Yamagata University Academic Repository

山形大学博士（看護学）学位論文(Thesis)学位論文要

髙橋, 公子

論 文 内 容 要 約 
 
 
論文題目  3年課程看護師養成所看護教員が臨地実習指導で行う 
教育実践因子構造モデル 
 
 
教育・研究領域：安全・管理支援看護学 
氏     名：髙 橋 公 子 
 
【要約】 
3 年課程看護師養成所の看護教員が意識的に取り組む教育実践の因子構造を探索し、因
子構造モデルを明らかにすることを目的に研究を行った。3 年課程看護師養成所で指導的
立場にある看護教員の面接から抽出した項目と文献を検討し作成した「臨地実習指導で行
う教育実践に関する項目」を用いて自記式質問紙調査を行った。質問項目は全て集計し、
項目分析を行った後、探索的因子分析、確認的因子分析を行いモデルの信頼性妥当性を確
認した。因子分析の結果より看護教員が臨地実習指導で行う教育実践は、【臨地指導者との
連携】【看護実践の機会の提供】【思考過程の指導】【学習への動機づけ】【受け持ち患者の
受ける医療行為に対する知識の確認】の 5 因子 26 項目が抽出され、確認的因子分析で検
証した結果、信頼性妥当性のあるモデルであることが確認できた。 
 


３年過程看護師養成所看護教員が臨地実習指導で行う教育実践因子構造モデル

山形大学博士（医学）学位論文(Thesis)学位論文要

木下, 大資

論 文 内 容 要 約 
論文題目 
 
Growth factor Midkine deteriorates pulmonary arterial hypertension via cell surface nucleolin 
(成長因子 Midkine は細胞表面の Nucleolin を介し肺動脈性肺高血圧症を悪化させる) 
 
 
責任講座：内科学第一講座          
氏  名：   木下 大資           
 
【内容要旨】（1,200 字以内） 
 
【背景】肺動脈性肺高血圧症は根本的治療のない進行性の疾患である。Midkine
は細胞増殖、抗アポトーシス、炎症細胞の遊走など、多彩な作用を有する成長
因子である。一方、Nucleolin は細胞表面に発現し、細胞増殖に関与する Midkine
の受容体の一つと考えられている。本研究では肺動脈性肺高血圧症において、
Midkine が細胞表面 Nucleolin を介して、肺動脈性肺高血圧症の進行に関与す
ると仮説を立て検討を行った。 
【方法・結果】低酸素誘導肺高血圧マウスおよび肺動脈性肺高血圧患者の血清
で Midkine の発現が見られた。Midkine 欠損遺伝子改変マウスでは低酸素誘導
肺高血圧における肺血管リモデリングおよび右室肥大が抑制されていた。肺動
脈血管平滑筋細胞(PASMC, pulmonary arterial smooth muscle cell)において
低酸素刺激により、Nucleolin の核から膜への局在変化が見られた。Midkine と
Nucleolin の免疫沈降では、低酸素刺激により Midkine と Nucleolin の相互作
用が増加した。Midkine は上皮成長因子受容体(EGFR, epidermal growth factor 
receptor)の活性化を促すが、Midkine による EGFR の活性化は、低酸素下でさ
らに増強した。Midkine による PASMC の増殖作用は、正酸素下に比べて低酸
素下ではさらに増強した。siRNA (small interfering RNA)を用いて Nucleolin
の発現を抑制すると、MidkineによるEGFRの活性化は抑制された。またEGFR
の発現を抑制すると、Midkine による EGFR 下流シグナルの ERK1/2 
(extracellular regulate kinase)の活性化が抑制された。Nucleolin 阻害剤の
AS1411 は Midkine と Nucleolin の結合を抑制し、Midkine による EGFR の活
性化および細胞増殖を抑制した。Su5416 を用いて作成したラット重症肺高血圧
モデルにおいても、AS1411 は右室収縮期血圧を有意に低下し、右室肥大を軽減
した｡組織学的検討では、AS1411 投与により肺血管リモデリングが有意に抑制
され、細胞増殖マーカーである PCNA(proliferation cell nuclear antigen)の発
現が有意に減少した。 
【結論】Midkineは低酸素刺激により細胞表面に発現したNucleolinを介して、
肺動脈性肺高血圧の進行に関与することが示唆された。 


