Ehime University Institutional Repository

松本, 紗季

MATSUMOTO, Saki

寺谷, 亮司

TERAYA, Ryoji

Japanese

愛媛県喜多郡における酒文化および酒類産業の変容

Ehime University (愛媛大学)博士(医学)thesi

清井, 武志

KIYOI, Takeshi

（第７号様式） 
 
学位論文審査結果の要旨 
 
   氏     名  清井 武志 
 
 
 
 
 
   審 査 委 員 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                                      
 
                                      
 
                                      
 
                                      
 
                                      
 
 
      論  文  名： 
ベージュマウス(Chédiak-Higashi 症候群)における巨大顆粒を 
有するマスト細胞の形態および機能解析 
      審査結果の要旨： 
【背景と目的】 
ベージュ(bg/bg)マウスは、CHS／LYST 遺伝子に突然変異を認め、細胞中の巨大化した分泌
顆粒やライソゾームを特徴とするヒト Chédiak-Higashi 症候群のモデル動物である。ベージュマ
ウスのマスト細胞に関する研究は、巨大顆粒をマーカーとしてマスト細胞が骨髄由来前駆細胞
より分化することを証明した報告があるが、その機能解析に関する報告は乏しい。本研究では
ベージュマウスのマスト細胞における開口分泌過程を形態学的に解析すると共にヒスタミン含
量とヒスタミン遊離能の測定、さらにはヒスタミン遊離が引き起こすアナフィラキシー反応に
ついて検討を行った。 
【方法】 
雄性(10-15 週齢)の bg/bg マウス(C57BL/6-bg/bg）とその野生型(C57BL/6-+/+)およびヘテロ型
(C57BL/6-bg/+)を実験に用いた。 
DNA シーケンスによる LYST 遺伝子の解析により変異を確認した。 
 耳皮膚を採取し、パラフィン試料と透過型電子顕微鏡による組織学的解析を行った。また走
査型電子顕微鏡(SEM)により、ヒスタミン遊離時に生じる開口分泌過程の形態観察を行った。 
HPLC-蛍光法により皮膚ヒスタミン含量の測定を行った。また結合組織型マスト細胞として
腹腔マスト細胞、粘膜型マスト細胞モデルとして IL-3(5ng/ml)存在下で培養(3～4 週)した骨髄
由来培養マスト細胞（BMMCs）のヒスタミン含量ならびにヒスタミン遊離率を測定した。 
耳皮膚に IgE を皮下注射し、24 時間後に抗原(DNP-BSA)とエバンスブルー混合液を尾静脈か
ら投与した。30 分後に皮膚組織に漏出するエバンスブルー量を吸光測定し PCA 反応の評価を
行った。さらに抗原刺激による耳皮膚組織中ヒスタミン含量とヒスチジン脱炭酸酵素(HDC)活
性の変化を測定した。 
【結果と考察】 
 DNA シーケンスによる遺伝子解析から本研究で用いた bg/bg マウスの Lyst 遺伝子のエクソ
ン 54 に 3 塩基欠損変異が明らかとなった。 
 耳皮膚の組織学的解析では、bg/bg マウスに巨大顆粒を有するマスト細胞を認めたが、マス
ト細胞数は各系統間で差を認めなかった。また bg/bg マウスの腹腔マスト細胞、ならびに 
BMMCs に巨大顆粒を確認した。 
 bg/bg マウスにおける耳皮膚のヒスタミン含量は+/+マウスの 57.7%と低値を示した。bg/bg
マウスの腹腔マスト細胞、BMMCs のヒスタミン含量は、+/+マウスに比べてそれぞれ 64.8%、
35.3%(3 週培養)と低値を示した。一方、bg/+マウスは+/+マウスと有意な差を認めなかった。 
 bg/bg マウス腹腔マスト細胞の Compound 48/80 に対するヒスタミン遊離率の最大反応値は+/
+マウスの 1.53 倍、Thapsigargin(0.5µM)、Ionomycin(1µM)では+/+マウスのそれぞれ 1.25 倍、1.
59 倍と高値を示した。また bg/bg マウス BMMCs の DNP-BSA に対するヒスタミン遊離率の最
大反応値は+/+マウスの 4.6 倍、Thapsigargin(0.5µM)、Ionomycin(1µM)では+/+マウスのそれぞ
れ 2.89 倍、1.92 倍と高値を示した。SEM による形態学的観察では、ヒスタミン遊離時に起こ
る巨大顆粒の開口分泌過程を bg/bg マウスで確認した。bg/+マウスは+/+マウスと有意な差を
認めなかった。 
 抗原刺激による PCA 反応の検討について、IgE 感作群ではコントロール群(PBS)に対してエ
バンスブルー漏出色素量の増加率は各系統間で差を認めなかった。また抗原刺激後の組織中ヒ
スタミン含量は低下しており、HDC 活性の上昇が見られたが各系統間で差を認めなかった。 
【結論】  
ベージュマウスのマスト細胞は野生型ならびにヘテロ型と比べてヒスタミン含量は低値を示
すが、遊離反応性は高いことが明らかとなった。またヘテロ型のマスト細胞は、形態および生
理機能的に野生型と類似した性質を示すことが明らかとなった。 
 
