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International logistics: definition of the origin calculation process and proof of Intra-community transport of goods
No full textDissertação de mestrado integrado em Engenharia e Gestão IndustrialA presente dissertação, elaborada no âmbito do Mestrado Integrado em Engenharia e Gestão Industrial,
foi desenvolvida em contexto empresarial, nomeadamente no Departamento de Planeamento Estratégico
e Melhoria Contínua da Efacec, empresa do setor de mobilidade elétrica e energia. A gestão de
transportes é a atividade logística em foco nesta dissertação, assim como a melhoria de processos
relacionados com a exportação de produtos para países comunitários e para países terceiros com
acordos comerciais com a União Europeia, a Prova de Transporte Intracomunitário de Bens e as Regras
de Origem, respetivamente. Assim, o objetivo deste projeto é a diminuição de custos e a redução do risco
associado às exportações.
Uma análise aos atuais processos logísticos permitiu identificar que existiam lacunas significativas na
definição de procedimentos e dificuldades na adaptação dos processos à legislação em vigor. Foram
desenvolvidas várias propostas de melhoria, nomeadamente na definição do procedimento de
transportes, segregação de responsabilidades e monitorização de indicadores. Houve, também, um
grande foco na adaptação dos processos atuais de expedição para o cumprimento e requisitos legais de
exportação, com apoio de ferramentas de automatização de algumas atividades dos processos.
Com a implementação das propostas de melhoria é esperado obter uma redução nos custos de
transporte causado pela diminuição de custos por paralisações, por escolhas mais estratégicas dos
Incoterms nos contratos de compra e venda e pela redução do número de envios urgentes. A redução
do Lead Time no processo de transporte também é esperada, resultado da diminuição dos erros das
Requisições de Transporte (RC). Relativamente ao tema da Prova de Transporte Intracomunitário de Bens
(PTIB) verificou-se uma diminuição de 21% do risco de contingência de IVA e foram implementadas
medidas para garantir a recolha e monitorização de provas. No tema das Regras de Origem observou-se
um aumento no envio de declarações do fornecedor a longo prazo, assim como uma diminuição de erros
deste documento de 62% para 10%. É expectável uma redução nos recursos usados para efetuar o
Cálculo da Origem, assim como o cumprimento rigoroso das Regras de Origem nos acordos comerciais.
O estatuto de exportador registado pelo sistema REX foi obtido para a Efacec Energia.This dissertation, prepared within the scope of the Integrated Master’s in Industrial Engineering and
Management, was developed in a business context, namely in the Department of Strategic Planning and
Continuous Improvement at Efacec, a company in the electric mobility and energy sector. Transport
management was the logistics activity in focus in this dissertation, as well as the improvement of
processes related to the export of products to European Union countries and third countries with trade
agreements with the EU, the Intra-Community Transport of Goods and the Rules of Origin, respectively.
Thus, the objective of this project is to reduce costs and reduce the risk associated with exports.
An analysis of the current logistical processes allowed us to identify that there were significant gaps in
the definition of procedures and difficulties in adapting the processes to the legislation in force. Several
proposals for improvement were developed, namely in the definition of the transport procedure,
segregation of responsibilities and monitoring of indicators. There was also a strong focus on adapting
current shipping processes to comply with legal export requirements, with the support of automation tools
for some process activities.
