near-death experiences (NDE) will be compared to altered states of consciousness described in Tibetan Buddhist literature, more specifically, in the Bardo Thodol, a Tibetan manual for death and dying written by eighth-century Buddhist master Padmasambhava, popularly known in the West as The Tibetan Book of the Dead.
Besides the general theme of death, there is an abundancy of elements shared between the death and after-death descriptions in the Bardo Thodol, the typical DMT psychedelic “trip,” and near-death experiences, such as, among others, experiences of ego-dissolution and non-dual states of consciousness, and encounters with autonomous and intelligent entities.
My argument is that Padmasambhava’s text is describing the same psychological phenomenon that DMT and NDEs ultimately provide.Nesta dissertação a experiência típica causada pela substância N,N-dimetiltriptamina (ou DMT, que se acredita ser libertada no organismo no momento da morte) e o fenómeno psicológico das experiências de quase-morte serão comparados a estados alterado de consciência descritos na literatura do budismo tibetano, mais especificamente, no Bardo Thodol (“O Livro Tibetano dos Mortos”), um manual tibetano para a morte e o seu processo atribuído a Padmasambhava, um mestre budista do século XVIII.
Para além do tema geral da morte, há uma abundância de elementos partilhados entre as descrições do Bardo Thodol acerca da morte e da pós-morte, a típica “trip” de DMT, e as experiências de quase-morte, tais como, entre outras, experiências de dissolução do ego e estados de consciência não-dualistas, e o encontro e comunicação com entidades autónomas e inteligentes.
O meu argumento é que o texto de Padmasambhava está a descrever o mesmo fenómeno psicológico que a DMT e as experiências de quase-morte causam
Esofagite eosinofílica : avaliação da qualidade de vida em idade pediátrica
No full textTrabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2023Introdução: A Esofagite Eosinofílica (EEo) é uma entidade com incidência cres-cente na população pediátrica. A sua natureza crónica, carácter recidivante, terapêutica e monitorização condicionam um elevado impacto na qualidade de vida, pelo que a ava-liação é essencial.
Objetivos: Avaliação da qualidade de vida em doentes pediátricos com EEo em seguimento num centro terciário nos últimos 5 anos.
Metodologia: Estudo observacional transversal. Análise de dados clínicos, endoscó-picos e histológicos. Aplicação do Questionário de Qualidade de Vida Pediátrica – PedsQL™4.0 para Crianças (8-12 anos) e Adolescentes (13-18 anos), aos próprios doen-tes. Análise descritiva e bivariada, considerando-se diferença estatisticamente significa-tiva se p-value <0,05.
Resultados: Incluídos 65 doentes, 84,6% do sexo masculino, mediana de idade atual 15,2 anos (mínimo 5,0; máximo 18,2), mediana de idade ao diagnóstico 10,4 anos (mí-nimo 0,6; máximo 17,3), mediana de tempo de doença 4,1 anos (mínimo 0,3, máximo 13,8). 82% apresentavam antecedentes atópicos, sendo a rinite alérgica o mais fre-quente (61,5%). Os sintomas mais comuns na apresentação foram o impacto alimentar (66,2%) e a disfagia (64,6%). Os achados endoscópicos mais frequentes foram as estrias longitudinais (86,2%). Todos os doentes apresentaram infiltrado eosinofílico na avalia-ção histológica. Durante o seguimento 61,5% utilizaram corticóide deglutido, 40% inibi-dor da bomba de protões e 23,1% dieta de eliminação. Dos 65 doentes, 49 (75,4%) res-ponderam ao PedsQL™4.0: média de funcionamento físico 85,40 (SD±18,52); psicológico 71,12 (SD±21,72); social 85,31 (SD±14,76); escolar 67,86 (SD±21,95); psicossocial 74,76 (SD±17,47); score total 78,46 (SD±16,34). De acordo o cut-off determinado, 16,3% en-contravam-se em risco para o funcionamento físico (66,9), 12,2% para o psicossocial (49,4) e 16,3% para o score total (62,1). Não foi encontrada nenhuma associação com significado estatístico entre os dados clínicos, endoscópicos e histológicos e a qualidade de vida.Conclusão: Os domínios total e específicos estão preservados nos doentes estuda-dos, o que corrobora a evidência reportada em estudos prévios. A presença de doentes em risco em certos domínios reforça a importância de uma abordagem biopsicossocial na gestão destes doentes.Introduction: Eosinophilic Esophagitis (EoE) is a condition with an increasing in-cidence in the pediatric population. Its chronic nature, recurrent character, therapeutic interventions and monitoring have a significant impact on the quality of life, making its assessment essential.
