Ehime University Institutional Repository

和田, 寿博

Japanese

2020年度観光中核人材育成講座の概要と課題

達川, まどか

藤村, 一美

陶山, 啓子

西嶋, 真理子

田中, 久美子

小岡, 亜希子

藤井, 晶子

吉田, 美由紀

在宅生活支援実習を履修した看護学生の学び

Ehime University (愛媛大学)博士(農学)thesi

MD, MANIRUL ALAM

English

In vitroにおけるデンドロビウム・キンギアナムのプロトコーム様球体(PLBs)の器官形成に関する研究

Supriadi

（様式５）(Style5) 
 
学位論文全文に代わる要約 
Extended Summary in Lieu of Dissertation 
 
 
氏名： 
Name 
Supriadi 
 
学位論文題目： 
Title of Dissertation 
Study of biological nitrogen fixation in legume and non-legume plants 
 
（マメ科植物と非マメ科植物の生物的窒素固定の研究）  
 
 
学位論文要約：   
Dissertation Summary 
 
 
 
 
Excess synthetic fertilizer usage caused emission since it produced from fossil fuel with high 
economic costs which pollute environment. Nitrogen fertilizer which is known as the biggest amount of 
synthetic fertilizer could be reduced with increase of biological nitrogen fixation. Understanding the 
mechanisms of biological nitrogen (N2) fixation in legume and non-legume expects to decrease the synthetic 
nitrogen fertilizer consumption. The symbiotic relationship between rhizobia and legume contributed to the 
major source of biological nitrogen fixation (BNF). This symbiotic system plays a significant role in 
improving the fertility and productivity of low-N soils, and widely used for strategy of cropping system and 
plant rotation. Thus, the rhizobium-legume symbiosis has received most attention and has been studied 
extensively. On the other hand, the contribution of nitrogen fixation in non-legumes is limited.  Different 
with that occurred in the root nodules of legumes, free living nitrogen-fixing bacteria (diazotrophs) and 
endophyte bacteria do not excrete mutualistic compounds to be directly used for host plant. Diazotrophic 
bacteria can enter through the sugarcane root by crack entry or by a Nod factor-independent process. 
In this study, we used legume and non-legume plants to study the symbiotic nitrogen fixation. 
Firstly, we used Lotus japonicus as a model plant for genome studies in legumes. In the second study, we 
focused on BNF in non-legume plants which is related the potential of endophytic bacteria. In the third 
study, we focused on T3SS dependent nodulation on Clitoria ternatea. 
 
 
 
 
 
（様式５）(Style5) 
 
Effect of ferritin in nitrogen fixation in Lotus japonicus 
Legume nodule requires large amount of iron for complex of such as nitrogenase and 
leghemoglobin. In nodules, ferritin is accumulated at the initial stages of nodule development and increases 
at the nodule senescence stage. We investigated the effects of overexpressing and suppressing ferritin in L. 
japonicus nodule. Acetylene reduction activity (ARA) revealed nitrogen fixation was higher by the 
overexpression of ferritin under the higher iron concentrations, while ferritin-suppressed nodule by RNAi 
was higher nitrogen fixation under lower iron concentration. Our data suggest that suppressing ferritin in 
the nodules is effective under iron deficient conditions. Over accumulated ferritin in nodule is effective 
under the higher iron conditions. In conclusion, ferritin expression plays a role in nitrogen fixation activity 
in response to various iron concentrations. Ferritin is needed to help buffer the cell iron concentration for 
effective nitrogen fixation. At low iron concentrations, ferritin accumulation is not required by L. japonicus 
nodules. 
 
 
Figure 1 Acetylene reduction activity per nodule at 5 μM (A, B), 0.005 μM (C, D), and 500 μM (E, 
F) iron-citrate concentrations. The activities were measured at 28 and 56 days after inoculation (dai). Error 
bars indicate mean ± SD. Significant differences (P < 0.05) compared with the Mesorhizobium loti-
inoculated nodules in GusRNAi and GusOx are indicated by asterisks. 
 
