Ehime University Institutional Repository

玉井, 輝之

大西, 義浩

森慎, 之助

薬師神, ??啓

横山, 元稀

Japanese

情報の技術の見方・考え方および課題解決型学習を取り入れたIoT 教材の開発と授業実践

櫻井, 亮輔

水口, 啓吾

否定的な自伝的記憶想起に認知的再評価が及ぼす影響 -社会性による記憶の種類に着目して-

Ehime University (愛媛大学)博士(医学)thesi

佐藤, 恵里子

SATO, Eriko

 
（第 12 号様式） 
 
 
学 位 論 文 の 要 約 
（ 研 究 成 果 の ま と め ） 
 
 
 
            氏   名  佐藤 恵里子 
 
 
            学位論文名  耳鼻咽喉科医のための結紮縫合カリキュラムの開発 
   
    学位論文の要約 
 
目的：結紮や縫合などの手術における基本的なスキルは、サブスペシャリティに関わ
らず全ての耳鼻咽喉科医にとって重要である。頭頸部外科領域の手術においては、特
に基本手技は重要であり、キャリアの早期に獲得すべきであると考えられる。一般外
科領域においては、基本手技獲得のためのカリキュラムが報告されているが、耳鼻咽
喉科領域においては未だ存在しない。本研究では、耳鼻咽喉科の多様なサブスペシャ
リティの存在を考慮したうえで、耳鼻咽喉科医に必要な結紮や縫合のスキルを明らか
にし、若手耳鼻咽喉科医に対するカリキュラムを開発することを目的とした。この研
究は愛媛大学医学部倫理委員会によって承認されている。 
 
方法：各サブスペシャリティを考慮してコンセンサスを形成するために、様々なスペ
シャリティを持つ耳鼻咽喉科医によるエキスパートパネルを編成した。このエキスパ
ートパネルで、複数回反復して無記名投票を行う RAND/UCLA 法を用いて、可能な限
り列挙した手術の際の基本的なスキルの中から耳鼻咽喉科医に必要な結紮縫合のスキ
ルを選定した。それぞれのスキルに対して、手順、エラー（縫合部分のずれやゆるみな
ど結紮縫合が失敗したと捉える行為）、制限時間、目標とするタイム・スコア（頭頸部
がん専門医のタスク実施のための所要時間の平均）、カリキュラム内でのタスクの施
行順序、次のタスクへ進むための実施回数を含めた細かなルールなどを設定した。そ
れらのルールをもとに各スキルを採点可能にする計算式を含んだタスクを作成し、カ
リキュラムを開発した。９名の卒後 3 年目の耳鼻咽喉科医を対象とし、プレテスト、
専門医レベルを目標とする熟達度ベースのセルフトレーニング、ポストテストの順に
カリキュラムを実施した。カリキュラム実施前後には自己評価やカリキュラムの評価
を目的にアンケートを実施した。 
 
結果：専門医パネルは、専門性に偏りがないように耳科、鼻科、喉頭科、頭頸部外科か
ら各 2 名、一般耳鼻咽喉科医から 3 名の、合計 11 名の耳鼻咽喉科専門医により構成さ
れた。一般外科の基本手技に関する論文や実際の耳鼻咽喉科手術における必要な基本
 
手技などから 21 の結紮縫合スキル候補が列挙され、複数回の無記名投票と専門家パネ
ルミーティングを行う RAND/UCLA 法により、タスクの選別が行われた。その結果、
参加者から基本手技カリキュラムに採用すべき重要なスキルであると同意を得られた
7 つの結紮縫合スキルが選定され、それぞれに細かなタスク（定義、エラー、制限時間
など）が作成され、カリキュラムを開発した。9 名の卒後 3 年目の耳鼻咽喉科専攻医を
対象に開発したカリキュラムを実施し、全 7 タスクで、エキスパートである専門医と
専攻医との間で点数の差を確認し、選別したタスクがカリキュラムとして有用である
ことが確認できた（p＜0.01）。また、専攻医では、有意に点数の変動係数が大きく、
ばらつきが大きい結果となった（p＜0.05）。専門医の点数を 100 点満点として目指し
たセルフトレーニング後のポストテストの点数は、プレテストと比較し有意に改善し
た（95.9 ± 3.6 vs 68.6 ± 11.6, p < 0.01）。カリキュラム実施前後のアンケートでは、
現在の自己評価は全ての参加者で実施前と比較して実施後には改善を確認できた
（p<0.01）。また実施したカリキュラムについて、全ての参加者が内容は有用である
と評価した。アンケート結果からは、自覚的に実際の手術室でのパフォーマンスが向
上し、自信へと繋がったと感じられるとの回答を得ることができた。 
 
