Ehime University Institutional Repository

齋藤, 貴弘

Japanese

古代ギリシアの「巡礼」 : エレウシスの秘儀入信を中心に

川岡, 勉

四国遍路の形成をどう読み解くか : 長谷川賢二氏の講演によせて

田中, 雅人

計量テキスト分析を用いた野外活動の振り返りの分析

岡部, 雅人

福知山線列車脱線転覆事故最高裁決定(最決平成29・6・12刑集71巻5号315頁)

OYAMA, Yoshinori

NAKAYAMA, Akira

English

Timed reading training:Can it promote second language listening comprehension of Japanese learners of English?

渡邉, 敬逸

地理空間データを用いた無住化集落の特定方法の検討

Ehime University (愛媛大学)博士(医学)thesi

宇都宮, 亮

UTSUNOMIYA, Ryo

（第７号様式） 
 
学位論文審査結果の要旨 
 
   氏     名  宇都宮 亮 
 
 
 
 
 
   審 査 委 員 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                                      
 
                                      
 
                                      
 
                                      
 
                                      
 
 
       
論  文  名 ヘパリン類似物質の抗炎症作用の解析 
 
審査結果の要旨 
 【研究内容のまとめ】 皮膚のケラチノサイトは免疫担当細胞と協働して皮膚炎症を惹起する。
アトピー性皮膚炎では、皮膚のバリア機能が破綻しており、ハウスダストなどの環境刺激に暴露
されやすい。申請者らは先行論文において、ハウスダストがケラチノサイトで炎症性サイトカイ
ンである IL-1のプロセシングに関わる NLRP3 インフラマソームを活性化して、炎症性サイト
カインの産生に関わることを報告している。一方、ヘパリン類似物質は保湿剤外用薬の有効成分
であり、乾燥皮膚の治療に広く用いられている。しかし、ヘパリン類似物質軟膏によって乾燥の
関与しない疾患である扁平苔癬が治癒した報告がある。また、ヘパリン類似物質が関節リウマチ
の軟骨細胞からの炎症性サイトカインの放出を抑制することが報告されている。そこで、申請者
は、ヘパリン類似物質に抗炎症作用があると考え、そのメカニズムを解明する目的で実験を行な
った。 
 
 実験は、ヒト皮膚から採取したケラチノサイトの一次培養細胞と、living skin equivalent モデ
ルという表皮の分化を模倣したケラチノサイトの３次元培養系を用いて行なった。ケラチノサイ
トから IL-1を産生させる刺激は、コナヒョウヒダニ由来のアレルゲンである Der p を用いた。
培養上清中の IL-1量は ELISA 法で測定した。また、この時のケラチノサイト内の IL-1メッセ
ンジャーRNA 量をリアルタイム PCR 法で測定した。ケラチノサイトの増殖能は MTT アッセイ
法で評価し、死細胞の評価はトリパンブルー色素排除試験法で行なった。シグナル伝達機構に関
わるタンパク質のリン酸化の評価はウェスタンブロット法によって行なった。 
 
 その結果、Der p 刺激に対するケラチノサイト培養上清中の IL-1濃度は、ヘパリン類似物質
の添加後 1 時間で有意に抑制された。一方で、カスパーゼ１の培養上清中濃度は Der p 刺激で上
昇したが、ヘパリン類似物質添加の有無で、有意な違いはみられなかった。また、Der p 刺激に
対するケラチノサイトの IL-1メッセンジャーRNA の発現量はヘパリン類似物質の添加容量依存
性に低下した。Der p 刺激を受けたケラチノサイトでは、ERK、MAPK、p38 のリン酸化は抑制
されていたが、JNK、I-B のリン酸化に有意な違いはみられなかった。Der p 刺激によるケラチ
ノサイトからの IL-1産生は MEK 阻害剤である U0126、p38 阻害剤である SB203580 で有意に抑
制された。 
 
