Biotecnia (E-Journal)
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    Prevalencia de Chlamydia abortus en cabras con problemas de aborto en la zona centro de Sinaloa, México

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    A cross-sectional study that included seven bucks and 132 goats with recent parturition or abortion was conducted to assess the prevalence of chlamydiosis in a caprine herd showing abortion issues in Central Sinaloa, Mexico. Additionally, 32 out of the 135 goats were selected to perform a longitudinal study throughout two consecutive periods of kidding/abortions. Chlamydia abortus was detected by bacterial isolation and the positive samples were confirmed by PCR. In does, chlamydiosis prevalence was 55.6 % (75/135; 69 parturitions and six abortions). Ten out of 75 positive isolations were confirmed by PCR. In bucks, two out of seven samples tested positive for bacterial isolation. In the longitudinal study, the likelihood of showing a positive result increased 41.6 times (OR=0.024, 95 % CI: 0.002 to 0.299) during the second period of evaluation. According to multivariate analysis, chlamydiosis positivity, lower age of goats, and a reduced number of parturitions were associated. The results presented herein represent the first report of C. abortus in a caprine herd in the state of Sinaloa. More studies focused on the prevalence and distribution of C. abortus in Mexico are needed to improve the knowledge regarding the impact of chlamydiosis on animal health and production.Para determinar la prevalencia de clamidiosis en un rebano caprino con problemas de aborto en el centro de Sinaloa, México, se realizó un estudio transversal que incluyo a siete machos y 135 hembras con parto o aborto reciente. Adicionalmente, 32 de las 135 hembras fueron seleccionadas para realizar un estudio longitudinal por dos periodos consecutivos de partos/abortos. Chlamydia abortus se identifico mediante aislamiento y las muestras positivas se confirmaron mediante PCR. La prevalencia de clamidiosis fue de 55.6 % en las hembras (75/135), en las cuales se presentaron 69 partos y seis abortos. Únicamente 10/75 muestras positivas fueron confirmadas por PCR. En los machos, 2/7 muestras resultaron positivas mediante aislamiento. En el estudio longitudinal, se incrementó en 41.6 veces la posibilidad (OR=0.024, IC 95 %: 0.002-0.299) de tener un resultado positivo durante el segundo periodo de evaluación. De acuerdo con el análisis multivariado, se presentó una asociación entre la positividad a clamidiosis, la edad de las hembras y el número de partos. Estos resultados representan el primer reporte de C. abortus en un rebano caprino del estado de Sinaloa. Se requieren más estudios que evalúen la prevalencia y distribución de C. abortus en México para comprender mejor el impacto de la clamidiosis sobre la salud y producción animal

    Efecto de la adición de subproductos agroindustriales en las propiedades físicas de un biopolímero almidón-gelatina

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    This study reports the effect of mango, jamaica and coffee by-products addition into formulation of starch-gelatin for elaborating a spoon-shaped bioplastic. Such additions improved the bioplastics mechanical properties due to the compatibility of their components, observed at microscopic level (hardness was increased in a range of 190 to 290 N). In the same way, the bioplastics physical properties such as the hue angle values (63-89), solubility and absorp­tion index, were modified with the by-product’s addition. To obtain the spoon-shaped bioplastics conditions of maximum stability (aw≈0.4) at 35 °C, we employ the GAB equation and the moisture content corresponding to micropore volume. The different formulations exhibited an endothermic event at 180ºC, associated with a melting process, as well as a high degradation rate in soil after 120 h. The by-products proved to be a reinforcement in the bioplastics formulation. The use of by-products of mango, coffee and jamaica represent an in­teresting alternative to increase their technological potential.En este trabajo se reporta el efecto de la adición de subproductos de mango, jamaica y café a una formulación de almidón-gelatina para elaborar una bioplástico en forma de cuchara. Se encontró que la adición de los subproductos mejoró las propiedades mecánicas del bioplástico debido a la compatibilidad de sus componentes observados a nivel microscópico (la dureza aumento de 190 hasta 290 N). Asimismo, las propiedades físicas de los bioplásticos como el ángulo matiz (63-89), y los índices de solubilidad y absorción en agua se modificaron por la adición de subproductos. Se observó que las condiciones de máxima estabilidad de los bioplásticos obtenidas a partir del modelado de las isotermas de adsorción a 35 °C con la ecuación de GAB y el cálculo el volumen de microporo correspondieron a una actividad de agua cercana a 0.40, independientemente del subproducto agregado.  Las distintas formulaciones exhibieron un evento endotérmico a una temperatura de 180ºC, asociado a un proceso de fusión, así como una elevada tasa de degradación en suelo después de 120 h. Los subproductos probaron ser un refuerzo en la formulación de bioplásticos. El uso de subproductos de mango, café y jamaica representan una alternativa interesante para incrementar su potencial tecnológico