考察：耳鼻咽喉科領域は専門分野が多岐にわたり必要なスキルも異なるが、結紮や縫
合などの基本手技は手術の安全性や耳鼻咽喉科医としてのキャリアにおいて重要であ
る。今回は RAND/UCLA 法を用いて耳鼻咽喉科医として必要で重要なスキルを選別し
た。この方法を用いることで専門性に偏りなく幅広い意見を取り入れて、耳鼻咽喉科
医として本当に必要なスキルを選択できたと考えられる。本研究においては習熟度ベ
ースのトレーニングを取り入れた。これにより各々の習熟度に合わせて練習強度が調
整され、結果的に全参加者の技術を同等のレベルまで向上できたと考えられる。若手
耳鼻咽喉科医にとって術中に実践する on-the-job training は限られているため、この
ような教育的カリキュラムによる off-the-job training を有効に活用にすることによ
り、手術手技獲得へのモチベーションの向上に加えて、医療安全面や個人の技術力の
向上を担うことができると考えられる。 
 
結論：本研究では、7 つの結紮縫合スキルが RAND/UCLA 法により選定され、熟達度
ベースのトレーニングカリキュラムが作成された。結果から、本カリキュラムが若手
耳鼻咽喉科医の手術における基本的なスキルを有意に改善することが示唆された。 
 
なお、この学位論文の内容は、以下の原著論文に既に公表済みである。 
 
主論文： 
Sato E, Mitani S, Nishio N, Kitani T, Sanada T, Ugumori T, Christopher Holsi
nger F, Baik FM, Hato N. Development of proficiency-based knot-tying and sut
uring curriculum for otolaryngology residents: A pilot study. Auris Nasus La
rynx. 2020 Apr;47(2):291-298. DOI: 10.1016/j.anl.2019.11.005.  
 


English

耳鼻咽喉科医のための結紮縫合カリキュラムの開発

Ehime University (愛媛大学)博士(農学)thesi

尾松, 数憲

OMATSU, Kazunori

（第５号様式）
学位論文審査の結果の要旨
氏 名 
審 査 委 員 
  論  文  名
農福連携における協同組合の役割
審査結果の要旨
 農福連携は、障がい者等に農業関連活動に従事する場を提供することを通じて社会参画や経済自立を
助け、促す仕組みであり、近年、福祉等社会政策や地域活性化対策としても注目されている。農福連携
の推進によって障がい者等の就労や人間発達の場を創出するだけでなく、高齢化進行で担い手不足と懸
念される農業の働き手の確保に寄与する可能性もある。他方では、農業と福祉を連携して行うソーシャ
ルビジネスとして多方面の連携・協働が不可欠であり、協同組合の役割が期待されているが、学術研究
の蓄積は非常に少ない。本論文はこの点に着目し、農福連携に果たす協同組合の役割の解明を試みたも
のである。
 本論文は、序章を含む５つの章から構成されている。第１章では、代表的な先行研究や国・自治体の
関連施策を取り上げて考察した。これまでの関連研究で協同組合の役割や地域ネットワークの視点が欠
け、農福連携が障がい者の人間発達や自立にどのような役割を果たしたかの解明に至っていないこと、
国や自治体の関連施策は農業生産における活動の場の提供、農産物の付加価値向上、農業を通じた障が
い者の自立支援に力点を置いてきたことを指摘した。
 第２章は、農福連携における協同組合の役割を歴史的経緯と事例研究の両方から考察した章である。
前半では、農福連携の歴史的経緯を戦前・戦後の協同組合の源流と福祉思想、JA（農業協同組合）の福
祉理念と活動、近年のJA活動方針などの面から考察するとともに、2020年現在、全国584の農協単協に
おいて71の単協が農福連携事業に取り組んでいる実態を挙げ、農福連携は協同組合の理念、思想に合致
し、事業運営に体現されている認識を示した。後半では、前半の考察を裏付ける事例研究として京都府
京田辺市山城就労支援事業所「さんさん山城」を取り上げ、事業所開設の経緯、事業構成、取組の内容、
事務体制やサービス内容、障がい者の就労実態と効果などの面から調査研究と考察を行った。事業運営
面の特徴として、①地域に立脚した総合的な仕事づくり、②JA、行政、地域諸団体、とりわけさんさん
山城とJA京都やましろとの連携が見られたこと、こうした多面的な連携によって新商品の開発を含む多
尾松 数憲
主査　　胡 柏
副査　　松岡　　淳
副査　　市川　昌広
副査　　山本　和博
副査　　武藤　幸雄
 
