Repositorio Institucional de Acceso Abierto (RIAA) (Universidad Autónoma del Estado de Morelos)
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    Síntesis de nuevos α-aminofosfonatos y α-amino-gem-bifosfonatos conformacionalmente restringidos

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    Transesterificación de ésteres y resolución de derivados de aminoácidos, catalizadas por la lipasa CaLB

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    El progreso que se ha tenido en el estudio de la promiscuidad catalítica de enzimas ha fortalecido el uso de biocatálisis en química orgánica. Las exploraciones de biocatálisis para la síntesis de ésteres son críticas ya que hasta el momento los métodos tradicionales existentes son complicados, debido a que suelen requerir largos tiempos de reacción, microondas o incluso reactivos tóxicos. Esta tesis presenta una metodología biocatalítica versátil para obtener ésteres bencílicos mediante una reacción de transesterificación de ésteres metílicos con lipasa B de Candida antarctica (CaLB) y alcohol bencílico en ausencia de disolvente. Además, se estudió el efecto del tamaño del nucleófilo y el sustituyente directamente unido al grupo carbonilo. Los resultados muestran que, en algunos casos, el uso de vacío desplaza el equilibrio de la reacción hacia los productos. Por otra parte, en esta tesis también se presenta una metodología amigable con el medio ambiente, con condiciones suaves y tiempos cortos de reacción para llevar a cabo la resolución de γ-lactamas mediante una reacción de hidrólisis utilizando la enzima comercialmente disponible CaLB. Lo anterior es de gran importancia sintética debido a que a pesar de que se han descrito un sin número de métodos químicos, así como biocatalíticos para la preparación de γ-lactamas quirales, en la literatura hasta ahora solo se ha reportado un método para la resolución de la γ⁴-lactama, mientras que las γ²-y γ³ -lactamas no han sido reportadas, esto ha sido justificado debido a que el sitio catalítico se encuentra remoto al centro quiral. Por otra parte, la resolución de las γ-lactamas por hidrólisis es complicada, ya que las enzimas que están reportadas hasta ahora capaces de llevar a cabo esta reacción son difíciles de conseguir, dando como ejemplo las enzimas ENZA-1 y ENZA-20. Tomando como base estos resultados, se llevaron a cabo estudios de acoplamiento molecular, donde las regiones específicas en la cavidad catalítica de la enzima CaLB fueron analizadas.Recent progress of the catalytic promiscuity of enzymes have invigorated the use of biocatalysis in organic chemistry. Explorations of biocatalysis for the synthesis of esters are critical since up to now, existing traditional methods are complicated, which usually require long reaction times, microwaves, or even toxic reagents. This thesis presents a versatile biocatalytic methodology to obtain benzyl esters through a transesterification reaction of methyl esters with Candida antarctica lipase B (CaLB) and benzyl alcohol in the absence of solvent. In addition, the effect of the nucleophile size and the substituent directly attached to the carbonyl group was studied. The results show that, in some cases, using a vacuum shifts the equilibrium of the reaction towards the products. On the other hand, this thesis also presents an environmentally friendly methodology, with mild conditions and short reaction times to carry out the resolution of γ-lactams through a hydrolysis reaction using the commercially available CaLB enzyme. This is of great synthetic importance because even though several chemical as well as biocatalytic methods have been described for the preparation of chiral γ-lactams, only one method has been reported in the literature so far for the resolution of the γ⁴-lactam, while the γ² - and γ³-lactams have not been reported, this has been justified because the catalytic site is remote from the chiral center. On the other hand, the resolution of γ-lactams by hydrolysis is complicated, since the enzymes that are reported up to now capable of carrying out this reaction are difficult to obtain, giving the ENZA-1 and ENZA-20 enzymes as examples. Based on these results, molecular docking studies were carried out, where specific regions in the CaLB catalytic cavity were analyzed

    Mecanismos de tolerancia a MgCl₂ y potencial en micorremediación del ascomiceto halófilo Aspergillus sydowii

