Ehime University Institutional Repository

Ehime University (愛媛大学)博士(学術)thesi

Shedage, Kishor Ashok

 
 
 
（第５号様式）  
                        学位論文審査の結果の要旨 
 
    氏    名 Shedage Kishor Ashok 
審 査 委 員 
       
 
 
 
 
         論  文  名  
 
Structural Analysis of Growth Hormone (GH) in Microminipig (MMP) (超小型ブタの成長ホル
モンに関する構造科学的研究)  
 
 
 
本学位論文において、申請者は、農業組合法人富士農場サービスで、通常のミニブタより新たに作出
された超小型ブタ（マイクロミニピッグ；MMP）が持つ生理学的特長、特に超小型化の要因を遺伝子構
造に基づき解明することを目的とし、成長ホルモン（GH）遺伝子およびその周辺構造における MMP 特異
的変異の検出ならびに、遺伝子組換え技術により大量発現させたブタ GH の MMP への投与効果の評価を
行った。 
具体的には、通常ブタ、通常ミニブタ、MMP のそれぞれ複数個体より単離したゲノムを鋳型として GH
遺伝子およびその上流域を含む約３kbp の領域を PCR 法で増幅し、その塩基配列を direct sequencing 
法により詳細に比較検討した。また、申請者の所属する研究室で新たに開発した、封入体タンパク質を
天然状態へ効率的に巻き戻す反応手法を用いて、大腸菌内で封入体として発現させた遺伝子組換えブタ
GH を天然状態へと巻き戻すとともに、得られたブタ GH を MMP へ投与することによる成長促進効果を体
重増加率ならびに、体脂肪率の２つの観点から解析し、以下の成果をあげた。 
１）当研究室で開発した、封入体蛋白質の高効率巻き戻し反応技術は、大腸菌内で発現させたブタ  
GH に対しても有効であり、高い精製度の標品を高い収率で得ることにに成功した。 
２）１）により得られたブタ GH の投与により、体重の増加率は未投与個体より優位に高く、体脂肪
率は GH 投与に伴い、大きく減少することがわかった。このことから、GH の分泌量もしくは、GH
受容体の血中 GH に対する感度が MMP では低いことが個体の小型化の一因であると結論した。 
 
 
３）MMP の GH 遺伝子のエクソン領域において、シグナルペプチドに２つのアミノ酸変異を伴う変異
が存在することがわかった。この変異がもたらす生理学的影響については、現在解析中である。 
４）MMP の GH 遺伝子の TATA Box 領域に MMP に特異的変異が存在することを見出した。この変異は、
GH の遺伝子発現プロファイルが、MMP では、通常の肉豚やミニブタと比較して大きく異なってい
る可能性を示唆しており。MMP の小型化の主たる要因の一つであると結論した。 
 
以上のように、申請者は、MMP の小型化に関する GH の寄与を蛋白質・遺伝子発現の２つの観点から
解析し、重要な知見を得た。 
 
本論文の公開審査会は、平成 26 年 2 月  1 日に愛媛大学農学部において開催され、論文発表とこ
れに関連する質疑応答が行われた。 引き続き行われた学位論文審査委員会において本論文の内容につ
いて審査が行われた。 その結果、本学位論文は、動物の発生および成長過程における器官分化・形成
に関する有用な知見を示しており、バイオテクノロジーによる食糧増産などへの応用展開の基礎として
の価値のみならず、動物生理学、分子生物学、細胞生物学、発生学などの、さまざまな学問分野・領域
にまたがる、境界領域分野に属する 
 
 研究であることから、５人の審査委員全員が一致して博士（学術）の学位を授与するに値すると判
定した。 
 
 


English

Structural Analysis of Growth Hormone (GH) in Microminipig (MMP)

松原, 英世

Japanese

大学生の規範意識について

TERAYA, Ryoji

Changing spatial differentiation in the downtown areas of Japanese cities : the case of Matsuyama city, Japan

