Repositório Científico de Acesso Aberto da ULisboa
Not a member yet
95032 research outputs found
Sort by
Insights into AAV promoter activity and helper virus components interactions
No full textTese de mestrado, Biologia Molecular e Genética , 2023, Universidade de Lisboa, Faculdade de CiênciasGene therapies using viral vectors expanded in the last two decades, being Adeno-associated virus
(AAV)-based methods one of the most used with six clinical products approved. Accordingly, the efforts
are now focused on the improvement of recombinant AAV (rAAV) production based on stable producer
cell lines, devoid of replication-competent virus.
Several studies have been focusing on the mechanisms of transactivation of AAV promoters by viral
Rep proteins. However, the ability of each promoter to mediate independent ectopic gene expression in
mammalian cells is not so well known. In this study, we assessed the activity and strength of each AAV
promoter and compared it with other viral and cellular promoters by transient transfection, in HEK 293,
A549 and Vero cells. Additionally, the impact of AdV helper components of serotype 2 (E2A, E4 and
VA RNA) in promoter activity was also evaluated. We showed that AAV promoters were active in all
tested cell lines, being p5 the strongest. Moreover, in 293 cells, the presence of AdV helper components
enhanced AAV promoter activity as well as that of other studied promoters. In Vero and A549 cells,
this effect was less pronounced and, in some cases, absent.
This work also focuses on the manipulation of AdV helper components, namely the E2A and E4, to
evaluate their contribution during rAAV production. Using a pHelper plasmid as backbone containing
the full AdV2 genes E2A, E4 and VA RNAs, we generated eight plasmids with different combinations
of these genes. The impact of each construct in the productivity of serotype 5, 8 and 9 was evaluated by
transient transfection and compared relative to control (pHelper). Through this approach, we identified
which minimal components of the E2A and E4 significantly impacted the overall rAAV productivity
and the quality of produced virus
Characterization of rare CFTR mutations
No full textTese de Mestrado, Biologia Molecular e Genética, 2024, Universidade de Lisboa, Faculdade de CiênciasA Fibrose Quística (FQ) é a doença autossómica recessiva mais comum entre a população Caucasiana.
Esta doença resulta de mutações no gene Cystic Fibrosis Transmembrane Conduntance Regulator
(CFTR), que funciona como um canal regulado pelo cAMP e pelo ATP responsável pelo transporte de
cloreto (Cl−
) na superfície apical das células epiteliais das vias respiratórias, rins, intestino, glândulas
sudoríparas, pâncreas e trato reprodutor masculino. Adicionalmente uma das funções da CFTR é a
secreção de bicarbonato (HCO−
3), que regula o pH do líquido que reveste as vias respiratórias (airway
surface liquid - ASL) e a inibição de canais de sódio (Na+
) epitelial (ENaC), tendo um papel importante
da hidratação destas vias e na limpeza mucociliar.
O gene que dá origem à proteína CFTR está localizado no cromossoma 7 e é constituído por 27 exões.
A proteína é sintetizada por ribossomas associados ao retículo endoplasmático (RE) e é glicosilada cotraducionalmente, produzindo uma forma imatura. Ao longo do tráfego através do Complexo de Golgi,
os resíduos glicídicos associados à proteína CFTR são processados gerando uma forma madura que é
transportada por vesiculas de secreção até à membrana apical das células epiteliais onde a proteína é
ancorada ao citoesqueleto de actina, o que contribui para a sua estabilidade membranar e funcional como
canal de Cl−
/HCO3
−
.
A CFTR é um membro da família dos transportadores ABC (ATP binding cassette) composta por cinco
domínios distintos: dois domínios transmembranares (MSDS1 e MSD2), que formam o poro do canal;
dois domínios de ligação ao ATP (NBD1 e NBD2), e um domínio regulador (R), que contém vários
locais de fosforilação, permitindo a abertura e fecho do canal. O folding, tráfego e função da CFTR
dependem das interações entre os vários domínios.