 
数の事業実績を上げたことを明らかにした。障がい者の就労実態に関する意識・意向調査では、農業活
動への参加によって障がい者達は「働く場ができたこと」、「生活のリズムが規則正しくなった」こと、
「コミュニケーション力が向上」したこと、「自分に自信が持てるようになった」こと、「集団性が身
についた」、「怒りっぽくなくなった」ことなどの感触が得られ、社会的に疎外され、孤独な暮らしを
強いられた障がい就労者達が、農福連携を通して人間発達と自立に向けて着実な一歩を踏み出している
実態を明らかにした。これらの成果を生み出した主要因の１つに、事業運営を支えるJAの役割が大きか
ったことも明らかになった。 
本章ではさんさん山城のほか、愛媛県のJAの取組（JA東宇和、JA西宇和等）を取り上げ、JAにおけ
る農福連携の取組が一定の広がりを見せていること、取組がまだ決まっていない理由は主に職員体制の
不備や情報交換不足にあるなどの点を明らかにした。 
第３章は、社会的協同組合、ソーシャルビジネスまたはコミュニティビジネスの視点から農福連携の
広がりの可能性と実態についての調査研究を取りまとめた章である。実態研究の成果として、京丹後市
の（株）エチエ農産、南丹市日吉町の農事組合法人グリーン日吉、奈良県五條市の王隠堂・パンドラフ
ァームの関西地域３事例と愛媛西予市の（株）百姓百品の事例を取り上げ、それぞれの事業の背景、事
業実績とその要因、農福連携の取組を考察した。各事例は、売上の伸長やブランド育成、独自販売ルー
トの開拓などの面で堅調な実績を上げ、ソーシャルビジネスとして地域活性化に貢献するとともに、高
齢者の就労の場づくり、幅を持った人材採用、障がい者・引きこもり者の雇用等の取組で農福連携の面
においても実績を上げたことを明らかにした。（株）百姓百品の高齢者、障がい者の就労効果に関する
意識・意向調査では、「生活に潤いができた」、「規則正しい生活ができるようになった」、「友達が
たくさんできた」、「体調がよくなった」などの回答が得られ、ソーシャルビジネス、コミュニティビ
ジネスを特徴とする農福連携の取組が収入効果に限らず、高齢者、障がい者の社会参加や潤いのある地
域社会づくりにも効果を上げていることが明らかになった。 
 第４章は、上記の実態分析を基にした考察の章として、農福連携と地域共生社会づくり、福祉づくり
・福祉向上・福祉制度の改革における協同組合の役割、農福連携を通じた障がい者・高齢者の農業参加、
社会参加、農業・農村社会づくりに及ぼす農福連携の影響、農福連携の広がりと福祉社会形成などを展
望し、農福連携を包容する共生・協働社会づくりは未来社会の形づくりに示唆を与える考えを示した。 
 
 以上のように、生協の職員として長く食と農や福祉等の実務に携わり、食と農の福祉力に高い関心を
持ってきた著者は、協同組合の理念と事業への確信、福祉事業、農福連携事業への強い愛着、実務経験
を人生のハイライトとして学術論文に仕上げようとする学問への憧れ、情熱と執念をもって文献研究や
事例調査に取り組み、慣れない学会誌投稿論文の書き方を一から学び取り、学位論文の取得要件をクリ
アするまでに至った。学術論文としての記述や表現手法、事例調査結果への考察などの面で改善すべき
点も残るが、本論文が目指す農福連携と協同組合の役割解明によって得られた結果、結論は有意義であ
り、協同組合の農福連携の取組に示唆を与えるものがあると評価できる。 
 
 本論文に関する公開審査会は、令和４年１月３１日にリモートシステムを利用して開催され、論文発
表と質疑応答が行われた。引き続いて行われた学位論文審査会で、本論文の内容を慎重に審議した結果、
審査委員全員一致して博士（農学）の学位を授与するものと判定した。 


農福連携における協同組合の役割

井上, 卓

INOUE, Takashi

（第７号様式） 
学位論文審査結果の要旨
 氏 名 井上 卓 
 審 査 委 員 
      
    
      
      
      