    Predicción de la resistencia térmica de Escherichia coli O157:H7 en carne molida de res en función de la temperatura y las concentraciones de carvacrol y grasa

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    Escherichia coli O157: H7 is one of the most important pathogens in ground beef, and the risk of contamination compromises its safety and quality. Thermal treatments are the main option to ensure food safety; although, the use of additional barriers such as the addition of antimicrobial agents increases safety margins against pathogens growth. In this work the effects and interactions of temperature (55-65 °C), carvacrol (0-2%) and fat (5-20%) on thermal resistance (D-value) of E. coli O157: H7 in ground beef were evaluated using response surface methodology. Temperature was the main factor of inactivation, while fat exhibited a protective effect over the pathogen survival. There was an interaction effect between fat and carvacrol, at high concentrations of fat the carvacrol favored the inactivation of the pathogen. The optimal combination of fat, carvacrol and temperatura that ensure the highest inactivation of the pathogen was 63°C, 11% fat and 1.6% carvacrol. The obtained model allow to predict the thermal resistance of E. coli O157: H7 in any combination of temperature, carvacrol and fat, within the limits studied.Escherichia coli O157: H7 es uno de los patógenos más importantes que contaminan la carne y comprometen su seguridad y calidad. Los tratamientos térmicos son la opción principal para garantizar la inocuidad; aunque el uso de barreras adicionales como la adición de agentes antimicrobianos, aumentan los márgenes de seguridad contra los patógenos. En este trabajo se evaluó el efecto y las interacciones de temperatura (55-65 °C), carvacrol (0-2%) y grasa (5-20%) sobre la resistencia térmica (valor D) de Escherichia coli O157: H7 en carne molida de res utilizando la metodología de superficie de respuesta. La temperatura fue el principal factor de inactivación y la grasa mostró un efecto protector sobre el patógeno. Hubo un efecto de interacción entre la grasa y el carvacrol, a altas concentraciones de grasa el carvacrol disminuyó la resistencia del patógeno. La combinación óptima de grasa, carvacrol y temperatura que minimizan los valores D fue 63 °C, 11% de grasa y 1.6% de carvacrol. El modelo obtenido permite predecir la resistencia térmica de E. coli O157: H7 en cualquier combinación de temperatura, carvacrol y grasa, dentro de los límites estudiados

    Efecto de levaduras de origen marino y ulvan en el control poscosecha de Penicillium italicum agente causal del moho azul en limón persa

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    Penicillium italicum is causing blue mold on citrus fruits. Its control is with synthetic fungicides, however, marine yeasts and ulvan are an alternative to synthetic agro-products. The objective of this study was to determine in vitro antagonism of yeasts against P. italicum and its effect with ulvan in the control of blue mold in Persian lemon fruits. The effect of ulvan on P. italicum and yeasts was evaluated. In vitro antagonism was determined by confrontation between yeast-phytopathogen and competition for carbohydrates. The protection of fruits with yeasts and ulvan against P. italicum was evaluated and the severity and incidence of the disease and the expression of SOD, POX and CAT were determined. There was no effect of ulvan on microorganisms. In vitro, yeasts inhibited the phytopathogen. Carbohydrates decreased with yeast and P. italicum, and spore germination of the phytopathogen was inhibited. The incidence of P. italicum in the fruits was decreased by yeast and ulvan. POX, CAT and SOD were increased in the fruits with yeast and ulvan. The application of marine yeasts and ulvan may be an option in the control of blue mold in Persian lemon fruits.Penicillium italicum es el agente causal del moho azul en los cítricos. Su control es con fungicidas sintéticos, sin embargo, levaduras marinas y ulvan son una alternativa a los agro-productos sintéticos. El objetivo de este estudio fue determinar el antagonismo in vitro de levaduras hacia P. italicum y su efecto con ulvan en el control del moho azul en frutos de limón persa. Se evaluó el efecto de ulvan sobre P. italicum y levaduras. Se determinó el antagonismo in vitro por confrontación entre levadura-fitopatógeno y competencia por carbohidratos. Se evaluó la protección de frutos con levaduras y ulvan hacia P. italicum y se determinó severidad e incidencia de la enfermedad y expresión de SOD, POX y CAT. No hubo efecto de ulvan sobre los microorganismos. In vitro las levaduras inhibieron al fitopatógeno. Los carbohidratos disminuyeron con levaduras y P. italicum y se inhibió la germinación de esporas del fitopatógeno. La incidencia de P. italicum en los frutos fue disminuida por levaduras y ulvan. POX, CAT y SOD se incrementó en los frutos con levaduras y ulvan. La aplicación de levaduras marinas más ulvan puede ser una opción en el control del moho azul en frutos de limón persa