 本研究は Chédiak-Higashi 症候群のモデル動物であるベージュマウスのマスト細胞に関する研
究である。巨大顆粒を有するベージュマウスのマスト細胞を詳細に解析しており、その成果か
らマスト細胞の脱顆粒反応機構の解明の進展が期待できる。 
 公開審査会は平成 28 年 2 月 22 日に開催され、申請者は研究内容を明快に発表し、以下の内
容を含む多くの質問に対し的確に応答した。主な質疑の内容として、1)Lyst 遺伝子産物の組織、
細胞内分布、2) 顆粒のサイズとヒスタミン含有量の相関関係について、3) 臨床研究に関して、
4) ヒスタミン総量およびヒスタミン遊離のタイミングに関して、5) Lyst 遺伝子変異が 
Chédiak-Higashi 症候群の病態とどのように関わるのか、などであった。審査委員は，申請者が
本論文関連領域に対して学位授与に値する十分な見識と能力を有することを全員一致で確認し，
本論文が学位授与に値すると判定した。 


English

Morphological and functional analysis of beige (Ch?diak-Higashi syndrome) mouse mase cells with giant granules

Ehime University (愛媛大学)博士(農学)thesi

Tanapoom, LAOJUNTA

（第３号様式）(Form No. 3) 
 
学  位  論  文  要  旨  
Dissertation Abstract 
 
氏名： 
Name 
 
タナポーン  ラオジュンタ 
Tanapoom         LAOJUNTA 
 
学位論文題目：   
Title of Dissertation 
 
トレニア遺伝資源の評価，創出ならびに保存に関する研究
Evaluation, creation and preservation of Torenia genetic resources 
 
 
学位論文要旨： 
Dissertation Abstract 
 
Torenia is a popular summer bedding plant belonging to family Linderniaceae. Recently the number of 
commercially available cultivars including seed propagated (SP) and vegetative propagated (VP) genotypes has 
increased. To provide an overview of the Torenia cultivars sold in Japan, twenty-five Torenia cultivars were 
grown in a greenhouse under 50% shading. The cultivars could divided two groups; with or without yellow 
blotch on the lower petal. A wide range of petal color was observed; deep to light blue, deep to light reddish 
purple, yellow and white. Flower size varied 20 to 32 mm in width and 25 to 37 mm in length. Leaf size varied 
8 to 30 mm in width and 10 to 40 mm in length. Leaf shape also varied depending on the cultivar; round to 
narrow round shape (length/width ratio, 0.95 to 1.62). Flow cytometry analysis revealed that the VP cultivars 
included diploids, triploids and tetraploids. The VP cultivars are assumed to be interspecific hybrids derived 
from crossing of T. fournieri, T. concolor and T. baillonii. The putative cross combination of each VP cultivar 
was determined by RFI. Torenia cultivars could be divided in to three groups by plant shape, erect (T. fournieri), 
semi-erect (Interspecific hybrid between T. fournieri and T. concolor or T. baillonii) and creep (T. concolor, T. 
baillonii and Interspecific hybrid between T. concolor and T. baillonii). Flower of T. fournieri had six 
anthocyanins (Mv 3,5 dG, Pn 3,5 dG, Pt 3,5 dG, Dp 3,5 dG, Cy 3,5 dG and Pg 3,5 dG). The pigment component 
varied depending on petal color.  
The narrow genetic source from only three species brings some limitations. To produce new novel 
flower type of interspecific hybrid, new species are required to use as parents. In this study, three species T. 
bicolor, T. siamensis and T. hirsutissima from Thailand was selected and crossed with T. fournieri, T. concolor 
and T. baillonii. The pollen germination percentages of all species were high enough for a reciprocal crossing 
experiment. Chromosome number of Torenia varied from 2n=16 to 2n=34. Fully developed mature seeds were 
obtained from only three of 30 cross combinations. When ovule culture was applied, new 14 cross combinations 
produced progeny. The results show that ovule culture is very effective in expanding crossing potential in the 
interspecific hybridization of Torenia. Newly produced interspecific hybrids showed intermediate chromosome 
numbers between parents. Interspecific hybrids derived from cross combinations of distant related species often 
showed sterile because of the unbalanced chromosome number and different gene components, resulting in 
（第３号様式）(Form No. 3) 
 
