University of Zagreb
Repository of Faculty of Pharmacy and Biochemistry University of ZgrebNot a member yet
2946 research outputs found
Sort by
Elastase activity in selected Aspergillus species from the Nigri section
No full textPlijesni roda Aspergillus sekcije Nigri široko su rasprostranjene u okolišu te su neizmjerno značajne čovjeku zbog široke primjene u biotehnologiji i industriji. Također, ove plijesni predstavljaju rizik za zdravlje. Ukoliko plijesni proizvode enzim elastazu koja razgrađuje elastin u plućnom tkivu, povećava se invazivnost plijesni. Cilj ovog rada bio je ispitati uvjete rasta odabranih aspergila iz sekcije Nigri uključujući Aspergillus luchuensis, Aspergillus niger, Aspergillus piperis, Aspergillus tubingensis i Aspergillus welwitschiae nakon inkubacije 5, 7 i 14 dana na 37 °C na hranjivoj podlozi BHI koja sadrži ekstrakte mozga i srca te simulira fiziološke uvjete. Na podlogama CDA modificiranim s obzirom na udio anorganskog/organskog dušika ispitan je utjecaj dušika na rast plijesni (5, 7 i 14 dana na 37 °C). Elastazna aktivnost ispitana je na hranjivoj podlozi CDA bez nitrata uz dodatak supstrata elastin – kongo crveno (ECR), a procijenjena mjerenjem promjera razgradnje elastina provedeno 5., 7. i/ili 14. dan inkubacije na 37°C. Prikladnost modificirane CDA podloge sa ECR ispitana je pomoću standarda enzima elastaze nakon inkubacije 48 h na 37 °C.Sve ispitane vrste pokazale su dobar, propulzivni rast na podlozi BHI razmjerno period inkubacije na 37 °C. Na podlozi CDA sa i bez nitrata pokazano je da je dušik neophodni nutrijent osobito važan za razvoj micelija plijesni.Elastazna aktivnost dokazana je za izolate svih vrsta. Najveća aktivnost izmjerena je za vrstu Aspergillus niger te se ona kretala u rasponu od 1,556 do 1,680. Nešto niža elastazna aktivnost dokazana je kod vrsta A. tubingensis i A. welwitschiae, a po prvi puta je elastazna aktivnost pokazana kod vrsta A. luchuensis i A. piperis. Rezultati ovoga rada upućuju da i druge vrste crnih aspergila osim A. niger, A. tubingensis i A. welwitschiae mogu imati klinički značaj za čovjeka, posebno obzirom na utvrđenu elastaznu aktivnost ispitanih sojeva.The Aspergillus section Nigri are widespread in the environment and due to their application in biotechnology and industry they are immensely important to humans. Furthermore, these molds have the potential to cause health problems. If the molds produce the enzyme elastase which breaks down elastin in lung tissue, the invasiveness of the mold increases.The aim of this paper was to examine the growth of selected Aspergilli from the section Nigri including Aspergillus luchuensis, Aspergillus niger, Aspergillus piperis, Aspergillus tubingensis and Aspergillus welwitschiae following five, seven and fourteen days of incubation at 37 °C on BHI agar containing brain and heart extracts and thus simulating physiological conditions. The impact of nitrogen on the fungal growth was investigated following five, seven and fourteen days of incubation at 37 °C on CDA agar modified with respect to the proportion of inorganic/organic nitrogen. Elastase activity was tested on the nitrate-free CDA with the addition of elastin - congo red (ECR) substrate. The measurement of the diameter of elastin degradation was carried out on the 5th, 7th and/or 14th day of incubation at 37°C. The suitability of the ECR-modified CDA was tested with elastase standard following 48 hrs incubation at 37 °C.All the tested isolates of the black Aspergilli showed good, propulsive growth on BHI medium. Growth characteristics on CDA, with or without nitrate, showed that nitrogen is essential nutrient for the growth of Aspergilli, especially for the mycelium development.The elastase activity was demonstrated for all the tested isolates. The highest elastase activity was measured for A. niger isolate (EI 1.556-1.680). Slightly lower levels of elastase activity were mesured for A. tubingensis and A. welwitschiae, while elastase activity was demonstrated for A. luchuensis and A. piperis for the first time. The results of this paper suggest that other species of the black Aspergilli besides A. niger, A. tubingensis, and A. welwitschiae may be clinically significant for humans, especially considering the observed elastase activity
