Ehime University Institutional Repository

Ehime University (愛媛大学)博士(工学)thesi

溝田, 裕久

MIZOTA, Hirohisa

主査 中畑 和之
副査 黄木 景二
副査 高橋 学



Japanese

時間反転法の超音波非破壊イメージングへの応用

ライネルト, ルードルフ

German

DaF: Freie Arbeiten im Detail beurteilen II

田川, 靖紘

弁識能力の一考察

Kristin ArmitAge,

English

Enhancing Japanese University Students' English Engagement and Speaking Proficiency Using Smartphones

巻頭?「図書館という社会インフラを思うこと」 / 胡柏愛媛?学ミュージアム開館?周年記念展「浅海蘇?の書業と研究展(?)」を開催?学?のインターンシップ近くのツカエル図書館(1) 愛媛県?図書館ちょっと便利な探し?(1) 近くの図書館の本を?度に探す学?にすすめるこの1冊学部別・貸出ランキング【2019 年上半期】グラフで?る愛媛?学図書館図書館からのお知らせ図書館?誌othe

愛媛大学図書館

愛媛大学図書館報「図書館だより」第107号

魁生, 由美子

KAISHO Yumiko

ソウル市恩平区における社会事業の事例研究 -コミュニティケアへ,20 年の実践から-

Ehime University (愛媛大学)博士(医学)thesi

Trivadila

（第７号様式） 
 
学位論文審査結果の要旨 
 
   氏     名  Trivadila 
 
 
 
 
 
   審 査 委 員 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                                      
 
                                      
 
                                      
 
                                      
 
                                      
 
 
      論  文  名  マスト細胞におけるトランスポーターを介するヒスタミンの 
            取り込み機構の解析 
      審査結果の要旨 
                    
【緒言】生体活性アミンであるヒスタミンはマスト細胞で産生・貯蔵され、抗原刺激により遊
離してアレルギー反応を引き起こす。マスト細胞におけるヒスタミン遊離機構の解明は培養腫
瘍細胞株であるラット好塩基球性白血病細胞(RBL-2H3)を用いた研究により進展してきたが、
マスト細胞におけるヒスタミンの取り込みに関しては細胞内ヒスタミン濃度が高いことが解析
の妨げとなってきた。申請者は新たにヒスタミン産生酵素であるヒスチジン脱炭酸酵素活性を
有さず、ヒスタミン含量が低下した RBL-2H3 細胞の亜株である RBL-2H3 Sc98 細胞を確立した。
有機カチオントランスポーター organic cation transporter（OCT 1-3）と plasma membrane
 monoamine transporter(PMAT)はヒスタミン、セロトニンやカテコラミンの“uptake-2”トラ
ンスポーターとして知られている。申請者は RBL-2H3 Sc98 細胞を用いて細胞外からのヒスタ
ミンの取り込みを確認し、さらにいずれのトランスポーターがマスト細胞におけるヒスタミン
の輸送に関与するかを明らかにする目的で、それぞれのトランスポーターに対する阻害薬の作
用と mRNA の発現を検討した。 
 
【実験方法】 
１）RBL-2H3 Sc98 細胞を 15％胎児血清と抗生物質を含む MEM 培地中で 5%CO2、37℃条件下で
培養した。 
２）ヒスタミンを RBL-2H3 Sc98 細胞に負荷したのち、細胞内へのヒスタミンの取り込み（総
ヒスタミン含量）を HPLC-蛍光法にて測定した。 
３）uptake-2 トランスポーター阻害薬のヒスタミンならびに FFN206（蛍光カチオントランス
ポーター指示薬）に対する取り込み阻害効果を検討した。Uptake-2 トランスポーター阻害薬
として decynium-22（非特異的 OCT 阻害薬）、desipramine（OCT-1 阻害薬）、cimetidine
（OCT-2 阻害薬）、corticosterone（OCT-3 阻害薬）、lopinavir（PMAT 阻害薬）を用いた。 
４）2H3 Sc98 細胞における OCT ならびに PMAT の遺伝子発現を RT-PCR 法にて検討した。 
 
