Dirección de Investigación y Desarrollo

Tesis Electrónicas UACh
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    Evaluación de la diversidad genética de papas nativas (Solanum tuberosum L. ssp. tuberosum Hawkes) silvestres y cultivadas del sur de Chile, mediante el uso de marcadores microsatélites

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    La zona sur de Chile es considerada subcentro de origen de la papa cultivada a nivel mundial, motivo por el cual en el Banco genético de la Universidad Austral de Chile se conservan accesiones de la forma cultivada Solanum tuberosum L. ssp. tuberosum Hawkes. Estos individuos provienen de colectas realizadas principalmente en la Isla de Chiloé y Archipiélago de los Chonos. El material colectado ya ha sido caracterizado morfológicamente y con técnicas electroforéticas, con la finalidad de eliminar duplicados, sin embargo, no ha sido estudiada a nivel molecular (secuencias de ADN). El objetivo principal de esta tesis fue determinar la diversidad genética de las papas nativas que se cultivan y crecen en el sur de Chile y sus relaciones de parentesco. Mediante siete marcadores del tipo microsatélites del núcleo (SSRs), fueron analizadas 249 accesiones de Solanum tuberosum ssp. tuberosum nativas del sur de Chile, las que fueron agrupadas según su origen e información disponible en tres grupos: Chiloé(n=41), constituido por variedades típicamente chilotas; Chonos(n=11), con material silvestre colectado en el Archipiélago de los Chonos, y Colección(n=197), formado por accesiones distintas a Chonos y variedades típicamente chilotas, colectadas en la Isla de Chiloé y otros lugares del sur de Chile. Como referencia se utilizó el grupo Europeas(n=24), con cultivares antiguos europeos. En el material nativo del sur de Chile se detectaron en promedio 9,86 alelos/locus. Para Colección se detectaron 9,29 alelos/locus, seguido por Chiloé con 7,71 alelos, Chonos con 6,29 y Europeas con 5,7 alelos/locus. El grupo que presentó la mayor diversidad genética fue Chonos (0,82), seguido de Chiloé (0,78), Colección (0,74) y Europeas (0,74). Esta alta diversidad del material chileno fue acompañada de un alto porcentaje de individuos heterocigotos (88%) con índices de heterocigosidad de 0,52 en Chiloé a 0,46 en Chonos. Las distancias genéticas entre grupos fueron muy bajas, siendo la mayor entre el grupo Chiloé y Europeas (0,01), poniendo de manifiesto el alto parentesco de las papas nativas del sur de Chile con las variedades antiguas europeas. Mediante la visualización de las distancias genéticas en forma de dendrogramas y coordenadas principales para todas las accesiones estudiadas, se determinó que se formaron grupos pero independientes del origen geográfico en que se colectaron las muestras. La genotipización permitió determinar que el 99,2% del material nativo presenta un patrón genético único, lo que permite inferir que el número de duplicados es muy bajo. El gran número se alelos encontrado en las papas nativas de Chile, dentro de los cuales un alto porcentaje no estuvieron presentes en las variedades europeas, y a los valores de diversidad genética encontrados, revelan el gran valor que presenta el banco de germoplasma de papas mantenido en la Universidad Austral de Chile. Se espera que los conocimientos generados en relación a la base genética de las papas nativas de Chile, contribuyan a hacer de este valioso material un mayor y mejor uso por parte de los fitomejoradores, aprovechando así el potencial genético que presentan para el mejoramiento del cultivo.Southern Chile is considered a subcenter of the origin of cultivated potatoes in the world, for that reason in the gene bank of the Universidad Austral de Chile, accessions of the cultivated species Solanum tuberosum ssp. tuberosum Hawkes are conservated. This material was collected in Chiloé Island, the Chonos Archipelago and the adjacent areas in south-central mainland Chile. These accessions have been morphologic and electroforetically characterized through protein and esterase techniques to eliminate duplicates. However, their molecular level (DNA sequence) has not been yet studied. The main objective was to determinate the genetic diversity in wild and cultivated potatoes that grow in southern Chile, and the relationships between them. Two hundred and forty nine chilean native accessions of S. tuberosum ssp. tuberosum were analyzed by seven nuclear microsatellites markers (SSRs). These were previously gathered in three groups accord to origin and available information: “Chiloé”(n=41) conformed by typically Chiloé Island varieties, “Chonos”(n=11) with wild accessions collected in Chonos Archipelago and “Colección”(n=197) with material different to Chonos and Chiloé collected in southern Chile. As reference 23 old european varieties were used. By means the genotyping were assessed that the 99,2% of the native potatoes of Chile presented an unique genetic pattern, and it permits to conclude that the number of duplicates is very low. This native material presented an average of 9,8 alleles/locus. In the “Colección” was detected 9,29 alleles/locus, followed by “Chiloé” with 7,71 alleles, “Chonos” with 6,29 and “Europeas” with 5,7 alleles/locus. The group that presented the highest genetic diversity was “Chonos” (0,82), then “Chiloé”(0,78), “Colección” (0,74) and “Europeas” (0 74). The large diversity of chilean potatoes was associated with a high percentage of heterozygous individuals (88%), with a Heterozygosity Index of 0,52 in “Chiloé” to 0,46 in “Chonos”. The groups are closely related, appearing the greater distance between “Chiloé” and “Europeas” groups(0,01 value). This is an evidence of the high level of kinship between chilean and old european varieties. The genetic distance was visualized by means of dendrograms and principal coordinates analysis. Relation between the phylogenetic groups and geographic origin in which the plants were collected, was not found. The presence of high allelic diversity in chilean native potatoes and an important number of unique alleles or exclusives that were not present in old european varieties, added to the high levels of genetic diversity found in this material, evidence the great value of the potato germplasm bank maintained in the Universidad Austral de Chile. It is expected that the knowledge obtained in this work about genetic base of the chilean potato germplasm, contribute to make a greater and better use of this valuable genetic material by plant breeders, taking advantage of the genetic potential that present these to genetic improvement of cultivated potato