    Effect of hypoxia on purine metabolism in human skeletal muscle cells

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    Mammals experience some degree of hypoxia during their lifetime. In response to hypoxic challenge, mammalian cells orchestrate specific responses at transcriptional and posttranslational level which lead to changes in the purine metabolites in order to cope with threatening conditions. The aim of this study was to evaluate the response of the enzymes involved in the purine metabolism of human muscle cells to hypoxic conditions. Muscle cells in culture were exposed to hypoxia and the enzymatic activity of inosine monophosphate dehydrogenase (IMPDH), xanthine oxidase (XO), purine nucleoside phosphorylase (PNP) and hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase (HGPRT) as well as their transcript expression were quantified under normoxic and hypoxic conditions. Purine metabolite (hypoxanthine (HX), xanthine (X), uric acid (UA), inosine monophosphate (IMP), inosine, nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+), adenosine, adenosine monophosphate (AMP), adenosine diphosphate (ADP), adenosine triphosphate (ATP), guanosine diphosphate (GDP) and guanosine triphosphate (GTP)) concentrations were also quantified. Significant reduction of IMPDH activity and HX and IMP concentrations (p < 0.05) were observed after hypoxia, suggesting a decrease of de novo synthesis of purines. After hypoxia a global reduction of transcripts was observed, suggesting a reduction of the metabolic machinery of purine metabolism to new steady states that balance ATP demand and ATP supply pathways.Los mamíferos experimentan cierto grado de hipoxia durante su vida. Como respuesta al reto de hipoxia, las células de mamíferos orquestan respuestas específicas a nivel transcripcional y postraduccional que conducen a cambios en los metabolitos de purinas para hacer frente a las condiciones amenazantes. El objetivo de este estudio fue evaluar la respuesta de las enzimas involucradas en el metabolismo de las purinas de células musculares humanas a condiciones hipóxicas. Las células musculares en cultivo se expusieron a hipoxia y la actividad enzimática de la inosina monofosfato deshidrogenasa (IMPDH), la xantina oxidasa (XO), la purina nucleósido fosforilasa (PNP) y la hipoxantina guanina fosforribosil transferasa (HGPRT), así como su expresión de transcripción, se cuantificaron bajo condiciones de normoxia e hipoxia. Los metabolitos de purina (hipoxantina (HX), xantina (X), ácido úrico (UA), monofosfato de inosina (IMP), inosina, dinucleótido de nicotinamida y adenina (NAD+), adenosina, monofosfato de adenosina (AMP), difosfato de adenosina (ADP), trifosfato de adenosina (ATP), difosfato de guanosina (GDP) y trifosfato de guanosina (GTP)) también se cuantificaron. Se observó una reducción significativa de la actividad de IMPDH y de las concentraciones de HX e IMP (p < 0.05) después de la hipoxia, lo que sugiere una disminución de la síntesis de novo de purinas. Después de la hipoxia, se observó una reducción global de la expresión transcripcional, lo que sugiere una reducción de la maquinaria metabólica del metabolismo de las purinas a nuevos estados estacionarios que equilibran la demanda de ATP y las vías de suministro de ATP

    Isolation and properties of collagen extracted from mixed by-products obtained from different fish species