 以上の結果から、Der p 刺激によるケラチノサイトからの IL-1産生に対するヘパリン類似物
質の作用は、インフラマソームへの直接作用ではなく、IL-1の転写を制御する ERK、MAPK、p
38 の活性化の抑制によるものと結論した。 
 
 本論文に対する公開審査会は平成 30 年 2 月 6 日に開催された。申請者から研究内容が英語
で口頭発表された後に、審査委員から本研究に関連する以下の質問がなされた。1)ヘパリン類
似物質の皮膚への浸透性をどう評価しているか。2)in vivo の実験で、ヘパリン類似物質の保湿
効果と抗炎症効果をどのように区別して評価しているのか。3)Living skin equivalent モデルで
のヘパリン類似物質のデリバリーはどうなっているのか。4) ヘパリン類似物質は均一な物質
なのか。5)細胞傷害のアッセイ方法を複数使っているが、違いは何か。6)ヘパリン類似物質の
抗炎症作用は抗凝固作用と関係はないのか。7)ヘパリン類似物質は表皮のどの層のケラチノサ
イトに作用しているのか。8)どのような受容体を介した IL-1産生を抑制しているのか。後
発品などの製造元による作用の違いはあるのか。10)ハウスダストのアレルゲンはどのようにケ
ラチノサイトに取り込まれるのか。11)IL-1欠失マウスではアトピー性皮膚炎にならないのか。
12)マクロファージでは IL-1産生の際、ピロプトーシスという細胞死を伴うが、ケラチノサイ
トではどうか。13) ヘパリン類似物質の糖鎖の長さの違いや製品のエンドトキシンの混入によ
る影響を見ている可能性は考えられるか。ヘパリン類似物質の抗炎症作用として IL-1以外
のサイトカインが重要である可能性は考えられるか。 
 
 これらに対して申請者は、質問の意図を十分に理解した上で、詳細かつ明解に応答した。本
論文は、ケラチノサイトでの IL-1産生の新しい制御系を示した上で、その制御系に作用する
ヘパリン類似物質の抗炎症作用を初めて明らかにした。アトピー性皮膚炎の病態解明と治療に
重要な知見を含んでおり、今後の研究の発展が期待される。審査委員は一致して本論文を高く
評価し、博士(医学)の学位論文に値するものと結論した。
 
 
 
 


Heparinoid suppresses Der p-induced IL-1β production by inhibiting ERK and p38 MAPK pathways in keratinocytes

Ehime University (愛媛大学)博士(農学)thesi

中本, 英里

NAKAMOTO, Eri

 
 
（第５号様式）  
                        学位論文審査の結果の要旨 
 
    氏    名 中本 英里 
審 査 委 員 
                                     
                                  
                                
                                
                                 