Growth factor Midkine deteriorates pulmonary arterial hypertension via cell surface nucleolin

山形大学博士(医学)学位論文（Thesis)学位論文要

那須, 史明

論	 文	 内	 容	 要	 約 
論文題目	  
Azelnidipine reduces cell-surface expression of Cav1.2 
(アゼルニジピンによる Cav1.2膜発現量の減少) 
 
責任講座：	 	 	 	 薬理学	 	 	 	 講座 
氏	 	 名：	 	 	 那須 史明	 	 	 	 	  
 
【要約】 
背景：第三世代ジヒドロピリジン系 Ca2+チャネル遮断薬であるアゼルニジピンの
降圧作用は特徴的であり、血漿中濃度がゼロになったあとも作用が持続する。
この特徴的な作用は、アゼルニジピンが血管平滑筋に長くとどまるためである
と考えられているが、詳細は不明である。一方、電位依存性イオンチャネルは、
開口確率の変化など質的な制御に加え、チャネル数の変化である量的な制御を
受ける。受容体を量的に修飾する薬物では、しばしば血漿中濃度とその作用は
相関しないことから、アゼルニジピンの特徴的な降圧作用にも Cav1.2 の量的修
飾が関与する可能性を考えた。 
目的：アゼルニジピンが Cav1.2を量的に修飾するかどうかを明らかにする。 
方法：Cav1.2 (α1cサブユニット)、β2c及び α2δサブユニットを発現させた HEK293
細胞及び、内因性に Cav1.2 チャネルが発現しているラット肺動脈平滑筋細胞を
用いた。薬物処置による Cav1.2蛋白発現量ならびに mRNA発現量の変化を、蛍
光免疫染色法及びウェスタンブロッティング法、定量的 RT-PCR法により検討し
た。 
結果・考察：①蛍光免疫染色法：Cav1.2 チャネルを発現させた HEK293 細胞を用
いた検討によって、アゼルニジピン 10 μM 6 hr 処置により Cav1.2の膜発現量が
減少することが明らかになった。このとき細胞内にはCav1.2が存在していたが、
その局在はインターナリゼーションの初期段階である初期エンドソームとは異
なっていた。アゼルニジピンによる Cav1.2 膜発現量の減少は、ダイナミン阻害
剤である dynasore 処置では抑制されなかった。比較として用いたジヒドロピリ
ジン系 Ca2+チャネル遮断薬であるニカルジピン、アムロジピンでは、Cav1.2膜発
現量の減少は認められなかった。②ウェスタンブロッティング法：HEK293細胞
及びラット肺動脈平滑筋細胞を用いて検討したところ、アゼルニジピンは異所
性に発現させたCav1.2及び内因性のCav1.2を減少させることが明らかになった。
続いて、HEK293 細胞を用いて検討したところ、アゼルニジピンによる Cav1.2
の減少はプロテアソーム阻害剤であるMG132によって抑制された。また、アゼ
ルニジピンは Cav1.2のシャペロン蛋白である β2c蛋白を減少させなかった。③定
量的 RT-PCR法：ラット肺動脈平滑筋細胞を用いた検討によって、アゼルニジピ
ンは Cav1.2の転写には影響を与えないことが明らかになった。 
以上の結果から、アゼルニジピンによる Cav1.2 蛋白の減少にはプロテアソーム
系による分解が関与しており、その結果 Cav1.2 の膜発現量が減少している可能
性が示唆された。アゼルニジピンによるこの現象は、他のジヒドロピリジン系
Ca2+チャネルブロッカーでは見られない新たな作用である可能性が示唆された。 
 


Azelnidipine reduces cell-surface expression of CaⅤ1.2

山形大学博士（医学）学位論文（Thesis

鈴木, 朱美

解剖学的二重束前十字靱帯再建術における大腿骨骨孔作製法の比較検討

山形大学博士(理学)学位論文(Thesis

佐竹, 徳

Synthesis and Evaluation of Chloride Ion Selective Receptors

大木, 弘治

論 文 内 容 要 約 
論文題目 
Establishment of high-specific anti-podoplanin mAb and analysis of podoplanin 
expression in osteosarcoma 
 