（様式５）(Style5) 
 
Biological Nitrogen fixation in Saccharum sinense 
BNF in sugarcane is widely studied, as it is environmentally and economically advantage. The aim 
of this study was to determine the bacterial diversity of the roots and soil using 16S rRNA gene sequencing. 
The sugarcane was sampled in two different fields: one field was where wheat was cultivated the previous 
year and the other field was where sugarcane has been grown continuously for 10 years in Kagawa Japan. 
Samples of sugeracane roots and soil were collected from three separate areas in each field. The sugarcane 
soil and roots from the field where wheat was cultivated last year were named soil-1 and root-1, respectively, 
while the soil and sugarcane roots from the field cultivated continuously with sugarcane for 10 years were 
named soil-10 and root-10, respectively. Bacterial community analysis suggested that the most abundant 
phyla in the roots and from the soil were Proteobacteria, Verrucomicrobia, Acidobacteria, and 
Actinobacteria, which represented more than 70% of the bacterial taxa in both the soil and roots. The 
microbial communities in soil-1 and soil-10 and in root-1 and root-10 were similar, indicating that the 
sugarcane continuous cropping did not change the core microbial community. Five classes were more 
dominant in the root bacterial populations than in the soil bacterial populations: α-proteobacteria, β-
proteobacteria, Cytophagia, Saprospirae, and Actinobacteria. We speculated that these classes have a 
higher potential to be isolated as endophyte nitrogen-fixing bacteria. Moreover, Sphingomonas, 
Asticcacaulis, Agrobacterium, and Rhizobium species of the α-Proteobacteria that have been identified as 
important nitrogen-fixing bacteria also found in metagenomes data. Notably, not only α-Proteobacteria but 
also β-Proteobacteria increased as root bacteria. β-Proteobacteria were dominant in the roots at 26%, an 
increase of approximately 2–3 times higher compared with the 10% in the soil.  The β-Proteobacteria 
identified in the sugarcane fields in Kagawa such as Achromobacter, Burkholderia, Ralstonia, and 
Janthinobacterium may be endogenous nitrogen-fixing bacteria. The sequencing data showed that not only 
Rhizobium sp. or Bradyrhizobium sp. but also Agrobacterium sp. contain nifH genes. The phylogenetic tree 
of 16SrRNA revealed that the isolated bacteria belong to Agrobacterium sp., Bradyrhizobium sp., and 
Rhizobium sp.  
In conclusion, we identified the soil bacteria and endophyte bacteria in the roots of field-grown 
sugarcane in Kagawa. This report is the first on S. sinense, which is used to produce wasanbon. Diversity of 
bacteria in Kagawa’s sugarcane was different from that in Brazilian and other Japanese sugarcane, S. 
officinarum, which might produce unique flavor for wasanbon sugar. Many Rhizobium sp. and 
Agrobacterium sp. with nifH are potential as nitrogen fixing bacteria.  
 
（様式５）(Style5) 
 
 
Figure 2 The relative abundance (%) for (A) phylum and (B) class of bacterial community in soil 
and root of sugarcane. The taxa represented accounted for less than 1% abundance in at least one sample. 
‘Other’ is taxa with a maximum abundance of less than 1% in each sample. 
 