Influence of chitosan molecular weight on the properties of spray-dried donepezil-loaded microspheres
No full textDonepezil je reverzibilni inhibitor acetilkolinesteraze koji se koristi u liječenju Alzheimerove bolesti. Nedostatci
oralne primjene donepezila su gastrointestinalne nuspojave te mala bioraspoloživost u mozgu zbog slabog prolaska
kroz krvno-moždanu barijeru. Nazalnom primjenom zaobilazi se krvno-moždana barijera, što omogućuje izravnu
dostavu lijeka u mozak. Suvremena istraživanja usmjerena su na razvoj praškastih farmaceutskih oblika za nazalnu
primjenu temeljenih na mukoadhezivnim polimerima kao što je kitozan. Pokazano je da molekulska masa kitozana
može utjecati na svojstva farmaceutskih oblika. Cilj ovog rada bio je ispitati utjecaj molekulske mase kitozana na
svojstva kitozansko-manitolskih mikrosfera s donepezilom za nazalnu primjenu, pripravljenih sušenjem
raspršivanjem. U korištenim otopinama variran je tip kitozana (visokomolekulski, srednjemolekulski i
niskomolekulski) i koncentracija manitola (4 % i 6 %, m/V). Iskorištenje procesa sušenja raspršivanjem kretalo se
od 36,8 % do 65,2 %. Uspješnost uklapanja donepezila bila je visoka (96,1±1,7-101,2±0,7 %) te je sadržaj lijeka
u mikrosferama prikladan za nazalnu primjenu. Volumni promjeri pripravljenih mikrosfera s donepezilom, Dv10,
Dv50 i Dv90, redom su iznosili 7,00±0,07-12,0±0,92 μm, 23,2±0,16–28,8±1,02 μm i 55,5±0,28–73,9±3,02 μm.
Najveći Dv10 zabilježen je za mikrosfere pripravljene sušenjem raspršivanjem otopine koja je sadržavala
visokomolekulski kitozan i manitol u većoj koncentraciji. Uzorci s niskomolekulskim kitozanom imali su bolja
svojstva tečenja od ostalih uzoraka. Izmjereni su kutovi raspršenja 17,1±1,5-19,9±0,3° prikladni za nazalnu
primjenu. Ostatak u kapsuli nakon aktivacije raspršivača iznosio je 0,0±0,7-2,0±1,3 % od početne doze u kapsuli.
Mikrosfere su karakterizirane pozitivnim zeta potencijalom (16,1±0,9-38,8±3,9 mV) što upućuje na
mukoadhezivnost i potencijal poboljšanja permeacije uklopljenog lijeka. Primijećen je porast zeta potencijala s
porastom molekulske mase kitozana za uzorke s manjim sadržajem manitola.Donepezil is a reversible inhibitor of the acetylcholinesterase enzyme, used in the treatment of Alzheimer's disease. The disadvantages
of oral administration of donepezil are adverse effects in the gastrointestinal system and low bioavailability in the brain due to the
drug’s poor ability to penetrate the blood–brain barrier. The intranasal route enables the delivery of drug directly to the brain by
bypassing the blood-brain barrier. Modern research has been focused on the development of dry powder formulations for intranasal
administration based on mucoadhesive polymers such as chitosan. It has been shown that the molecular weight of chitosan can
influence the properties of drug formulations. The aim of this study was to examine the influence of chitosan molecular weight on
the properties of chitosan/mannitol based donepezil-loaded microspheres for intranasal administration, prepared by spray drying. In
the solutions used, the type of chitosan (high molecular weight, medium molecular weight and low molecular weight) and the
concentration of mannitol (4% and 6%, w/v) were varied. The yield of the spray drying process ranged from 36.8% to 65.2%.