高感度抗ポドプラニン抗体の樹立と骨肉腫におけるポドプラニン発現の検討 
 
責任講座：  整形外科学    講座 
氏  名：  大木 弘治       
 
【要約】 
 
 
骨肉腫は原発性悪性骨腫瘍の中で最も発生数が多く、早期より肺転移を来たすことが知
られている。1970 年代は 20%未満であった 5 年生存率は、近年の化学療法の発展に伴い、
初診時に転移を認めない症例では 70-90%程度にまで改善した。一方、約 14%の症例で初診
時より肺転移を認め、その 5年生存率は 20-40%程度にまで低下する。また、多剤併用での
化学療法では聴神経障害や心毒性、二次性の悪性腫瘍の発生などの問題があり、従来の化
学療法に代わる骨肉腫に対する新たな分子標的治療の開発が望まれている。 
Ⅰ型膜貫通タンパクであるポドプラニン（PDPN）は、骨肉腫をはじめ、悪性脳腫瘍、悪
性中皮腫、肺がん、食道がん、卵巣がん、精巣腫瘍など様々な悪性腫瘍で発現が認められ、
がん細胞の浸潤や転移にも関わることも報告されている。悪性脳腫瘍においては、PDPN
の発現が予後不良因子であることが知られている。一方、PDPNは血小板の C-type lectin-like 
receptor-2 に結合することで、血小板凝集を引き起こす。この結合には PDPN の platelet 
aggregation-stimulating (PLAG) domain（29から 54番目のアミノ酸配列）が関与している。
既にポドプラニンに対する抗体として NZ-1 や D2-40 が開発されているが、その抗原認識
部位は PLAG domainに対してであった。  
今回樹立した新規抗 PDPN抗体 LpMab-7は、その抗原認識部位が既存の抗 PDPN抗体
と異なり、PLAG domainの領域外で、79番目のアルギニンから 83番目のロイシンである
ことが、ELISA法、Western blot（WB）法、Flow cytometry（FCM）法より明らかとな
った。また、SaOS2、HuO9、U-2 OS、OST、NOS-1の 5種類の骨肉腫細胞株に対する反
応性を、WB法と FCM法を用いて NZ-1と比較したところ、LpMab-7とNZ-1はU-2 OS
にのみ反応した。さらに、この既存の抗 PDPN 抗体と異なる抗原認識部位をもち、骨肉腫
細胞株に対して NZ-1と同等の反応性を持つ LpMab-7を用いて、骨肉腫患者から採取した
腫瘍組織を免疫組織化学染色（IHC）すると、LpMab-7 は NZ-1 よりも高感度であった。
また、同一の骨肉腫患者の腫瘍原発巣と肺転移巣に対する IHC の比較検討では、4 症例中
3症例で原発巣よりも肺転移巣で PDPNの強発現が認められた。 
 これらの結果より、新規の抗 PDPN抗体 LpMab-7は、IHCにおいて既存の抗体よりも
高感度に骨肉腫腫瘍の PDPNを染色し、さらに肺転移巣の PDPNの発現を原発巣よりも強
く染色することから、肺転移を来たした骨肉腫症例に対する新たな分子標的治療薬として
期待される。 
 
 


Establishment of high-specific anti-podoplanin mAb and analysis of podoplanin expression in osteosarcoma

佐藤, 正道

論 文 内 容 要 約 
論文題目 
Role of transcription factor MafB for efferocytosis 
（Efferocytosisにおける転写因子MafBの役割） 
 