Desde a sua clonagem em 1989 foram registadas mais de 2,100 variantes no gene CFTR na Cystic
Fibrosis Mutation Database (CFMD) sendo a mais comum a deleção de três nucleótidos que leva à
deleção do resíduo de fenilalanina na posição 508 (F508del) com uma prevalência de cerca de 80% nos
pacientes que sofrem desta doença. Esta mutação leva a um defeito no tráfego e na função devido à
formação (folding) incorreta da proteína. Dado o elevado número de variantes descritas no gene CFTR
é utilizada uma categorização com base no respetivo defeito causado ao nível da proteína sendo
numeradas de I-VII: nas variantes de Classe I não há produção de proteína, sendo normalmente mutações
nonsense, nas quais a existência de um codão stop prematuro leva à degradação do mRNA por nonsensemediated decay (NMD); as de Classe II levam ao folding e processamento incorreto da CFTR, ficando
a proteína retida no reticulo endoplasmático (RE) e posteriormente degradada pelo sistema ubiquitinaproteassoma; as de Classe III impedem o funcionamento correto do canal, sendo maioritariamente
mutações localizadas nos NBDs; as de Classe IV levam a uma baixa condutância, localizando-se
maioritariamente nos MSD1 e MSD2; as de Classe V resultam na diminuição dos níveis de CFTR devido
a anomalias no promotor e no splicing; nas de Classe VI a proteína é pouco estável na membrana apical
da membrana plasmática; e por fim, as variantes de classe VII levam a que não haja produção de mRNA
CFTR (p.ex. grandes deleções), sendo muito difícil a sua correção com fármacos atuais. Devido à
complexidade da estrutura da proteína CFTR, uma variante pode ser inserida em mais que uma classe -
é o caso da F508del que possui defeitos que tanto a classificam como uma mutação de classe II, a
proteína mutada é degradada no reticulo endoplasmático, e de classes III e VI uma vez atingindo a
membrana apical tem um tempo de abertura e uma estabilidade reduzidos.
Nos últimos anos, foram identificados novos fármacos com a capacidade de modificar a expressão,
função e estabilidade da proteína CFTR, denominados como corretores e potenciadores – estes compostos atuam na conformação da estrutura que permitem o melhoramento da sua função. De entre
as cerca de 2100 variantes descritas no gene CFTR a maioria destas são raras o que dificulta o acesso a
materiais para uma melhor caracterização dos efeitos da variante como também testar os fármacos já
existentes (e aprovados) para mutações mais comuns. Esta caraterização é imperativa a fim de se poder
fazer a validação de compostos que levem à correção especifica de cada mutação.
Para o estudo de variações menos comuns é necessário o uso de modelos celulares que consigam
reproduzir o fenótipo epitelial em que estas alterações se encontram, nomeadamente linhas celulares
provenientes do tecido pulmonar ou bronquial com a capacidade de polarizar e formar tight junctions
entre si. Entre os modelos biológicos utilizados para investigação clínica e académica é recorrente o uso
de modelos imortalizados, culturas primárias de células epiteliais e organóides (células estaminais
primárias presentes nas criptas do epitélio retal) consoante a relevância fisiológica requerida.
A necessidade de criação de linhas celulares estáveis é um primeiro passo para entender como a proteína
CFTR com variantes raras responde a determinado fármaco. Além disso, uma vez que a maioria das
variantes se encontra em heterozigotia com outras mutações, tal dificulta a avaliação do efeito individual
de uma variante em indivíduos que sejam heterozigóticos. Por outro lado, estudos in vitro de variantes
ainda não estudadas funcionam como base para uma melhor compreensão dos efeitos celulares e
moleculares quando não é possível ter acesso a materiais primários derivados dos indivíduos com o
genótipo em estudo.
Este trabalho teve como principal objetivo a caracterização de variantes raras no gene CFTR -
nomeadamente as variantes G458A, A559E, Y563D e Y563C. Estas foram estudadas a nível funcional
e molecular, usando novos modelos celulares. Para além disto, testámos se os fármacos já existentes
para mutações comuns são eficazes nestas variantes. Para isto foram levadas a cabo as seguintes tarefas:
(i) Criação de novas linhas celulares (baseadas na linha CFBE) que sobreexpressam de forma
estável cada uma das mutações em estudo;
(ii) Estudo do efeito a nível celular por Western Blot (para avaliar o processamento e expressão
da CFTR com a finalidade de determinar a quantidade de proteína recuperada) e por Câmara
de Ussing (avaliação do transporte transepitelial de Cl- na CFTR, com o uso de células
polarizadas);
(iii) Avaliação do efeito de corretores (já aprovadas para mutações comuns) nestas novas linhas
celulares.
Foi analisado o impacto das variantes no processamento da CFTR (presença ou ausência da forma
matura da proteína) por Western Blot e posteriormente para a variante G458A foi também estudado o
impacto na função da CFTR (determinação de transporte transepitelial em câmara de Ussing). Para as
variantes em estudo foram testados o corretor VX-445 e o corretor VX-661, individualmente ou em
combinação.
Os resultados neste trabalho mostram que:
• As variantes G458A, A559E, Y563D e Y563C levam a um defeito no processamento (banda C
ausente ou bastante reduzida), podendo ser consideradas mutações de classe II.
• O defeito de processamento na mutação G458A é parcialmente corrigido pelo corretor VX-445
e pelo corretor VX-661, individualmente e em combinação.