Entrapment efficiency was high (96.1±1.7-101.2±0.7%) and drug loading was suitable for intranasal administration. The volume
diameters of the prepared donepezil-loaded microspheres, Dv10, Dv50 and Dv90, were 7.00±0.07-12.0±0.92 μm, 23.2±0.16–
28.8±1.02 μm and 55.5±0.28–73.9±3.02 μm, respectively. The highest Dv10 was recorded for microspheres prepared by spray drying
of the solution containing high molecular weight chitosan and mannitol in a higher concentration. Samples with low molecular weight
chitosan had better flow properties than other samples. The measured spray cone angles 17.1±1.5-19.9±0.3° are suitable for nasal
administration. Powder retention within the capsule upon activation ranged from 0.0±0.7% to 2.0±1.3% of the initial dose in the
capsule. The microspheres had a positive zeta potential (16.1±0.9-38.8±3.9 mV), which indicates possible mucoadhesion and the
potential to enhance the permeation of the encapsulated drug. Zeta potential increased with an increase in chitosan molecular weight
in samples with lower mannitol content
Stability testing of ophthalmic nanoemulsions under conditions of simulated tear turnover
No full textBolest suhog oka jedan je od najčešćih razloga posjeta oftalmologu i pogađa milijune ljudi. Karakteriziraju ju kronična upala, hiperosmolalnost suznog filma i smanjena debljina lipidnog sloja suznog filma, što uzrokuje simptome poput pečenja, svrbeža, crvenila i suzenja oka. Prva linija liječenja bolesti suhog oka primjena je bezreceptnih kapi za oko. Zadnjih nekoliko desetljeća istražuju se kapi za oko u obliku nanoemulzija te je odobreno nekoliko lijekova u tom obliku za liječenje bolesti suhog oka. Nanoemulzije tipa U/V daju mogućnost uklapanja slabo topljivih djelatnih tvari te dulje zadržavanje na mjestu primjene, a nude i simptomatsko liječenje bez djelatne tvari, zahvaljujući sinergizmu korištenih pomoćnih tvari u vidu stabilizacije i nadoknade suznog filma. Složeni su farmaceutski oblici s nekoliko fizičko-kemijskih parametara (primjerice, veličina, raspodjela veličina i zeta-potencijal kapljica unutranje faze) koji utječu na njihovu in vivo učinkovitost. Postoji veliki interes za razvoj inovativnih i generičkih lijekova temeljenih na tehnologiji nanoemulzija, ali zbog složenosti nanoemulzija taj je razvoj vrlo izazovan. Trenutno ne postoje biorelevantne in vitro metode konstruirane na temelju ključnih fizioloških i anatomskih aspekata površine oka, a koje bi omogućile učinkovit razvoj oftalmičkih nanoemulzija. Cilj ovog diplomskog rada je ispitati stabilnost oftalmičke nanoemulzije u uvjetima simulirane izmjene suza. U tu svrhu pripravljene su jednostavne U/V nanoemulzije stabilizirane neionskom PAT te je određen utjecaj razrjeđenja vodom ili vanjskom fazom nanoemulzije na veličinu i raspodjelu veličina te zeta-potencijal kapljica nanoemulzije. Potom je određena stabilnost jednostavne nanoemulzije u uvjetima simulirane izmjene suza korištenjem umjetne suzne tekućine koja sadržava soli, ureu i glukozu. Tijekom 40 minuta ispitivanja u uvjetima kontinuiranog biorelevantnog razrjeđenja nanoemulzije stabilizirane neionskom površinski aktivnom tvari nije uočena značajnija promjena veličine i raspodjele veličina te zeta-potencijala kapljica unutarnje faze.Dry eye disease (DED) is one of the most common reasons for visiting an ophthalmologist and affects millions of people. It is characterized by chronic inflammation, hyperosmolarity of the tear film and reduced thickness of the lipid layer of the tear film, which causes symptoms such as burning, itching, redness and watering of the eye. The first line of treatment for DED is