With the implementation of the improvement proposals, it is expected to obtain a reduction in transport
costs caused by the reduction of costs due to stoppages, by more strategic choices of Incoterms in the
purchase and sale contracts, and by the reduction number of urgent shipments. Lead Time reduction in
the transport process is also expected, as a result of the decrease in RC errors. Regarding the issue of
Intra-Community Transport of Goods, there was a 21% decrease in the risk of VAT contingency and
measures were implemented to ensure the collection of evidence. With regards to Rules of Origin, there
was an increase in the submission of long-term supplier declarations by the supplier of goods, as well as
a decrease in errors in this document from 62% to 10%. A reduction in the resources used to carry out
the Calculation of Origin is expected, as well as strict and automatic compliance with the Rules of Origin
and commercial agreements. The status of registered exporter by the REX system was obtained for Efacec
Energia
Psychosocial risk assessment in a geographically distributed organization
No full textProjeto de mestrado em Psicologia do Trabalho e das OrganizaçõesO presente relatório de estágio descreve o estágio realizado numa organização geograficamente
distribuída, que teve como objetivo avaliar os riscos psicossociais dentro da mesma. Inicialmente, aborda a
organização em causa, mencionando a sua estrutura, funcionamento e ambiente organizacional. Em seguida, faz se referência ao departamento específico onde o estágio foi realizado, detalhando as suas funções e a sua
importância dentro da organização. Posteriormente, são descritas as atividades e tarefas desenvolvidas durante o
estágio, destacando os métodos e ferramentas utilizadas, incluindo o questionário COPSOQ-II para a análise dos
riscos psicossociais. O relatório conclui com uma reflexão crítica sobre a experiência de estágio, avaliando os
conhecimentos adquiridos, os desafios enfrentados e as contribuições feitas para a organização.This internship report describes the internship carried out in a geographically distributed
organization, with the aim of assessing the psychosocial risks within it. Initially, it discusses the
organization in question, mentioning its structure, functioning and organizational environment. Next,
reference is made to the specific department where the internship was carried out, detailing its functions
and its importance within the organization. Subsequently, the activities and tasks carried out during the
internship are described, highlighting the methods and tools used, including the COPSOQ-II questionnaire
for the analysis of psychosocial risks. The report concludes with a critical reflection on the internship
experience, assessing the knowledge acquired, the challenges faced and the contributions made to the
organization
Developing and testing a safety culture model: the workers' perspective
No full textTese de doutoramento em Psicologia AplicadaA cultura de segurança (CS) desempenha um papel relevante na promoção de um bom desempenho de
segurança (DS). A necessidade de a compreender e aprimorar tem sido reconhecida amplamente,
levando ao desenvolvimento de diversos modelos concetuais. No entanto, apesar dos avanços na área,
ainda existem lacunas a serem preenchidas, especialmente no que diz respeito à integração das
características do Sistema de Gestão de Segurança (SGS) nos modelos existentes. Esta tese procura
preencher essas lacunas, contribuindo para o refinamento dos modelos em termos concetuais, tomando
como ponto de partida o modelo proposto por Fernández-Muñiz et al. (2007). Para alcançar esse objetivo,
foram delineadas várias etapas, que se refletem nos estudos realizados. O primeiro estudo integra uma
revisão sistemática da literatura que procurou identificar potenciais dimensões relevantes da CS e do
SGS na explicação do DS, tendo sido analisados 33 artigos. Para além das variáveis já contempladas no
modelo de Fernández-Muñiz et al. (2007), a análise realizada permitiu identificar outras variáveis
significativas de nível individual, grupal e organizacional que contribuem para o DS dos trabalhadores. O
segundo estudo focou-se no refinamento do modelo proposto por Fernández-Muñiz et al. (2007),
incorporando novas variáveis do SGS e da CS identificadas na revisão sistemática como relevantes para
explicar o DS, e no refinamento das medidas de avaliação da CS, direcionadas especificamente aos
trabalhadores. Os resultados sugerem, para além das variáveis já contempladas no modelo original,
outras como conscientização do trabalhador para a segurança, suporte dos colegas de trabalho e
condições do ambiente de trabalho, que poderão contribuir para a melhoria no DS. O terceiro estudo
compreendeu o teste empírico do modelo desenvolvido, tanto na amostra total, quer em função dos dois
setores considerados. A análise das medidas integrada no estudo dois, bem como o teste do modelo
realizado no estudo três, baseou-se numa amostra de 473 trabalhadores diretos dos setores da indústria
e construção civil, de seis organizações. Os resultados do teste do modelo destacaram a importância do
compromisso das chefias, do SGS e da participação dos trabalhadores no DS. As contribuições desta
investigação incluem a identificação e validação de novas variáveis relevantes para o entendimento da
CS, bem como o refinamento de medidas de avaliação e de um modelo concetual, proporcionando