 
Figure 3 Phylogenetic (neighbor-joining) tree of Isolated bacteria from sugarcane based on 
16SrRNA (A) and nifH (B) sequences. A., Agrobacterium; B., Bradyrhizobium; M., Mesorhizobium; R., 
Rhizobium; S., Sinorhizobium. The percentage of replicate trees in which the associated taxa clustered 
together in the bootstrap test (500 replicates). Evolutionary analyses were conducted in MEGA7. 
（様式５）(Style5) 
 
 
Symbiotic Nitrogen fixation in Clitoria ternatea 
C. ternatea, also known as butterfly pea or blue pea, is a perennial plant belonged the family of 
Fabaceae. Some potential application of usage from C. ternatea are natural food colorants and antioxidants 
and always used as traditional medicine such as fever, inflammation, pain, and diabetes. In this study we 
aimed to understands the effect of type three secretion system (T3SS) of isolated bacteria. C. ternatea 
produced nodules with infection of Bradyrhizobium elkanii USDA 61, however did not with T3SS mutants. 
In this study we have used Bradyrhizobium strains which have been isolated from C. ternatea nodules grown 
in Thailand. Identification of the strains based on phylogenetic analysis of 16S rRNA and ITS showed that 
B. elkanii were major bacteria for plant growth and higher nitrogen-fixing activity in C. ternatea. We also 
produced T3SS mutants. As a result, C. ternatea produced nodules after infection with T3SS mutant, 
however produced Fix- nodules (lower nitrogen fixation). These data suggest the isolated bacteria have 
positive effectors for the nitrogen fixation in C. ternatea nodule. 


Study of biological nitrogen fixation in legume and non-legume plants

Ehime University (愛媛大学)博士(医学)doctoral thesi

大野, 吏輝

OONO, Riki

（第７号様式） 
 
学位論文審査結果の要旨 
 
   氏     名 大野 吏輝 
 
 
 
 
 
   審 査 委 員 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
  主 査                                   
 
  副 査                                   
 
  副 査                                   
 
  副 査                                   
 
  副 査                                   
 
 
 
  論  文  名 
IPMN における悪性度予測因子としての術前好中球/リンパ球比の有用性 
 
  審査結果の要旨（2,000 字以内） 
                     
【背景と目的】膵管内乳頭粘液性腫瘍（intraductal papillary mucinous neoplasm;IPM
N）は、low-grade dysplasia(LGD)、intermediate-grade dysplasia（IMGD）、high-grade 
dysplasia（HGD）そして浸潤癌へと多段階に発育していく膵嚢胞性腫瘍である。HGD および
浸潤癌は LGD および IMGD と比較して有意に予後不良であり、術前に正確な悪性度を予測す
ることは治療方針決定において重要である。2017 年 IPMN 国際診療ガイドラインに診断基準
と診療方針アルゴリズムが定められているが、悪性度予測の精度はまだ十分に高くはない。 
近年末梢血中の好中球/リンパ球比（neutrophil to lymphocyte ratio; 以下,NLR）は腫瘍
促進環境と抗腫瘍免疫状態のバランスを反映していると考えられ、多くの癌腫において予後
予測因子として有用であることが報告されている。本研究では IPMN における悪性度予測に
おける術前 NLR の有用性について検討を行った。 
【材料と方法】1996 年から 2017 年までに愛媛県立中央病院消化器外科で膵切除を行い病
理組織学的に IPMN と診断された 103 例のうち、NLR に影響を与える併存疾患を有する症例お
よび術前 NLR を算出できない症例を除外した 56 例を対象とした。LGD および IMGD を “non-
malignant-IPMN”、HGD および浸潤癌を”malignant-IPMN”と定義、NLR を含む臨床放射線
学的因子と IPMN の悪性度の関係について検討を行った。この臨床研究は愛媛県立中央病院
の倫理委員会によって承認されている。 
【結果】全 56 例中 nonmalignant-IPMN は 21 例(37.5%)、malignant-IPMN は 35 例(62.5%)
であった。NLR を含む連続変数については ROC 解析 ROC 解析を用いて至適カットオフ値を
算出した。単変量解析では NLR≧2.2(P=0.001)、PNI(prognostic nutritional index)＜45
(P=0.016)、CA19-9(carbohydrate antigen 19-9)＞37U/mL (P=0.039)、嚢胞径≧30mm (P=0.
010)、壁在結節あり(P=0.010)が有意な予測因子であり、多変量解析では NLR≧2.2 (odds 
ratio[OR],9.79; 95% confidence interval[CI],2.06-45.6)、嚢胞径≧30mm(OR,4.65; 95%
 CI,1.14-18.9)、壁在結節あり(OR,4.91; 95%CI,1.20-20.1)が独立した因子として残った。
また国際診療ガイドラインの criteria である High-risk stigmata と Worrisome features
を有する症例それぞれ 31 例と 22 例について、NLR 高値群(≧2.2)と NLR 低値群(＜2.2)に分
類したところ、いずれの criteria においても NLR 高値群で有意に malignant-IPMN の割合が
多い結果となった。 
【結論】本研究において，NLR 高値は IPMN における独立した悪性度予測因子であった。ま
た NLR は術前血液検査で簡易に計測可能であり，国際診療ガイドラインをサポートするバイ
オマーカーとして有用であると考えられた。 
 