【結果・考察】RBL-2H3 Sc98 細胞はヒスタミン合成酵素であるヒスチジン脱炭酸酵素活性の
低下からヒスタミン含量は RBL-2H3 細胞の 0.5％であった。RBL-2H3 Sc98 細胞は細胞外からヒ
スタミンを濃度並びに時間依存的に取り込み、EC50 は 111.4 M であった。RBL-2H3 Sc98 細胞
は小胞モノアミントランスポーター(VMAT-2)を発現しており、細胞質に取り込まれたヒスタミ
ンは VMAT-2 を介して顆粒に取り込まれ貯蔵される。RBL-2H3 Sc98 細胞において抗原刺激によ
るヒスタミンならびに -ヘキソサミニダーゼの遊離が用量依存的に認められることから開口分
泌過程は十分機能している。decynium-22 (10nM)によりヒスタミンの取り込みは 30.1%まで抑
えられた。lopinavir、desipramine の FFN206 取り込み抑制における IC50 はそれぞれ 29.1 
M、15.3 M であった。一方 cimetidine、corticosterone は抑制を認めなかった。同様に
lopinavir、desipramine のヒスタミン取り込み抑制の IC50はそれぞれ 3.78 M、 20.7 M であ
り、cimetidine、corticosterone による抑制は認められなかった。RT-PCR 法にて PMAT なら
びに OCT1 の mRNA の発現は認められたが、OCT-2、３の発現はほとんど認められなかった。 
 
【結論】粘膜型マスト細胞の培養モデル細胞である RBL2H3 細胞の亜系であり、ヒスタミン産
生能が低下した RBL-2H3 Sc98 細胞を用いて細胞外から取り込まれたヒスタミン含量を直接測
定することによりヒスタミンが有機カチオントランスポーターを介して細胞内に取り込まれ、
mRNA の発現とトランスポーターに対する阻害薬の検討から PMAT と OCT-1 が候補トランスポー
ターであることが明らかとなった。アレルギーや炎症反応において末梢組織で分化増殖するマ
スト細胞が産生するヒスタミンは開口分泌を介さずに本トランスポーターを介して細胞外に輸
送される可能性を考慮すると、本トランスポーターの生理かつ病態における役割を解明するこ
とが重要となる。 
 
審査会は平成２８年８月５日に開催された。発表後、本研究に対して質疑応答が行なわれ、
１）RBL-2H3 細胞のマスト細胞のモデルとしての妥当性、２）腹腔マスト細胞でのトランスポ
ーターの発現パターンとの比較、３）トランスポーターのタンパク質レベルでの発現の確認、
４）siRNA によるトランスポーター機能の確認、５）本トランスポーターの病態での意義 
６）uptake-2 トランスポーター阻害薬の VMAT-2 への影響、等の質問、指摘があり申請者は的
確に回答した。申請者は、本論文関連領域に対して学位授与に値する十分な見識と能力があ
ることを審査員全員一致で確認した。 
 
 
 


histamine uptake mediated by plasma membrane monoamine transporter and organic cation transporters in rat mast cell lines

上野, 義智

UENO, Yositomo

 
（第 12号様式） 
 
 
学 位 論 文 の 要 約 
（ 研 究 成 果 の ま と め ） 
 
 
 
            氏   名   上野 義智 
 
 
      学位論文名  塩素イオンチャネルタンパク質 CLIC2 のヒト癌およびその周囲組織
             における発現：血管内皮細胞におけるタイトジャンクション形成と
             の関わり 
 