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    Los organismos extremófilos tienen la capacidad de vivir en condiciones inhóspitas para cualquier otro organismo vivo. Estos microorganismos desarrollan mecanismos de respuesta que les permiten sobrevivir en estos ambientes con elevadas concentraciones de sales. En los hábitats hipersalinos con concentraciones elevadas de sal, se han identificado una gran diversidad de hongos extremófilos entre los que se destacan las especies del género Aspergillus. No se conocen claramente los mecanismos moleculares que diferencian la respuesta a condiciones hipersalinas impuestas por NaCl y MgCl₂. Para una mayor claridad se realizó un análisis transcriptómico de Aspergillus sydowii presencia de 2 M de la sal caotrópica MgCl₂ y 2 M de la sal cosmotrópica NaCl para entender los mecanismos diferenciales de respuesta a estrés osmótico. A partir del análisis del transcriptoma se identificaron 376 transcritos diferenciales regulados positivamente y 436 transcritos regulados negativamente. Entre los transcritos regulados positivamente se identificaron genes involucrados en la respuesta al daño en el genoma, la biosíntesis de solutos compatibles, las modificaciones de la pared celular, el transporte celular, el estrés oxidativo y ciclo celular. Se detectaron por Cromatografía Líquida de Alta Definición (HPLC) aquellos solutos compatibles involucrados en la respuesta al estrés osmótico en A. sydowii. En ambas condiciones la utilización de compuestos osmóticamente activos genera la mezcla de solutos como la trehalosa, el manitol, el arabitol, el eritritol y el glicerol. En presencia de 2 M de MgCl₂ se detectó mayor actividad de las enzimas catalasa y glutatión peroxidasa respecto a la condición de 2 M NaCl. Esto sugiere que existe un estrés oxidativo en A. sydowii a altas concentraciones de MgCl₂ y que las enzimas catalasa y glutatión peroxidasa están involucradas en la respuesta del mantenimiento de la homeostasis redox a nivel celular.There are environments that present extreme life conditions, however, some microbial communities have the ability to live in these, these communities are defined as extremophiles. An example of these are environments with high concentrations of ions, in which the availability of water in the environment is very low, which is why it represents a challenge for life. Extremophilic microorganisms present response mechanisms that allow them to survive in these environments with high concentrations of salts. In hypersaline habitats, a great diversity of extremophilic fungi have been identified, among which species of the genus Aspergillus stand out for their high tolerance to high concentrations of salts. The molecular mechanisms that differentiate the response to hypersaline conditions imposed by NaCl and MgCl₂ are not clearly understood. For greater clarity, a transcriptomic analysis of Aspergillus sydowii grown in the presence of 2 M of the chaotropic salt MgCl₂ and 2 M of the cosmotropic NaCl salt was performed to understand the differential mechanisms of response to osmotic stress. From transcriptome processing, 376 positively regulated transcripts and 436 negatively regulated transcripts were identified. Among the positively regulated transcripts, genes involved in the response to damage in the genome, biosynthesis of compatible solutes, cell wall modifications, cell transport, oxidative stress and cell cycle were identified. Compatible solutes involved in the response to osmotic stress in A. sydowii were detected by High Definition Liquid Chromatography (HPLC). In both conditions, the use of osmotically active compounds is given by a mixture of solutes such as trehalose, mannitol, arabitol, erythritol and glycerol. In the presence of 2 M of MgCl₂, greater activity of the enzymes catalase and glutathione peroxidase was detected with respect to the condition of 2 M NaCl. This suggests that there is oxidative stress in A. sydowii at high concentrations of MgCl₂ and that the enzymes catalase and glutathione peroxidase are involved in the response to maintain redox homeostasis at the cellular level

    Propuesta de plan estratégico para el centro de investigación en ingeniería y ciencias aplicadas ciicap 2019-2023