     
     論  文  名     農業と医療・福祉の連携 
－ひきこもり・ニート等の支援現場を事例として－ 
 
審査結果の要旨 
 
  近年、若者のひきこもりやニート問題は大きな社会的関心事になっている。本来、学生または新生社
会人として健常で活力に満ち溢れる「若者らしい」暮らしを送るはずだった若者が、様々な理由で社会
から閉ざされた「無気力」の状態に陥り、本来発揮されるべき能力が発揮できず、本人やその家族だけ
でなく、将来社会のあり様にも影響を及ぼしかねない多大な人的資源の損失をもたらしているためであ
る。その解決に向けたアプローチは多方面に行われているが、農園芸療法を含む医療福祉的アプローチ
と、若者の社会復帰を社会・経済の側面から支援する政策的アプローチが大きな柱となっている。本研
究は、両者を組み合わせた農業と医療・福祉連携の視点から問題把握と解決策の解明を試みたものであ
り、第二章から五章まで構成される主な研究は、以下の通りである。 
 第二章は、４名のひきこもり者またはニート（心身不調のF氏、統合失調症のG氏、社会不安障害のH
氏、適応障害のI氏）を対象に、農園芸療法を適用させた経過、活動過程、活動前後の効果評価を１年
間にわたる詳細な観察と記録に基づき分析した。対象者の症状に応じた一連の農作業活動への継続的
参加を基に得られた資料や対象者の自己評価をベースに、主治医と実施者がその効果を主観的側面（
感覚、趣味、関心）と客観的側面（症状変化、睡眠、作業による改善確認等）から評価し、次に活か
していくプロセスが繰り返し実施される過程を克明に記録している。継続的な活動参加が体力づくり、
感覚運動能力の向上、社会適応の改善等の効果が確認される一方、疲労や食習慣面での未改善ケース
もあることを示した。 
第三章では、１人の若年ひきこもり者を対象に、農園芸療法と実験社会科学的アプローチを融合さ
せた実験実証的手法で考察、分析した。10か月にわたる30回の農作業活動を実施し、その結果を認知
遂行、感覚運動、心理反応、社会技能の面から評価した上、実験社会科学で求められる感応性（実験
効果の合目的性）、活動効果の非負性または単調性、合目的の優位性等を検証し確認した。対象者の
臨時就労や進学意向等で示される「社会参加への移行」を果たす中で、主治医、園芸療法士、圃場提
供者、実施者間の協働作業や対象者家族の協力が極めて重要であることも判明した。 
 第四章では、農の医療・福祉機能をさらに充実させるための条件整備面の課題として、愛媛県松山
 
 
市内の病院・診療所や「就労訓練の場」として位置付けられている全国の「地域若者サポートステー
ション」（サポステ）を対象に農園芸活動の導入状況と効果を考察した。病院・診療所へのアンケー
ト調査では、８割の回答がひきこもり・ニート支援における農園芸活動の有効性を認識し、今後も継
続または実施する意向を示した。全国のサポステへのアンケート調査では、回答の７割が農園芸活動
の導入実績があることや医療・福祉・農業関係者間の連携のメリットと課題を示した。サポステにお
ける農園芸活動の事例分析では、活動経過後の就職、復職、障害者雇用等の実績が確認され、施設の
人材確保、就職先確保、職業訓練面での課題を明らかにした。 
 第五章では、JAの取組を対象に地域農業における農業と医療・福祉連携に着目し分析を行った。全国
667のJAから246件の回答を得た調査では、JAは若者雇用等多様な地域的課題に取り組んでいるが、ひき
こもり・ニートへの取組は僅か２件にとどまっており、関心度や既存の取組への協力・関わりも極めて
低いこと、その主な理由は職員教育、時間確保、および組合員からの協力不足にあることが明らかにな
った。取組のあった事例分析では、就労体験や就労機会の確保等におけるJAの間接的な関わりや、農地
斡旋、作物選択、栽培指導等の面で協力可能であることが確認された。 
 以上のように、本論文は、ひきこもりやニートという、未来社会の活力・あり方にも影響を及ぼす極
めて重要な課題に着目し、長い時間をかけて対象者と作業を共にしながらその経過と結果を具に観察、
記録、評価し、学問的検証を経て仕上げたものである。現場と共にある研究姿勢や地道な作業によって
多くの証拠が得られた点、社会科学の分野でまだ少数にしかない実験実証的分析手法を採用した点は高
く評価される。研究成果の体系化やその政策的意味づけ、健常で活力ある地域づくり、社会づくりにお
ける本研究の位置づけ等の点で課題も残るが、学位論文として評価に値する結果が得られたと評価でき
る。 
 
 本論文に関する公開審査会は平成 30 年 2 月 3 日、愛媛大学農学部で開催され、申請者の論文発表と
適切な質疑応答が行われた。引き続いて行われた学位論文審査会で本論文の内容を慎重に審議した結果、
全員一致して博士（農学）の学位を授与するに値するものと判定した。 


農業と医療・福祉の連携 : ひきこもり・ニート等の支援現場を事例として

Ehime University (愛媛大学)博士(学術)thesi

Amol, Dahal

 
 