the use of over-the-counter (OTC) eye drops. For the last few decades, eye drops in the form of nanoemulsions have been researched, and several medicines in this form have been approved for treatment of DED. Oil-in-water (O/W) nanoemulsions provide the possibility of incorporating lipophilic drugs and prolonging their retention time at the site of application. Furthermore, they offer symptomatic treatment without the active substance, thanks to the synergism of the excipients, by stabilizing and replacing of the tear film. They are complex pharmaceutical forms with several physicochemical parameters (such as size, polydispersity index and zeta-potential of the internal phase droplets) which affect their in vivo efficiency. There is great interest in the development of innovative and generic drugs based on nanoemulsion technology, but due to the complexity of nanoemulsions, this development is very challenging. Currently, there are no biorelevant in vitro methods constructed on the basis of key physiological and anatomical aspects of the eye surface, which would enable the effective development of ophthalmic nanoemulsions. The aim of this thesis is to examine the stability of ophthalmic nanoemulsion under the conditions of simulated tear turnover. For this purpose, simple O/W nanoemulsions stabilized by non-ionic surfactant were prepared and the influence of dilution with water or the external phase of the nanoemulsion on the size and polydispersity index and zeta-potential of the nanoemulsion droplets was determined. Then, the stability of a simple nanoemulsion was determined under the conditions of simulated tear turnover using an artificial tear solution containing salts, urea and glucose. During 40 minutes of testing under conditions of continuous biorelevant dilution of the nanoemulsion stabilized with a nonionic surfactant, no significant change in the size, polydispersity index and zeta-potential of the internal phase droplets was observed
Implikacije poremećaja opskrbe tržišta oralnim farmaceutskim oblicima lijekova
No full textCilj istraživanja: Cilj istraživanja je detektirati oralne lijekove koji se nalaze na listama lijekova Hrvatskog zavoda za zdravstveno osiguranje, izdaju na recept u javnim ljekarnama i koji nemaju generičku zamjenu u istoj dozi i istom farmaceutskom obliku zbog čega njihova nedostupnost implicira zamjenu farmaceutskom alternativom ili prilagodbu dostupnog oralnog oblika lijeka što može rezultirati medikacijskim pogreškama.
Materijal i metode: U istraživanje su uključeni svi oralni lijekovi s važećih lista lijekova Hrvatskog zavoda za zdravstveno osiguranje koji se izdaju u javnim ljekarnama. Lijekovi su razvrstani u one koje imaju jednu djelatnu tvar i one s kombinacijom djelatnih tvari. Izdvojeni su lijekovi koji nemaju zamjenu u istoj dozi, oni koji nemaju zamjenu ni u nekoj drugoj dozi, oni koji nemaju zamjenu u istom farmaceutskom obliku bilo da se radi o istom ili različitom načinu oslobađanja te oni koji nemaju zamjenu od drugog proizvođača. Od lijekova koji sadrže više djelatnih tvari izdvojeni su lijekovi koji nemaju adekvatnu zamjenu monokomponentnim lijekovima. Izdvojeni su nezaštićeni nazivi lijekova koji nemaju zamjenu u istoj terapijsko-kemijskoj podskupini te su detektirani konkretni lijekovi koji se na listama lijekova nalaze u jedinstvenoj dozi i od jedinstvenog proizvođača. Dobiveni podaci statistički su obrađeni po skupinama Anatomsko–Terapijsko–Kemijske klasifikacije (ATK). Pregledom relevantne literature izdvojeni su primjeri koji demonstriraju implikacije poremećaja opskrbe oralnim farmaceutskim oblicima lijekova.