conhecimentos relevantes para a prática e para investigações futuras no âmbito da segurança
ocupacional.Safety culture (SC) plays a relevant role in promoting good safety performance (SP). The need to
understand and enhance it has been widely recognized, leading to the development of various conceptual
models. However, despite advances in the field, there are still gaps to be filled, especially concerning the
integration of Safety Management System (SMS) characteristics into existing models. This thesis seeks to
fill these gaps by contributing to the refinement of models in conceptual terms, starting from the model
proposed by Fernández-Muñiz et al. (2007). To achieve this goal, several steps were outlined, which are
reflected in the studies conducted. The first study integrates a systematic literature review that sought to
identify potentially relevant dimensions of SC and SMS in explaining SP, analyzing 33 articles. In addition
to the variables already contemplated in the model by Fernández-Muñiz et al. (2007), the analysis
identified other significant variables at the individual, group, and organizational levels that contribute to
workers' SP. The second study focused on refining the model proposed by Fernández-Muñiz et al. (2007),
incorporating new SMS and SC variables identified in the systematic review as relevant to explaining SP,
and refining SC assessment measures, specifically directed at workers. The results suggest, in addition
to the variables already included in the original model, others such as worker safety awareness, coworker
support, and working environment conditions, which may contribute to improvements in SP. The third
study comprised the empirical testing of the developed model, both in the total sample and according to
the two sectors considered. The analysis of the measures integrated in study two, as well as the model
testing conducted in study three, was based on a sample of 473 direct workers from the industry and
construction sectors, from six organizations. The results of the model test highlighted the importance of
management commitment, SMS, and worker participation in SP. The contributions of this research
include the identification and validation of new relevant variables for understanding SC, as well as the
refinement of assessment measures and a conceptual model, providing relevant insights for practice and
future research in the field of occupational safety
Feasibility study of phosphorus recovery from wastewater in the Grupo Águas do Norte WWTP
No full textDissertação de mestrado em Engenharia Química e BiológicaO fósforo é essencial para a vida, mas a sua presença em ambientes aquáticos pode causar problemas como a eutrofização. Visto que a sua extração provém de recursos finitos e está prevista a sua depleção total, é crucial removê-lo e recuperá-lo dos cursos de água para garantir um futuro sustentável e a segurança alimentar.
Assim, o presente estudo pretende avaliar e otimizar a recuperação de fósforo a partir de águas residuais provenientes de uma ETAR do Grupo Águas do Norte, sendo objetivos específicos identificar o melhor local de remoção e recuperação de fósforo ao longo do processo de tratamento das águas residuais (fase líquida e fase sólida), e otimizar a precipitação e recuperação do fósforo sob a forma de estruvite.
Desta forma, foram identificados 5 potenciais locais de recuperação de fósforo ao longo do processo de tratamento, e caracterizadas as correntes quanto ao teor de sólidos totais e voláteis, CQO, 3−, 4+, 2+, P (total e solúvel) e pH. De seguida, foram realizados ensaios preliminares de precipitação química e otimizados os parâmetros de ajuste de pH, tempo de agitação e quantidade de agente precipitante na corrente com maior potencial. Por fim, foi desenvolvido um projeto de implementação do processo na ETAR acompanhado de uma análise económica. No processo de otimização, foram utilizadas fontes de magnésio como cloreto de magnésio, água do mar e água do rio. A máxima eficiência foi alcançada com pH 8,5 e 30 minutos de agitação. Obteve-se 97 % e 92 % de recuperação com 2,4 kg/m³ e 1,5 kg/m³ de cloreto de magnésio, respetivamente, e 90 % de recuperação com 20 % de água do mar.
Posto isto, concluiu-se que a linha das escorrências totais seria o local mais promissor para o desenvolvimento deste processo. A análise económica mostrou que o processo é viável com 20 % de água do mar. As tecnologias AirPrex® e Ostara Pearl® apresentaram períodos de retorno de 10 anos, enquanto a Struvia™ apresentou 8 anos. A Ostara Pearl® foi considerada a mais adequada por garantir a venda e o aumento da produção de estruvite. Por fim, o local de implementação do processo poderia situar-se numa área entre o tratamento preliminar e tratamento primário.Phosphorus is essential for life, but its presence in aquatic environments can cause issues such as eutrophication. Since its extraction comes from finite resources and total depletion is predicted, it is crucial to remove and recover it from water bodies to ensure a sustainable future and food security.
Thus, this study aims to evaluate and optimize the recovery of phosphorus from wastewater from the Grupo Águas do Norte Wastewater Treatment Plant (WWTP). The specific objectives include identifying the best location for phosphorus removal and recovery throughout the wastewater treatment process (liquid and solid phases) and optimizing the precipitation and recovery of phosphorus in the form of struvite.