Objectives: To assess the quality of life in pediatric patients with EoE followed at a terciary center in the past 5 years.
Methods: Cross-sectional observational study. Analysis of clinical, endoscopic, and histological data. Application of the Pediatric Quality of Life Inventory™ (Ped-sQL™4.0) questionnaire for Children (8-12 years) and Adolescents (13-18 years) to the patients. Descriptive and bivariate analysis, considering p-value <0.05 as statistically sig-nificant.
Results: A total of 65 patients were included, 84.6% male, with a median current age of 15.2 years (range 5 to 18), median age at diagnosis of 10.4 years (range 0.6 to 17.3), and median disease duration of 4.1 years (range 0.3 to 13.8). 82% had an atopic background, with allergic rhinitis being the most common (61.5%). The most common presenting symptoms were food impaction (66.2%) and dysphagia (64.6%). The most frequent endoscopic findings were longitudinal furrows (86.2%). All patients had eosin-ophilic infiltration on histological evaluation. During follow-up, 61.5% used swallowed corticosteroids, 40% proton pump inhibitors, and 23.1% elimination diet. Out of the 65 patients, 49 (75.4%) responded to the PedsQL™4.0: the mean physical functioning score was 85.40 (SD±18.52); psychological 71.12 (SD±21.72); social functioning 85.31 (SD±14.76); school 67.86 (SD±21.95); psychosocial 74.76 (SD±17.47); total score 78.46 (SD±16.34). According to the determined cut-off, 16.3% were at risk for physical func-tioning (66.9), 12.2% for psychosocial functioning (49.4) and 16.3% for the total score (62.1). No statistically significant associations were found between clinical, endoscopic, and histological data and the quality of life.
Conclusions: The total and specific domains are well preserved in the studied patients, which is consistent with previous studies’ findings. The presence of patients at risk in certain domains reinforces the importance of a biopsychosocial approach in the management of these patients
Exercício físico pré-mórbido e declínio da função respiratória em Esclerose Lateral Amiotrófica
No full textTrabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2023Introdução: A Esclerose Lateral Amiotrófica (ELA) é uma doença neurodegenerativa rapidamente progressiva conduzindo à morte (por falência respiratória) em cerca de 2 a 5 anos após os primeiros sintomas, que afeta tanto o sistema motor (causando paresia, fadiga e atrofia muscular), como o sistema extramotor (por exemplo, defeito cognitivo), tendo subjacente múltiplos mecanismos fisiopatológicos e diferentes fenótipos clínicos. Apesar da sua etiologia ser ainda, em parte, desconhecida, vários estudos têm suportado uma relação entre a prática de exercício físico intenso e o risco da doença, em particular em doentes mais jovens, provavelmente por interação com predisposição genética. Objetivo: O objetivo primário é investigar a relação entre a prática de exercício físico intenso, pré-mórbido, e o declínio respiratório na ELA. Metodologia: Efetuou-se um estudo retrosprospetivo, utilizando dados colhidos de forma padronizada numa coorte de 307 doentes com diagnóstico de ELA, acompanhados no CHULN, do sexo masculino e maiores de 18 anos. Realizou-se uma análise preliminar comparativa entre os grupos com e sem história de exercício físico intenso. Posteriormente, a relação entre o exercício intenso e a redução da Capacidade Vital Forçada (CVF) e de outros testes respiratórios foi explorada com um modelo de regressão múltipla, tendo como outras variáveis independentes a idade, a região de início de sintomas e o declínio do ALSFRS-R. Resultados: O presente estudo permitiu tirar três conclusões: a prática de exercício físico intenso não é preditor do declínio da CVF ou de outros testes respiratórios; confirmou a relação entre a idade de início dos primeiros sintomas e a prática de exercício físico intenso; e a idade de início dos primeiros sintomas é preditora do declínio da CVF, sendo que, quanto mais tarde surgirem os primeiros sintomas, maior o declínio da CVF.Introduction: Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS) is a rapidly progressive neurodegenerative disease, causing death 2-5 years after first symptoms, in general, and affecting both the motor system (paresis, atrophy