 論  文  名 T細胞におけるヒストン H3K27 脱メチル化酵素 Utxの低下は 
接触性皮膚炎を重症化する 
審査結果の要旨 
【目的】 
アレルギー性接触皮膚炎（ACD）の病態には、エフェクターおよび制御性 T（Treg）細胞な
どの抗原特異的 T 細胞の活性化が深く関わっている。抗原特異的 T 細胞の分化や機能は、DN
A メチル化やヒストン修飾を介してエピジェネティックに調節されている。特に、ヒストン H
3K27 メチル化は T 細胞の分化・機能を決定する上で重要な働きを持つことが示されているが、
ACD の発症における T 細胞のヒストン H3K27 メチル化の変化の影響は明らかになっていない。
哺乳類では、2 種類のヒストン H3K27 脱メチル化酵素、Utx と Jmjd3 が存在する。そこで本研
究では、Utx または Jmjd3 を T 細胞特異的に欠損させたノックアウトマウスを実験に用いて A
CD 発症中の T 細胞におけるヒストン H3K27 脱メチル化酵素の役割について解析を行った。 
【方法】 
T 細胞特異的 Utx 欠損（Utx KO）マウスおよび Jmjd3 欠損（Jmjd3 KO）マウスを作成し実
験に用いた。コントロール（WT）には、C57BL/6 マウスを用いた。ACD の発症には 2-4-ジニ
トロフルオロベンゼン（DNFB）を使用した。腹部に DNFB を塗布して感作し、5、10、15 日
目に DNFB を耳介もしくは背部に反復塗布した。耳介腫脹量の推移を評価する事で炎症反応を
定量的に評価し、集積した免疫細胞の解析を行った。また、剃毛した背部を再刺激しその所属
リンパ節を回収する事で CD4+ T 細胞（Th）サブセットの分化と産生サイトカインの解析、お
主　査　　佐山　浩二
副　査　　増本　純也
副　査　　加藤　英政
副　査　　石前　峰斉
副　査　　三宅　映己
よび皮膚への移行性を検討した。また、脾臓由来ナイーブ CD4+ T 細胞を用いて、Th 分化に
対する影響を解析した。 
【結果】 
WT マウスと比較して、Utx KO マウスは 2 回目の反復塗布以後より重度の耳介炎症を呈し
たが、Jmjd3 KO マウスの症状は WT マウスと同等であった。Utx KO マウスの耳介組織にお
いて、表皮から真皮にかけて炎症細胞の有意な増加が確認された。Utx KO マウスの耳介皮膚
に集積した CD4+ T 細胞における炎症性サイトカインの発現は、有意に増加していた。一方、
CD8+ T 細胞の炎症性サイトカインの発現は WT, Utx KO 間で同等であったことから、炎症反
応の差異は、CD4+ T 細胞を介したものであると推測された。Utx KO マウスの所属リンパ節
では、炎症性サイトカインの Ifng, Csf2 mRNA の発現が有意に高かった。Utx KO CD4+ T 細
胞における皮膚向性ケモカイン受容体 Ccr4 の in vitro における発現は、Th2 細胞において増強
していた。この結果から Utx KO Th2 細胞が皮膚に移行しやすい可能性が考えられた。一方
で Treg 細胞は、Utx KO マウスにおいて分化が低下しており、Il10 や Foxp3 の mRNA 発現が
有意に低下していた。さらに、in vitro 解析で、Utx KO Treg 細胞における Ccr4 の発現が有意
に低下していた。 
【結語】 
本研究では、T 細胞における Utx の欠損は ACD を重症化させることを見出し、その原因を
明らかにするため、Utx KO Th 細胞に着目して解析を行なった。その結果、1) 抗原特異的 C
D4+ T 細胞における Ifng, Csf2, Il13 などの炎症性サイトカインの発現増強、2) Th2 細胞にお
ける Ccr4 発現の増強、3) Treg 細胞への分化能の低下、4) Treg 細胞における Ccr4 発現の低下、
を明らかにした。この 4 つの要因により、Utx KO マウスにおいて ACD による炎症が増悪し
た可能性が示された。すなわち、T 細胞において Utx は、Treg 細胞への分化を促進し炎症性サ
イトカインの発現を抑制すること、また、Th 細胞における皮膚向性ケモカイン Ccr4 の発現を
制御することが示された。今後は、Jmjd3 KO マウスを用いて同様の研究を行い、Jmjd3 KO 
マウスが ACD の重症化を呈さなかった原因を Treg 細胞への分化や Ccr4 の発現に着目し検証
する予定である。 
 