本論文の公開審査会は、令和３年１月２１日に開催された。申請者はまず本論文の内容な
らびに研究意義について英語により明解な発表を行った。審査委員からは本研究の方法や
結果の解釈、今後の展望などについて次のような質疑がなされた。１）リンパ球のサブセ
ット(CD4, CD8 など)と NLR の関係はどうか、２）NLR のカットオフ値を決めた根拠は？カ
ットオフ 2.2 という値は他の研究に較べて低いのではないか、３）NLR が特に高い値の症
例の特徴は何かあるのか、４）術後の NLR の推移はどうであったか、また NLR の経時的変
化と腫瘍の悪性度、予後との関係はどうか、５）NLR と IPMN の悪性度が関連している機序
をどう考えるのか、６）ガイドラインの criteria と NLR を組み合わせた適応基準の活用に
ついて、などであった。申請者はこれらの質問やコメントすべてに対して明確に応答し、
さらに NLR を組み入れた IPMN に対する外科治療戦略の展望について申請者の考えを詳細に
説明した。 
 
審査委員は、申請者が本論文関連領域に対して学位授与に値する十分な見識と能力を
有することを全員一致で確認し、本論文が学位授与に値すると判定した。 


IPMNにおける悪性度予測因子としての術前好中球/リンパ球比の有用性

Ehime University (愛媛大学)博士(工学)thesi

木戸, 祐吾

KIDO, Kogo

プラズマ照射による細胞への遺伝子導入現象の等価回路網解析と高周波化

Ehime University (愛媛大学)博士(医学)thesi

今村, 良樹

IMAMURA, Yoshiki

（第７号様式） 
学位論文審査結果の要旨
 氏 名 今村 良樹 
 審 査 委 員 
  主 査 
  副 査 
  副 査 
  副 査 
  副 査 
 論  文  名 
肝硬変患者における share wave elastography を用いた膵硬度測定と膵うっ血および 
インスリン分泌能との関連
   審査結果の要旨 
【背景と目的】 
肝硬変（LC）患者ではしばしば門脈圧亢進症を合併する。膵からの血流は門脈に流入するため、
門脈圧亢進症では、膵うっ血が想定される。また、LC では、進行とともに糖代謝異常をきたす
ことが知られているが、病態は解明されていない。申請者らは、これまでに造影超音波検査を用
いて膵うっ血の存在、膵うっ血とインスリン分泌能が負に関連することを見出し、膵血流が肝性
糖尿病の病態に関与する可能性を示した。一方、デメリットとしては、造影剤投与は手技が煩雑
であり、かつ侵襲を伴う可能性があげられる。そこで、申請者は、非侵襲的で比較的簡便に使用
できる shear wave elastography（SWE）に注目した。SWE はうっ血や線維化を含めた硬度の測定
に有用で、肝・脾硬度の測定による肝硬変や門脈圧亢進症の評価に用いられている。本研究では、
SWE を用いて LC 患者の膵硬度の測定を試み、その臨床的意義を検討した。さらに、LC ラットモ
デルを用いて、膵うっ血とインスリン分泌機能との関連を解析した。また、剖検によるヒト膵組
織を用いて、膵島及びβ細胞とうっ血、線維化との関連を解析した。 