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    Fish by-products consisting of skin, bones, or scales are collagen sources. Acid-soluble collagen (ASC) and pepsin-soluble collagen (PSC) mixed by-products derived from different fish species were extracted and evaluated. The properties evaluated for both collagens were chemical composition, amino acid- and SDS-PAGE- protein profiles, Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR), denaturation temperature (Tmax), enthalpy (ΔH), and solubility. The ASC and PSC registered a protein content of 48.56 and 38.80 %, respectively. From the total amino acids detected, hydroxyproline accounted for 7 % and 6 % for ASC and PSC, respectively. The electrophoretic profile showed the presence of the type I collagen bands (α1, α2, β, and γ), whereas FTIR spectrum showed the presence of diverse collagen functional groups (Amide A, B, I, II, and III) for both extracted types, and demonstrated that the extraction process did not affect the collagen´s triple-helical structure. The Tmax of ASC and PSC were 38.27 and 38.07° C, respectively, whereas ΔH were 0.64 and 0.33 J g-1. The lowest solubility was registered at pH 5 for ASC and pH 9 for PSC. The caractheristics of the collagen extracted, indicated that a mixture of by-products from different species could be an alternative for their reutilization by the local markets.Los subproductos de pescado como pieles, huesos o escamas son fuentes de colágeno. Se extrajo y evaluó el colágeno soluble en ácido (ASC) y soluble en pepsina (PSC) derivados de diferentes especies. Las propiedades evaluadas para ambos colágenos fueron composición química, amino ácidos, perfil electroforético, FTIR, temperatura y entalpía de desnaturalización y, solubilidad. El ASC y PSC registraron 48.6 y 38.8 % de proteína, respectivamente. El ASC y PSC presentaron 7 % y 6 % de hidroxiprolina. El perfil electroforético mostró la presencia de bandas de colágeno tipo I (α1, α2, β, and γ), el espectro de FTIR mostró los grupos funcionales del colágeno (Amide A, B, I, II, and III) y demostró que el proceso de extracción no afectó la estructura de triple hélice. La Tmax de ASC y PSC fueron 38.27 y 38.07° C, respectivamente, mientras que el ΔH fue 0.64 and 0.33 J g-1. La solubilidad más baja fue a pH 5 para ASC y a pH 9 para PSC. Ambos tipos de colágeno se extrajeron exitosamente y, basados en sus características estructurales, pueden ser una alternativa para la industria de alimentos, biomédica y farmacológica

    Recubrimiento comestible a base de alginato en combinación con eugenol nanoencapsulado y su efecto conservador en la vida útil de jitomate (Solanum lycopersicum)

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    Deficiencies in post-harvest technology and the attack of phytopathogens cause a very short shelf life of fruits and vegetables, such as tomatoes. In addition to the economic damage, it can have negative effects on health and the environment. The objective of this work was to apply an active sodium alginate coating in combination with eugenol-loaded polymeric nanocapsules (AL-NP-EUG) to improve the shelf life of tomato. Using the nanoprecipitation technique, NP were obtained with a mean size of 171 nm, a polydispersity index of 0.113 and a zeta potential of –2.47 mV. Using the technique of HS-SPME coupled to GC-FID, a percentage of encapsulation efficiency of 31.85% was determined for the EUG-loaded NP. The shelf life study showed that tomatoes treated with AL-NP-EUG held firm longer than those without the coating. In addition, for the pathogenicity test, it was shown that tomatoes with AL-NP-EUG did not show signs of damage caused by the phytopathogen Colletotrichum gloesporoides. It was concluded that the formulation of EUG nanoencapsulated and incorporated into the edible coating has high potential for its application as a natural nanopreservative of fruit and vegetable products such as tomato.Las deficiencias en la tecnología postcosecha y el ataque de fitopatógenos ocasionan que los productos hortofrutícolas, como el jitomate, presenten una vida útil muy corta. Además del daño económico, esto puede traer efectos negativos sobre la salud y el medio ambiente. El objetivo de este trabajo fue evaluar un recubrimiento activo de alginato de sodio en combinación con nanocápsulas poliméricas cargadas con eugenol (AL-NP-EUG) para mejorar la vida útil del jitomate. Utilizando la técnica de nanoprecipitación se obtuvieron NP con un tamaño de 171 nm, un índice de polidispersidad de 0.113 y un potencial zeta de –2.47 mV. Utilizando la técnica de HS-SPME con CG-FID, se determinó un porcentaje de eficiencia de encapsulación de 31.85 % para el EUG. El estudio de vida útil demostró que los jitomates tratados con el AL-NP-EUG mantuvieron por más tiempo la firmeza que aquellos sin el recubrimiento. Además, en el ensayo de patogenicidad se demostró que los jitomates con el AL-NP-EUG no presentaron signos de daño ocasionado por el fitopatógeno Colletotrichum gloesporoides. Se concluyó que la formulación de EUG nanoencapsulado e incorporado al recubrimiento comestible presenta alto potencial para su aplicación como nanoconservador natural de productos hortofrutícolas como el jitomate