（第５号様式）  
                        学位論文審査の結果の要旨 
 
    氏    名      Amol Dahal 
審 査 委 員 
       
                       
                               
                                
                               
                               
         論  文  名 
    
    Study on function of type III effectors in Ralstonia solanacearum 
   （青枯病菌における III 型エフェクターの機能に関する研究） 
 
         審査結果の要旨 
 
 青枯病菌は、トマトやナスなど 200 種類以上の植物に感染し青枯れ症状を引き起こす
難防除植物病原細菌である。他のグラム陰性病原細菌と同様に、感染過程において III
型タンパク質分泌装置から分泌される III 型エフェクタータンパク質を宿主細胞に注入
し、感染を成立させる。一方、宿主植物は注入されたエフェクターを無毒化するための
タンパク質を進化させ、病気から逃れようとする。こうしたいわゆるジグザグモデルの
結果、植物病原細菌は数多くの III 型エフェクタータンパク質を保有するようになって
いる。実際に青枯病菌においては 70 種類以上のエフェクターの存在が明らかとなって
いる。それぞれのエフェクターの機能を調べる方法にはいくつかあるが、本研究におい
ては、エフェクター遺伝子と相互作用する植物タンパク質を、酵母による yeast two 
hybrid (Y2H)システムによってスクリーニングし、そこからエフェクターの機能を推測
する手法をとった。 
 青枯病菌の持つエフェクターには、配列の相同性のからなるいわゆるファミリーエフ
ェクターがいくつか知られている。そのうちのひとつが、RipG（Gala）エフェクターフ
ァミリーである。青枯病菌日本株 OE1-1 株には 7 種類の RipG エフェクターが存在して
いる。RipG ファミリーは F-box 領域と LRR (Leucine-rich repeat)領域を持つタンパク質で
ある。RipG2 を除いて、LRR は C 末端側に配置されている。フランスのグループによる
これまでの研究により、RipG エフェクターは F-box 領域を介してシロイヌナズナ Skp1 
(Suppressor of kinetochore protein 1)と結合することが示されている。植物内には多数の F-
box タンパク質が存在しており、Skp1 の他に Cullin、Rbx1 と SCF タンパク質複合体で
あるユビキチンリガーゼを形成することで、特定のタンパク質の認識とその分解に関与
している。 
 本研究では RipG ファミリーエフェクターと相互作用するタバコタンパク質を、Y2H
システムを用いて探索した。まず、２種類のタバコ植物 Nicotiana tabacum と Nicotiana 
benthamiana の葉から RNA を抽出 cDNA に逆転写したのち、酵母の GAL4-AD 領域との
融合タンパク質となるように prey ライブラリーを構築した。一方、７種類の RipG 遺伝
子を GAL4-BD 領域と融合するように bait プラスミドも構築した。両者を酵母細胞内で
 