【方法】 
症例対照研究として、2017 年 4 月から 2019 年 7 月まで当科に入院し、20 歳以上、BMI＜30ｋ
ｇ/m2で、膵疾患、糖尿病、門脈圧関連疾患がない者を対象とした。同意が得られ
大澤　春彦
木村　映善
青戸　守
北澤　理子
西村　和久
た 46 例のうち、アルコール換算 1 日 20g 以上の飲酒、腹部エコーで膵を視認でき
なかった症例を除外した。その結果、LC18 例と対照 21 例を前向きに解析した。SWE により
膵・肝・脾硬度を、造影超音波を用いた膵の造影剤流入・流出時間により膵うっ血を、グルカゴ
ン負荷試験における delta C-peptide immunoreactivity（ΔCPR）によりインスリン分泌能を評
価した。また、LC モデルラットを carbon tetrachloride (CCL4)を週 2 回、18 週間投与で作成
し、経静脈的ブドウ糖負荷試験によるインスリン分泌能と膵病理組織を解析した。さらに、2014
年 10 月から 2019 年 10 月まで、上記と同基準の LC12 例と対照 9 例の剖検組織を用いて、膵病
理組織を解析した。 症例対照研究(承認番号:1509014、1602002)、剖検検体を用いた研究(承認
番号:1901005)は、愛媛大学医学部附属病院臨床研究倫理審査委員会、動物実験プロトコールは
愛媛大学動物実験委員会で承認されている(番号:05-TI-82-2)。 
【結果・考察】 
症例対照研究において、SWE を用いて測定した膵・肝・脾硬度は、LC では対照と比していずれ
も上昇していた。また、膵硬度は門脈径、肝硬度、脾硬度と各々正に関連した。さらに造影超音
波を用いた検討において、膵硬度は膵うっ血の指標である time to peak、time from peak to 1
/2 peak と正に関連した。また、膵硬度は ΔCPR と負に関連した。これらのことから、SWE によ
る膵硬度値は、膵うっ血の程度の評価に用いることが可能であり、膵のインスリン分泌能と負に
関連することが示された。 
LC モデルラットにおいて、門脈圧亢進が確認され、経静脈的ブドウ糖負荷試験においてイン
スリン分泌が対照に比し低下していた。膵臓に明らかな組織学的変化はみられず、膵 β 細胞の
機能障害が示唆された。ピモニダゾールを用いた免疫組織染色において、LC モデルラットの膵
島は強く染色される領域が広く、低酸素状態にあることが示唆された。 
ヒト剖検検体を後ろ向きに検討した結果、LC では膵島あたりのインスリン陽性細胞領域が低下
していた。さらにインスリン陽性細胞領域は、膵うっ血を反映する膵静脈壁肥厚と負に関連した。
壁肥厚は、膵線維化を反映するα-SMA および Sirius Red の染色域と正に関連した。 
【結論】  
LC 患者において、SWE による膵硬度は、膵うっ血と正に、インスリン分泌能と負に関連した。
LC モデルラットでは、インスリン分泌は低下し、膵島は低酸素状態にあった。剖検では、イン
スリン陽性細胞領域は、膵うっ血、膵線維化と負に関連することが示唆された。SWE による膵硬
度は、膵うっ血を反映し、LC に伴う肝性糖尿病の病態の低侵襲な臨床的指標となりうる。 
 