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    RESUMEN El principal objetivo de este trabajo fue desarrollar una propuesta de Plan Estratégico para el Centro de Investigación en Ingeniería y Ciencias Aplicadas, CIICAp. Este trabajo incluye una autoevaluación del CIICAp en cuanto a Dirección y Planeación Estratégica, que permitió conocer su estado actual, avances y oportunidades de mejora, esta evaluación, además, puede ser empleada en futuros esfuerzos de Planeación Estratégica. Mediante el empleo de metodologías de Investigación, Administrativas, y de Negocios, de la cuales se pueden citar: el análisis de las cinco fuerzas de Porter, PESTEL, FODA y CAME, se obtuvo la Propuesta de Plan estratégico. La propuesta de Plan Estratégico desarrollada para el CIICAp considera el periodo de Administración actual, 2019 a 2023, y muestra estrategias relevantes para el desempeño del Centro ante las problemáticas actuales. La importancia de este trabajo radica en la imperiosa necesidad de estrategias pertinentes en CIICAp, por lo que la Dirección requiere de un Plan Estratégico que sea comunicado eficazmente a toda la Comunidad Académica, e indique el rumbo y acciones que serán tomadas durante los siguientes 4 años.SUMMARY The main objective of this work was to develop a Strategic Plan Proposal for the Center for Research in Engineering and Applied Sciences, CIICAp. This work includes a CIICAp self-assessment in terms of Strategic Planning and management that allowed to know the current state, progress, and opportunity areas. Same self-assessment can be used in future Strategic Planning efforts. Using Research, Administrative and Business methodologies, of which it can be mentioned, the analysis of the five forces of Porter, PESTEL, FODA and CAME, the Strategic Plan Proposal was obtained. The Strategic Plan Proposal developed for CIICAp considers the current Administration period, 2019 to 2023, and shows relevant strategies for the Institution's performance in the face of current problems. The importance of this work is the urgent need for relevant strategies in CIICAp, for which the principal requires a Strategic Plan that should be effectively communicated to the entire Academic Community and indicate the direction and actions that will be taken during the following 4 year

    Desarrollo de un método para deslactosar leche materna conservando sus propiedades inmunológicas

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    La leche materna es el alimento ideal y completo para los bebés durante los primeros 6 meses de vida, y sigue siendo el alimento óptimo durante los siguientes seis meses, aunque debe ser complementado con otros alimentos. Proporciona todas las vitaminas, minerales, enzimas y anticuerpos necesarios para el correcto desarrollo infantil y protección a enfermedades. Sin embargo, la OMS reporta que el 1% de los recién nacidos a nivel mundial presentan intolerancia a la lactosa, lo que provoca malestares gastrointestinales, tales como: cólicos, diarreas, vómitos, deshidratación, malestar en general y en casos extremos la muerte; motivo por el cual no pueden ser alimentados del seno materno, y por consiguiente no adquieren los anticuerpos contenidos en la leche materna, predisponiéndolos a infecciones y rompiendo el lazo materno-infantil. La intolerancia a la lactosa se debe a la disminución o ausencia parcial o total de la enzima lactasa en el tracto digestivo. Esta enzima tiene la función de transformar el disacárido lactosa de la leche en azúcares en los monosacáridos glucosa y galactosa, que son absorbidos en el intestino. Las bacterias probióticas son microorganismos que ejercen efectos benéficos, principalmente a nivel gastrointestinal; actualmente se sabe que algunas bacterias acido lácticas son capaces de producir lactasas y por consecuente digerir lactosa. Por ello este proyecto tuvo el objetivo de obtener una bacteria con actividad in vitro de lactasa y desarrollar un método para deslactosar leche materna. La bacteria seleccionada para la realizar este proyecto fue L. acidophilus, debido a que fue la cepa que demostró presentar la mejor actividad de lactasa de las 4 cepas evaluadas y comparadas entre sí, la evaluación de la actividad de lactasa de la cepa se realizó utilizando a la bacteria en su forma entera y como lisado bacteriano para hidrolizar la lactosa contenida en leche de vaca y humana y en una solución de lactosa al 7.3%. En los resultados obtenidos se observó que el lisado bacteriano demostró tener mayor actividad de lactasa, se logró hidrolizar hasta un 70% de lactosa presente en una muestra de leche y también se demostró que más de un 90% de las IgA propias de la leche materna se mantienen después de los tratamientos gástrico, intestinal y con lisado bacteriano

    Actividad trombolítica del extracto hidroalcohólico de Bougainvillea x buttiana (Var. Rosa) en modelo murino