Rezultati: Od 2225 lijekova uključenih u analizu, njih 1815 sadrži jednu od ukupno 302 djelatne tvari, a 410 ih sadrži dvije ili više djelatnih tvari, a takvih je kombinacija 77. Ukupno 434 lijeka (19,5%) nema zamjenu u istoj dozi od čega je njih najviše u ATK skupinama C (lijekovi koji djeluju na kardiovaskularni sustav), N (lijekovi koji djeluju na živčani sustav) i A (lijekovi koji djeluju na probavni sustav i metabolizam), a 88 lijekova (4,0%) nema zamjenu ni u drugoj dozi. Adekvatnu zamjenu u istom farmaceutskom obliku nema 166 lijekova (7,5%), od čega 19 lijekova (0,9%) nema zamjenu u obliku istog načina oslobađanja. Nikakvu farmakoterapijski prihvatljivu zamjenu nema 4,8% analiziranih lijekova. Zamjenu u istom farmaceutskom obliku od drugog proizvođača nema 90 lijekova (4,0%), od čega 4 lijeka proizvodi samo jedan proizvođač u istoj dozi s različitim načinom oslobađanja. Zamjenu monokomponentnim lijekovima nemaju 74 fiksne kombinacije (18,0%). Terapijsku alternativu u istoj kemijsko-terapijskoj ATK podskupini nema 96 djelatnih tvari ili kombinacija djelatnih tvari. Generičku zamjenu, a ni alternativu u istoj ATK podskupini nema 34 lijeka odobrena u jedinstvenoj dozi i od jedinstvenog proizvođača. Implikacije poremećaja opskrbe oralnim oblicima očituju se u povećanoj potražnji za drugim lijekovima iste ATK podskupine, donošenju protokola o postupanju farmaceuta u slučaju nestašice, zamjeni lijekom koji ne pokriva zdravstveno osiguranje, dozvoljenoj manipulaciji dostupnim lijekom te zamjeni s drugim oblikom istog ili različitog načina oslobađanja i/ili različitom inačicom djelatne tvari.
Zaključak: Nestašice lijekova globalni su problem koji implicira izravni štetni utjecaj na javno zdravstvo i dobrobit pacijenta zbog odgođenog, uskraćenog ili neadekvatnog liječenja koje za posljedicu može imati medikacijske pogreške, povećani rizik od nuspojava i/ili interakcija lijekova, nepovjerenje u terapiju, smanjenu suradljivost te dodatne financijske troškove. Zamjena nedostupnog lijeka drugim lijekom kao i svaka manipulacija lijekom u svrhu prilagodbe doze ili primjena lijeka manje jačine u ekvivalentnoj dozi zbog nedostupnosti lijeka željene jačine treba biti znanstveno opravdana i potkrijepljena kliničkim farmakokinetičkim dokazima te opisana u službenoj dokumentaciji o lijeku.Objectives: The aim of the study is to detect oral drugs that are on the lists of drugs of the Croatian Health Insurance Fund, are available in public pharmacies and do not have a generic substitute in the same dose and the same pharmaceutical form of the drug which can result in medication errors.
Material and methods: The research included all oral medicines from the valid lists of medicines of the Croatian Health Insurance Fund that are issued in public pharmacies. Medicines are classified into those that have one active substance and those with a combination of active substances. Drugs that do not have a replacement in the same dose, those that do not have a replacement in another dose, those that do not have a replacement in the same pharmaceutical form, whether it is the same or different mode of release, and those that do not have a replacement from another manufacturer. Among the drugs that contain more active substances, drugs that do not have an adequate replacement with monocomponent drugs have been singled out. Unprotected names of drugs that have no substitute in the same therapeutic-chemical subgroup were singled out, and specific drugs that are on the drug lists in a single dose and from a single manufacturer were detected. The obtained data were statistically processed by groups of Anatomical-Therapeutic-Chemical Classification (ATC). A review of the relevant literature highlights examples that demonstrate the implications of supply disruptions in oral pharmaceutical forms.
Results: Of the 2225 drugs included in the analysis, 1815 contain one of a total of 302 active substances, and 410 contain two or more active substances, of which there are 77 combinations. A total of 434 drugs (19,5%) have no replacement in the same dose, most of which are in ATC groups C (drugs that act on the cardiovascular system), N (drugs that act on the nervous system) and A (drugs that act on the digestive system and metabolism), and 88 drugs (4,0%) have no
replacement at the second dose. 166 drugs (7,5%) do not have an adequate substitution in the same pharmaceutical form, of which 19 drugs (0,9%) do not have a substitution in the form of the same mode of release. 4,8% of the analyzed drugs have no pharmacotherapeutically acceptable substitution. 90 drugs (4,0%) do not have a substitute in the same pharmaceutical form from another manufacturer, of which 4 drugs are produced only by the same manufacturer in the same dose with different mode of release. 74 fixed combinations (18,0%) do not replace monocomponent drugs. 96 active substances or combinations of active substances do not have a therapeutic alternative in the same chemotherapeutic ATC subgroup. There are no generic substitutes or alternatives in the same ATC subgroup with 34 drugs approved in a single dose and from a single manufacturer. Implications of oral supply disorders are manifested in increased demand for other drugs of the same ATC subgroup, adoption of a protocol on pharmacists in case of shortage, replacement with another form of the same or different mode of release and /or different version of the active substance insurance and permitted manipulation of available medicine.