    Detección de la contaminación por bacterias lácticas en cerveza tipo Ale elaborada por la Compañía Cervecera Kunstmann S.A.

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    Durante el proceso de elaboración de Cerveza tipo Pale Ale se realizó un estudio con el fin de determinar posibles contaminación por bacterias lácticas. Los análisis, principalmente microbiológicos, se realizaron durante Enero–Febrero 2003, en donde se detectaron tres fermentaciones con claras evidencias de contaminación por bacterias lácticas. Los resultados determinaron que la contaminación por bacterias lácticas se inicia en la etapa de maceración–cocción, así como también, en los primeros días de la fermentación y se debe exclusivamente a condicionantes de temperatura, pH y aseos deficientes en los equipos, lo que trae consigo un deterioro en las características sensoriales del producto (aromas y sabores desagradables, acidificación y turbidez en la cerveza). Por lo tanto, basado en las condiciones favorables para el desarrollo de las bacterias lácticas se modificaron algunos parámetros del proceso, como por ejemplo, aumento del pH en el mosto durante la cocción, disminución de la temperatura de fermentación y utilización de siembras de levadura jóvenes.Duyring the process of making beer type Ale, it was developed an study to determine posibles lactic acid contaminations. The analysis, mostly microbiologycal, was made in Juanary–February 2003, where three fermentations were detected with lactic acid bacteria contamination. The result determined that this lactic acid bacteria begins in the mash and boiled process and also in the first days of fermentation. This contamination is due to some deficiency in variablkes as temperature, pH, a poor equipment cleaning resulting in anormal characteristic in the beer (turbidity, acid product, taste and flavors anormal). Therefore, basis in the normal conditions to develop the growing of lactis acid bacteria, were modified some parameter in the entire process to enhance the quality of beer, such as, rising pH during the boiling step, drop the temperature and the use young cultures of yeast