公開審査会は、令和 3 年 1 月 20 日に開催され、申請者は、研究内容を英語で明確に発表した。
審査員からは、膵観察不十分による除外症例の妥当性、膵うっ血指標である time to peak に影
響する血流、CCL4の肝臓への特異性と膵臓への影響の可能性、剖検の組織と肝硬変モデルラット
での膵線維化の有無が異なる理由、膵外分泌と内分泌の線維化の関連、インスリン抵抗性に対す
る膵代償性肥大からβ細胞数低下への過程、SWE による膵硬度評価の臨床応用の可能性等、広範
に渡る質問がなされた。申請者は、いずれも明確かつ適切に回答した。 
 
以上より、審査委員は、申請者が本論文関連領域に対して学位授与に値する十分な見識と能力
を有することを全員一致で確認し、本論文が学位授与に値すると判定した。 
 


肝硬変患者におけるshare wave elastographyを用いた膵硬度測定と膵うっ血およびインスリン分泌能との関連

Megita, Ryanjani Tanuputri

（第５号様式）
学位論文審査の結果の要旨
氏 名 Megita Ryanjani Tanuputri 
審 査 委 員 
   
   
   
    
   
論  文  名 Supply Chain and Risk Analysis of Indonesian Tea: 
A Case Study in Central Java Province 
（インドネシア茶のサプライチェーンとリスク分析：中部ジャワ州の事例研究）
審査結果の要旨
インドネシア・中部ジャワ州は西ジャワ州に次ぐ茶の主産地であり、基幹作物の茶の生産は2万8,000
の農家と6,600人の関連部門雇用者の生活を支えている。労働集約型産業としての茶の生産は農村の雇用
維持や地域発展に大きく貢献する重要な役割を担っている。しかしこの10数年において世界的な供給過
剰や国内物流システムの整備不足、重層的な所有制および生産規模の零細性等に起因する品質改善の遅
れ等により、インドネシア茶の国際競争力が年々低下し、輸出量の減少と輸入の増加、茶園面積の激減
をもたらしている。こうした背景を踏まえて本論文は、茶の競争力を規定するサプライチェーンの機能
に着目し、生産流通各段階のコスト構造、小規模農家の収入構造や安定性分析、物流システムを構成す
るステークホルダー別リスク評価等を通して茶の生産流通構造を把握し、競争力改善の可能性と方策を
探ることを課題とした。
論文の主体は、主に2～4章から構成されている。第2章は、対象地域における茶のサプライチェーン
を支える経済組織構成と費用構成の解明に力点を置いた。茶のサプライチェーンを小規模茶農家、中間
流通業者（専門集荷業者、農業者協会、自営集荷業者）、商業的農園（私有、国有）、茶交易所、商工
業者（茶の加工、小分け、輸出業者）別に8つのステークホルダーに整理し、複雑な生産流通と組織構
造の実態を明らかにした。さらには、現地調査データを用いて小規模農家と中間流通業者の費用構成を
分析し、農家段階で採茶費（人件費）、中間流通業者段階で包装、配達費の割合が高く、中間流通業者
より茶農家はより高いリスクに直面していることを明らかにした。
第3章は、118軒の小規模農家、44の中間業者および商業的茶園の調査結果を用いて経済的持続可能性
の視点から茶のサプライチェーンに対する評価を行った。まず、フロートチャットの手法を用いて茶の
生産流通に関する一連の経済活動や影響要因、相互関係をステークホルダー別に整理統合し、明確なフ
レームワークを提示した。続いて国際開発省（DfID）の持続可能な暮らしのフレームワーク（SLF）を
援用してステークホルダーのSLFを明示した。こうした作業を行った上で、経済的持続性に及ぼす脆弱
主　査　　胡　　　柏
副　査　　松岡　　淳
副　査　　市川　昌広
副　査　　椿　　真一
副　査　　武藤　幸雄
 