 
責任講座： 内科学第一講座   講座 
氏  名： 佐藤 正道        
【要約】 
【背景と目的】転写因子 MafB（ v-maf musculoaponeurotic 
fibrosarcoma oncogene homolog B）はマクロファージの分化に関与
し、細胞機能の調節に関与している。これまで、当講座では MafB
が Fcgr3 の発現を誘導することでマクロファージの貪食に関与する
ことを示した。マクロファージはアポトーシス細胞を生体内で貪
食・処理する役割も演じており、この機構はエフェロサイトーシス
として知られている。エフェロサイトーシスには Axl 受容体チロシ
ンキナーゼ（Axl）が必要であることが知られている。しかし、マク
ロファージにおける MafB とエフォロサイトーシスの関連は不明で
あり、また MafB と Axl の関連も不明である。本研究においては当
講座で樹立されたMafB発現抑制細胞（RAW264.7-MafB-shRNA 細
胞）を用いて、これら関連について検討した。 
【方法】マウスから摘出した胸腺を細胞に単離し、デキサメサゾン
処理を行いアポトーシスを誘導後、胸腺細胞を蛍光標識した。
RAW264.7-MafB-shRNA 細胞とコントロール細胞に標識アポトー
シス細胞を添加して、蛍光顕微鏡とフローサイトメトリーにて、そ
の貪食陽性細胞の割合について検討した。また、リアルタイム PCR
およびウエスタンブロッティングにて、Axlの mRNA および蛋白を
定量し比較した。さらに、Axlと GFP を同時に発現するプラスミド
ベクターまたはGFPのみを発現するコントロールプラスミドベクタ
ーを RAW264.7-MafB-shRNA 細胞に遺伝子導入し、アポトーシス
細胞に対する貪食能について比較した。 
【 結 果 】 蛍 光 顕 微 鏡 と フ ロ ー サ イ ト メ ト リ ー に て
RAW264.7-MafB-shRNA 細胞では、コントロールに比してアポトー
シス細胞貪食能が有意に低下していた。Axlの mRNA および蛋白発
現はコントロール細胞と比較し、RAW264.7-MafB-shRNA 細胞で有
意に低下していた。さらに、コントロールプラスミドを導入した
RAW264.7-MafB-shRNA 細胞と比較し、Axl を強制発現させた
RAW264.7-MafB-shRNA 細胞でアポトーシス細胞に対する貪食能
の改善が確認された。 
【結論】マクロファージにおいて、MafB は Axl の発現を誘導し、
エフェロサイトーシスを制御していることが示唆された。 


Role of transcription factor MafB for efferocytosis

山形大学博士（医科学）学位論文(Thesis)学位論文要

内海, 浩

論 文 内 容 要 約 
論文題目 
 
自主回収が行われた医療用医薬品の回収理由と販売継続の有無に関する研究 
 
所属部門： 社会環境予防医学部門 
所属講座： 医薬品医療機器評価学講座 
氏  名：  内 海  浩  
 
【内容要旨】（1,200字以内） 
【目的】 
医薬品は、高度な製造管理や品質管理によって安全性有効性を担保され、医薬品製造
販売業者は、一定品質の医薬品を市場へ供給する使命を負っている。 
これまで医療用医薬品の回収が、医薬品の製造工程上の製造管理や品質管理のどの段
階で発生した問題を理由としているのか、その結果としてその後の供給状況にどのよう
な違いが出ているかについては、明らかになっていない。 
そこで今回、過去の自主回収事例について回収理由に着目し、回収の理由が医療用医
薬品の販売継続の有無に影響を与えているかどうかを検証し、医療用医薬品の安定供給
のためには、製造管理と品質管理のどの部分に重点的な配慮をおこなうべきかを明らか
にすることにした。 
【方法】 
厚生労働省と医薬品医療機器総合機構（PMDA、以下同じ）のホームページに掲載
されている「医薬品等の回収に関する情報」を基に、企業が過去に報告した医療用医薬
品の回収の概要から回収の理由を製造工程別に大別し、品目ごとに 2016年 9月時点の
販売継続の有無を調べ、医療用医薬品の剤型別、後発医薬品と先発医薬品等（先発医薬
品、局方品、準先発医薬品を含む）の別に比較した。 
【結果】 
 内用剤は「製造起因」が有意に低く、「出荷後発生」が有意に高かった。また、注射
剤は「製造起因」が有意に高く、「出荷後発生」が有意に低かった。 
販売継続の無かった医薬品は、原体の不備を理由とする回収が先発医薬品等で多く、
溶出試験及びその他（不溶性物質の検出等）を理由とする回収が後発医薬品で多かった。
内用剤では、販売継続の無かった医薬品は後発医薬品が多かった。 
【考察】 
医療用医薬品の回収は、不具合が発生する個所が製造工程上の様々な個所であるほかに、
市場で流通している間に不具合となる事例もみられた。 
製品のライフサイクルは、医薬品の誕生から製造販売品目の承認整理までの医薬品の
サイクルを意味し、医薬品を開発後、工業化する際、医薬品の研究・開発部門から生産
部門への技術移転が、先発医薬品等及び後発医薬品の製造管理と品質管理上の課題であ
る。 
後発医薬品にとって、溶出試験不適合であることは、先発医薬品との同等性を疑わせ
るものであり、改善を行う技術的能力も不足していたため、結果として医薬品の販売継
続が困難になったものと考えられた。 
今回、回収の理由からその原因を製造工程別に検討することで、医薬品の製造管理と
品質管理に関する課題を明らかにすることができた。 
 