reduced chromosome pairing during meiosis. Chromosome doubling is an efficient way to restore the pollen 
fertility of interspecific hybrids. Efficient chromosome doubling by chemical treatment in vitro requires efficient 
regeneration system. Leaf explants with scarification cultured on MS medium supplemented with 2 mg L-1 BA 
showed high adventitious shoot regeneration. The present result showed that 20 days of 1500 mg L−1 colchicine 
treatment is optimal. Hybrids from two way cross of Torenia species often showed limited variation of flower 
color and plant form. The backcrossed hybrids (‘Crown Violet’ × T. baillonii) × ‘Crown Violet’ had 2n = 18 
and showed pollen fertility. Only one hybrid had pink color but other seven hybrids had violet petals indicating 
that all hybrids accumulated anthocyanin on all upper, lateral and lower petal. On the other hand forty-eight 
hybrids were obtained from cultured 250 ovules of (‘Crown Violet’ × T. baillonii) × T. baillonii. Ten of the 
backcrossed hybrids had 2n=16, other 38 had 2n =17. Only the hybrids had 2n=16 showed pollen fertility. 
Serrated petal appeared in the backcross of both (‘Crown Violet’× T. baillonii) × ‘Crown Violet’ No. 3 and 
(‘Crown Violet’× T. baillonii) × T. baillonii. Self-pollination of (‘Crown Violet’× T. baillonii) × ‘Crown Violet’ 
No. 3 having serrated petal produce 100 % serrated petal progenies.  The progenies showed wider range of 
flower color variations. The results demonstrated that backcross and selfing are effective in expansion of petal 
color variation in Torenia. In case of tri-parental cross, the progenies showed rather narrow variation in flower 
color as same as other interspecific hybrids. 
Market demand of Torenia young plants concentrates in short period of spring. To catch up the 
demands efficient vegetative propagation is required. Leaf cutting of Torenia was investigated. Explants taken 
from the upper and middle positions of the shoots showed higher regeneration than lower positions with a 
higher number of shoot and longer shoots. Whole leaf explants without petiole from the middle position showed 
the highest shoot regeneration with a larger number of shoots.  
Vegetative propagated cultivars require a stable method for mother plant maintenance. Cryopreservation 
of shoot tips is one of the most reliable methods for long-term storage of genetic resources. The small explants 
with 2 days of pre-culturing showed 50% regrowth after cryopreservation. On the other hand, the large explants 
with 2 days of pre-culturing and the small size explants without pre-culturing browned after thawing and no 
regrowth was observed. Regrowth percentages of non-cryopreserved shoot tips decreased with the increase in 
exposure time to PVS2 from 0 to 50 min at room temperature. Ten-minute exposure to PVS2 at room 
temperature gave the highest regrowth of cryopreserved shoot tips. The results confirmed that both explant size 
and conditions of PVS2 treatment are critical for successful of cryopreservation of Torenia shoot tips. 
 
 


Evaluation, creation and preservation of Torenia genetic resources

Ehime University (愛媛大学)博士(理学)thesi

縄田, 暁

NAWATA, Akatsuki


虫形態に戻った。シスト様細胞の生存期間は温度に依存するが、10℃の場合、90 日後でも 2 割弱が
生存し、被嚢抽出液で処理すると 9 割以上が脱シストすることが明らかにされた。一方で、シスト様細
胞の高温耐性は鞭毛虫形態と変わらず、25℃で培養すると 7 日後には死滅した。シスト様細胞の微
細構造や細胞膜の構造は鞭毛虫形態とほぼ同じであることがわかっており、本研究で明らかになっ
た生理的な特徴と合わせて考察したところ、このシスト様細胞は、突発的な環境ストレスなどによって
引き起こされる一時シストに該当すると述べられている。これらの研究で明らかになった知見をもとに、
申請者は本鞭毛虫の感染環を以下のように提案した。 
 
1. マボヤが、海水と一緒に A. hoyamushi を取り込む。 
2. 水管内壁のクチクラ層損傷部からは、水溶性の走化性因子が拡散している。鞭毛虫は、マボヤ
に取り込まれた際に走化性因子を感知し、正の走化性を示して移動することで、クチクラ層損傷
部に辿り着き、被嚢内に感染する。 
3. 鞭毛虫が被嚢内で増殖するにともない、被嚢は軟化する。病状が進行すると、最終的に感染個
体は、被嚢が裂けて死亡する。その際に、鞭毛虫は海水中に放出される。 
4. 一部の鞭毛虫は、直ちに周囲のマボヤに海水と取り込まれ、新たな個体に感染する。マボヤに
取り込まれなかった鞭毛虫の一部は一時シストとなり、養殖施設等への付着や海底に沈降する
など、周囲の環境中に潜伏する。宮城県のマボヤ養殖漁場は夏季に表層の水温が 20℃を超え
るが、水深が 30 m 以上あるため水温躍層が形成され、海底の水温は 20℃以下に保たれる。従
って、海底に沈降した一時シストは越夏可能と考えられる。 
5. 一時シストはマボヤに取り込まれると、水溶性の被嚢成分に反応して脱シストして、鞭毛虫形態
に戻る。その後、クチクラ層損傷部へ走化的に移動し、感染する。宮城県の養殖漁場では、秋
季から冬季にかけて鉛直混合により海底に沈降した一時シストが表層へ供給されるため、夏季
に一旦終息した被嚢軟化症が冬季に再発すると考えられる。 
 