To this purpose, five potential phosphorus recovery locals were identified throughout the wastewater treatment process, and the streams were characterized in terms of total and volatile solids content, COD, 3−, 4+, 2+, P (total and soluble) and pH. Then, preliminary chemical precipitation tests were carried out and the parameters for pH adjustment, stirring time, and amount of precipitating agent were optimized in the stream with the highest potential. Finally, a project was developed for implementing the process at the WWTP, accompanied by an economic analysis. In the optimization process, magnesium sources such as magnesium chloride, seawater, and river water were used. Maximum efficiency was achieved at pH 8.5 and 30 minutes of stirring. A 97 % and 92 % recovery were obtained with 2.4 kg/m³ and 1.5 kg/m³ of magnesium chloride, respectively, and 90 % recovery with 20 % seawater.
Therefore, it was concluded that the total sludge liquor line was the most promising local for the development of this process. The economic analysis showed that the process is viable with 20 % seawater. The AirPrex® and Ostara Pearl® technologies presented payback periods of 10 years, while Struvia™ presented 8 years. Ostara Pearl® was considered the most suitable due to its ability to ensure the sale and increased production of struvite. Finally, the implementation site for the process could be between the preliminary and primary treatment stages.Este trabalho foi apoiado pela Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT) no âmbito do projeto AIM4Water (Ref: 2022.06822.PTDC, DOI: 10.54499/2022.06822) e também ao abrigo do financiamento estratégico das unidades UIDB/04469/2020 e UIDB/00319/2020
Penitentiary Disciplinary Law and the Rights of Inmates: introduction to the study of the current legal regime and its debilities
No full textDissertação de mestrado em Direito Judiciário (Direitos Processuais e Organização Judiciária)O direito disciplinar penitenciário é um ramo do direito sancionatório aplicável aos cidadãos reclusos. Os
estabelecimentos prisionais portugueses possuem um regime disciplinar próprio regulado pelo Código
de Execução das Penas e Medidas Privativas da Liberdade (Lei n.º 115/2009, de 12 de outubro) e pelo
Regulamento Geral dos Estabelecimentos Prisionais (DL n.º 51/2011, de 11 de Abril).
Os reclusos, durante o cumprimento da sua pena de prisão ou da medida de coação de prisão preventiva
estão sujeitos a uma série de direitos e deveres legalmente previstos, sendo que o desrespeito desses
deveres é suscetível de constituir infração disciplinar e originar processo disciplinar e a consequente
aplicação de uma medida disciplinar.
Estes deveres têm uma dimensão fortemente ligada às restrições consequentes da privação da liberdade,
mas não deixam de integrar uma componente de educação para a cidadania e de responsabilização pelo
comportamento individual, deste modo contribuindo para reforçar a preparação da pessoa reclusa para
o retorno à liberdade e à vida em sociedade.
O direito disciplinar penitenciário é imprescindível para a manutenção da ordem e da segurança, na
medida em que visa prevenir e desencorajar comportamentos que possam colocar em risco a segurança
dos próprios reclusos e dos funcionários prisionais, assim como sancionar esses mesmos
comportamentos quando ocorrem, para dessa forma garantir um ambiente seguro e ordenado
intramuros. Contudo, é necessário que na aplicação dos processos disciplinares estejam assegurados
os direitos e as garantias dos cidadãos reclusos constituídos arguidos.
Nestes termos, a presente dissertação visa o estudo do direito disciplinar penitenciário e os direitos dos
reclusos, com uma análise do regime jurídico atual e das fragilidades que o mesmo apresenta, numa
perspetiva da sua aplicação prática, sem descurar a sua evolução histórica e o enquadramento deste
regime no âmbito internacional e do direito comparado, visto que existe, no ordenamento jurídico
português uma influência marcada dos normativos internacionais que estabelecem os padrões e as
diretrizes para o tratamento de reclusos.The Penitentiary disciplinary law is a branch of sanctionatory law applicable to citizens in prisons.
Portuguese prisons have their own disciplinary regime regulated by the CEPMPL (Code of Execution of
Sentences and Measures that Deprive Liberty) (Law No. 115/2009, of October 12) and the General
Regulation of Prisons (DL No. 51/2011, of April 11).
Inmates, during the serving of their prison sentence or preventive detention, are subject to a series of
legally stipulated rights and duties. The disrespect of these duties can constitute a disciplinary infraction,
leading to disciplinary proceedings and the consequent application of a disciplinary measure.
