Ehime University Institutional Repository

榊原, 正幸

砂田, 寛雅

Japanese

「課題解決思考力を育む海外準正課プログラム」構築に向けた実践報告

Ehime University (愛媛大学)博士(医学)thesi

李, [セン]

LI, Xuan

（第７号様式） 
 
学位論文審査結果の要旨 
 
氏     名     李      璇 
審 査 委 員 
 
 
                                      
 
                                      
 
                        
        
                                      
 
                                      
 
 論  文  名  
カイニン酸投与後のプロサポシンとその受容体の変化 
   
【審査結果の要旨】本研究はプロサポシン(PSAP)とその受容体である GPR37、GPR37L1 の動
態をカイニン酸投与モデルで検討したものであり、プロサポシンのみならず神経栄養因子に関
する重要な研究である。  
 
【はじめに】PSAP は約 66kDa の糖蛋白質でサポシン A, B, C, D の前駆体である。PSAP 及び
サポシンは脳、骨格筋、心筋をはじめ全身の様々な組織で広く発現しており、サポシンではな
く前駆体 PSAP の状態でも発現している。また、PSAP は精液、胆汁、膵液、母乳及び脳脊髄液
等の様々な分泌液中にも含まれている。GPR37、GPR37L1 は G 蛋白結合型受容体であり、4 年前
に発見された(Meyer et al., 2013). カイニン酸はグルタミン酸アナログで、興奮性神経伝達
物質の放出を刺激する神経毒性物質である。申請者らは低用量のカイニン酸投与モデルを用い
て海馬等の PSAP の研究を行い、興奮性神経のみならず抑制性神経にも大きな変化のあること
を報告しており（Nabeka et al., 2014, 2015）、本研究では主要な抑制ニューロンである小
脳のプルキンエ細胞での PSAP とその受容体の変化を研究した。 
 
【材料及び方法】１０週齢の雄 Wistar ラットを用い、低用量のカイニン酸（5 mg/kg）を投
与しイムノブロット、免疫組織化学、免疫蛍光染色、in situ hybridization(ISH)を用いて P
SAP とその受容体の変化を検討した。ISH には、数個のアミノ酸配列の差も感知出来る RI を用
い AS3( Pro+9)型と AS4（Pro+0）型の PSAPmRNA の発現の差を検討した。 
【結果】イムノブロットでは抗 PSAP 抗体で約 65 kDa の部分に単一のバンドが見られ、カイ
ニン酸投与後に明らかに増加した。免疫組織化学と免疫蛍光染色ではプルキンエ細胞の細胞体
に点状の PSAP 陽性反応が見られたが細胞核には見られなかった。分子層ではインターニュー
ロンも同様の PSAP 陽性反応が見られ、カイニン酸投与後に増強していた。ISH では、カイニ
ン酸投与後に AS3( Pro+9)型の PSAPmRNA が増加し AS4（Pro+0）型の PSAPmRNA は変化が無かっ
た。受容体に対する抗体によるイムノブロットではカイニン酸投与後１日で軽度、3 日で明瞭
な GPR37 の減少が認められた。GPR37 の免疫組織化学では、プルキンエ細胞の細胞体、その樹
状突起や分子層のインターニューロンに陽性反応が見られたが、カイニン酸投与による変化は
認められなかった。 
 
【考察】PSAP は多機能な蛋白であり、サポシン A-D の前駆体として脂質代謝に関与する一方
で、プロサポシンのほぼ全長が細胞外に分泌され神経栄養因子作用を示す(Gao et al., 2013)。
本研究結果では、PSAP の発現はカイニン酸投与により増加するという以前からの海馬や大脳
皮質での結果と同様に、プルキンエ細胞でもカイニン酸投与後に PSAP は増加していた。ISH
の結果でもカイニン酸投与により PASP 産生が増加することが分かったが、AS4（Pro+0）型の
PSAPmRNA が増加する海馬や大脳皮質とは逆に、小脳では AS3( Pro+9)型の PSAPmRNA が増加し
ていた。申請者ら以外の論文では、両型の違いを ISH で示すことは出来ておらず、極めて重要
な新知見であるので、中枢神経系内の他領域を詳細に検討し、さらに次の論文作成を進めてい
る。GPR37 と GPR37L1 はオーハン受容体であり 2013 年になりようやく PSAP 受容体であること
が判明したが、中枢神経系での発現量の多さと発現部位の広さから重要な物質であることは以
前から想定されていた。本研究では GPR37 は約 50KDa に単一バンドとして認められ、この GPR
37 のバンドはカイニン酸投与後に減少しているが、免疫組織化学ではその減少は明瞭には捉
えられていない。イムノブロットでは組織全体を、一方免疫組織化学ではプルキンエ細胞に注
目して検討していることが原因と思われる。しかし免疫組織化学で用いたパラフォルムアルデ
ヒドやパラフィン包埋が反応性の低下を招いている可能性も否定出来ない。GPR37L1 に関して
は GPR37 に似た受容体として知られていたが、ほとんど報告が無い。申請者らが産生した 2 種
類の抗体と市販の抗体を用いて研究を行ったが、カイニン酸投与による明瞭な変化を捉えられ
ていない。申請者らの作成した抗体の特異性が低い可能性もある。ただし、申請者らの別のグ
ループの研究ではこの抗体により、グリアに関して明瞭な結果が出ており、GPR37 は神経細胞
に、GPR37L1 はグリアに特異的に反応する可能性は高い。そのように考えるならば、今回の結
果も納得出来る結果であり、これらの問題点も検討しながらさらに研究を続けたい。  
 
審査会は平成２９年１月３０日に開催された。発表後の質疑応答では、カイニン酸の投与法
と用量、他の領域における PSAP の発現、AS3( Pro+9)型と AS4（Pro+0）型の PSAPmRNA の発現
様式の違い、受容体 GPR37 と GPR37L1 の違い、GABA と PSAP の関係、PSAP の臨床応用、特に創
薬の可能性等について多くの質問が出され、申請者はこれらに的確に回答した。審査委員は，
申請者が本論文関連領域に対して学位授与に値する十分な見識と能力を有することを全員一
致で確認し，本論文が学位授与に値すると判定した。 
 
 


English

Expression of prosaposin and its receptors in the rat cerebellum after kainic acid injection

加地, 真弥

教育改善のためのデータ共有の試み : 愛媛大学における教学IRの事例から

中野, 広輔

フリーソフト"Web Clicker"を用いた双方向授業の経験

清水, 栄子

小林, 忠資

愛媛大学における初年次教育用教材の改訂 : 探究を志向するスタディ・スキルの育成を目指して

岡部, 雅人

てんかん発作による交通事故と刑事責任

松村, 暢彦

東川, 祐樹

防災教育ツール「クロスロード」を用いた道徳性発達効果に関する研究

寺谷, 亮司

村上, 恭通

槙林, 啓介

井口, 梓

大谷, 尚之

淡野, 寧彦

地域資源マネジメント学科文化資源マネジメントコースにおけるフィールドワーク「松山市中心部の文化資源を探る」の実践

片岡, 由香

尾形, 愛実

羽鳥, 剛史

愛媛大学生の街中サードプレイスに関する実態調査

浅川, 泰宏

四国霊場の聖年モニュメント : 御遠忌、御誕生、そして四国霊場開創の「記憶」

Not a member yet