 
性要素の影響や各種生活資産要素の重要性評価を行い、茶の生産流通から得られた経済成果は関係者の
生計を満たすには極めて不十分で経済の持続可能性が達成されていないこと、彼らの生活や生活回復力
は気候変動やCOVID等自然的、経済的、社会的ショックに大きく影響されることを明らかにし、対策や
知識普及の必要性を提起した。 
 第4章は、ISO31000: 2018ガイドラインや世界銀行のRapAgRisk (Rapid Agricultural Supply Chain Risk
 Assessment)を援用し、161軒の小規模農家、中間業者、商業的茶園から得られた調査結果に対して19の
リスク要因評価を行った。支払いの遅延は小規模農家と中間業者にとって最大リスクであり、病害、気
候変動リスクも認識されていること、中間業者にとっては需給関係の不安定性、商業的茶園にとっては
より複雑で多様なリスクに直面し、国際価格の不安定性、気候変動の影響、茶農家の確保等のリスク対
応に注力しなければならないことを明らかにし、リスク軽減策の必要性を提起した。 
 以上のように、本論文は2年間の非日常の中で小規模農家117名を含む計219名の関係者への地道な調
査、分析、検証を通して地域の基幹作物である茶のサプライチェーン構造、サプライチェーンを支える
人々（ステークホルダー）の生産・生活様態や生活の安定性・持続可能性を脅かすリスク要因等の解明
を行い、農業経営と政策の両面において実りある成果を上げた。学位論文として高い評価に値する結果
が得られたと評価できる。 
 
 本論文に関する公開審査会は令和 3 年 7 月 29 日に愛媛大学大学院連合農学研究科でテレビおよびオ
ンライン方式より開催され、申請者の論文発表と適切な質疑応答が行われた。引き続いて行われた学位
論文審査会で本論文の内容を慎重に審議した結果、全員一致して博士（農学）の学位を授与するに値す
るものと判定した。 


Supply Chain and Risk Analysis of Indonesian Tea: A Case Study in Central Java Province

北畑, 翔吾

KITAHATA, Shogo

（第７号様式） 
学位論文審査結果の要旨
 氏 名    
 審 査 委 員 
      
     
      
      
      