    Efecto del aceite esencial de Chrysactinia mexicana A. Gray sobre aislados clínicos de Candida glabrata

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    The objective of this work was to evaluate the effect of the Chrysactinia mexicana A. Gray essential oil, on C. glabrata clinical isolates. The essential oil was obtained by steam entrainment of flowers, leaves and secondary branches of C. mexicana. Gas chromatography and mass spectrometry were performed to determine the oil composition. Logarithmic and stationary phase microdilution assays were performed with Saccharomyces cerevisiae and clinical isolates of C. gla­brata to determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of the oil. The cultures were incubated in liquid YPD medium, for 7 h in fresh medium (logarithmic phase) or 3 h in recovering medium (stationary phase), with the oil and microdilution tests were performed. The three main oil compounds identified were piperitone (29.57%), eucalyptol (26.86%) and α-terpineol (14.65%). The MICs obtained were, a) stationary phase: S. cerevisiae (BY4741) 2.78 mg/mL and C. glabrata (CBS138), (NY66) and (AN400) 6.50 mg/mL and (NY62) 9.29 mg/mL; b) logarithmic phase: S. cerevisiae (BY4741) 3.71 mg/mL and C. glabrata (CBS138) 4.64 mg/mL, (NY66) 6.5 mg/mL, (AN400) 8.36 mg/mL, and (NY62) 18.5 mg/ mL. This work constitutes the first report of the fungicidal effect of the C. mexicana essential oil on human pathogenic fungi such as C. glabrata.El objetivo del trabajo fue evaluar el efecto del aceite esencial Chrysactinia mexicana A. Gray en aislados clínicos de C. glabrata. Se obtuvo aceite esencial por arrastre de vapor de las flores, hojas y ramas secundarias de C. mexicana. Se realizó cromatografía de gases y espectrometría de masas para conocer la composición del aceite. Se hicieron ensayos de microdilución en fase logarítmica y fase estacionaria con Saccharomyces cerevisiae y aislados clínicos de C. glabrata para determinar la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) en presencia del aceite esencial. Los principales compuestos del aceite esencial fueron la piperitona (29.57 %), eucaliptol (26.86 %), a-terpineol (14.65 %), delta-3-careno (12.37 %) y linalool (3.56 %). Se determinaron las CMI del aceite esencial, para las cinco cepas utilizadas en las dos fases de crecimiento, siendo menor la CMI para S. cerevisiae que para los diferentes aislados clínicos de C. glabrata. El aceite esencial de C. mexicana tiene efecto fungicida en S. cerevisiae y los aislados clínicos de C. glabrata

    Efecto de diferentes proporciones de luz LED azul:roja en plantas de chile habanero (Capsicum chinense Jacq.)