 本研究により、これまで未解明であった A. hoyamushi の感染環が初めて提案された。本研究は原
生生物学において重要な新知見を提供している。さらに、魚病学、寄生虫学分野の観点からも高く
評価できる。加えて、提案された感染環は感染症対策を検討する上で重要な基盤情報となる。本論
文の公聴会は、平成 31 年 2 月 1 日に愛媛大学理学部講義棟 S21 講義室において開催され、論文
発表と質疑応答が行われた。発表および質疑への応答は明快かつ的確で、申請者が高い学識と専
門的知識・技術を有することを確認した。公聴会後の学位論文審査委員会において審議を行った結
果、本論文は理工学研究科の定める学位審査基準を満たしており、学位を授与するに相応しい内
容であると判定された。 
 
 


Study of the infection cycle of Azumiobodo hoyamushi, causal agent of soft tunic syndrome in ascidian Halocynthia roretzi.

横井, 敬弘

YOKOI, Takahiro

 
 （第３号様式）     
 
 
学 位 論 文 要 旨 
 
 
 
      氏   名 横井 敬弘 
 
 
 
      論 文 名 ダイナミック心筋 CT 灌流画像から算出された心筋血流量による定量評価 
         に対して撮影間隔延長が及ぼす影響 
 
 
 
 
 
 
学位論文要旨     
【背景】 
 近年コンピュータ断層撮影（CT）装置の目覚ましい発展により、冠動脈 CT 血管撮影法は非
侵襲的な冠動脈形態評価法の代表として、広く臨床の現場に普及した。一方、虚血性心疾患の
診療において、冠動脈形態評価だけでなく心筋血流評価もまた治療方針の決定に重要な評価項
目とされている。ダイナミック心筋 CT 灌流画像（CTP）は、末梢静脈より高速でヨード造影剤
の投与を開始してから造影剤が心筋を通過するまでの間、ダイナミック CT 撮影を行うことで
心筋血流評価を行う検査である。この検査では心臓の CT 値の変化を記録した時間濃度曲線 
（TAC）を作成し、数学的な解析によって心筋血流量（MBF）を算出することで、心筋血流の定
量評価を行うことが可能となる。しかし、ダイナミック撮影の欠点として、繰り返し撮影を行
うことによる被曝量の増加が挙げられる。撮影から撮影までの時間を延長することで、全体の
撮影枚数を減らして被曝量を低下させることが可能となるが、得られる TAC が粗雑になり解析
結果の定量値に影響を及ぼす可能性がある。定量値の正確性、もしくは心筋の虚血や梗塞によ
って引き起こされる血流異常の検出能に対して、どの程度の撮影間隔で影響が及ぼされるのか
ということについては、十分に調査されていないのが現状である。 
【目的】 
 本研究の目的は、ダイナミック心筋 CTP による心筋血流定量評価において、撮影間隔を延長
した場合の定量値の正確性や血流異常の検出能に対する影響を調査する事である。 
 
 
 