    Acción antimicrobiana de dos bacteriocinas lácticas sobre Listeria monocytogenes adherida a una superficie de acero inoxidable

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    El objetivo general del presente trabajo fue, estudiar el efecto inhibidor de una combinación de dos bacteriocinas lácticas en contra de L. monocytogenes, sobre una superficie de acero inoxidable. Para ello se empleó la bacteriocina nisina y una sustancia tipo bacteriocina (STB) de Carnobacterium piscicola L103, en contra de L. monocytogenes Lsa 4/00, en caldo soya tripticasa (CST), a 10ºC y en células adheridas a placas de acero inoxidable de 1x1cm. La recuperación de las células viables a partir del CST fue determinada a las 0, 0,5, 1,5, 3, 24 y 48 h de exposición. Los resultados mostraron que L. monocytogenes fue completamente inactivada después de 24 h, por la combinación sinérgica de 100 UA/mL (5.000 UI/mL) de nisina y 100 UA/mL de la STB de C. piscicola L103 . Nisina sola, también presentó un efecto bactericida, en cambio, para la STB de C. piscicola L103 se obtuvo una inhibición parcial, originándose células resistentes a las 24 h. Para la obtención de biopelículas de L. monocytogenes sobre las placas de acero inoxidables, éstas fueron incubadas con la bacteria durante 24 h a 25 ºC. La densidad inicial de L. monocytogenes sobre las placas de acero inoxidable fue de 3,0x104 a 1,0x105 ufc/cm2. Después de 0,5 y 24 h de contacto con las bacteriocinas a 10ºC, los recuentos se redujeron en 1,5 a 4 unidades log. Con la combinación de bacteriocinas la cantidad células de L. monocytogenes en la biopelícula llegó a <10 ufc/cm2 después de 24 h. El tratamiento combinado (Nis+STB), presentó un efecto sinérgico frente a la biopelícula de Listeria. Los resultados indican que la combinación de bacteriocinas puede ser usada en forma segura sobre superficies de acero inoxidable, lográndose una efectiva inhibición de L. monocytogenes por 24 h. El uso de una combinación de bacteriocinas tendría como ventaja reducir el desarrollo de células resistentes de L. monocytogenes a las bacteriocinas.The general objective of the present work was, to study the inhibitory effect of a combination of two bacteriocins from lactic acid bacteria, against L. monocytogenes, on a stainless steel surface. The commercial bacteriocin nisin was used and a bacteriocin-like inhibitory substance (BLIS) from Carnobacterium piscicola L103, with L. monocytogenes Lsa 4/00 as the indicador organism. The test was done in triptic soy broth (TSB) at 10ºC and with the in cells adhered to stainless steel plates of 1 cm x 1cm. The recovery of the viable cells from the TSB was determined at 0, 0.5, 1.5, 3, 24 and 48 h of exposure. Results showed that L. monocytogenes was completely inhibited after 24 h, by the combination of 100 AU/mL (5.000 IU/mL) of nisin and 100 AU/mL of the BLIS of C. piscicola L103. Nisin alone, also presented a bactericidal effect. For the STB of C. piscicola L103 a partial inhibition was obtained, with resistant cells originating after 24 h. For the formation of biofilms of L. monocytogenes the stainless steel plates were incubated with the bacterium for 24 h at 25 ºC. The initial density of L. monocytogenes on the stainless steel plates ranged from 3.0x1.04 to 1.0x105 cfu/cm2. After 0.5 and 24 h of contact with the bacteriocin at 10ºC, the counts were reduced in 1.5 to 4 log cycle units. With the combination of bacteriocins the amount of cells of L. monocytogenes on stainless steel plates was reduced to <10 cfu/cm2 after 24 h. The combined treatment (Nis+ BLIS) presented a synergic effect on the biofilm of Listeria. The results indicate that the combination of bacteriocins can be effective on stainless steel surfaces, during prolonged exposure. The use of a combination of bacteriocins will reduce the development of bacteriocin resistant cells