• O defeito de processamento causado pela mutação A559E, Y563D e Y563C não são corrigidas
pelos corretores VX-445 e VX-661. Em resumo, esta dissertação cumpriu os objetivos propostos e os resultados apresentados possibilitam
a melhor compreensão do efeito de cada mutação e a identificação de compostos que podem levar à sua
correção.
Uma vez que se continuam a identificar novas variantes (raras) no gene CFTR, a sua própria
caracterização é essencial para permitir uma abordagem de medicina personalizada que possibilite o
acesso aos novos moduladores, e consequentemente a melhoria da qualidade de vida, a indivíduos com
FQ e genótipos raros.Cystic Fibrosis (CF) is the most common genetic life-shortening autosomal recessive disease, among
Caucasians. It is caused by mutations in the gene encoding the CF transmembrane conductance regulator
(CFTR) protein. CFTR functions as a chloride channel at the apical membrane of epithelial cells and
has an important role in airway hydration and effective mucociliary clearance. Clinically, CF manifests
mainly as a respiratory disease; with patients having compromised longevity and quality of life.
Nowadays, more than 2100 variants in the CFTR gene have been described, with F508del being the
most common mutation accounting for approximately 70% of CF alleles. A large spectrum of additional
variants, most of which with rare prevalence, accounts for the remaining CF cases. CFTR mutations
were categorized into seven different classes according to the molecular defect they cause – e.g.
impairment of CFTR production, processing, function, or stability at the apical membrane. A recent
breakthrough in the field happened with the approval of CFTR modulators, small molecules able to act
on mutant CFTR protein, correcting its respective molecular defect. However, these drugs do not apply
yet to all CF patients, especially because many harbor rare variants for which proper characterization is
still missing. The main goal of the present work was to better characterize four novel rare variants
(G458A, A559E, Y563D and Y563C), identifying the defect they cause and the response to the
correctors elexacaftor and tezacaftor. Our results show that the variants G458A, A559E, Y563D, and
Y563C are class II mutations as they impair processing, and that G458A (but not the other variants) can
be partially corrected by elexacaftor and tezacaftor, both individually or in combination. Overall, this
project contributes to the understanding of the defect caused by rare CFTR variants and to assess their
response to CFTR modulator drugs for possible translation into clinical use
The inhibitory potential of selected tyrosine kinase inhibitors on the most active anthracycline carbonyl reducing enzymes
No full textTrabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, 2023, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia.O cancro é um problema de saúde pública crítico, representando o segundo lugar das mortes no mundo. Um dos tratamentos disponíveis para combater o cancro é a quimioterapia. As antraciclinas (ANTs) são um grupo de agentes utilizados em vários protocolos de quimioterapia, desde a sua descoberta. Contudo, existem alguns inconvenientes da utilização, como a resistência aos medicamentos contra o cancro e os efeitos secundários associados. Primeiro, os efeitos secundários estão principalmente relacionados com a cardiotoxicidade causada pelas doses cumulativas de ANTs. Segundo, uma das principais causas da resistência às ANTs é um grupo de enzimas chamadas enzimas redutoras do carbonilo (CREs). Estas enzimas participam no metabolismo de compostos endógenos e exógenos, como as ANTs. De facto, estas enzimas são responsáveis pela redução das ANTs aos seus metabolitos menos ativos. Isto compromete as propriedades das ANTs e conduz à resistência aos medicamentos contra o cancro. Uma vez que as CREs estão sobre-expressas em vários tipos de cancro, uma forma de reduzir o fenómeno de resistência a fármacos nas células é associar inibidores destas enzimas a protocolos de quimioterapia. Neste trabalho, o principal objetivo foi investigar in vitro as interações dos inibidores de tirosinacinase (TKIs) selecionados nas enzimas redutoras do carbonilo das ANTs. A daunorubicina (DAUN) foi a ANT escolhida. As CREs utilizadas foram AKR1A1, 1B1, B10 e 1C3 da superfamília das aldo-ceto redutases (AKR) e CBR1 da superfamília das desidrogenases/reductases de cadeia curta (SDR). Ceritinib (CER), TKI, demonstrou o efeito inibitório mais potente sobre a AKR1C3, com uma concentração inibitória média (IC50) de 6,021 μM. A constante de inibição (Ki) foi determinada, e o resultado obtido foi entre 1,76 e 2,49 μM. Além disso, o CER apresenta um tipo misto com uma inclinação para não competitiva com um alfa entre 2,36 e 6,31. São necessárias mais experiências in vivo para apoiar os resultados obtidos nas nossas experiências in vitro. Em conclusão, os nossos resultados mostram uma inibição promissora mediada pelas CER nas redutases do carbonilo das ANTs, sugerindo uma potencial forma de melhorar a eficácia terapêutica e a segurança dos protocolos de quimioterapia, especialmente da DAUN, impedindo o seu metabolismo pela AKR1C3.Cancer is a critical public health issue, which represents the second place of
deaths in the world. One of the treatments available to fight against cancer is using
chemotherapy. Anthracyclines (ANTs) are a group of agents used in several
chemotherapy protocols since their discovery. However, there are some drawbacks to
their use, as well as cancer drug resistance and their associated side effects. Firstly,
the side effects are mainly related to cardiotoxicity caused by cumulative doses of
ANTs. Secondly, one of the leading causes of ANTs resistance is a group of enzymes
called carbonyl reducing enzymes (CREs). These enzymes participate in the
metabolism of endogenous and exogenous compounds, such as ANTs. Indeed, these
enzymes are responsible for the reduction of ANTs to their less active metabolites.