 
共存させることで、RipG エフェクターと相互作用するタバコタンパク質を探索した。
その結果、RipG3 及び RiPG4 と相互作用するタバコタンパク質は得られなかったが、そ
れ以外の５種類の RipG タンパク質と相互作用するタバコタンパク質が複数得られた。
その中には、タバコ Skp1 も含まれていた。 
 単離された陽性クローンの配列を元に N. tabacum と N. benthamiana のそれぞれから２
種類、合計４種類の skp1cDNA の全長を増幅し GAL4-AD との融合遺伝子を構築した。
いずれの Skp1 も RipG1、RipG2、RipG5、RipG6、RipG7 と相互作用することが Y2H シ
ステムによって明らかとなった。RipG2 と RipG7 の F-box 領域を欠失させると、Skp1 と
の相互作用が確認されなかったことから、シロイヌナズナの場合と同様にタバコ Skp1
とも F-box を介して結合していることが証明された。一方、Skp1 以外のタバコタンパク
質は多様で、共通した性質は一見確認できなかったが、詳細に解析すると、細胞質で合
成された後、葉緑体に輸送される核支配の葉緑体タンパク質が大部分を占めていること
が明らかとなった。 
 スクリーニングされた葉緑体タンパク質の中から chlorophyll a-b binding protein 13 
(Nbcab13)、 chaperonin-like RbcX protein (NbrbcX)、ribulose bisphosphate carboxylase small 
chain (NbrbcS)の３種類をコードする cDNA の全長と GAL4-AD との融合遺伝子を構築
し、以降の解析に用いた。いずれの葉緑体タンパク質も RipG2 と RipG7 とのみ強く相
互作用することが確認された。RipG2 の F-box 欠失体は葉緑体タンパク質 NbCab13 と相
互作用したことから、Skp1 とは結合部位を共有しないことが明らかとなった。同様
に、RipG7 の F-box 欠失体は３種類の葉緑体タンパク質 NbCab13、NbRbcX、NbRbcS い
ずれとも相互作用したことから、Skp1 とは結合部位を共有しなかった。そこで、RipG7
の N 末端部分もしくは C 末端の LRR 領域を欠失させた誘導体を構築し葉緑体タンパク
質との結合を調べた。なお、Skp1 はいずれの欠失体とも相互作用した。NbRbcX は
LRR 欠失体との相互作用を失ったことから、LRR が結合部位であることが判明した。
一方、NbCab13 と NbRbcS の LRR 欠失体は結合能を保持していたのに対し、N 末端欠
失体との結合能を喪失した。これらのことは、葉緑体タンパク質によって RipG7 との結
合部位が異なっていることを示している。 
 これまでに F-box タンパク質である RipG7 は植物の Skp1 と結合し宿主のユビキチン
系をかく乱すると考えられてきたが、本研究により、ユビキチン系によって葉緑体タン
パク質が実際に分解されるターゲットである可能性が始めて示された。  
 青枯病菌の 2 種類のエフェクター遺伝子 popP1 と avrA はタバコにおける非病原性遺
伝子であることが示されている。日本株におけるこれら 2 種類の非病原性遺伝子につい
て解析を行った。日本株にはタバコに対して病原性を示す株と HR を誘導する株が存在
している。HR を誘導する 4 株（8107, MAFF211471, MAFF211496, MAFF301520）と病
原性を示す 1 株（OE1-1）を用いた。8107 と MAFF211471 は popP1 遺伝子を持つが、他
の株はゲノム上に popP1 を欠いている。タバコに病原性を示す株 OE1-1 から avrA を欠
失させたところ、植物体内での増殖能は増加したものの、病原力は野生株と同等であっ
た。しかしながら、8107 株の popP1 遺伝子を導入したところ、著しい病原力の低下が
確認された。また増殖能が著しく低下した。このことは OE1-1 株においては PopP1 が非
病原性因子として働くことを強く示唆している。 
 一方、HR 誘導株から avrA 遺伝子を欠失させた変異株を構築しタバコ葉に接種したと
ころ、程度の差はあるものの、いずれも HR が誘導される時間が遅くなった。しかしな
がら、接種されたタバコが枯死することはなかった。これは HR 誘導株である GMI1000
株において popP1 と avrA の非病原性遺伝子を両方欠失させると病原性を示すようにな
るという報告と異なる結果である。日本株においては、更に別のエフェクターがタバコ
における HR 誘導に関与している可能性を示唆している。  
 
 本論文に関する公開審査会は平成３０年２月３日、愛媛大学農学部で開催され、申請
者の論文発表と適切な質疑応答が行われた。引き続いて行われた学位論文審査会で本論
文の内容を慎重に審議し、審査委員全員一致して博士（学術）の学位を授与するに値す
るものと判定した。 


Study on function of type III effectors in Ralstonia solanacearum

Ehime University (愛媛大学)博士(医学)doctoral thesi

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