Conclusion: Drug shortages are a global problem that implies a direct detrimental impact on public health and patient well-being due to delayed, denied or inadequate treatment that can result in medication errors, increased risk of side effects and/or drug interactions, distrust in therapy, decreased compliance and additional financial costs. Replacement of an unavailable drug with another drug as well as any manipulation of the drug for dose adjustment or administration of a lower strength drug at an equivalent dose due to unavailability of the desired strength should be scientifically justified and supported by clinical pharmacokinetic evidence and described in the official dossier
Verification of a method for homocysteine analysis in dried blood spots using tandem mass spectroscopy
No full textHomocistein je aminokiselina koja u organizmu nastaje isključivo u metioninskom ciklusu. Povišena koncentracija homocisteina u krvi naziva se hiperhomocisteinemija, a povezuje se uz mnoga stanja uključujući kardiovaskularne i neurodegenerativne bolesti, komplikacije u trudnoći, maligne bolesti i dijabetes. Ipak, hiperhomocisteinemija najčešće se očituje kod nasljednih metaboličkih poremećaja poput klasične homocistinurije gdje je uslijed mutacije prisutan manjak ili potpuna odsutnost enzima uključenih u metioninski ciklus. Homocistein se do sada određivao iz uzorka plazme, međutim uzorak suhe kapi krvi bitno je praktičniji za rutinsko određivanje, a pokazala se i potreba za mjerenjem homocisteina u drugostupanjskim testovima novorođenačkog probira. Provedbom kratke analitičke validacije zaključeno je da je metoda određivanja homocisteina iz uzorka suhe kapi krvi tandemskom spektrometrijom masa primjenjiva za rutinski rad.Homocysteine is an amino acid that is formed only during the methionine cycle in the human body. An elevated concentration of homocysteine in the blood is called hyperhomocysteinemia, and it is associated with many conditions, including cardiovascular and neurodegenerative diseases, complications in pregnancy, malignancies, and diabetes. However, hyperhomocysteinemia is most often manifested in hereditary metabolic disorders such as classical homocystinuria. Due to the mutation, there is a deficiency or complete absence of enzymes involved in the methionine cycle. Up to now, homocysteine has been determined from a plasma sample, but a dry blood spot is significantly more practical for routine determination. Also, there is a need for measuring homocysteine in secondary newborn screening tests. During the short analytical validation, it was concluded that the method of determining homocysteine from dried blood spots by tandem mass spectrometry is applicable for routine work
Botanical characteristics, phytochemical profile and biological effects of Globularia L. species
No full textVrsta Globularia alypum L. široko je primjenjivana biljna vrsta u narodnoj medicini mediteranskih zemalja i najbolje istražena predstavnica roda Globularia L. U okviru ovog doktorskog rada prvi je put provedeno opsežno usporedno istraživanje botaničkih obilježja, fitokemijskog profila i bioloških učinaka četiriju vrsta roda Globularia, koje je, uz vrstu G. alypum, uključivalo tri slabije istražene srodne vrste: G. cordifolia L. (G. cordifolia subsp. cordifolia (L.) Hayek), G. meridionalis (Podp.) O. Schwarz (G. cordifolia subsp. bellidifolia (Ten.) Wettst.) i G. punctata Lapeyr. Istraživanjem su obuhvaćeni uzorci 19 samoniklih populacija, sabrani u vrijeme cvatnje na području Hrvatske i okolice kroz više različitih sezona (do pet). U cilju procjene biomedicinskog potencijala slabije istraženih vrsta provedena je kvalitativna i kvantitativna kemijska analiza biološki aktivnih sastavnica primjenom različitih kromatografskih i spektroskopskih tehnika (TLC, HPLC-DAD-ESI-MS, LC-PDA-ESI-MSn, UV/Vis spektrofotometrija, GC-FID, GC-MS), a prikladnim metodama u uvjetima in vitro ispitani su odabrani biološki učinci prethodno utvrđeni kod vrste G. alypum (antidijabetski, antioksidativni, protuupalni, antimikrobni i citotoksični). Navedenim