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    La hemostasia es un suceso fisiológico que mantiene la sangre fluida en los vasos sanguíneos, pero ante una lesión vascular este mecanismo tiene la finalidad de crear un coagulo; una alteración en este proceso lleva a la formación de trombos. Y su formación está representado por la integridad de la triada de Virchow, lo cual conduce a graves complicaciones como infarto al miocardio, infarto cerebral, trombosis venosa y embolia pulmonar que implican una falta de circulación que en ocasiones conduce a la muerte, siendo así las Enfermedades Cardiovasculares (ECV), la principal causa de defunción a nivel mundial y tiene un registró del 21% de defunciones durante el 2018. Se estima que el tromboembolismo pulmonar corresponde el tercer lugar de morbimortalidad, luego de la enfermedad coronaria y trombosis cerebral, responsables del 5% de mortalidad global en la población de edad avanzada. A pesar de las diferentes alternativas quirúrgicas y tratamientos, éstos son de elevados costos, producen efectos adversos y generan tolerancia en las administraciones prolongadas. Y el empleo de plantas medicinales sigue siendo una alternativa para los pacientes, en este contexto, diversos estudios científicos han comprobado diferentes actividades farmacológicas relacionada con los extractos o compuestos presentes en la especie Bougainvillea x buttiana (Bxb) como actividad analgésica, antidiabética, antiinflamatoria, antioxidante y antihistamínica. En este sentido el presente trabajo evaluó la actividad trombolítica de B. x buttiana (Var. Rosa) a partir del extracto hidroalcohólico en un modelo murino, en el cual se realizó la determinación del efecto toxicológico agudo obteniendo que la administración de extracto hidroalcohólico de B. x buttiana (EHABxb) no causa toxicidad y se requiere dosis mayores a 2,000 mg/Kg de peso para inducir la letalidad. Posteriormente al ensayo toxicológico, se analizó el ensayo exploratorio a múltiples dosis del EHABxb mediante la vía oral e intraperitoneal y se evaluó en ratones CD1 en un modelo de trombosis generado por FeCl3, el EHABxb mostró que la dosis es dependiente en función del tiempo obteniendo que la DE50 se encuentra entre 50 mg/Kg vía intraperitoneal y 18 mg/Kg vía oral. Además, desde las 24 hasta las 72 horas el EHABxb mostro una disminución significativa de la actividad trombolítica comparado con el grupo control. El cual, a las 24 horas presentó el coagulo en el modelo murino que fue incrementando en función del tiempo. Posterior al ensayo trombolítico, se cuantificó el perfil de coagulación de cada grupo experimental al termino de 3 días de tratamiento, donde se presentó en el FeCl3 un incremento en los valores de fibrinógeno comparado con el EHABxb y no se mostró cambio de TP y TPT del EHABxb en via oral e intraperitoneal comparado con los valores basales y los de referencia; concluido lo anterior, se llevó a cabo el análisis de expresión de citocinas mostrando que el extracto promueve una mayor actividad antinflamatoria (IL-10) de acuerdo al balance de citocinas comparada con FeCl3, adicionalmente con la administración el EHABxb vía intraperitoneal en la expresión de IL-6 se obtuvo una diferencia significativa comparada con el FeCl3 y además, el extracto tuvo un comportamiento similar al de la aspirina y heparina utilizados como punto de referencia.ABSTRACT Hemostasis is a physiological event that keeps blood flowing in blood vessels, but in the event of vascular injury this mechanism is intended to create a clot; an alteration in this process leads to thrombus formation. And its formation is represented by the integrity of Virchow's triad, which leads to serious complications such as myocardial infarction, cerebral infarction, venous thrombosis and pulmonary embolism involving a lack of circulation that sometimes leads to death, thus being cardiovascular diseases (CVD), the leading cause of death worldwide and has a record of 21% of deaths during 2018. It is estimated that pulmonary thromboembolism is the third leading cause of morbidity and mortality, after coronary heart disease and cerebral thrombosis, responsible for 5% of overall mortality in the elderly population. In spite of the different surgical alternatives and treatments, these are expensive, produce adverse effects and generate tolerance in prolonged administrations. And the use of medicinal plants remains an alternative for patients, in this context, several scientific studies have shown different pharmacological activities related to extracts or compounds present in the species Bougainvillea x buttiana (Bxb) as analgesic, antidiabetic, anti-inflammatory, antioxidant and antihistamine activity. In this sense, the present work evaluated the thrombolytic activity of B. x buttiana (Var. Rosa) from the hydroalcoholic extract in a murine model, in which the acute toxicological effect was determined, obtaining that the administration of hydroalcoholic extract of B. x buttiana (EHABxb) does not cause toxicity and doses higher than 2,000 mg/kg body weight are required to induce lethality. After the toxicological assay, the exploratory multi-dose assay of EHABxb was analyzed by oral and intraperitoneal routes and evaluated in CD1 mice in a model of thrombosis generated by FeCl3, EHABxb showed that the dose is time-dependent, obtaining that the DE50 is between 50 mg/kg intraperitoneal route and 18 mg/kg oral route. Furthermore, from 24 to 72 hours EHABxb showed a significant decrease in thrombolytic activity compared to the control group. At 24 hours, the coagulum in the murine model presented a clot that increased as a function of time. After the thrombolytic assay, the coagulation profile of each experimental group was quantified at the end of 3 days of treatment, where FeCl3 showed an increase in fibrinogen values compared to EHABxb and no change in TP and TPT of EHABxb in oral and intraperitoneal route compared to baseline and reference values; After this, the analysis of cytokine expression showed that the extract promoted a greater anti-inflammatory activity (IL-10) according to the cytokine balance compared to FeCl3; additionally, with the administration of EHABxb intraperitoneally in the expression of IL-6, a significant difference was obtained compared to FeCl3 and the extract had a behavior similar to that of aspirin and heparin used as a reference point