自主回収が行われた医療用医薬品の回収理由と販売継続の有無に関する研究

山形大学博士（医学）学位論文(Thesis

大瀧, 恵

Genotoxicity of occupational exposure of anesthesiologists to sevoflurane

山形大学博士(医科学)学位論文（Thesis)学位論文要

佐々木  , 飛翔

論	 文	 内	 容	 要	 約 
論文題目 
パーキンソン病関連分子α-シヌクレインの Ser129 リン酸化反応の効果について
の細胞生物学的解析 
所属部門：	 分子疫学	 	 	 	 	 	 部門 
所属講座：	 内科学第三	 	 	 	 	 講座 
氏	 	 名：	 佐々木	 飛翔	 	 	 	 	 	  
 
【要約】 
[背景] パーキンソン病(PD)は、神経病理学的に黒質ドパミン神経細胞の変性・脱落と異常細胞質内封入
体レビー小体(LBs)の出現によって特徴付けられる。PD脳では、LBsを構成するα-シヌクレイン（a-syn）
の約 90%が Ser129でリン酸化されている。一方、正常脳では、全体の 4%がリン酸化されているに過ぎな
い。この差は、a-synの Ser129リン酸化反応は病的状態で亢進することを示唆している。しかし、LBsにリ
ン酸化された a-synが高度に蓄積する機序は明らかではない。これまで、ミトコンドリア complex I阻害薬
の rotenoneで細胞を処理すると Ser129リン酸化が亢進すること、a-synは Ca2+と相互作用して神経毒性を
発揮することが報告されている。しかし、これらの詳細については不明である。[目的] PDの病態を明らか
にするため、a-synリン酸化体の維持機構、リン酸化反応が亢進する条件、リン酸化反応の役割について細
胞生物学的に解析した。[方法]細胞内においてリン酸化反応が亢進する条件について、Ca2+イオノフォア
A23187とキレート剤を使用した。また、ミトコンドリアを障害する MPP+と rotenoneの処理により伴う変
化を解析した。リン酸化の役割を分解系との関わりから調べるため、タンパク質合成阻害剤 cyclohexymide
（CHX）による追跡実験においてプロテアソーム阻害剤 MG132を使用して解析した。 [結果] cDNAの濃
度を変えて a-synを一過性発現させたところ、細胞内の Ser129リン酸化体量と全体の a-syn増加量は正の相
関を示していた。大脳皮質初代培養神経細胞を A23187で処理すると、リン酸化 a-syn量が増加し、この反
応は Ca2+キレート剤で抑制された。MPP+または rotenoneで SH-SY5Y細胞または大脳皮質初代培養神経細
胞を処理すると、リン酸化 a-syn量が増加し、この反応は Ca2+キレート剤で抑制された。CHXの追跡実験
において、rotenoneによって惹起される Ser129リン酸化は MG132の併用処理によって減少が有意に抑制さ
れた。 [考察] 本実験から、a-synの Ser129リン酸化は全 a-synに対して一定の割合になるよう細胞内で調
節されていること、ミトコンドリア障害によるリン酸化体の増加は細胞外から流入する Ca2+を介して生じ
ること、ミトコンドリア障害によるリン酸化は a-synをプロテアソーム分解系に向かわせることを示唆して
いた。したがって、リン酸化は、ストレス反応によって生じる a-synの蓄積を防ぐ可能性が考えられる。本
研究により、細胞内 Ca2+濃度の上昇によりリン酸化体が上昇したので、細胞内 Ca2+濃度を調節することに
より PDの治療につながる可能性が示唆された。 


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