公開審査会は、令和 3 年 1 月 14 日に開催され、申請者は、研究内容を英語で明確に発表した。
その後、審査員から本研究に関する以下の質問がなされた。1) Utx KO マウスにおける遺伝
子発現、骨髄細胞・血管への影響、2) メチル化の確認、3) ヒトにおける Utx の発現、多型、
4) Utx 阻害剤投与による影響、5) 本研究の金属アレルギーなどへの臨床応用、6) Utx KO マ
ウスのアトピー性皮膚炎、乾癬モデルなどへの応用。 
 
上記の質問に対して申請者は的確に応答した。 
 
審査委員は、申請者が本論文関連領域に対して学位授与に値する十分な見識と能力を有するこ
とを全員一致で確認し、本論文が学位授与に値すると判定した。 


T細胞におけるヒストンH3K27脱メチル化酵素Utxの低下は接触性皮膚炎を重症化する

Shaikhul, Islam

Comparative analysis of mechanisms underlying the chlorosis development in transgenic tobacco expressing different chlorosis triggers

山田, 裕貴

YAMADA, Yuki

（様式５）(Style5) 
学位論文全文に代わる要約 
Extended Summary in Lieu of Dissertation 
 
 
氏名： 
Name 山田 裕貴 
学位論文題目： 
Title of Dissertation 
水産種・普通種・絶滅危惧種からみる 
国内移入魚の遺伝的問題 
 
学位論文要約： 
Dissertation Summary 
 
序論 
現在，IUCN レッドリストには約 12 万種が記載され，そのうち約 32000 種が絶滅の危機にさらさ
れている。種の絶滅リスクの一つに国外由来生物と国内由来生物による移入種問題が挙げられる。特
に，移入先に同種集団が分布する場合は遺伝的撹乱が生じ，在来集団の消失につながる。国内移入種
となった絶滅危惧種の取り扱いと保全については報告がある一方，絶滅危惧種以外の種に関する研究
は不十分である。 
本研究では，国内移入種問題における在来種が分布するパターンについて着目し，種の資源状況お
よび人間の利用状況等で水産種・普通種・絶滅危惧種のカテゴリー分けされる淡水性魚類を用いて，
それらの遺伝的問題を把握し，国内移入魚問題の要因の解明と他魚種への応用を含めた基礎的知見を
収集することを目的とした。1章では，有用水産種のアユにおいて，両側回遊型の生活史を送る海産
系統と陸封型の生活史を送る琵琶湖産系統の 2系統が唯一分布する淀川水系を対象に，遺伝的撹乱ま
たは交雑が生じているかをマイクロサテライトDNA多型解析から評価し，淀川水系および琵琶湖産
系統の放流先であった他水系において移入種問題が生じるかを議論した。2章では，普通種のオイカ
ワにおいて，他県より移入された国内移入魚として定着している可能性が高いが，在来系統の存在も
否定できず，遺伝的撹乱を受けているかもしれない愛媛県のオイカワを対象にし，その由来をミトコ
ンドリDNAの部分塩基配列変異とマイクロサテライトDNA多型解析を用いて推定した。3章では，
絶滅危惧種のオヤニラミにおいて，保全・増殖活動を行う中で非在来系統の移入が疑われた徳島県の
オヤニラミ集団を対象に，マイクロサテライトDNA多型解析を用いて，移入個体の由来推定と在来
集団の遺伝的多様性の評価を行った。 
 
水産種アユ 
種々のアユ種苗が放流されている淀川水系では，海産アユ，琵琶湖産アユのいずれの系統が定着し
て再生産に貢献しているのか明らかになっていない。淀川水系におけるアユ系統の繁殖貢献および分
布を解明するため，産卵場のアユ，河口域および沿岸域のアユ仔稚魚および遡上アユについてマイク
ロサテライトDNA多型解析による系統判別を行った。いずれの生活期においても主として海産系統
に帰属する個体が示されたが，琵琶湖産系統に帰属する個体も示され，琵琶湖産系統のアユも再生産
している可能性が高いことが明らかになった。 
（様式５）(Style5) 
普通種オイカワ 
オイカワは琵琶湖産アユの放流に伴って分布範囲を拡大しており，国内外来種として他魚種間との
競合および在来集団の遺伝的撹乱が懸念されている。愛媛県のオイカワについては在来性が不明であ
ることから，ミトコンドリア DNA の D-loop 多型およびマイクロサテライト DNA 多型により遺伝
的集団構造解析を行い，由来の推定を行った。愛媛県下 6水系 9地点および，比較として県外産 9地
点の標本を用いた結果，ミスマッチ分布においてピークが複数確認されたことから，外来系統が混入
している可能性が示唆された。また，ハプロタイプネットワークおよび STRUCTURE 解析から，外
来系統とは考えにくい遺伝子組成をもつ個体が確認されたこと，愛媛県固有のハプロタイプが確認さ
れた。また，滋賀県と愛媛県の一部の標本間で有意な遺伝的分化がみられたことから，愛媛県におい
て在来系統の存在が示唆され，なかでも猿子川の集団は在来系統の可能性が高いと考えられた。 
 