This compromises the ANTs’ proprieties and leads to cancer drug resistance. Once
CREs are overexpressed in several types of cancer, one way to reduce the
phenomenon of drug resistance in cells is to associate inhibitors of these enzymes with
chemotherapy protocols. In this work, the principal aim was to investigate in vitro the
interactions of selected tyrosine kinase inhibitors (TKIs) on ANTs carbonyl reducing
enzymes. Daunorubicin (DAUN) was the chosen ANT. The CREs used were AKR1A1,
1B1, B10, and 1C3 from the aldo-keto reductase (AKR) superfamily, and CBR1 from
the short-chain dehydrogenase/reductase (SDR) superfamily. Ceritinib (CER), a TKI,
demonstrated the most potent inhibitory effect on AKR1C3, with a half-maximal
inhibitory concentration (IC50) of 6.021 μM. The inhibition constant (Ki) was determined,
and the results obtained were between 1.76 and 2.49 μM. Moreover, CER exhibits a
mixed type with an inclination for non-competitive inhibition with an alfa value between
2.36 and 6.31. Further experiments in vivo are needed to support the results obtained
from our in vitro experiments. In conclusion, our results show a promissory CERmediated inhibition on the ANTs carbonyl reductases, which suggests a potential way
to improve the therapeutic efficacy and safety of chemotherapy protocols, especially
of DAUN by preventing its metabolism by AKR1C3
O turismo criativo como fator de desenvolvimento sustentável de territórios de baixa-densidade - O caso de Évora
No full textO turismo criativo tem vindo a destacar-se, em muitas regiões, enquanto produto turístico. É um dinamizador de experiências criativas, sendo muitas delas baseadas nos recursos endógenos, na interação com o anfitrião e na cocriação. É um tipo de turismo que dinamiza os destinos e comunidades e, também, acrescenta valor ao turista. Como tal, o turismo criativo está em crescimento a nível mundial. Por outro lado, os países carecem de encontrar soluções para dinamizar os territórios de Baixa-Densidade. Esse desafio passa sobretudo por tentar estabelecer estratégias com base nos pilares da sustentabilidade e nos Objetivos de Desenvolvimento Sustentável. Nesse seguimento, a presente investigação pretendeu analisar o turismo criativo como fator de desenvolvimento sustentável de territórios de baixa-densidade, com ênfase no caso Évora (NUT III – Alentejo Central). Procurou ainda apresentar contributos que permitam compreender a situação atual da oferta no território em estudo, mas também as oportunidades e as estratégias a seguir, com reforço na sustentabilidade e na promoção. Esta investigação é fundamentada através da revisão bibliográfica e do estudo empírico com a realização de 22 entrevistas a stakeholders e a aplicação de um questionário a 104 promotores de atividades criativas, todos eles com ligação ao Alentejo Central. Através dos resultados é possível verificar que o turismo criativo pode ser relevante para esses territórios, tendo impactos positivos, quer para a comunidade, quer para os turistas. Para tal, é necessário que exista uma estratégia bem estruturada, que vise a comunicação e promoção do Alentejo Central com base nos seus recursos característicos, conferindo assim um sentimento de “autenticidade” e de identidade que o permite diferenciar-se dos demais destinos. Mas também, a manutenção da sua diversidade e singularidade cultural, o que permite que a comunidade se torne sustentável, assim como os produtos e consumos turísticos. O turismo criativo pode ser uma alternativa viável para os territórios de Baixa-Densidade.Creative tourism has been emerging as a prominent tourism product in many regions. It fosters creative experiences, many of which are based on local resources, interaction with hosts, and co-creation. It is a type of tourism that energizes destinations and communities while adding value to the tourist experience. As such, creative tourism is growing worldwide. On the other hand, countries need to find solutions to revitalize low density territories. This challenge primarily involves establishing strategies based on sustainability pillars and the Sustainable Development Goals. In this context, the present research aimed to analyse creative tourism as a factor for sustainable development in low-density territories, with a focus on the case of Évora (NUT III - Central Alentejo). It also sought to provide insights into the current situation of the offering in the studied territory, as well as the opportunities and strategies to be pursued, emphasizing sustainability and promotion. This research is supported by a literature review and an empirical study involving 22 interviews with stakeholders and a questionnaire administered to 104 promoters of creative activities, all of them connected to Central Alentejo. The results demonstrate that creative tourism can be relevant for these territories, with positive impacts on both the community and tourists. However, it requires a well-structured strategy that focuses on communicating and promoting Central Alentejo based on its distinctive resources, thereby creating a sense of "authenticity" and identity that sets it apart from other destinations. Additionally, it is important to maintain its cultural diversity and uniqueness, allowing the community, as well as the tourism products and consumption, to become sustainable. Creative tourism can be a viable alternative for low-density territories