氏名  横井 敬弘   
 
【方法】 
 当院で冠動脈疾患が疑われ、薬物負荷ダイナミック心筋 CTP 検査を施行された 120 症例を対
象に、後方視的な調査を行った。ダイナミック心筋 CTP の撮影プロトコルは、心位相の収縮期
をターゲットに 1 回の撮影で心臓全体を撮影され、1 心拍に 1 回の撮影間隔（1RR）で連続 30
回の撮影が行われるものであった。この得られたオリジナルの撮影データセットから、それぞ
れ 2 心拍に 1 回（2RR）、3 心拍に 1 回（3RR）、4 心拍に 1 回（4RR）の間隔で撮影データを抽
出して仮想の撮影データセットを作成した。それぞれの撮影データセットから専用のソフトウ
ェアを用いて、デコンボリューション解析という計算方法で心筋血流量（CT-MBF）を算出した。
それぞれ心筋全体の平均値を Global CT-MBF、心筋の 16 セグメントモデルを用いた各セグメ
ントの平均値を Segmental CT-MBF と定義してそれぞれ出力した。120 症例のうち心臓核磁気
共鳴画像（MRI）検査も施行されていた 32 症例を対象に、心臓 MRI による血流異常評価をスタ
ンダードとして、Segmental CT-MBF の血流異常検出能を受信者動作特性曲線(ROC)解析から求
めた曲線下面積（AUC）で評価した。対応のある同等性検定（TOST-P）にて、1RR のデータセ
ットから解析された CT-MBF と 2RR、3RR、4RR のデータセットから解析された CT-MBF の同等性
を評価した。同等性マージンは 1RR の平均値の 5%と定義した。統計学的有意差は P<0.05 と定
義した。 
【結果】 
 全 120 症例における、1RR、2RR、3RR、4RR のデータセットから解析した Global CT-MBF の
平均値±標準偏差はそれぞれ、1.57±0.34 ml/g/min、1.54±0.36 ml/g/min、1.51±0.37 ml/
g/min、1.41±0.33 ml/g/min であった。1RR と 2RR の間で統計学的に同等性が示された。1RR、
2RR、3RR、4RR のデータセットから解析した Segmental CT-MBF の AUC はそれぞれ 0.84、0.83、
0.79、0.76 であった。1RR と 2RR の間に統計学的有意差は見られず、1RR と 3RR 及び 4RR の間
では統計学的有意差が見られた。 
【結論】 
 撮影間隔を 1RR から 2RR まで延長しても、定量値の正確性と血流異常の検出能に有意な影響
を及ぼさなかった。 
 
なお、本研究は愛媛大学医学部附属病院の倫理委員会によって承認されている。 
 
 
 
 
キーワード（３～５） 
 
 
 
 
 
冠動脈疾患、ダイナミック心筋CT灌流画像、心筋血流量、 
心筋血流異常、定量評価 
 
 
 


ダイナミック心筋CT灌流画像から算出された心筋血流量による定量評価に対して撮影間隔延長が及ぼす影響

高木, 香津子

TAKAGI, Kazuko

（第 12号様式） 
 
 
学 位 論 文 の 要 約 
（ 研 究 成 果 の ま と め ） 
 
 
 
            氏    名  髙木 香津子 
 
 
            学位論文名  父親の身長が児発育に及ぼす影響 
 
    学位論文の要約 
 【背景】 
近年、子宮内の低栄養や過栄養といった環境が次世代の肥満症や高血圧、糖尿病といった非感染
性疾患（non-communicable diseases; NCDs）の発症と関連することが知られている。出生体重を規定す
る因子として遺伝的因子のみならず子宮内環境等によるエピジェネティクスを介することが報告されて
いる。たとえば、母親の体格が関与することはよく知られた事実であるが、父親の体格も関連することが
報告されている。すなわち、父親の身長が出生体重と関連するというものであるが、父親の BMI が関
与するかに関しては明らかではない。さらにわが国において出生体重と父親の体格との関連を検討した
報告は皆無である。今回我々は、わが国において最大規模の疫学調査である「エコチル調査（The 
Japan Environment and Children’s Study; JECS）」のデータを用いて、父親の体格と児発育の関連につい
て解析した。 
 
【方法】 
2011 年から 2016 年までにエコチル調査に参加した 103,099 名を選択し、そのうち母親と父親のデー
タが欠落している症例、途中で研究継続拒否を受けた症例、多胎や染色体異常、骨格異常の症例を除
外し、最終的に 33,448 例の母親および父親の体重、身長および BMI のデータを使用した。多項ロジス
ティック回帰モデルを用いて、父親の身長または BMI と出生時体重との関連を調べた。すなわち、日本
の胎児成長曲線の 10 パーセンタイル以下の small gestational age(SGA)あるいは 90 パーセンタイル以
上の large gestational age (LGA)と父親の身長または BMI との関連を検討した。胎児プログラミングの
過程の性別特有の差が関連する可能性を鑑み、男女児を別々に父親体格との関連を分析した。また、
年収、妊娠方法、婚姻状況、父親変数（年齢、BMI、喫煙状況、アルコール消費量、最終学歴、妊娠期
間）や種々の母親変数で調整した。次に、父親の BMI と SGA、及び LGA との関連性を多項ロジスティ
ック回帰分析で評価し、父親の BMI を四分位別に解析した。なお JECS はヘルシンキ宣言に則り実施
され、全ての参加者に対してインフォームドコンセント下に同意を得、施行されている。また、環境省の
疫学研究に関する審査検討会、国立環境研究所の医学研究倫理審査委員会、宮城ユニットセンター東
北大学における倫理審査に承認されている。 
 