    Moléculas mediadoras de activación genética, Fak y Erk, en pacientes con distrofía muscular de Duchenne y en ratones MDX

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    La distrofia muscular de Duchenne (DMD), es una enfermedad secundaria a mutaciones en el gen de distrofina, proteína subsarcolemal de músculo. Esta condición es invariablemente fatal en humanos. El modelo animal para DMD es el ratón mdx, el cual presenta una mutación puntual en el gen de distrofina. Aunque genéticamente mdx y Duchenne son homólogos, fenotípicamente difieren, porque el ratón mdx tiene una sobrevida normal en cautiverio. Postulamos entonces que debe existir un punto regulatorio en la respuesta biológica a esta mutación que se comporte distinto en mdx en comparación a Duchenne, determinando fenotipos y resultados funcionales diferentes. Para probar esta hipótesis se analizaron las proteínas regulatorias de expresión génica, FAK (quinasa de adhesión focal) y ERKs (quinasas reguladas del extracelular), tanto por técnicas inmunohistoquímicas, como por análisis de Western blot. Los resultados obtenidos indican que los niveles de ERK están aumentados en ratones mdx, pFAK sólo aumenta en el periodo de pre-necrosis, en cambio FAK y pERK no tienen cambios significativos en ambos periodos. En pacientes con DMD, los niveles de ERK y pERK están aumentados, en cambio FAK y pFAK están disminuidas con respecto a sus controles. En la fibra muscular inmunofluorescencias muestran localizaciones celulares diferentes, para estas proteínas en pacientes con DMD y mdx. La diferencia descrita podría estar detrás del resultado funcional distinto ante el mismo defecto genético entre las dos especies, aportando así a la comprensión de la respuesta de la célula muscular en patología y la posibilidad de mejorarla.Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a disease secondary to mutations in the dystrophin gene, a subsarcolemmal protein of muscle. This condition is invariably fatal in human. The animal model for DMD is the mdx mouse, which also present a dystrophin gene point mutation. Although genetically mdx and Duchenne are homologous, they differ phenotypically because the mdx mouse has a normal survival in captivity. We postulate that there is a regulatory point in the biological response to this mutation which responds differently in mdx than in Duchenne, determining different functional results and phenotypes. To probe this hypothesis analyze the gene expression regulatory proteins, FAK (focal adhesion kinase) and ERKs (extracellular regulated kinase), both by immunocytochemistry as by Western blot. The levels of ERK are increased in mdx mice; pFAK is only increased in the pre-necrotic period. In contrast, both pERK and FAK do not have significative changes in both periods. In DMD patients, the levels of both ERK and pERK are increased, however FAK and pFAK are decreased with respect to controls. In the muscle fiber, we found that these proteins are located in different subcellular compartments in DMD compared to mdx. The difference described could explain the distinct functional result against the same genetic defect between the two species, apporting to the knowledge of muscle cell response to injury and may be a potential target for future therapies

    Marcadores moleculares de ADN y su aplicación en el análisis de la estructura genética de poblaciones de choro zapato (Choromytilus chorus) (Molina 1782) (Bivaalvia: Mytilidae)