    学位論文の要約 
 Chloride intracellular channel protein2(CLIC2)は、近年になって発見された塩素イオンチャンネ
ルである CLIC ファミリーに属するタンパク質で、ヒトでは CLIC 1 から 6 の 6 種類が存在する。
後生動物に広く保存されており、生命維持に重要な働きをしている可能性がある。CLIC2 は性
染色体長腕末端(Xq28)のテロメア領域に存在し、その重複や欠損が発達遅滞やてんかんに関連が
あるとの報告がある。また、CLIC2 遺伝子の変異がリアノジン受容体を刺激し、心肥大を引き
起こすとの報告もある。本研究では手術で摘出されたヒト肝細胞癌、大腸癌肝転移、大腸癌の検
体を用いて腫瘍組織とその周囲の非腫瘍組織における CLIC2 の発現や局在を検討し、その生理
的意義や癌とその遠隔転移との関わりを検討した。愛媛大学医学部附属病院で 2015 年 1 月から
2018 年 3 月の期間に手術を受けた 51 人の患者を本研究の対象とした。内訳は肝細胞癌 32 例、
大腸癌肝転移 14 例、大腸癌 6 例で、大腸癌肝転移と大腸癌を同時切除した 1 例を含んでいる。
本研究は愛媛大学医学部附属病院臨床研究倫理審査委員会の承認を受けている。 
 定量的 RT-PCR (qPCR)で肝細胞癌、転移癌、大腸癌患者の腫瘍組織と腫瘍周囲組織の CLIC1,
 2, 3, 4, 5 の mRNA 発現量を調べたところ、CLIC2 の mRNA 発現は腫瘍組織で低く、腫瘍周囲
組織のほうが高かった。CLIC1, 4, 5 では差がなく、CLIC3 はほとんど発現していなかった。ま
た、肝細胞癌では CLIC2 mRNA 発現量は肝障害や肝線維化によって抑制されていた。ウェスタ
ンブロッティングでは、CLIC2 タンパク質量も腫瘍組織で少なく、腫瘍周囲組織で多い事が判
明した。 
 免疫化学染色では、肝臓の腫瘍周囲組織において、CLIC2 はクッパー細胞と内皮細胞に強く
発現し、肝細胞には発現していなかった。免疫蛍光多重染色で大腸癌周囲組織を染色したところ、
血管内皮細胞に CLIC2 が特に強く発現していることを見出した。しかし、癌組織内では血管内
皮細胞であっても CLIC2 発現は弱い、または発現が確認できなかった。CLIC2 の中等度の発現
は、間質の線維芽細胞様細胞、CD11b 陽性マクロファージ様細胞等に見られた。また、血管内
皮細胞において CLIC2 は主に細胞膜直下と核内に分布しており、塩素イオンチャネルとしては
機能していないと考えられた。CLIC2 は、内皮細胞間の接着部位に比較的集積していたため、
タイトジャンクション構成タンパク質である claudin 1 と二重染色したところ共局在が確認でき
 
た。claudin 1 は、腫瘍内血管やリンパ管には発現が見られなかった。Claudin1 mRNA は肝細胞
癌と転移癌では腫瘍周囲組織で強く発現していた。その他のタイトジャンクション構成タンパク
質である claudin5、occludin、Zo-1 も正常大腸の内皮細胞に発現していたが、リンパ管内や腫瘍
組織の血管内では発現が弱かった。 
 肝細胞癌の腫瘍組織と腫瘍周囲組織を単細胞に分散させて、フローサイトメリーによりソーテ
ィングし、内皮細胞(CD31+/CD45-)と(CD31+/CD45+)細胞、(CD31-/CD45+)の細胞に分けて、mR
NA 発現を検討した。その結果、腫瘍周囲組織の内皮細胞で CLIC2 及び、タイトジャンクション
タンパクである claudin1、occludin、ZO-1 の mRNA を強く発現していた。腫瘍組織内内皮細胞で
はいずれも低い発現であった。 
 HUVEC を用いて Transmigration assay を行った。正常 HUVEC と CLIC2 をノックダウンした
HUVEC で monolayer を形成させ、ヒト舌癌細胞（SAS）を用いて通過性を比較すると、CLIC2
をノックダウンした monolayer を通過した SAS が有意に多かった。 
 CLIC2 は、タイトジャンクションタンパク質とともに非腫瘍組織血管内皮に限局して発現し
ており、リンパ管内皮や癌組織血管には発現していなかった。この結果は、CLIC2 が正常血管
内皮のタイトジャンクション形成またはその維持に関与しており、その結果、血行性遠隔転移の
抑制と関連していると考えられた。 
 この学位論文の内容は、以下の原著論文に既に公表済みである。 
主論文：Ueno Y, Ozaki S, Umakoshi A, Yano H, Choudhury M.E, Abe N, Sumida Y,     
Kuwabara J, Uchida R, Islam A, Ogawa K, Ishimaru K, Yorozuya T, Kunieda T,         
Watanabe Y, Takada Y & Tanaka J:Chloride intracellular channel protein2 in cancer and  
non-cancer human tissues : relationship with tight junctions. Tissue Barriers. 2019;7(1):1593
775.    DOI:10.1080/21688370.2019.1593775.  
 