These duties are strongly linked to the restrictions resulting from the deprivation of liberty but also
incorporate a component of education for citizenship and responsibility for individual behavior, thus
contributing to strengthening the inmate's preparation for return to freedom and life in society.
Penitentiary disciplinary law is essential for maintaining order and security, as it aims to prevent and
discourage behaviors that may endanger the safety of the inmates and prison staff, as well as sanction
these behaviors when they occur, thereby ensuring a safe and orderly environment within the prison.
However, it is necessary that in the application of disciplinary procedures, the rights and guarantees of
the incarcerated citizens accused of misconduct are ensured.
Therefore, this dissertation aims to study penitentiary disciplinary law and the rights of inmates, with an
analysis of the current legal regime and its debilities from a practical perspective, without neglecting its
historical evolution and the framing of this regime in the international context and comparative law, given
that there is a significant influence of international norms that establish standards and guidelines for the
treatment of inmates in the Portuguese legal system
Exploração e engenharia da levedura não convencional Kluyveromyces marxianus para a produção sustentável de compostos de alto valor agregado
No full textPrograma doutoral em Chemical and Biological EngineeringBiorrefinarias baseadas em biomassa lenhocelulósica têm surgido como alternativas
sustentáveis aos métodos atuais baseados em combustíveis fósseis para a coprodução de
biocombustíveis, energia e produtos químicos de alto valor agregado. Para alcançar a viabilidade
económica das biorrefinarias, diversos compostos químicos foram identificados, incluindo furanos (como
o 5-hidroximetilfurfural – HMF – e o furfural), que são blocos de construção de diversos produtos
químicos utilizados em diferentes indústrias, e isopreno, um hidrocarboneto volátil amplamente utilizado
na produção de borracha. Um outro composto com um mercado em rápida expansão, é o resveratrol,
um polifenol comercializado pelas suas propriedades antioxidantes. O interesse na utilização da levedura
não convencional Kluyveromyces marxianus como plataforma microbiana para a produção de
biocombustíveis e compostos químicos de alto valor agregado com aplicações em diversas indústrias
tem crescido consideravelmente. Aproveitando as características específicas de K. marxianus, como a
termotolerância e a capacidade de metabolizar diversas fontes de carbono, este trabalho focou na
exploração do seu potencial para a produção de compostos químicos de alto valor agregado,
nomeadamente derivados de HMF e furfural, isopreno e resveratrol. Desta forma, os principais resultados
desta tese incluem: (1) o estabelecimento de um isolado robusto tipo selvagem como biocatalisador para
converter furfural e HMF nos seus derivados, álcool furfurílico e 2,5-bis(hidroximetil)furano (BHMF),
respetivamente; (2) a construção de estirpes metabolicamente modificadas para a produção de isopreno,
alcançando pela primeira vez a produção de isopreno a partir do hidrolisado celulósico de madeira de
Eucalyptus globulus pré-tratada; (3) a construção de estirpes de K. marxianus geneticamente modificadas
para a produção de resveratrol utilizando diferentes fontes de carbono sob condições de fermentação
otimizadas, com as maiores concentração obtidas a partir do hidrolisado hemicelulósico de caroço de
milho e do licor integral. Em conjunto, estes resultados demonstram o potencial da levedura K. marxianus
como hospedeira microbiana para a produção de compostos de alto valor agregado, ressaltando a
importância das suas características para o estabelecimento de bioprocessos sustentáveis, alinhados
com os princípios de uma bioeconomia circular.Lignocellulosic-based biorefineries have been emerging as sustainable alternatives to current
fossil fuels-based methods to co-produce biofuels, energy, and high-value chemicals. To attain
biorefineries economic feasibility, several chemicals were identified, including furans (such as 5-
hydroxymethylfurfural (HMF) and furfural), which are building blocks of many chemicals across industries,
and isoprene, a volatile hydrocarbon used mainly for rubber production. Another fine chemical with an
expansively growing market is resveratrol, a polyphenolic compound commercialised by its antioxidant
properties. The interest in using the non-conventional yeast Kluyveromyces marxianus as a microbial
platform for producing biofuels and high value-added chemicals with applications in several industries
has been growing. Taking advantage of K. marxianus specific traits, such as thermotolerance and capacity
to metabolise several carbon sources, this work focused on the exploitation its potential to produce high