    Obtención de precursores neurales a partir de fibroblastos humanos mediante el uso de señales de inducción neural

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    Las enfermedades neurodegenerativas (EN) y demás afecciones del sistema nervioso que ocasionan un daño celular, han ido aumentando en el número de muertes generadas a lo largo de los años; del octavo puesto en 2010 al quinto en 2016 según el reporte de la OMS de EN de 2017. Anteriormente se ha demostrado que es posible trasplantar células que permiten restablecer la función celular afectada en pacientes con EN. En el año 1987 mediante ensayos clínicos se logró una mejoría del 50% de los pacientes con enfermedad de Parkinson que recibieron un trasplante de células nerviosas obtenidas de fetos, debido a estos resultados se planteó su empleo como alternativa terapéutica, sin embargo, la cantidad de células a trasplantar en cada paciente es una limitante, porque al ser la fuente celular cerebros fetales, producto de abortos, no se consideró un tratamiento ético para su uso clínico. Por lo que se han buscado fuentes celulares alternas como xenotrasplantes, donadores adultos, cadáveres y trasplantes autólogos, siendo estos últimos la mejor opción ya que no presentan efectos adversos de inmunogenicidad, baja disponibilidad, ni están sometidos a problemas éticos para su obtención. El presente estudio está centrado en el desarrollo de una metodología de cultivo celular que mediante el uso de distintas señales de inducción neural permita generar una población que presente el potencial de diferenciación similar a precursores neurales a partir de fibroblastos humanos. Este proyecto está basado en la implementación de distintas estrategias que no modifiquen genéticamente las células. La formación de agregados celulares en cultivo tridimensional para favorecer los eventos de reprogramación celular, el uso de moléculas pequeñas como inductores neurales, medios definidos con señales extracelulares obtenidos de neuroblastos y técnicas de cocultivo para promover la diferenciación, sobrevivencia y/o proliferación de precursores neurales. El primer paso de este protocolo consiste en la propagación y obtención de un cultivo de fibroblastos estable en cuanto a características morfológicas y de expresión de marcadores de esta población. Posteriormente, se cultivan las células para promover la formación de agregados celulares, los cuales se exponen a una mezcla de fármacos que alteran vías de señalización claves en la inducción neural, entre las que se encuentran Wnt y TGF-β; además de la inhibición de deacetilasas y metilasas de histonas; esto permite que las células adquieran una cromatina más permisiva, lo cual promovió un fenotipo parecido a células del neuroectodermo. Una vez favorecido el evento de inducción neural se cultivan las células obtenidas de los agregados en un microambiente que permite el crecimiento y la manutención de las células con expresión de marcadores de progenitores neurales; esto mediante el uso de cocultivo con células endoteliales y medio de cultivo obtenido de neuroblastomas

    Mecanismos de establecimiento de Prosthechea citrina (La Llave & Lex.) W.E. Higgins