【結果】 
父親の身長が高いほど LGA のオッズが高く、SGA のオッズは低かった。これらの結果は、男児
（LGA: 補正オッズ比＝1.182、95％信頼区間：1.124-1.243、SGA: 補正オッズ比＝0.854、95％信頼区
間：0.804-0.907）及び女児（LGA: 補正オッズ比＝1.231、95％信頼区間：1.167-1.298、SGA: 補正オッ
ズ比＝0.819、95％信頼区間：0.771-0.870）共に同様の結果であった。父親の BMI は、男児では父親の
身長と LGA、SGA との関係とほぼ同様であった。一方、父親の BMI は、女児 SGA とは関連を認めず
（補正オッズ比＝0.980、95％信頼区間：0.920-1.044）、女児 LGA との間にわずかに有意な関連を認め
た（補正オッズ比＝1.052、95％信頼区間：0.999-1.108）。 
 
【考察】 
父親の身長と出生体重が関連するという結果は、海外の先行研究と一致するものであり、そのメカニ
ズムとして、父親の身長が胎児発育に及ぼす影響は遺伝的な要因が関与するのかもしれない。その一
方で、父親の BMI と出生体重との関連についての先行研究結果の一致はみていない。本検討では、
父親 BMI と児発育の関係は、児の性別差を認めたが、そのメカニズムは不明である。過去の報告によ
ると、父親の飢餓が次世代に肥満や心血管系疾患の危険性を高めたという報告があること、動物実験
において父親の肥満が次世代の表現型に性別依存性の関連を示す報告があること等より、父親の
BMI はエピジェネティクスを介して児発育に影響する可能性が示唆される。本研究の limitation として、
今回解析に用いた要因以外の因子が関与する可能性を否定できない点や妊娠前の体重が自己報告で
ある点等があげられる。今後、さらなるエビデンスの蓄積とメカニズムの解明を図ることが次世代の将来
の NCDs 発症予防目的の先制医療の開発の視点からも重要であると考えられる。 
なお、この学位論文の内容は、以下の原著論文に既に公表済みである。 
       
主論文:Takagi K, Iwama N, Metoki H, Uchikura Y, Matsubara Y, Matsubara K, Nishigori H, Saito M, 
Fujiwara I, Sakurai K, Kuriyama S, Arima T, Nakai K, Yaegashi N, Sugiyama T; Japan Environment and 
Children’s Study Group.: Paternal height has an impact on birth weight of their offspring in a Japanese 
population: the Japan Environment and Children's Study. Journal of Developmental Origins of Health 
and Disease. 2019 Feb 11:1-13. DOI: 10.1017/S2040174418001162. 
 
 


Paternal height has an impact on birth weight of their offspring in a Japanese population: the Japan Environment and Children's Study

Ehime University (愛媛大学)博士(医学)doctoral thesi

今井, 祐輔

IMAI, Yusuke

 （第３号様式）     
 
学 位 論 文 要 旨 
 
            氏   名：今井 祐輔 
 
            論 文 名：肝星細胞における Protein kinase R の活性化と肝細胞癌の進展への
影響 
 
学位論文要旨     
【背景と目的】1938/2000 
肝細胞癌の進展には、サイトカインやケモカインなど肝非実質細胞により形成される腫瘍微小
環境が影響する。肝非実質細胞である肝星細胞(HSC)は、サイトカインや DAMP (damage asso
-ciated molecular patterns)などの様々な刺激により活性化し、細胞外器質やサイトカインを分
泌することで腫瘍微小環境を形成し、肝細胞癌(HCC)の進展に関与すると考えられる。しかし、
その詳細な機序は明らかではない。 
  Protein kinase R（PKR）は HCC において高発現し、癌細胞増殖促進に寄与していることが
同定されている。刺激された HSC においても PKR が高発現することが報告されているが、そ
の生理的作用、特に HCC に対する役割は不明な点が多い。PKR は TLR などの細胞レセプター
を介した刺激によりリン酸化が促進することで炎症にも関与するとされ、マクロファージにおい
ては IL-1βの産生調節に関わっている。IL-1βは癌細胞の増殖および浸潤を亢進するとされ、H
SC でも LPS による刺激などによりその分泌が促進されることから、HCC の腫瘍微小環境形成
に刺激された HSC、および同 HSC から産生された IL-1βが関与し、その調整に PKR が関与す
る可能性が想定される。 
本研究では、刺激された HSC の PKR 活性化と、サイトカイン産生および HCC への影響を評
価し、HCC の進展における HSC および HSC で活性化する PKR の腫瘍微小環境形成に果たす
役割について明らかにすることを目的とした。 
 