value-added chemicals, namely HMF and furfural-derivatives, isoprene and resveratrol. Given this, the
main results of this thesis include: (1) the establishment of a wild-type robust isolate as a whole-cell
biocatalyst to convert furfural and HMF into their derivatives, furfuryl alcohol and 2,5-
bis(hydroxymethyl)furan (BHMF), respectively; (2) the construction of metabolically engineered strains for
isoprene production, achieving for the first time isoprene production from the cellulosic hydrolysate of
pretreated Eucalyptus globulus wood; (3) the construction of engineered K. marxianus strains for
resveratrol production using different carbon sources under optimised fermentation conditions, with the
highest titres achieved from corn cob hemicellulosic hydrolysate and whole slurry. Altogether, these
results show the potential of the yeast K. marxianus as a microbial host for high value-added chemicals
production, highlighting the importance of its traits for the establishment of sustainable bioprocesses,
aligned with the principles of a circular bioeconomy.The author would like to acknowledge the Portuguese Foundation for Science and Technology (FCT) for
the financial support under the scope of the strategic funding of UIDB/04469/2020 unit with DOI
10.54499/UIDB/04469/2020, and the PhD scholarship with DOI 10.54499/2020.06888.BD
Relaxation intervention to improve diabetic foot ulcer healing: protocol for a pilot study with a nested qualitative study
No full textObjective: A mixed-methods approach nested in a pilot three-arm randomised controlled trial (RCT) was conducted to evaluate the feasibility and acceptability of an intervention of progressive muscle relaxation with guided imagery (experimental group) compared to a neutral guided imagery placebo (active control group) and a group that did not receive any psychological intervention (passive control group). The purpose was to inform a future definitive RCT that will test its effectiveness. Qualitatively, this study examined patients and health professionals' perspectives regarding the relaxation intervention, in order to assess the acceptability and applicability of relaxation as an adjuvant therapy.
Method: Participants must have had a diagnosis of diabetes and diabetic foot disease; one or two active hard-to-heal ulcers at the time of the assessment; and clinical levels of stress or anxiety or depression. Participants were randomised and assessed at three timepoints after the first hospital consultation for hard-to-heal diabetic foot ulcer (DFU).
Results: Rates of eligibility, recruitment, refusal, adherence to study protocol, participation in follow-up and dropout, and patients' satisfaction with the relaxation intervention were assessed as primary outcomes. Secondary outcomes were DFU healing; patients' DFU-related quality of life; physical and mental quality of life; perceived stress; emotional distress; adherence to DFU care; perceptions of DFU; as well as arterial systolic/diastolic pressure and heart rate.
Conclusion: The results of this pilot study contributed to clarification and better elucidation of the benefits of relaxation techniques regarding patients' HRQoL and DFU healing.This study was conducted at the Psychology Research Centre (CIPsi/UM) School of Psychology, University of Minho, Portugal and supported by the Foundation for Science and Technology (FCT) through the Portuguese State Budget (UIDB/01662/2020) and by a PhD fellowship from FCT assigned to GF (SFRH/BD/131780/2017) and an FCT grant (PTDC/PSIGER/28163/2017) assigned to MGP
Otimização das condições de expressão de péptidos para formulações cosméticas
No full textDissertação de mestrado em BiotecnologiaNas últimas décadas, os péptidos e proteínas têm sido cada vez mais reconhecidos pelos seus
efeitos benéficos em formulações cosméticas. A tecnologia de DNA recombinante tem desempenhado
um papel fundamental na síntese destes compostos, frequentemente derivados de bactérias, leveduras
ou células de mamíferos. A levedura Pichia pastoris destaca-se como um sistema de expressão popular,
graças à sua rápida taxa de crescimento, facilidade de manipulação e eficiência em modificações pós tradução. A presença do promotor PAOX1 potencializa a expressão da proteína recombinante quando
induzida com metanol. Apesar das vantagens mencionadas, desafios como o enrolamento incorreto de
proteínas e a degradação por protéases podem afetar os rendimentos na produção de péptidos. Para
superar estes obstáculos, diversas estratégias são utilizadas, incluindo a otimização de estirpes,
modulação das condições de crescimento e expressão, bem como processos de purificação. Neste
estudo, utilizou-se a estirpe P. pastoris GS115, que incorporava a sequência da albumina sérica humana
(HSA) fundida com a repetição de um (1P), quatro (4P) e sete (7P) péptidos, na região C-terminal.