 
 


Chloride intracellular channel protein 2 in cancer and non-cancer human tissues: relationship with tight junctions

山内, 俊史

YAMAUCHI, Toshifumi

 
 
（第７号様式） 
 
学位論文審査結果の要旨 
 
氏     名 山内 俊史 
審 査 委 員 
 
 
                                      
 
                                      
 
                                      
 
                                      
 
                                      
      論  文  名    胎児発育不全マウスにおけるアンギオテンシンⅡ２型受容体の働き 
       
審査結果の要旨 
【背景】               
 WHO によると、世界の全出生のうち 15％が出生体重 2500g 未満の低出生体重児であるとされ
ている。FGR(fetal growth restriction)はその主な原因の一つだが、FGR は乳児期のみならず、成
人期の心血管病、代謝疾患などの危険因子となることが、疫学や動物研究により指摘されている。
このように生育期にうけたプログラミングが成人期の健康に影響を与えるという概念は DOHaD
(developmental origins of health and disease)と呼ばれ注目されている。 
 申請者らは以前、FGR マウスにおいて、血管障害による血管リモデリングが非 FGR マウスに
比べ増強することを報告した。一方でレニンアンギオテンシン系(renin angiotensin system, RAS)
は高血圧をはじめとした心血管病の病態に深く関わっており、中でもアンギオテンシン II2 型
受容体（AT2R）は心臓血管疾患に対して保護的役割を果たすとされている。また AT2R は、成
体組織よりも胎児組織において発現量が多く、胎児の臓器発生にも重要な役割を果たすと考えら
れている。 
FGR により成人期の心血管疾患が増加するとされるが、この時 RAS が影響を与えている可能
性がある。妊娠高血圧症候群や FGR における RAS に焦点を当てた報告はいくつかあるものの、
これまで遺伝子改変マウスを用いて FGR における RAS の効果を調べた研究はない。申請者は、 
AT2R ノックアウト（AT2KO）マウスを用い、FGR において AT2R が心血管に与える影響を検討
した。 
【方法と結果】 
野生型 C57BL/6J(WT)マウスと AT2R ノックアウト（AT2KO）マウスを用いて FGR モデルを
作成した。FGR は母体の蛋白制限による FGR モデルを使用した。10 週齢のマウスを蛋白通常蛋
白（NP）群と低蛋白（LP）群に分け、出産まで栄養を与えた。出生後は全て通常蛋白食に変更
 