中曽, 久雄

署名者に対する戸別訪問調査の合憲性 : 名古屋高裁平成24年4月27日判決を機縁として

REINELT, Rudolf

German

Der RR-Sprechtest und Test-DaF II

MURPHY, Ron

PEACE, Ashley

A Trial Study of Integrating a Systematic Extensive Reading Component With a Proscribed Non-ER Syllabus

藤田, 勝久

肩水金関と漢代の交通 : 伝と符の用途

杉田, 浩崇

「エビデンスに基づく教育政策・実践」時代における教師の専門職性に関する一考察 : ビースタの「学習化」に対する批判を中心に

平等権審査論

Ehime University (愛媛大学)博士(医学)thesi

榎本, 大次郎

ENOMOTO, Daijiro

 
  （第 12号様式） 
 
 
学 位 論 文 の 要 約 
（ 研 究 成 果 の ま と め ） 
 
 
 
            氏   名  榎本大次郎 
 
 
            学位論文名 本態性高血圧患者における尿中 IV 型コラーゲンと腎血行動態の関係 
 
 
    学位論文の要約 
【背景】高血圧は心血管病の発症進展に関わる強力なリスクファクターであり、腎機能障害を合併す
る高血圧患者では更なる心血管病の発症リスク増大が認められる。近年、糸球体濾過機能だけでなく、
尿蛋白や尿潜血の出現を含めた腎機能異常を慢性腎臓病(chronic kidney disease : CKD)と定義し、CKD
対策が全世界的に行われている。CKD は末期腎不全への進展リスクを示すだけでなく、将来の心血管
病発症リスクを増大させ、総死亡率を増大させるためである。 
IV 型コラーゲンは糸球体基底膜やメサンギウム基質を構成する主要蛋白であり、同部の障害により尿
中への IV 型コラーゲン(urinary type IV collagen , uT4C)排出が増加することが知られている。特に糖尿
病性腎症において早期から尿中排泄が増加し、微量アルブミン尿よりも鋭敏な指標となる可能性が報
告されている。糖尿病性腎症の組織学的検討から、uT4C の上昇は糸球体基底膜の肥厚およびメサン
ギウム細胞の増殖と関連している。しかしながら、高血圧患者における uT4C の検討はなされていな
い。 
非観血的に腎機能障害を評価する方法に、超音波ドプラ法を使用した腎葉間動脈血流の測定がある。
測定された血流波形から算出された resistive index(RI)は、腎細動脈硬化や腎線維化などの組織学的特
徴を反映することが報告されている。我々は高血圧患者を対象としたこれまでの検討で、RI は頸動脈
の内膜中膜厚などの高血圧性臓器障害や耐糖能障害の程度と関連することを報告している。そこで本
研究において、私は本態性高血圧患者における uT4C 排泄量と腎動脈 RI の関連を検討した。 
【方法】対象はこれまでに降圧薬を含めた薬物治療を受けていない本態性高血圧患者 42 人である。外
来受診時、坐位安静状態の血圧測定によって、平均収縮期血圧 140mmHg 以上もしくは平均拡張期血
圧 90mmHg 以上を高血圧と診断した。RI 測定値に影響を及ぼす可能性のある冠動脈疾患、心房細動、
膠原病、肝疾患、甲状腺疾患を有する患者および二次性高血圧の患者は除外した。また、推定糸球体
濾過値(estimated glomerular filtration rate, eGFR)を算出して、既に明らかな腎機能障害を有する患者
(eGFR<30mL/min/1.73m2)も除外した。糖尿病は、空腹時血糖値≧126mg/dL あるいは随時血糖値
≧200mg/dL であった患者を糖尿病と診断した。本研究に対する同意のもとに随時尿採取と安静時採血
を行い、uT4C、尿中アルブミン(uAlb)排泄量ならびに血液学的検査を施行した。uT4C、uAlb について
 