A taxa de crescimento destas quatro estirpes foi inicialmente avaliada em quatro meios de cultura
diferentes (BMGY, MGY, BSM e FM22), em que o meio BMGY demonstrou uma maior taxa específica de
crescimento e tempos de duplicação mais rápidos. Posteriormente, o meio BMMY foi utilizado para os
ensaios de expressão proteica. As técnicas de SDS-PAGE e Western blot revelaram, que nos primeiros
ensaios com uma concentração de 0,5% (v/v) de metanol, apenas a estirpe GS115-HSA-4P apresentou
expressão da proteína ao longo de 72 horas. Consequentemente, a concentração de metanol foi
aumentada para 2,5% (v/v), o que fez com que a estirpe GS115-HSA-1P expressasse a proteína de
interesse, após 48 horas, embora numa forma degradada. Além disso, diversas fontes de azoto foram
testadas, incluindo ureia, glicina, acetato de amónio e sulfato de amónio, sendo que este último
apresentou melhores resultados. Com base nestas descobertas, o sulfato de amónio foi utilizado como
fonte de azoto para futuras experiências. Ao explorar diferentes valores de pH (6, 7 e 8), observou-se que
o pH 8 foi o mais favorável para a expressão. Em conclusão, estes resultados contribuíram
significativamente para o desenvolvimento de uma plataforma mais eficiente para a produção de
péptidos, com potencial promissor para aplicações em formulações cosméticas.Over the last decades, peptides and proteins have gained recognition for their beneficial effects
in cosmetic formulations. Recombinant DNA technology has played a pivotal role in synthesizing these
compounds, often derived from bacteria, yeast, or mammalian cells. Pichia pastoris, a yeast, stands out
as a popular expression system due to its rapid growth rate, ease of manipulation, and proficiency in
post-translational modifications. The presence of the PAOX1 promoter enhances recombinant protein
expression when induced with methanol. Despite these advantages, challengessuch as protein misfolding
and degradation by proteases can impact peptide production yields. To address these challenges, various
strategies, including strain optimization, modulation of growth and expression conditions, and refining
purification processes, can be employed. This study focuses on the P. pastoris GS115 strain,
incorporating the human serum albumin (HSA) sequence fused with the repetition of one (1P), four (4P),
and seven (7P) peptides in the C-terminal region.
The growth rate of these four strains was initially evaluated in four different culture media (BMGY,
MGY, BSM, and FM22), with BMGY demonstrating higher specific growth rate and faster doubling times.
Subsequently, BMMY medium was used for protein expression assays. SDS-PAGE and Western blot
techniques revealed that, in the first assays with 0.5% (v/v) methanol concentration, only the GS115-HSA 4P strain exhibited protein expression within 72 hours. Consequently, methanol concentration was
increased to 2.5% (v/v), leading to GS115-HSA-1P expressing the protein of interest after 48 hours, albeit
in a degraded form. Additionally, different nitrogen sources (urea, glycine, ammonium acetate, and
ammonium sulfate) were tested, with ammonium sulfate yielding better results. Based on these findings,
ammonium sulfate was utilized as a nitrogen source for subsequent experiments. Exploring different pH
values (6, 7, and 8), revealed that pH 8 was more favourable to expression. In conclusion, these insights
significantly contributed to the development of a more efficient platform for peptide production, holding
promising potential for applications in cosmetic formulations
Sistemas de entrega localizada de fármacos baseados em nanofibras biodegradáveis para a terapia fotodinâmica do cancro
No full textPrograma doutoral em Engenharia de MateriaisO cancro representa uma das principais causas de morte em todo o mundo. Apesar da sua elevada prevalência, as modalidades terapêuticas convencionais ainda apresentam várias limitações. Neste sentido, terapias direcionadas e pouco invasivas têm surgido como alternativas promissoras para o tratamento do cancro, nomeadamente a terapia fotodinâmica (PDT). Esta terapia baseia-se na ação combinada de fotossensibilizadores (PSs), luz e oxigénio molecular, originando espécies reativas de oxigénio (ROS) que promovem a destruição dos tecidos irradiados. A incorporação de PSs em sistemas de entrega localizada e controlada de fármacos (DDS), que serão implantados no local do tumor ou próximo deste, permite a entrega direta dos PSs na zona alvo, reduzindo assim a sua toxicidade sistémica. As micro/nanofibras produzidas por electrofiação têm demonstrado elevado potencial para serem usadas como DDS, devido à sua elevada relação área de superfície/volume, porosidade controlada, flexibilidade e estrutura semelhante à matriz extracelular (ECM). Adicionalmente, a manipulação da morfologia e estrutura das membranas electrofiadas permite a obtenção de sistemas de entrega controlada. Desta forma, o objetivo deste projeto centrou-se no desenvolvimento de DDS de PSs para a PDT, com base em micro/nanofibras de polímeros biodegradáveis e biocompatíveis, incluindo o quitosano (CS), gelatina (Gel), poli(óxido de etileno) (PEO), poli(ɛ-caprolactona (PCL), e álcool polivinílico (PVA). De referir ainda que foram produzidas fibras com diferentes estruturas (blended, superfície modificada e core-shell). Após a otimização de micro/nanofibras sem defeitos, procedeu-se à incorporação de diferentes PSs (esquarina e porfirina). As plataformas fibrosas desenvolvidas foram caracterizadas em detalhe por diversas técnicas. O efeito fotodinâmico in-vitro dos diferentes PSs foi analisado. O perfil de libertação dos PSs das membranas electrofiadas foi avaliado, bem como a sua citotoxicidade contra células tumorais e saudáveis, no escuro e com irradiação. Assim, este trabalho demonstrou o potencial das estruturas fibrosas desenvolvidas para atuarem como sistemas de entrega localizada de PSs para PDT.Cancer is one of the leading causes of death worldwide. Despite its high prevalence, the current therapeutic modalities still present high concerns. Therefore, targeted and minimally invasive approaches, like photodynamic therapy (PDT), have arisen as excellent alternatives for cancer treatment. PDT involves the combined effect of photoactive molecules photosensitizers (PSs), light, and molecular oxygen, that will destroy the illuminated tissues by the production of reactive oxygen species (ROS). The encapsulation of PSs within localized drug delivery systems (DDS) implanted onto or near to tumor site has emerged as a powerful strategy to decrease systemic toxicities of drugs, enabling the direct delivery of PSs to the target area, thereby improving the treatment efficacy while decreasing the side effects. Recently, micro/nanofibers produced by electrospinning have demonstrated great potential to be used as local DDS, due to their large surface area-to-volume ratio associated with high drug loading capacity, controlled porosity, flexibility and resemble extracellular matrix (ECM) structure. Moreover, the adjustment of the membrane’s morphology and structure allows the production of controlled release systems. The aim of this project was the development of new local DDS for PDT based on electrospun micro/nanofibers loaded with PSs produced using biodegradable and biocompatible polymers, such as chitosan (CS), gelatin (Gel), poly(ethylene oxide) (PEO), poly(Ɛ-caprolactone) (PCL), and poly(vinyl alcohol) (PVA). Additionally, different fibers’ structures (blended, surface modified, and core-shell) were also produced. After the optimization of defect-free micro/nanofibers, the PSs were incorporated (squaraine and porphyrin). All the developed fibrous platforms were fully characterized by various techniques. The in-vitro photodynamic effect of the different PSs was assessed. The release profile of PSs from electrospun membranes was evaluated as well as their cytotoxicity under dark and light against tumor and healthy cells. Overall, this work demonstrated the potential of the developed electrospun fibrous structures as localized DDS for PDT.Foundation for Science and Technology (FCT) - SFRH/BD/147517/201
Overheating calculation methods, criteria, and indicators in European regulation for residential buildings
No full textWith the ongoing significance of overheating calculations in the residential building sector, building codes such as the European Energy Performance of Building Directive (EPBD) are essential for harmonizing the indicators and performance thresholds. This paper investigates Europe's overheating calculation methods, indicators, and thresholds and evaluates their ability to address climate change and heat events. e study aims to identify the suitability of existing overheating calculation methods and propose recommendations for the EPBD. The study results provide a cross-sectional overview of twenty-six European countries. The most influential overheating calculation criteria are listed the best approaches are ranked. The paper provides a thorough comparative assessment and recommendations to align current calculations with climate-sensitive metrics. The results suggest a framework and key performance indicators that are comfort-based, multi-zonal, and time-integrated to calculate overheating and modify the EU's next building energy efficiency regulations. The results can help policymakers and building professionals to develop the next overheating calculation framework and approach for the future development of climate-proof and resilient residential buildings.- (undefined