Má-rotação intestinal : a propósito de um caso clínico e revisão da literatura
No full textTrabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2023A má-rotação intestinal representa um espetro de anomalias da rotação e fixação intestinal que ocorrem durante o desenvolvimento embrionário, sendo uma das malformações embrionárias mais comuns do trato gastrointestinal. Apresenta-se tipicamente nos primeiros meses de vida, podendo surgir posteriormente. Pode manifestar-se através de uma grande variedade de sintomas, desde a apresentação aguda por volvo do intestino médio com risco de isquemia e necrose intestinal, até um conjunto de queixas abdominais inespecíficas, aparentemente não relacionadas entre si. O procedimento de Ladd tem sido o procedimento cirúrgico de escolha para o tratamento da má-rotação intestinal. Tal como todos os procedimentos, associa-se a possíveis complicações cirúrgicas, que se podem manifestar mesmo após anos sem sintomas. A complicação cirúrgica mais comum é a obstrução duodenal por bridas/aderências.
Este trabalho tem como principal objetivo realizar uma revisão bibliográfica da má-rotação intestinal, com principal foco na sua apresentação em idade adulta e nas principais complicações a longo prazo inerentes ao tratamento cirúrgico desta patologia.
A metodologia adotada consiste no estudo de um caso clínico de uma doente com diagnóstico incidental de má-rotação intestinal em idade adulta, realizado no contexto de um quadro de obstrução intestinal por bridas. Tendo em conta os antecedentes da doente, presume-se que este quadro tenha sido devido a uma complicação tardia de um procedimento cirúrgico realizado aos dois dias de vida no contexto de um quadro de oclusão intestinal aguda por volvo da raiz do mesentério, quadro esse que é a forma de apresentação típica desta patologia em idade pediátrica.
Este caso pretende realçar a importância da suspeita diagnóstica e do tratamento imediato em apresentações agudas, bem como a necessidade de seguimento de todos os doentes, quer tenham sido submetidos a tratamento cirúrgico ou não, pelo risco de complicações associado a ambas as situações.Intestinal malrotation can be defined as a congenital anomaly of intestinal rotation and fixation that occurs during fetal development, making it one of the most prevalent malformations of the gastrointestinal tract. Typically, it manifests within the initial months of life, although it can also emerge later. The condition encompasses a diverse range of symptoms, spanning from midgut volvulus and its subsequent risk of intestinal ischemia and necrosis to an array of non-specific abdominal complaints seemingly devoid of any correlation. Ladd's procedure has emerged as the preferred surgical intervention for the management of intestinal malrotation. Like any surgical procedure, it carries the potential for complications, which can manifest even after an extended period of being asymptomatic. The most frequently encountered surgical complication is duodenal obstruction arising from adhesions.
This study aims to undertake a comprehensive literature review of intestinal malrotation, with a primary focus on its presentation in adulthood, as well as the principal long-term complications intrinsic to the surgical management of this condition.
The chosen methodology entails a detailed examination of a clinical case involving an incidental diagnosis of intestinal malrotation in an adult patient, within the context of an adhesion-related obstruction. Based on the patient's medical history, it is presumed that the adhesion-related obstruction is a consequence of a surgical procedure conducted during the first two days of life, in response to an acute intestinal obstruction resulting from mesenteric root volvulus, which is a characteristic presentation of this condition during pediatric age.
This case seeks to emphasize the criticality of maintaining a prominent level of diagnostic suspicion and providing immediate treatment in cases of acute presentations. Furthermore, it underscores the necessity for comprehensive patient follow-up, regardless of whether they have undergone surgical intervention, due to the potential for complications associated with both scenarios
Buyright : human-centred design promoting sustainability E-Tail
No full textTese de doutoramento. Design. Universidade de Lisboa. Faculdade de Arquitetura. 2024The present study aimed to investigate, map, describe, and discuss the consumer journey when purchasing women's clothing online. In addition, it sought to mitigate some causes that lead to dissatisfaction and product returns. When product attributes are poorly presented, and their descriptions are evasive, consumers do not have all the necessary information to make well-informed purchasing decisions. The result is a high rate of returns, exchanges, and discards because consumers’ expectations are not met upon receiving the products.