 
し、出生した仔マウスを使用した。WT-NPO, WT-LPO, AT2KO-NPO, AT2KO-LPO の 4 群とし
て検討を行った。 
LPO 群はそれぞれ NPO 群と比較して有意に出生体重の低下を認め、蛋白制限により FGR が
誘導されたと考えられた。12 週齢で心拍、血圧を計測したがそれぞれ有意な差は認めなかった。
2、6、12 週齢で心臓、肝臓、腎臓、脳の臓器重量を計測し体重による補正を行った。2 週 6 週で
は有意差はなかったものの、12 週齢において AT2KO-LPO の心臓重量/体重と腎臓重量/体重の比
は、他の群より有意に高かった。 
次に 6 週齢、12 週齢に心臓中央部の短軸切片を作成し HE 染色で心筋細胞と心室壁肥厚の評価
を行い、エラスチカ・ワンギーソン染色で間質の繊維化と動脈周囲の繊維化を評価した。動脈周
囲繊維化については動脈径との比で比較を行った。12 週齢において AT2KO-LPO では左室肥大、
心筋細胞肥大を認めた。また間質の繊維化に有意差は認めなかったが、血管周囲の線維化は亢進
していた。6 週齢、12 週齢の心臓組織においてリアルタイム RT-PCR を行い AT1R、AT2R と、1
型コラーゲン、IL-6, MCP-1, IL-1β、TNF-αの mRNA 発現を検討した。コラーゲン I および炎症
性サイトカインの mRNA 発現は、6 週齢で AT2KO-LPO 心臓で有意な上昇を認めたが、12 週齢
では有意差はなかった。  
血管リモデリングの評価として炎症性血管障害モデルを作製し in vivo の実験を行った。各４
群の 10 週齢のマウスの大腿動脈にポリエチレンカフを留置し、カフ留置 2 週後に大腿動脈を採
取した。エラスチカ・ワンギーソン染色により血管内の新生内膜を評価した。WT において LPO
は NPO に比べ新生内膜の増加を呈したが、AT2KO においては LPO は NPO と比較し有意な増加
は認めなかった。 
【結論】 
以上のことから、FGR であった場合、AT2R のシグナル伝達が成人期の心血管障害に影響を与
える可能性がある。AT2R を調節することで、FGR に対し将来の心血管疾患の予防に寄与する可
能性が示唆された。 
 
 公開審査会は、平成 31 年 2 月 25 日に開催され、申請者は、研究内容を英語で明確に発表し
た後に、審査員から (1) 研究の着眼点、(2) マウスのタイプの掛け合わせ方、(3) 生後の体重
増加のキャッチアップの影響、(4)KO マウスの母体差、(5) 6 週と 12 週の結果の違い、(6)マウ
スの餌で蛋白以外の成分の影響について、(7) 実験中の麻酔や血圧測定の精度・誤差、(8) 将来
展開、等の質問がなされた。これらの質問に対し申請者は明確に応答した。 
審査委員は、申請者が本論文関連領域に対して学位授与に値する十分な見識と能力を有するこ
とを全員一致で確認し、本論文が学位授与に値すると判定した。  
 
 
 
 
 
 
 


Roles of angiotensin II type 2 receptor in mice with fetal growth restriction

Ehime University (愛媛大学)博士(医学)doctoral thesi

清家, 史靖

SEIKE, Fumiyasu

（第７号様式） 
 
学位論文審査結果の要旨 
 
   氏     名  清家 史靖 
 
 
 
 
 
   審 査 委 員 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                                      
 
                                      
 
                                      
 
                                      
 
                                      
 
 
       