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    El choro zapato (Choromytilus chorus) es una especie apreciada en nuestro país y un recurso altamente atractivo para la producción. Sin embargo, la sobreexplotación del recurso ha llevado a la disminución de bancos naturales en el país. Con el objeto de conocer como los factores genéticos contribuyen a la formación de stocks para así poder planificar la explotación de este recurso, evitar la pérdida de características poblacionales importantes y permitir la conservación de su patrimonio genético, se procedió a la búsqueda de marcadores moleculares de ADN para la diferenciación intraespecífica de poblaciones naturales de choro zapato en las costas de Chile. En el presente trabajo se estudiaron genes nucleares y mitocondriales de 198 individuos provenientes de 4 localidades de Chile: Iquique, Bahía de Concepción, seno del Reloncaví y Puerto Edén. Mediante PCR se lograron amplificar genes mitocondriales COIII, D-loop, el gen ribosomal nuclear ITS y secuenciar COIII e ITS. Se ensayó la restricción del fragmento ITS con 10 endonucleasas (PCR-RFLP) y solo una enzima (Dde I) permitió detectar polimorfismo en este gen, marcador que fue utilizado en el análisis de la estructura genética de la población. El análisis estadístico no arroja suficiente evidencia para identificar la presencia de stocks discretos ( FST=0.02 ), probablemente debido a un gran flujo génico (Nm=11.2). Sin embargo, se observó un menor número de heterocigotos en la localidad de Iquique con respecto a las localidades del sur que sugiere la posibilidad de una incipiente diferenciación que debe ser comprobada con nuevos muestreos y marcadores moleculares de mayor resolución. Los resultados establecen un marcador molecular para el monitoreo del patrimonio genético en ésta especie, sin embargo es necesario confirmar y apoyar estos resultados con un mayor número de marcadores moleculares.The choro zapato or “shoe mussel”, (Choromytilus chorus) is a native and very appreciated specie in Chile because of its nutritive features and great size that it can reach (30 cm). This distinguishes this mussel from other mussels and converts it in a very attractive natural resource for production. However the overexploitation has led to the reduction of natural beds. To know the manner in which genetic factors contribute to the creation of stocks, avoid the lost of important population features and allow the conservation of its genetic patrimony, the procedure of this study was to search for DNA molecular markers to perform intraspecific differentiation of natural populations of C. chorus. In this study nuclear and mitochondrial genes of 198 individuals were analyzed from 4 different localities in Chile: Iquique, bahía de Concepción, seno del Reloncaví and Puerto Edén. The COIII and D-loop mitochondrial genes and the ITS nuclear ribosomal gene were PCR amplified and COIII and ITS then sequenced. The restriction enzyme analysis of ITS (PCR-RFLP) with 10 enzymes allowed the detection of polymorphism in this gene only with Dde I. This marker was then used to analyze the genetic structure of the population. The results do not support enough evidence to identify the presence of discrete stocks (FST=0.02), probably due to a great gene flow (Nm=11.2). However in Iquique a fewer number of heterozygotes was observed compared to the southern localities that suggests the possibility of an incipient differentiation, but this has to be proved by additional sampling and application of high resolution molecular markers. These results have established a DNA molecular marker that allows further monitoring of the populations genetic patrimony, however it’s necessary to confirm and support these results further with a greater number of molecular markers

    Percepción pública respecto a los valores éticos en la profesión periodística

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    Esta tesis tuvo la visión de analizar la percepción pública con respecto a los valores éticos en la profesión periodística. Los valores escogidos fueron: veracidad, objetividad y credibilidad, ya que corresponden a los más importantes dentro de la Deontología Periodística

    Los niños en situación de calle y las organizaciones no gubernamentales que los atienden en la ciudad de México, México

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    Las innovaciones léxicas como recurso expresivo en la prensa escrita: caso diario La Estrategia