絶滅危惧種オヤニラミ 
絶滅危惧種オヤニラミの遺伝的保全管理に向け，両性遺伝する核DNA上にある多型性に富むマイ
クロサテライト領域を対象にしたマイクロサテライトマーカーを 7種開発し，徳島県のオヤニラミの
遺伝的多様性および遺伝的撹乱の有無を評価した。徳島県下 12標本個体群のうち，10標本個体群が
アレリックリッチネス 2.0未満を示し，徳島県のオヤニラミは遺伝的多様性が低かった。STRUCTURE
解析では徳島県桑野川支流南川の標本個体群は岡山県および広島県の標本個体群と同じクラスター
に帰属したことから，南川では他地域由来の放流個体によって在来系統が深刻な遺伝的撹乱を受けて
いることが示された。また，本研究の遺伝的多様性解析より，徳島県のオヤニラミ個体群における保
全上の提言を行った。 
 
総括 
本研究で対象とした淡水性魚類それぞれにおいて，人為的放流の影響の大きさが明らかになった。
水産種は資源増殖を目的とした意図的な放流が要因であり，普通種では資源増殖を目的とした意図的
な放流と，水産種アユの放流に混入した非意図的な移入が要因であった。また，絶滅危惧種は保全活
動を目的とした意図的な放流が要因であった。 
本研究で対象とした魚種において遺伝的撹乱が影響として挙げられる一方，その影響範囲は各カテ
ゴリーによって様相が異なっていた。水産種では対象とした流系全体で，陸封型系統の降下や種苗放
流によると考えられる複数系統の混在や，交雑個体の出現の遺伝的撹乱が示唆されたが，普通種では
河川によって遺伝的組成が異なり，その一部に放流事業によると考えられる県外由来の遺伝的組成が
混入する遺伝的撹乱が示唆された。絶滅危惧種においては，ある河川の支流は善意の放流によると考
えられる移入系統の集団で構成される遺伝的撹乱がみられた。 
水産種，普通種および絶滅危惧種それぞれの国内移入魚問題の要因，影響およびその範囲を踏まえ，
淡水性魚類の資源および保全管理は放流に頼らないよう実施することが必要である。もし，資源増殖
あるいは保全活動の手段として放流を行う場合には，日本魚類学会の放流ガイドラインを参考に，遺
伝的撹乱の影響を十分に評価した上で，放流場所の選定，放流の手順，放流後の活動について検討の
もとに実施することが必要である。 
 
 
(注) 要約の文量は，学位論文の文量の約１０分の１として下さい。図表や写真を含めても構いません。
(Note)  The Summary should be about 10％ of the entire dissertation and may include illustrations 