【材料と方法】 
1．ヒト肝星細胞株（LX-2 細胞）を LPS で刺激し、PKR、MAPK カスケードの遺伝子および蛋
白の発現、IL-1βの産生を、リアルタイム(RT-)PCR、ウエスタンブロット法、ELISA によって
評価した。 
2．PKR を阻害した際の IL-1βの産生への影響を検討するため、PKR 阻害剤で処理した LX-2 細
胞、および PKR siRNA をトランスフェクションして PKR の発現をノックダウンした LX-2 細
胞について、IL-1βの産生量の変化を RT-PCR、ELISA で評価した。 
3．LPS で活性化した HSC の形成する腫瘍微小環境による HCC への影響を検討するため、LPS
で刺激した LX-2 細胞のコンディショニング培地(CM)でヒト肝細胞癌由来細胞株（HepG2 細
胞）を培養し、HepG2 細胞の増殖能の変化を細胞増殖アッセイ、スクラッチアッセイで、浸潤
能の変化を細胞浸潤アッセイによって評価した。 
 
氏名 今井 祐輔  
4．NASH の進展に関与する長鎖脂肪酸であるパルミチン酸(PA)による HSC への影響を評価す
るため、HSC を PA で刺激し、IL-1βの産生を、RT-PCR、ウエスタンブロット法、ELISA によ
って評価した。 
5．PA で活性化した HSC の形成する腫瘍微小環境による HCC への影響を検討するため、PA で
刺激した HSC の CM で HepG2 細胞を培養し、増殖能の変化を細胞増殖アッセイ、スクラッチ
アッセイで評価した。 
 
【結果と考察】 
1．LX-2 細胞は、LPS 刺激により、IL-1βの産生が亢進した。また、LX-2 細胞は、LPS 刺激に
より、PKR mRNA の増加および PKR のリン酸化の亢進がみられた。さらに、PKR 活性化に伴
い、MAPK シグナルの ERK1/2、JNK、c-Fos、c-Jun の発現亢進、活性化がみられた。 
2．PKR 阻害剤ならびに、PKR siRNA で LX-2 細胞における PKR の発現を抑制すると、LPS 刺
激による LX-2 細胞の IL-1β産生が阻害された。 
3．LPS で刺激した LX-2 細胞の CM を HepG2 細胞に添加すると、細胞増殖アッセイ、スクラッ
チアッセイおよび細胞浸潤アッセイにて、HepG2 細胞の細胞増殖能、浸潤能の増強が見られた。
PKR 阻害剤で LX-2 細胞の PKR を阻害した CM で HepG2 細胞を培養すると、これらの増強効
果は消失した。 
4．PA で刺激した LX-2 細胞では、IL-1βの産生が亢進した。これらの効果は、PKR 阻害剤の投
与で消失した。 
5．PA で刺激した LX-2 細胞の CM は、LPS で刺激した CM と同様、HepG2 細胞の細胞増殖能
を増強させた。一方、PKR 阻害剤で処理した後 PA で刺激した LX-2 細胞の CM では、HepG2
細胞の細胞増殖はみられなかった。 
 
【結論】 
LPS および PA により刺激された HSC では PKR が活性化し、PKR 依存性に IL-1β産生が亢
進した。また、HSC より産生された IL-1βが肝細胞癌の進展を促進した。活性化 HSC による H
CC 増殖促進に PKR が関与することから、HSC における PKR が HCC 進展抑制のための新たな
治療標的となる可能性が示唆された。 
 
 
 
 
キーワード（３～５） 
 
 
 
肝星細胞 
肝細胞癌 
非アルコール性脂肪肝炎 
IL-1β 
PKR 
 


Stimulated hepatic stellate cell promotes progression of hepatocellular carcinoma due to protein kinase R activation

M., H. M. Borhannuddin Bhuyan

Physiological and Biochemical Responses of Wheat (Triticum aestivum L.) under Extreme pH Stress: Insight into the Antioxidant Defense, Glyoxalase System and Nutrient Homeostasis

桒原, 奈都美

KUWAHARA, Natsumi

（第７号様式） 
 
学位論文審査結果の要旨 
 
   氏     名 桒原 奈都美 
 
 
 
 
 
   審 査 委 員 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                                     
 
                                     
 
                                     
 
                                     
 
                                     
 
 
       