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    Las orquídeas son uno de los grupos más amenazados a nivel mundial porque son extraídas de sus hábitats naturales, principalmente para uso ornamental, así que enfrentan disturbio antropogénico crónico y agudo. En este trabajo se ensayaron técnicas de establecimiento in situ de Prosthechea citrina, una orquídea epífita, protegida por el gobierno mexicano, de la cual en el estado de Morelos sólo queda una población. Se investigó la estructura de la comunidad de epífitas y sus relaciones con los hospederos de P. citrina en el bosque de encinos donde habita, y se encontró una comunidad de epífitas dominada por bromelias, la población de P. citrina es de 15 individuos y constituye el 1% de los individuos de epífitas. Las epífitas tienen una distribución sesgada entre las especies de hospederos, habiendo preferidos y limitantes, y la calidad de los hospederos determina su red de interacción. Se entrevistó al 18% de la población local para conocer si la baja abundancia de P. citrina en el bosque es ocasionada por el uso de los pobladores de la zona; se encontró que la especie es conocida y aprovechada por la población desde hace lustros; sin embargo, su aprovechamiento no ha estado ligado a una celebración, así que la forma de disturbio antropogénico es crónica pero no aguda. Se realizó un ensayo de establecimiento in situ, en éste se germinaron semillas sobre dos especies de árboles (Acacia farnesiana, hospedero preferido; Quercus magnoliifolia, hospedero limitante), para evitar que las semillas se perdieran se ensayó el efecto de dos adherentes (agar y alginato) y una protección física (malla nitex)

    Síntesis estereodivergente y análisis conformacional de los ácidos cis- y trans-4-hidroxifosfopipecólicos

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    Efecto de las hormigas en el crecimiento y reproducción de tillandsia caput-medusae e. morren en el bosque tropical caducifolio de san andrés de la cal, tepoztlán

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    Resumen La mirmecofilia es la interacción entre plantas y hormigas. Existen diferentes servicios que las hormigas pueden brindar a las plantas: 1) protección contra herbívoros, 2) brindan nutrientes a las plantas, 3) dispersión de semillas y 4) polinización; a cambio las plantas ofrecen a las hormigas sitios de anidación y alimento en forma de néctar u otro tipo de recompensas. Entre las plantas mirmecófitas se encuentran algunas especies de epífitas como Tillandsia caput-medusae. En este trabajo se determinó si la ocupación por hormigas es benéfica para el crecimiento, protección y reproducción de la bromelia epífita Tillandsia caput-medusae, en un bosque tropical caducifolio de San Andrés de la Cal, Tepoztlán, Morelos. Se revisaron mensualmente plantas de T. caput-medusae durante febrero del 2017 a febrero del 2018 para conocer el ritmo y preferencia de ocupación de las especies de hormigas, el tiempo de permanencia en las plantas, las diferencias que existen entre especies de hormigas respecto a la protección de las inflorescencias y un monitoreo del crecimiento en plantas jóvenes y adultas. Además, durante la temporada de floración marzo-junio (2018) se seleccionaron 80 plantas para probar experimentalmente el efecto de las hormigas en la defensa de las inflorescencias, en el cual los factores fueron la presencia/ausencia de herbívoros y la presencia/ausencia de hormigas. Se identificaron nueve especies de hormigas asociadas a T. caput-medusae de las cuales la especie más abundante fue Camponotus rectangularis willowsi. La mayor ocupación de domacios se registró durante los meses de floración (mayo-junio) mientras que durante los meses de noviembre-febrero la ocupación de domacios fue mínima. La disponibilidad de recursos alimenticios podría ser el factor más importante para la ocupación de las plantas. Encontramos, una asociación entre la presencia de hormigas y el tamaño de las plantas, la cantidad de rosetas y la presencia de inflorescencias. También se detectó una relación entre las plantas asociadas con C. rectangularis willowsi en las cuales existe una mayor producción de frutos y mayor cantidad de flores. Al ser C. rectangularis willowsi la especie que ocupa los domacios durante la época de floración, estas plantas tienden a disminuir el daño provocado por larvas de Strymon 2 serapio por lo que su atractivo para los polinizadores no se ve reducido y su éxito reproductivo es mayor. El crecimiento de T. caput-medusae también está influenciado por la especie de hormiga asociada, siendo mayor en presencia de C. rectangularis willowsi. Finalmente, encontramos diferencias en el experimento del 2018 entre la proporción del daño a las brácteas en plantas con y sin hormigas, lo que indica que el éxito reproductivo de T. caput-medusae aumenta con la presencia de hormigas

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