Returns have a high environmental impact as they multiply the kilometres needed to fulfil an order and, therefore, increase greenhouse effect gas emissions.
This study had a primarily qualitative approach, using exploratory interviews, directed storytelling sessions, workshops, and questionnaires as methodologies.
We consider that through Design, it is possible to broaden the consumer’s knowledge base about clothing products, with the help of more complete and well-organized product presentation pages to aid in the communication of digital and non-digital attributes.
Furthermore, by presenting attributes effectively, efficiently, and satisfactorily, especially non-digital ones, consumers are expected to make more accurate choices to reduce exchanges, returns and discards.
Making purchases that meet their needs will increase the consumer’s lifetime value. In addition, it will promote Corporate Social Responsibility practices and Responsible Consumption.N/
Comunidades e fulgurações na obra de Maria Gabriela Llansol
No full textinfo:eu-repo/semantics/publishedVersio
HMA-EMA catalogue aimed at evaluating the effectiveness of risk minimization measures of oncology medicinal products
No full textTrabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, 2024, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia.Introdução: A guideline Boas Práticas de Farmacovigilância (GVP) representa um conjunto de medidas elaboradas para assegurar a monitorização da segurança de medicamentos na União Europeia. A farmacovigilância é crucial em oncologia, sendo o planeamento e implementação de medidas de minimização de risco (MMR) e sua avaliação de efetividade essencial.
Objetivo: Analisar os estudos pós-autorização de avaliação da efetividade de MMR dos medicamentos oncológicos, registados no catálogo de dados do mundo real da Agência Europeia do Medicamento e da Autoridade Europeia para Medicamentos (HMA-EMA).
Métodos: Os estudos de avaliação da efetividade de MMR registados no catálogo de estudos da HMA-EMA até Fevereiro de 2024, relativos a medicamentos classificados pelo Anatomical Therapeutic Chemical Code “L (Antineoplastic and Immunomodulating Agents)” e “V10 (Therapeutic Radiopharmaceuticals)”, com indicação terapêutica em oncologia, foram analisados. Os dados extraídos incluíam informação sobre o medicamento, desenho do estudo e suas características, tipos de MMR e indicadores avaliados, e efetividade reportada.
Resultados: Dos 1280 registos no catálogo da HMA-EMA, 21 estudos elegíveis foram analisados. Dezassete estudos (81%) eram estudos transversais, 57% (n=12) destinavam-se a profissionais de saúde e 86% (n=18) utilizaram uma fonte de dados primária. Cerca de 81% (n=17) avaliou MMR adicionais, 5% (n=1) avaliou MMR de rotina e 14% (n=3) avaliou ambas. Noventa porcento (n=19) avaliou indicadores de processo, 5% (n=1) avaliou indicadores de resultado e 5% (n=1) avaliou ambos. Quinze estudos apresentavam um relatório final. Desses, em 60% (n=9) as MMR foram classificadas como efetivas, em 27% (n=4) inconclusivas e em 13% (n=2) inefetivas, tal como reportado pelo titular de autorização de introdução no mercado.
Conclusão: A maioria dos estudos avaliou indicadores de processo e apenas um avaliou ambos os tipos de indicadores. Mais de metade dos estudos com resultados disponíveis foram avaliados como efetivos e um quarto deles foram inconclusivos. A GVP recomenda indicadores de resultado como a medida decisiva de sucesso de um programa de minimização de risco, com os indicadores de processo a complementar a sua avaliação. Um desenvolvimento contínuo de diretrizes futuras, relativamente à avaliação da efetividade de MMR, poderá ser benéfico no alcance de medidas de sucesso melhor estabelecidas.Introduction: The Good Pharmacovigilance Practices (GVP) guideline are a set of measures drawn up to facilitate the performance of the safety monitoring of medicines in the European Union. Pharmacovigilance activities play a crucial role in oncology and planning and implementing risk minimisation measures (RMM) and assessing their effectiveness is essential.
Objective: To analyze post-authorization studies aimed at evaluating the effectiveness of RMMs of oncology medicinal products, registered in the Heads of Medicines Agencies and the European Medicines Agency (HMA-EMA) Catalogue of real-world data (RWD) studies.
Methods: All RMMs effectiveness evaluation studies registered in the HMA-EMA RWD Catalogue up to February 2024, regarding medicines categorized under the Anatomical Therapeutic Chemical code “L (Antineoplastic and Immunomodulating Agents)” and “V10 (Therapeutic Radiopharmaceuticals)”, with a therapeutic indication in oncological medical conditions, were reviewed. Data extracted from submitted protocols and study reports included medicine information, study design, target population and objectives, types of RMMs evaluated, data collection methods, process and outcomes indicators and reported effectiveness.