論  文  名  Dynamic CT perfusion による quantitative perfusion ratio   
を用いた虚血性心疾患の評価 
 
      審査結果の要旨 
【研究内容のまとめ】 
目的：近年、心筋 dynamic CT perfusion (CTP)を用いて CT-myocardial blood flow (CT
-MBF)を算出し、心筋の血液灌流を定量的に評価する手法の有用性が報告されている。今回
我々は、冠動脈 CT angiography (CTA)と心筋 dynamic CTP の画像から算出された、冠動脈
狭窄領域の quantitative perfusion ratio (QPR)を新たな心筋血流評価の指標として提唱
する。本研究では、侵襲的冠動脈造影(ICA)による fractional flow reserve (FFR)測定に
より診断された冠動脈疾患(CAD)を評価基準として、冠動脈狭窄領域の CT-QPR を用いた CAD
の妥当性を検討した。 
方法：対象として、2013 年 1 月から 2015 年 1 月にかけて包括的心臓 CT 検査と ICA を施
行した患者のうち、CAD を有する又は CAD を疑われた患者 27 人を後方視的に選択した。全
ての患者は負荷心筋 dynamic CTP と冠動脈 CTA を施行した後、ICA で FFR を測定した。 FFR
≦0.8 の病変を血行力学的に有意な CAD と定義した。dynamic CTP 画像から deconvolution
法を用いて voxel ごとの CT-MBF を計算し、reference となる CT-MBF との比として voxel ご
との CT-QPR を算出した。次に、Coronary CTA の画像から Voronoi 法を用いて冠動脈支配領
域を解析し、それにより狭窄領域の CT-MBF と CT-QPR をそれぞれ算出した。以上の結果より、
主査 泉谷 裕則
副査 檜垣 高史
副査 鍋加 浩明
副査 髙田 康徳
副査 池宗 啓蔵
FFR と、狭窄領域の MBF または QPR との関係を Spearman の順位相関係数を用いて計算した。
また、狭窄領域 CT-MBF と CT-QPR による血行力学的に有意な CAD に対する診断能を算出し、
receiver operating characteristic (ROC)を用いて比較した。 
結果：27 人 81 枝の冠動脈のうち、39 枝で FFR 測定を行った。 15 人 21 枝(51%)の冠動脈
に、血行力学的に有意な CAD を認めた。狭窄領域の CT-QPR (r=0.70, p<0.05)は、CT-MBF 
(r=0.56, p<0.05)に比べて FFR とのより良い相関を示した。血行力学的に有意な CAD に対す
る診断能は、狭窄領域 CT-MBF で感度 95%、特異度 58% (cut-off value=1.70 mL/g/min)、
狭窄領域 CT-QPR で感度 95%、特異度 90%であった(cut-off value=0.80)。ROC 曲線の area 
 under curve (AUC)は、狭窄領域 CT-MBF に比べて、狭窄領域の CT-QPR の方が有意に大き
かった(CT-MBF の AUC 0.79 vs. CT-QPR の AUC 0.94; p<0.05)。 
結論：心筋 dynamic CTP より算出した狭窄領域の CT-QPR は、狭窄領域 CT-MBF と比較して
FFR とより良い相関を示し、血行力学的に有意な CAD に対する診断能も高かった。 
COI：本研究の内容に関連する利益相反事項はない。 
本研究は、愛媛大学医学部の臨床研究倫理審査委員会によって承認されている。また、後
方視的研究のため、同意書の取得は行っていない。 
 
【審査会のまとめ】 
 虚血性心疾患の診断や治療経過の過程で心臓 CT 検査が広く行われているが、本研究では、
冠動脈 CTA と心筋 dynamic CTP の画像から新たな心筋血流評価の指標として、冠動脈狭窄領
域の QPR を用いた。狭窄領域の CT-QPR は、冠動脈疾患評価のゴールデンスタンダードの  
 FFR と高い相関があり、狭窄領域の CT-QPR を用いた冠動脈疾患評価の妥当性を示す結果で
あった。研究対象の症例数が多くないことや三枝病変や低心機能症例では相関が高くない可
能性があり、適応や病変を限定したなどの limitation が述べられているが、方法論や結果、
考察内容は高く評価される論文である。 
公開審査会は、令和元年 8 月 21 日に開催された。申請者は、研究発表を英語で行い、最
後に本研究の今後の展望、放射線被爆量の軽減や本研究手法の予後との関連などの課題につ
いても言及した。発表後に審査委員らから以下の質疑があった。１）CT-QPR の FFR との相
関において逸脱する三枝病変やカテーテル治療後の症例があること、２）糖尿病合併例など
の微小循環不全や側副血行路のある症例、冠攣縮性狭心症などでの評価について、３）冠動
脈疾患の診断能についての CT-QPR の cut-off value の算定手法について、４）算出された
データの基礎となる解析の手法の妥当性について、５）他のモダリティーとの比較検討につ
いて、６）今後の臨床使用についての課題や展開などについての質問がなされ、申請者は的
確に応答した。 
審査委員は、申請者が本論文関連領域に対して学位授与に値する十分な見識と能力を有す
ることを全員一致で確認し、本論文が学位授与に値すると判定した。 
 
 
 
 
 


Dynamic CT perfusionによるquantitative perfusion ratioを用いた虚血性心疾患の評価

マーガレット, スパフォド

高橋, 基泰

Takahashi, Motoyasu

39
40
41
42
43
44
45
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