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    Habanero pepper is the most economically important horticultural crop in the Yucatan peninsula. This crop under a controlled environment with LED lighting, would allow conti­nuous production, with an exponential increase in yield, and be free of pests and diseases. The objectives were to evaluate the effects of five blue:red LED light ratios and a fluorescent control on plant growth, photosynthetic pigments, phenolic compounds and nutriments concentration in leaf; pollen germination, leaf thickness, ovary anatomy and anther of habanero pepper ‘Mayan Ba’alché’ grown under controlled conditions. The results showed that the treatments did not induce an effect on plant growth. Red light favored fruit yield and stomatal frequency. Monochromatic red light favored the concentration of photosynthetic pigments, Mg and Mn and induced a lower P and Cu concentration. Monochromatic blue light favored the concentration of phenolic compounds. The control induced a higher K concentration among some LED treatments and increased pollen germination and leaf thickness as well as monochromatic blue light. The anatomy of ovules in ovaries and pollen in anthers has no effect of the treatments.El chile habanero es el cultivo hortícola de mayor im­portancia económica en la península de Yucatán. Este podría desarrollarse en ambiente controlado con iluminación LED y permitiría tener una producción continua, con un aumento exponencial de rendimiento y estar libre de plagas y enfer­medades. Los objetivos fueron evaluar el efecto de cinco proporciones de luz LED azul:roja y un testigo fluorescente sobre crecimiento en planta, concentración de pigmentos fotosintéticos, compuestos fenólicos y nutrimental en hoja; germinación de polen, grosor de hoja, anatomía de ovario y antera de chile habanero ‘Mayan Ba’alché’ bajo condiciones controladas de crecimiento. Los resultados mostraron que los tratamientos no indujeron un efecto en crecimiento de plan­ta. La luz roja favoreció el rendimiento de frutos y frecuencia estomática. La luz roja monocromática favoreció la concen­tración de pigmentos fotosintéticos, Mg y Mn e indujo menor concentración de P y Cu. La luz azul monocromática favoreció la concentración de compuestos fenólicos. El testigo indujo mayor concentración de K entre algunos tratamientos LED e incrementó la germinación de polen y el grosor de hoja al igual que la luz azul monocromática. La anatomía de los óvu­los en ovarios y el polen en anteras no presentaron ningún efecto por los tratamientos

    Caracterización fisicoquímica y compuestos bioactivos en el coco (Cocos nucifera L.) y su aceite: Efecto del cultivar y región de cultivo

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    Endosperm and coconut oil are highly valued for health effects, their properties are attributed to bioactive compounds, mainly to medium-chain fatty acids, phenolic compounds and vitamin E. The concentration of bioactive compounds depends on the cultivar, the biotic and abiotic conditions of the cultivation area. The effect of the cultivar and producing areas on the bioactive compounds in the coconut and its oil was determined. The physicochemical properties and the profiles of bioactive components in cultivars harvested in Guerrero, Alto Pacifico-saladita, Enano Verde, and Hibrido and from Yucatán, Alto Pacífico-2, Enano Verde were analyzed. The physicochemical properties were found to be different depending on the growing region and cultivar. Regarding the fatty acid profile, mainly lauric, myristic and palmitic acids, in cultivars and regions there is no difference, but there is a difference in the content of phenolic compounds and a-tocopherol. The cultivar Enano Verde de Yucatán, is superior in the content of phenolic compounds (767.44 mg gallic acid / 100g), while Alto Pacífico -Saladita in α-tocopherol (151.03 µg / 100g). These cultivars could mean great potential in the content of phenolic compounds and α-tocopherol, in addition to the medium chain fatty acids, in the corresponding regions.  La pulpa y aceite de coco son altamente valorados por los efectos sobre la salud, éstas propiedades son atribuidas a compuestos bioactivos, principalmente a los ácidos grasos de cadena media, compuestos fenólicos y vitamina E. La concentración de los compuestos bioactivos, depende del cultivar, las condiciones bióticas y abióticas de la zona de cultivo. Se determinó el efecto del cultivar y zonas productoras, sobre los compuestos bioactivos en el coco y su aceite. Se analizaron las propiedades fisicoquímicas y los perfiles de componentes bioactivos en cultivares cosechados en Guerrero, Alto Pacifico-saladita, Enano Verde, e Hibrido y de Yucatán, Alto Pacífico-2, Enano Verde. Se encontro que las propiedades fisicoquímicas son diferentes dependiendo de la región de cultivo y el cultivar.  En relación al perfil de ácidos grasos principalmente los ácidos laúrico, mirístico  y palmítico, en los cultivares y las regiones no hay diferencia, pero si en el contenido de compuestos fenólicos y a-tocoferol. El cultivar Enano Verde  de Yucatán, es superior en el contenido de compuestos fenólicos (767.44 mg acido galico/100g), mientras que Alto Pacífico -Saladita en α-tocoferol ( 151.03µg/100g).Estos cultivares podrían significar un gran potencial en el contenido de compuestos fenólicos y α-tocoferol, además de los ácidos grasos de cadena media, en las regiones correspondientes

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