and fatigue) and the extramotor system (like as cognition), resulting from multiple pathophysiological mechanisms and associated with different clinical phenotypes. Although its etiology is still incompletely known, several studies have confirmed a relationship between the practice of intense physical exercise and the risk of ALS, in particular in younger patients, which can be related to specific genetic predisposing. Objective: The main aim is to investigate the association between a previous history of intense exercise ad the respiratory decline rate. Methodology: This study follows a retrospective design, analyzing data from 307 ALS man, older than 18 years, cared in our ALS Unit (CHULN), and prospectively evaluated by applying a standardized questionnaire. A multiple regression analysis was used to evaluate the role of the previous intense exercise as a predictor of the forced vital capacity decline (FVC) and other respiratory tests decay, including age, region of onset and ALSFRS-R decline rate as other independent variables. Results: The present study allowed drawing three conclusions: the practice of pre morbid intense physical exercise is not a predictor of the respiratory tests decline; intense physical exercise was associated younger age of disease-onset; age of onset is a predictor of FVC decay rate, later disease onset is associated with a greater FVC decline
O sócio dominante no direito societário moçambicano
No full textA figura do sócio dominante no direito societário moçambicano é definida e regulada, expressamente, no artigo 125 do CCM, que estabelece o regime de responsabilidade daquele decorrente do exercício ilícito (e abusivo) do poder de domínio prejudicial à sociedade ou outros sócios.
Os objetivos por nós visados são dois. Contribuir para a doutrina societária moçambicana, no geral, e em especial, para o esclarecimento do regime jurídico de responsabilidade do sócio dominante e, em consequência, ajudar para a resolução de questões que possam ser suscitadas em torno da figura e da responsabilidade do sócio dominante.
Recai a nossa análise aprofundada sobre a norma específica aplicável à responsabilidade do sócio dominante, bem como às regras gerais, do direito comercial comum, aplicáveis à responsabilidade do sócio.
O artigo 125 é a principal base legal da responsabilidade do sócio dominante por violação dos deveres impostos ao sócio, de lealdade, e do princípio de igualdade de tratamento a todos sócios, mas também por violação do interesse da sociedade (e indiretamente, dos credores sociais) ou de outros sócios, de que resultem prejuízos a estes A responsabilidade civil do sócio dominante no direito societário moçambicano assenta em dois pilares: no artigo 125 pelo exercício ilícito do poder de domínio, em culpa in eligendo e culpa in instruendo; no artigo 87 pela utilização e instrumentalização da personalidade jurídica da sociedade.The concept of dominant business partner in mozanbican corporate law is explicitly defined and regulated by article 125 of CCM, which establishes the liability regime arising from the ilicit and abusive use of power that can be harmful to the corporation itself or its other partners.
We envision two main goals: to contribute to the mozanbican corporate doctrine, particularly for clarification of the dominant business partner's legal regime and consequently, to help resolving issues that may raise from the concept and liability of the dominant partner.
Our detailed analysis is based on the specific rule applicable to the dominant business partner's liability, as well as general rules of common commercial law applicable to the partner's liability.
Article 125 is the main legal basis of the dominant business partner's liability for violation of duties imposed on every partner (loyalty and principle of equal treatment for all partners), but also for violation of the corporation's interests (and indirectly of social creditors) and other partners, that may result in damage to them.
In mozanbican corporate law, the dominant business partner’s civil liability rests on two main cornerstones: article 125 for illicit practice of the domain power - culpa in eligendo and culpa in insttruendo; and article 87 for use and instrumentalization of the company's legal personality