論  文  名  血管内超音波を用いた冠動脈狭窄の冠血流予備量計算手法 
 
      審査結果の要旨 
【研究内容のまとめ】 
FFR(冠血流予備量)に基づき治療を施行した場合、虚血性心疾患の予後が改善することが報 
告されており、本邦においても使用頻度が年々増加している。 FFR は冠動脈狭窄度、冠動脈
狭窄長のほか、冠動脈潅流範囲、末梢循環障害、側枝の分岐などが影響するとされており、単
純な解剖学的指標と FFR は乖離すると報告されている。 
IVUS(血管内超音波)を用いたエビデンスも著しく進歩している。しかし、IVUS の単純狭窄度
や狭窄長を用い、FFR の低下を推測する研究は多々報告されている。しかしながら、虚血に対
する高い相関を示すことは出来ていない。従って、現時点では解剖学的狭窄度と心筋虚血は一
般的には乖離すると報告されている。 
 さらに、近年 PCI の適応判断の重要性の認識が高まっている。本邦においても中央社会保険
医療協議会において、平成 30 年度より PC1 時に虚血評価が義務付けられることとなり、解剖
学的情報より虚血を診断する技術の開発は急務であると考えられる。 
 Computational fluid dynamics を用いた造影 CT(Computed tomography)で FFR を推測する報
告は多く見られるが、これらはスーパーコンピューターを用いた解析で演算のみで数時間を要
するため、臨床においての仕様は困難である。管腔内の圧損失はポアズイユの法則及びベルヌ
ーイの式で計算することが可能である。そこで、申請者は、⊿P=fQ+sQ2 (⊿P は圧損失、f は
ポアズイユの法則で求められる圧損失係数であり、s はベルヌーイの式で求められる損失係数
であり、Q は冠動脈血流量である)を用い、IVUS の情報からこの係数を計算した。さらに、こ
の方程式に加え、SFR(stenotic flow reserve)の冠循環モデルを用いて FFR を計算する手法を
開発した(IVUS-FFR)(特許出願番号：特願 2018-12061)。 
 主要冠動脈病変における IVUS-FFR の FFR に対する相関性を比較検討することを目的に本研
究を行った。後ろ向きに IVUS と FFR を同時期に施行した、48 症例 50 病変を検討した。冠動
脈造影検査での狭窄度は 56.4±10.7%であり、FFR は 0.69±0.08 であった。 IVUS-FFR の FFR に
対する相関は R=0.78(P<0.001, Root mean square error: 0.058 FFR units)であり、MLA との
相関(R=0.43, P=0.002)は高かった。 
 流体力学と新たな冠循環モデルである modified SFR を用いた IVUS-FFR は既存の指標と比較
し FFR に高い相関性を示した。現在まで、冠動脈虚血と狭窄度及び面積狭窄度の相関性は中程
度であり、高い相関性はないと報告されてきた。しかしながら、これらはわずか１若しくは２
断面の面積情報であり、冠動脈の解剖学的重症度を評価することは不可能であると考えられる。
一方、申請者の開発したモデルは冠動脈の１mm 毎の面積情報を用いることにより、冠動脈の
解剖学的重症度をより詳細に、且つ正確に評価することを可能にした。本研究では、FFR を計
算できたということだけでなく、詳細かつ正確に評価した冠動脈の解剖学的重症度と、心筋虚
血の重症度の相関性が高いことも示した。 
IVUS-FFR は既存の方法と比較し、高い精度で心筋虚血を評価可能であった。 
 
【審査会のまとめ】 
FFR は、虚血の評価や PCI 施行時の治療適応の評価など循環器診療において重要な手法で
ある。本論文の他に審査会に提出された参考論文、光干渉断層法（OCT）を用いた FFR によ
る冠動脈病変の評価、冠動脈造影画像の定量的評価と FFR の関係の 2 論文がある。FFR が虚
血評価の重要な手法であるが、申請者はこれまでに他の方法で FFR と相関の高い新たな手法
の模索をし続けてきた。本論文もそのような研究の流れから出されたものであり、IVUS の
データを用いた演算により、FFR と高い相関のある結果を導きだした。研究対象の症例数が
少なく、適応や病変を限定したなどの limitation を述べているが、方法論や結果、考察内
容は高く評価される論文である。 
公開審査会は、平成 31 年 1 月 22 日に開催された。申請者は、研究発表を英語で行い、最
後に本研究の今後の展望等についても言及した。１）IVUS-FFR の算出方法や FFR との統計
学的な相関、心肥大などデータに影響を与える因子について、２）OCT や CT の他の手法と
の空間分解能や血管径、冠動脈の性状での差異について、３）冠動脈以外や先天性心疾患な
どの応用、４）虚血性心疾患診療の医療経済、５）将来的な IVUS-FFR の応用などの質問が
なされ、申請者は的確に応答した。 
審査委員は、申請者が本論文関連領域に対して学位授与に値する十分な見識と能力を有す
ることを全員一致で確認し、本論文が学位授与に値すると判定した。 
 
 
 
 


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