水産種・普通種・絶滅危惧種からみる国内移入魚の遺伝的問題

Ehime University (愛媛大学)博士(学術)thesi

Qiu, Juan

（第３号様式）(Form No. 3)
学 位 論 文 要 旨
Dissertation Abstract
氏名：
Name Qiu Juan
学位論文題目：
Title of Dissertation
Studies on equilibrium vitrification of oocytes and embryos using
low concentrations of cryoprotectants
(低濃度の耐凍剤を用いた卵子と胚の平衡ガラス化凍結法に
関する研究 )
学位論文要旨：
Dissertation Abstract
With original slow freezing, embryos are equilibrated with a solution containing low
concentrations of cryoprotectants and are cooled slowly to -70oC before being cooled in
liquid nitrogen (LN2). They are dehydrated sufficiently and cryopreserved in a
near-equilibrium state. Therefore, frozen embryos can be warmed slowly and transported
with dry ice. In conventional vitrification, oocytes/embryos are vitrified in
non-equilibrium state with high concentrations of glass-inducing solutes. Therefore, the
embryos cryopreserved by vitrification must be stored in LN2 and warmed very rapidly.
To enable handy transportation of vitrified embryos with dry ice, we developed
equilibrium vitrification, named EFS35c (2010, 2012). This method yielded high survival
rates in mouse embryos at various stages. However, the high toxicity and osmolality
caused by high concentrations of cryoprotectants could damage embryos. In addition, the
method is not effective for vitrification of mouse oocytes. In the present study, we
developed a new equilibrium vitrification method by which embryos are vitrified in a
near equilibrium state using a solution containing low concentrations of cryoprotectants
and thus with relatively low toxicity and osmolality.
We used two-cell embryos to develope new method. First, we vitrified embryos with
1-step or 2-step protocol in LN2, and then kept at -80oC for various period. The survival
and the developmental ability into blastocysts were higher when using 2-step. Next, we
examined the optimum protocol for embryos vitrified in LN2 and then kept at -80oC for 7
days. When embryos were pretreated with ED5/5 at 25oC for 2 min and treated with
EDFS10/10a at 25oC for 1 or 0.5 min, vitrified in LN2, and kept at -80oC for 4, 7, and 28
days, the survival (96-100%) and developmental ability (54-85%) were relatively high.
Next, we assessed the developmental ability by in vivo using C57BL/6J mice. There were
no significant differences in birth rates between vitrified and fresh embryos. Therefore,
the vitrified 2-cell mouse embryos with EDFS10/10a had the ability to develop to term.
Therefore, this new method is effective for vitrifying 2-cell mouse embryos.
Next, we examined whether this method is useful for embryos at other stages. When 4-
and 8-cell mouse embryos to vitrified with this method and then kept at -80oC for 4, 7,
and 28 days. The survival rates (97-100%) and the developmental ability in vitro
（第３号様式）(Form No. 3)
(68-89%) were quite high and no significant different with unvitrified control groups.
This indicated that embryos at these stages were vitrified in a near-equilibrium state.
However, when morulae vitrified with this method and then kept at -80oC, the survival
decreased markedly (19-55%).
When blastocysts were vitrified and then kept at -80oC for 4 days, all of blastocysts
were dead. This is would be due to the blastocoel, which contains a large amount of
water and promotes the formation of ice during cooling/warming. After collapse of the
blastocoelic cavity with a glass pipette, and then kept at -80oC for 4, 7, and 28 days. The
survival rates were quite high (65-90%). Therefore, this method is effective for mouse
blastocysts.
Finally, we examined whether this method is effective for mouse oocytes. The viability
of oocytes vitrified with EDFS10/10a and then kept at -80oC for 4, 7, and 28 days were
quite high. The rates of survival, fertilizations and ability to develop into blastocyst were
also high (88-99%, 80-90% and 55-70%, respectively).
In conclusion, we developed a new equilibrium vitrification method using low
concentrations of cryoprotectants (EDFS10/10a). This new method is effective for
oocytes, 2-, 4-, 8-cell embryos and blastocysts of mouse. Further studies are needed to
examin whether this method is effective for other species.


Studies on equilibrium vitrification of oocytes and embryos using low concentrations of cryoprotectants

Sayed, Mohammad Mohsin

（第５号様式）
学位論文審査の結果の要旨
氏 名 Sayed Mohammad Mohsin 
審 査 委 員 
     
    
     
    
    