 論  文  名 
回腸の粘膜関連細菌叢における Sphingomonas 属の過剰増殖は原発性胆汁性胆管炎の独
立した危険因子である 
   審査結果の要旨 
【背景と目的】 
原発性胆汁性胆管炎（primary biliary cholangitis; 以下 PBC）は、慢性進行性に胆汁うっ
滞を来す自己免疫性肝疾患である。根治的治療法は未だ確立されておらず、進行した PBC
には肝移植が唯一の治療手段となる。PBC の病態には、遺伝的素因と環境因子とが想定さ
れ、環境因子として特に腸内細菌叢の変化が注目されている。動物実験では、Alphaproteo
bacteria 綱に属する細菌に感染したマウスが PBC 様の肝病変を発症することが報告され
ている。一方、PBC 患者の糞便では、細菌叢の多様性が有意に減少している（dysbiosi
s）ものの、特定の細菌の過剰増殖についての定説はない。腸内細菌叢は糞便中の管腔内細
菌叢（luminal microbiota; LM）と腸粘膜に存在する粘膜関連細菌叢（mucosal-associated m
icrobiota; MAM）とで構成されている。申請者等は、MAM が粘膜上皮の機能調整機能を
有することから、回腸末端における MAM が PBC の病態に関与しているのではないかとい
う仮説の下に、消化器内視鏡を用いて、PBC 患者の MAM を直接解析し、PBC の病態と M
AM との関連性を検討した。 
主　査　　北澤　荘平
副　査　　内田　大亮
副　査　　小川　晃平
副　査　　山之内　純
副　査　　ミヤケ　深雪
北　畑　翔　吾
【材料と方法】 
1. 2018年 3月から 2020年 1月の間に愛媛大学で大腸内視鏡を施行した患者のうち、研究同意
が得られた PBC 患者 34 人と健常人 21 人を対象とした。 
2. 内視鏡下にブラシ鉗子を用いて回腸末端の粘膜を擦過してサンプルを得た。サンプルは
-80℃で凍結し DNA を抽出した。 
3. 細菌の 16S リボソーム RNA 遺伝子の V3〜V4 領域を増幅し、アンプリコンを精製して
定量化したのち 16S rRNA シーケンスを実行し、既知の細菌の配列ごとに、97 %以上相同
な配列をまとめて Operational Taxonomic Unit を作成した。加重および非加重の UniFrac 距
離を計算し β多様性を比較した。 
4. すべての被験者はインフォームドコンセントが提供され、研究プロトコルはヘルシンキ
宣言の倫理ガイドラインに従って開発された。本研究は愛媛大学の倫理委員会によって承
認され（承認番号 1610012)、大学病院医療情報ネットワークセンター（UMIN 00004017
7）に登録されている。 
【結果と考察】 
1. 多様性評価により PBC 患者の小腸 MAM における dysbiosis の存在が明らかになった。 
2. PBC 患者では綱レベルにおいて Alphaproteobacteria 綱が有意に多かった。 
3. PBC 患者の小腸 MAM に、natural killer T cell を活性化させる Sphingomonas 属（以
下、S 属）とミトコンドリアピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体 E2（PDC-E2）と交差反
応を起こす Pseudomonas 属（以下、P 属）が、健常人と比較して有意に豊富にみられた。 
4. 上記のデータを元に、S 属と P 属の存在量が PBC リスクに関連するか評価した。得ら
れたカットオフ値をもとに S 属および P 属が豊富な群と少ない群とに分け、単変量解析で
有意であった性別を含めて多変量解析を行ったところ、S 属が豊富であることが PBC の独
立した危険因子で有ることが明らかとなった。 
5. 小腸 MAM は腸肝相関を介して、自己免疫の活性化や PDC-E2 と交差反応を引き起こす
ことで PBC の病因に重要な役割を果たす可能性が示唆された。 
【結論】 
 PBC 患者の小腸 MAM には dysbiosis が認められた。S 属と P 属の過剰増殖がみられ、S
属の過剰増殖は PBC の独立した危険因子であった。S 属増殖は PBC における環境リスク
因子である可能性があり、今後プロバイオティクスや選択的除菌など腸肝相関に基づく新
しい治療法の開発につながる可能性が示された。 
 
公開審査会は、令和３年２月３日に開催され、申請者は、研究内容を英語で明確に発表
した後に、審査員から本研究に関する以下の様な質問がなされた。 
１）腸管バリア破綻のメカニズム、２）肝移植後の原疾患再発防止への展望、３）性差
との関連性、４）口蓋扁桃摘出の適応の可能性、５）肝臓特異性と NKT 細胞との関係、
６）胆汁酸内の菌叢との関連性 
申請者は、これらの質問に対して適切に回答した。 
審査委員は、申請者が本論文関連領域に対して学位授与に値する十分な見識と能力を有
することを全員一致で確認し、本論文が学位授与に値すると判定した。 
 


Not a member yet

2020年度観光中核人材育成講座の概要と課題

在宅生活支援実習を履修した看護学生の学び

In vitroにおけるデンドロビウム・キンギアナムのプロトコーム様球体(PLBs)の器官形成に関する研究

Study of biological nitrogen fixation in legume and non-legume plants

IPMNにおける悪性度予測因子としての術前好中球/リンパ球比の有用性

プラズマ照射による細胞への遺伝子導入現象の等価回路網解析と高周波化

肝硬変患者におけるshare wave elastographyを用いた膵硬度測定と膵うっ血およびインスリン分泌能との関連

Supply Chain and Risk Analysis of Indonesian Tea: A Case Study in Central Java Province

回腸の粘膜関連細菌叢におけるSphingomonas属の過剰増殖は原発性胆汁性胆管炎の独立した危険因子である

松山市の事業所の経営課題の変化とその原因

5,362

5,403