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    La función principal del lenguaje es servir como instrumento de comunicación que posibilite la interacción social –a través del intercambio de información- entre todos los miembros de una comunidad, situación que explica, además, el constante cambio que se produce en la lengua al adaptarse a las necesidades expresivas de sus hablantes que, con el paso del tiempo, adquieren mayores conocimientos, nuevos referentes y, consecuentemente, necesitan de nuevas palabras. Entonces, si el lenguaje es considerado un fenómeno social -al ser la herramienta que utiliza el hombre para organizar, describir, y objetivizar el mundo-, es fundamental su rol en el proceso de socialización; proceso que en las sociedades contemporáneas ya no sólo atañe al intercambio entre los integrantes de una comunidad, sino también a la influencia de los mass media que a través del lenguaje oral o escrito, son el eje fundamental del proceso globalizador que caracteriza al mundo de hoy. En este contexto, cabe enfatizar el aporte de los medios de comunicación masiva no sólo en la construcción de la realidad sociocultural de los individuos, sino también en la aceptación colectiva de las innovaciones léxicas que se originan de los nuevos conocimientos, sin dejar de considerar su incidencia en la creciente incorporación de préstamos lingüísticos en la lengua castellana, debido al desvanecimiento de las barreras geográficas y culturales como consecuencia de la globalización. El aporte de los medios de comunicación en la aceptación de los cambios que se producen en la lengua, incluso en la imposición de nuevas palabras o códigos verbales debido a su carácter masivo (producción y difusión de mensajes a gran escala), es motivo del presente estudio, que registrará las innovaciones léxicas que se observan en la prensa escrita en un período de tres años (2000 – 2003), específicamente en el área de telecomunicaciones que son fundamentales para el intercambio cultural y por ende, sinónimo de globalización

    Insectos que se desarrollan en conos de Araucaria araucana en la Reserva Nacional Malalcahuello (IX Región)

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    Con el propósito de conocer un poco más acerca de la escasa información que se tiene respecto al comportamiento de los insectos que se desarrollan en los conos de Araucaria araucana, se realizó un análisis para determinar que tipos de especies son las que los habitan, cuales son sus roles, como es el comportamiento de su dominancia y constancia y en que estaciones climáticas se encuentran en mayor número. Para este análisis la zona de estudio a utilizar fue la Reserva Nacional Malalcahuello (IX Región) durante un período que incluyó las estaciones climáticas del año 2000, 2002 y 2003. La colecta de conos fue por medio de un muestreo dirigido y destructivo, extrayendo 20 conos masculinos y 20 femeninos por cada estación climática analizada durante los tres años de muestreo. Se determinó que 13 especies agrupadas en cuatro familias (Megalopodidae, Nemonychidae, Belidae y Curculionidae) habitan ambos tipos de conos. De ellas 10 especies se desarrollan en conos femeninos y 12 en conos masculinos. Se concluye que aquellos insectos que habitan el cono masculino se alimentan de polen, pero no se tiene certeza del porqué habitan el cono femenino, suponiendo que lo utilizarían de refugio o en la eventualidad para alimentarse de tejidos en estado de descomposición una vez que el cono ya se ha despojado de los “piñones” (semillas). Las especies de mayor protagonismo durante el análisis fueron Araucarietius viridans (Curculionidae) la cual fue una especie altamente abundante y dominante durante las estaciones de invierno y otoño, mientras que Oxycraspedus minutus y Oxycraspedus cornutus (Belidae) destacaron como más abundantes y constantes durante los veranos y primaveras.With the intention of knowing a bit more of the behavior in insects that develop in the cones of A. araucana, an analysis was realized to determine the different classes of insects, what kind of insects are they, which are their roles, dominance and abundance. The analysis zone used for the study was the National Reservation Malalcahuello (IXth Region) during a period that included the climatic stations of the years 2000, 2002 and 2003. The collection of cones was made by a directed and destructive sampling, extracting 20 masculine and 20 feminine cones for every climatic station analyzed during the three years of sampling. Once done the laborator analysis there was identified a whole of 13 insect species in four families (Megalopodidae, Nemonychidae, Belidae and Curculionidae) that live in both types of cones. Of them, 10 species develop in feminine cones and 12 in masculine cones. It ratify that those insects that live in the masculine cone feed of pollen, but certainty we do not know exactly the reason that they live in the feminine cones, supposing that they would use it to refuge or eventuality, stops to feed in state of decomposition as soon as the cone already has undressed the pine seeds(piñones). The species of major protagonism during the analysis were A. viridans (Curculionidae) which was a highly abundant and dominant species during the winter and autumn, whereas O. minutus and O. cornutus (Belidae) were like more abundant and constant during the summers and springs

    Régimen de responsabilidad aplicable a la indemnización por daño moral a causa de un despido injustificado

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