論  文  名 
Tebuconazole and Trifloxystrobin-Mediated Abiotic and Biotic Stress Regulation in Plants: In Relation 
to Reactive Oxygen Species and Antioxidant Defense Systems 
（テブコナゾールとトリフロキシストロビンに媒介された植物における非生物的および生物的ス
トレス制御：活性酸素種と抗酸化防御システムについて）
審査結果の要旨
植物は常時種々のストレス（非生物的；塩、乾燥、金属、温度；生物的：カビ、細菌、ウイルス、昆 
虫）を受けており、そのことによって植物生理が変化し、結果として、見過ごせない生産ロスが引き起
こされる。適切な生育管理は、ストレス条件下において、植物体における機能低下を改善し、植物の成
長と生産性を向上する。本研究において、非生物および生物的ストレス下における、植物生理に及ぼす
テブコナゾール(TEB)とトリフロクシストロビン(TRI)の役割を明らかにするために五つの実験を行った。
第一の実験では、塩耐性においては中程度の農作物であるコムギを用い、塩誘導性のダメージの緩和
に及ぼす TEB と TRI の影響について調べた。コムギ幼苗を TEB と TRI で 48 時間前処理し、塩ストレス
に 5 日間供した。TEB と TRI 処理は有意に塩ストレス誘導性の成長阻害を緩和し、光合成色素および葉
の水分状況を改善した。TEB と TRI 処理は、アスコルビン酸(AsA)およびグルタチオン(GSH)含量、さら
に酵素的抗酸化活性を制御することによって、マロンジアルデヒド(MDA)および過酸化水素（H2O2)含量、
さらに電解質漏出(EL)を滅少させた。その上、TEB と TRI 処理は、塩ストレス下において、K＋/Na＋比を
向上させることによって、K＋/Na＋恒常性を制御した。 
第二の実験では、塩感受性農作物であるキュウリを用い、塩誘導性のダメージの緩和に及ぼす TEB と
TRI の影響について調べた。キュウリ植物体は、温室にて半水耕栽培によって育て、TEB と TRI 処理だ
けのもの、TEB と TRI と塩処理を同時に行ったもので調査した。TEB と TRI 処理は抗酸化防御系を向上
させることによって、酸化ストレスを軽減した。イオン恒常性については、TEB と TRI 処理によって、 
Na＋の取込みが減少し、K＋の蓄積が上昇し、Na＋/K＋比が上昇し、効果的に維持された。 
第三の実験では、コムギを用い、重金属である Cd 導性のダメージの緩和に及ぼす TEB と TRI の影響 
について調べた。コムギ幼苗は、0.25mM と 0.5mM Cd の両方で処理した。TEB と TRI 処理は、Cd の根と
上部への取り込みを抑えることにより、H202、MDA、EL、MG と LOX 活性を滅少させた。 
後半の実験では生物的ストレス下における植物ストレス耐性向上に対する TEB と TRI の役割について調
べた。 
主　査　　藤田　政之
副　査　　鈴木　利貞
副　査　　秋田　　充
副　査　　島崎　一彦
副　査　　奥田　延幸
第四の実験では、Ceratocystis fimbriata 感染サツマイモにおける、抗酸化防御系の改善効果だけで
なく、C. fimbriata 自身の成長と抗酸化活性に及ぼす阻害効果についての、TEB と TRI の潜在能力につ
いて調べた。C. fimbriata 感染サツマイモにおいて、TEB と TRI 処理は、抗酸化防御系を増強すること
によって、H202、MDA、EL と LOX 活性を減少した。しかし、TEB と TRI による C. fimbriata の直接的処
理は、C. fimbriata における、H202、MDA、EL と LOX 活性を増大し、AsA および GSH 含量減少した。 そ
れゆえに、TEB と TRI 処理は C. fimbriata の成長を阻害することによって、サツマイモにおける黒斑病
耐性を改善した。 
 第五の実験では、柑橘果実と Alternaria citri における抗酸化防御系に及ぼす、プロピコナゾール
(PRO、トリアゾールグループ）の役割と TEB と TRI の組み合わせの効果のについて調べた。柑橘果実果
皮を A.citri 単独で感染したものと、異なった濃度のトリアゾールおよびストロビルリン殺薗剤の組み
合わせで感染したものとを調べた。トリアゾールおよびストロビルリン殺菌剤は、A.citri で感染した
柑橘果実果皮において、抗酸化防御系を増強し、酸化ダメージを減少した。殺菌剤による A.citri の直
接処理は、酸化的ダメージを増大することにより A.citri の菌糸の伸長を阻害した。 
以上のことを纏めると、TEB と TRI の作用メカニズムは、抗酸化防御系の制御と深くかかわっており、 
非生物的及び生物的ストレスの両方において、植物のストレス耐性を増強することが明らかとなった。 
それ故に得られた研究成果は、TEB と TRI による外部処理は、植物のストレス耐性を向上させる有力な 
手段として期待できることを示唆している。 
以上の研究成果は、植物ストレス生理学・生化学の領域における博士論文の内容として、一定の水準 
を満たした研究であると評価できる。また、以上の研究成果は、インパクトファクターが公示されてい 
る国際的学術雑誌に、4報の論文として報告されている。 
 本学位論文に関する公開審査会は、令和 3年 7月 26 日にリモートシステムを利用して開催され、論 
文発表と質疑応答が行われた。引き続いて行われた学位論文審査委員会で、本論文の内容を慎重に審議 
した結果、審査委員全員一致して博士（農学）の学位を授与するものと判定した。 


Tebuconazole and Trifloxystrobin-Mediated Abiotic and Biotic Stress Regulation in Plants: In Relation to Reactive Oxygen Species and Antioxidant Defense Systems

青木, 理奈

鈴木, 靜

小佐井, 良太

福井, 秀樹

石坂, 晋哉

自主性育成と大学教育 -ボランティア活動を行う学生へのインタビュー調査等からの一考察-

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