Results: Of the 1280 records registered in the HMA-EMA RWD Catalogues, 21 eligible studies were reviewed. Seventeen studies (81%) were cross-sectional surveys, 57% (n=12) were aimed at Healthcare Professionals and 86% (n=18) used primary data sources. Eighty-one percent (n=17) evaluated additional RMMs, 5% (n=1) evaluated routine RMMs and 14% (n=3) evaluated both. Ninety percent (n=19) assessed process indicators, 5% (n=1) assessed outcome indicators and 5% (n=1) assessed both. Fifteen studies had a study report available. Of those, 60% (n=9) were deemed effective, 27% (n=4) were inconclusive and 13% (n=2) were classified as ineffective, as assessed by the sponsor.
Conclusion: Most studies assessed process indicators, with only one assessing both process and outcome indicators. More than half of the studies with available results were reported as effective by the sponsor and a quarter of them were inconclusive. The GVP guideline recommends outcome indicators as the ultimate measure of success of a risk minimisation programme, with process indicators complementing the former. Continuing to develop future regulatory guidance regarding effectiveness evaluation of RMM could be beneficial in reaching better established measures of success
Criptococose : caracterização clínica e epidemiológica de uma coorte de doentes
No full textTrabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2024Introdução: Cryptococcus spp. é um fungo que possui múltiplos fatores de virulência que lhe confere a capacidade de provocar quadros clínicos graves, geralmente de meningoencefalite, porém com uma apresentação clínica muito variada, visto que qualquer órgão pode estar afetado.
Objetivo: Este estudo debruça-se sobre uma coorte retrospetiva e tem como objetivo avaliar as características clínicas e epidemiológicas dos doentes com criptococose seguidos no Serviço de Doenças Infeciosas do Hospital Garcia de Orta durante os anos de 2017 a 2022.
Métodos: O laboratório forneceu uma lista de 17 doentes que obtiveram o diagnóstico de criptococose seja por teste de antigénio, exame direto, ou outro método diagnóstico. Os dados colhidos foram de natureza diversa: epidemiológica, laboratorial e clínica. Avaliaram-se ainda a presença de comorbilidades, bem como o prognóstico de cada doente.
Resultados: A média de idades dos doentes incluídos no estudo é 49,7 anos (34-72 anos). A distribuição por sexo é relativamente semelhante, com 58,8% de homens e 41,2% de mulheres. 52,9% dos doentes eram portugueses e 41,2% eram africanos. Verificou-se que, em média, os doentes que faleceram durante o internamento têm uma idade superior, um maior número de comorbilidades relevantes, uma contagem celular de linfócitos T CD4+ inferior, uma carga viral de VIH superior e valores laboratoriais de PCR mais elevados.
Conclusão: A doença criptocócica continua a ser uma das principais causas da mortalidade, morbilidade e perda de qualidade de vida da população infetada com VIH. A população incluída no estudo tem características clínicas e epidemiológicas semelhantes às descritas na literatura.Introduction: Cryptococcus spp. is a fungus that has multiple virulence factors that are responsible for serious clinical conditions, usually meningoencephalitis, but with a very diverse clinical presentation, since any organ can be affected.
Objective: This study is a retrospective cohort and aims to evaluate the clinical and epidemiological characteristics of patients with cryptococcosis followed up at the Infectious Diseases Department of Hospital Garcia de Orta between 2017 and 2022.
Methods: The laboratory provided a list of 17 patients diagnosed with cryptococcosis either by antigen test, direct examination or other diagnostic method. The data collected was of a diverse nature: epidemiological, laboratory and clinical. The presence of comorbidities and the prognosis of each patient were also assessed.
Results: The average age of the patients included in the study was 49.7 years (34-72 years). The gender distribution was relatively similar, with 58.8% men and 41.2% women. 52.9% of the patients were Portuguese and 41.2% were African. It was found that, on average, patients who died during hospitalization were older, had a greater number of relevant comorbidities, a lower CD4+ T-lymphocyte cell count, a higher HIV viral load and higher laboratory CRP values.