は、尿中クレアチニン値(uCr)を用いて補正した。uT4C/uCr の値が≦7.3μg/g･Cr を正常、uT4C/uCr の
値が＞7.3μg/g･Cr を異常とした。uAlb 排泄量で 30mg/g･Cr 以下を正常、30-300mg/g･Cr を微量アルブ
ミン尿、300mg/g･Cr 以上を顕性アルブミン尿と分類した。uAlb/uCr は正規分布を来さないため、自然
対数で表記した。また、同時に腎超音波検査を施行し、ドプラ法による腎葉間動脈の血流測定を行っ
た。血流波形から収縮期最大血流速度(PSV)、拡張末期最少血流速度(EDV)を測定し、以下の式を用い
て RI を算出した。RI = (PSV – EDV) / PSV。 
【結果】対象の平均年齢は 54.7±15.5 歳で、24 人(57％)が男性であった。糖尿病の合併を 6 人に認めた。
平均収縮期および拡張期血圧は 154±17/95±15mmHg であった。平均の血清 Cr は 0.74±0.18mg/dL、eGFR
は 76±18mL/min/1.73m2、RI は 0.64±0.07 であった。24 人が正常域 uAlb、10 人が微量アルブミン尿、4
人が顕性アルブミン尿であった。顕性アルブミン尿を認めた 4 人のうち 2 人は糖尿病性腎症が原因と
考えられたが、他 2 人の原因疾患については不明であった。平均 uT4C/uCr は 4.59±2.74μg/g･Cr であ
り、36 人が正常域、6 人が高値域であった。uT4C/uCr が正常であった 36 人の中 11 人が微量アルブ
ミン尿を呈していた。 
単回帰分析では uT4C/uCr と正の相関を認めたのが、年齢(r=0.318, p=0.040)、HbA1c(r=0.356, p=0.021)、
RI(r=0.422, p=0.005)であった。血清 Cr、eGFR、uAlb/uCr とは有意な相関を認めなかった。uT4C/uCr
に影響すると考えられる年齢、収縮期血圧、eGFR、HbA1c、RI を説明変数として stepwise 回帰分析を
行った結果、RI のみが採用され、RI が uT4C 排泄量の独立した規定因子であった。糖尿病を合併した
6名および原因不明の顕性アルブミン尿を認めた 2名を除外して同様の検討を行ったところ、uT4C/uCr
と正の相関を認めたのは RI(r=0.341, p=0.048)のみであった。一方 RI と相関する因子は、年齢(r=0.440, 
p=0.004)、HbA1c(r=0.373, p=0.015)、平均拡張期血圧(r=-0.704, p=0.0001)、脈拍数(r=-0.431, p=0.004)で
あった。 
【考察】これまでの腎組織と RI の検討から、RI は腎における糸球体硬化と強く関連することが報告
されている。本研究で uT4C/uCr が RI と強く関連したことから、uT4C/uCr も糸球体硬化を示す指標
であることが考えられた。私たちは、これまでに RI が高血圧性臓器障害の指標と関連することも報告
しており、uT4C/uCr の増加は、高血圧性臓器障害が進行している可能性を示唆している。 
【結論】本態性高血圧患者における uT4C 排泄量は、腎葉間動脈血流から得られる RI と相関したこと
から、腎臓の線維化や糸球体硬化に伴う末梢血管抵抗の増大を反映し、血液学的検査では検出できな
い腎機能障害を反映することが示唆された。なお、この学位論文の内容は、以下の原著論文にすでに
公表済みである。 
主論文：Enomoto D, Okura T, Nagao T, Jotoku M, Irita J, Miyoshi K, Higaki J: Relations
hip between renal hemodynamics and urinary type IV collagen in patients with essentia
l hypertension. Clinical and Experimental Hypertension 34:612-616, 2012 DOI: 10.3109/1064
1963.2012.683911 
 


Relationship Between Renal Hemodynamics and Urinary Type IV Collagen in Paatients with Essential Hypertension

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