Conclusion: Cryptococcal disease continues to be one of the main causes of mortality, morbidity and loss of quality of life in the HIV-infected population. The population included in the study has clinical and epidemiological characteristics similar to those described in the literature
Feline chronic rhinitis versus feline nasal lymphoma : diagnostic issues and pitfalls
No full textDissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária, área científica de ClínicaThe clinical manifestations of chronic rhinitis (CR) and nasal lymphoma (NL) in cats are similar, and neither rhinoscopy nor computed tomography (CT) scans results are pathognomonic to one or another. Both are extremely prevalent in day-to-day practice, and the only methods to distinguish between them are nasal biopsies, histopathology and, in some cases, immunohistochemistry (IHC). In everyday practice, it can be particularly difficult to distinguish between CR and NL; this is partly due to similarities in the cell populations of biopsy specimens. Another contributor to the difficulties in diagnosis is the absence of pathognomonic findings in CT scans, many of which are linked to NL but overlap with those in CR. Although diagnostic imaging and histopathology are important for a prompt diagnosis, there are some commonly recognized pitfalls that compromise an accurate medical approach. The current study intends to review imaging, histopathology and IHC findings. It also aims to retrospectively revise final diagnoses, correlating with histopathology, IHC biomarkers (CD3, CD20, Pax5, STAT5, MLH1, MSH6) and outcome, as well as and retrospectively characterize cases pertaining to cats with nasal disease, between 2017 and 2022, for general data, signalment, age, and other pertinent data. 35 cases of cats with a final diagnosis of CR or NL diagnosis from the Veterinary Teaching Hospital (Faculty of Veterinary Medicine, University of Lisbon) were included in this study. Nasal discharge (28/35; 80%) was the most common clinical signs, followed up by sneezing (21/35; 60%). Regarding histopathology and IHC, these revealed to be useful in differentiating these conditions. CR cases demonstrated predominantly chronic inflammatory processes with milder structural alterations, while NL was characterized by more aggressive tissue destruction and a distinct lymphoid neoplastic profile. As for IHC, CD20/Pax5 and MLH1 antibodies showed potential for enhancing diagnostic accuracy (p=0.024 e p=0.001, respectively), and although not statistically significant, STAT5 and MSH6, showed potential in diagnostic NL as well (p=0.509 e p=0.051, respectively). These findings, besides helping determine a diagnosis, appear to be useful as prognostic factors; however, further studies are needed. Although preliminary, these results reveal that some of these markers, such as STAT5 and CD20, could be used to develop new therapeutic strategies in feline medicineRESUMO - Rinite Crónica Felina versus Linfoma Nasal Felino: problemáticas no diagnóstico e limitações - As manifestações clínicas da rinite crónica (RC) e do linfoma nasal (LN) em gatos são semelhantes, e tanto os resultados obtidos pelas técnicas da rinoscopia quanto da tomografia computorizada (TC) não são patognomónicos na sua distinção. Ambos são relativamente prevalentes na prática clínica, e os únicos métodos para distingui-los baseiam-se no recurso a histopatologia e, em alguns casos, análises complementares como imunohistoquímica (IHQ). Na prática diária, é, portanto, difícil distinguir entre RC e LN; isso deve-se em parte às semelhanças nas populações celulares das amostras de biópsia. Embora o diagnóstico por imagem e a histopatologia sejam importantes e complementares para um diagnóstico rápido, existem algumas limitações comumente reconhecidas que comprometem uma abordagem médica precisa. Este estudo pretende rever as alterações imagiológicas, de histopatologia e IHQ. Visa também rever retrospetivamente o diagnóstico final correlacionando com a histopatologia e biomarcadores de IHQ (CD3, CD20, Pax5, STAT5, MLH1, MSH6) e o desfecho, assim como caracterizar retrospetivamente a apresentação, sinais clínicos, idade e outros dados relevantes em casos de gatos com doenças nasais, entre 2017 e 2022. Foram incluídos neste estudo 35 casos de gatos com diagnóstico de RC ou LN do Hospital Escolar Veterinário (Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade de Lisboa). A secreção nasal (28/35; 80%) foi o sinal clínico mais comum, seguido por espirros (21/35; 60%). A histopatologia e a IHQ revelaram ser úteis na diferenciação destas doenças. Os casos de RC demonstraram predominantemente processos inflamatórios crónicos com alterações estruturais mais ligeiras, enquanto os de LN foram caracterizados por uma destruição tissular mais marcada e um perfil neoplásico linfoide distinto. Quanto à IHQ, os anticorpos CD20/Pax5 e MLH1 mostraram potencial para melhorar a precisão diagnóstica (p=0.024 e p=0.001, respetivamente), e embora não sejam estatisticamente significativos, STAT5 e MSH6 também mostraram potencial no diagnóstico de LN (p=0.509 e p=0.051, respetivamente). Estas alterações, além de serem uteis no processo de diagnóstico, aparentam ser úteis como fatores de prognóstico; no entanto são necessários mais estudos. Ainda que preliminares, estes resultados revelam que alguns destes marcadores, como STAT5 e CD20, poderão ser usados para criar novas estratégias terapêuticas em medicina felinaN/