istraživanjima prethodila su temeljna botanička istraživanja na ekološkoj, morfološkoj, histološko-anatomskoj, citološkoj i molekularnoj razini, kojima se u kombinaciji s fitokemijskim istraživanjima pokušalo pridonijeti rješavanju taksonomskog spora oko razdvojenosti vrsta G. cordifolia i G. meridionalis. Sve četiri istraživane vrste pokazale su antidijabetski, antioksidativni, protuupalni, antimikrobni i citotoksični učinak u uvjetima in vitro, što je bilo moguće povezati s njihovim utvrđenim fitokemijskim profilima. Rezultati usporedbe fitokemijskog profila ukazali su na veću sličnost vrste G. punctata (podrod Globularia) s vrstom G. alypum (podrod Abolaria) od ostalih dviju vrsta (podrod Abolaria). Podjelu na podrodove nije podupirala ni usporedba histološko-anatomskih, molekularnih i fitokemijskih značajki, koja je ukazala na veću sličnost vrsta G. cordifolia i G. meridionalis s vrstom G. punctata. Također, kod uzoraka uključenih u ovo istraživanje nisu uočena karakteristična ekološka, morfološka, histološko-anatomska, citološka, molekularna ili fitokemijska obilježja koja bi podupirala razdvajanje na vrste G. cordifolia i G. meridionalis.Globularia alypum L. is a plant species widely used in folk medicine of Mediterranean countries and the best explored representative of the genus Globularia L. In this doctoral thesis, a comprehensive comparative study of botanical characteristics, phytochemical profile and biological effects of four Globularia species, which, apart from G. alypum, included three less explored related species: G. cordifolia L. (G. cordifolia subsp. cordifolia (L.) Hayek), G. meridionalis (Podp.) O. Schwarz (G. cordifolia subsp. bellidifolia (Ten.) Wettst.) and G. punctata Lapeyr., was conducted for the first time. Samples from 19 natural populations, collected during flowering time in Croatia and surrounding area in several different seasons (up to five), were used in this study. In order to evaluate the biomedical potential of less investigated species, qualitative and quantitative chemical analyses of biologically active constituents were conducted using different chromatographic and spectroscopic techniques (TLC, HPLC-DAD-ESI-MS, LC-PDA-ESI-MSn, UV/Vis spectrophotometry, GC-FID, GC-MS), while suitable in vitro methods were used to evaluate selected biological effects, previously established for G. alypum (antidiabetic, antioxidative, anti-inflammatory, antimicrobial and cytotoxic). The aforementioned research was preceded by basic botanical research on ecological, morphological, histo-anatomical, cytological and molecular level, by which, in combination with the phytochemical research, an attempt was made to contribute to the resolution of the taxonomic dispute over the separation of the species G. cordifolia and G. meridionalis. All four examined species showed antidiabetic, antioxidative, anti-inflammatory, antimicrobial and cytotoxic activity in vitro, which could be linked to their established phytochemical profiles. The results of the comparison of phytochemical profiles showed greater similarity of G. punctata (subgenus Globularia) to G. alypum (subgenus Abolaria) than those of the other two species (subgenus Abolaria). The division into subgenera was also not supported by the comparison of histo-anatomical, molecular and phytochemical characteristics, which indicated greater similarity of G. cordifolia and G. meridionalis to G. punctata. Moreover, no ecological, morphological, histo-anatomical, cytological, molecular or phytochemical characteristics, that would support the separation of G. cordifolia and G. meridionalis into different species, were observed for the samples included in this study
Phytotherapeutic approach for the treatment of GERD
No full textGastroezofagealna refluksna bolest (GERB) je sve učestalija gastrointestinalna bolest, a definira se kao patološko stanje koje nastaje zbog refluksa želučanog sadržaja u jednjak, usnu šupljinu te ponekad gornje dišne puteve s posljedicama poput neugodnih simptoma i/ili dodatnih komplikacija. Dugotrajno korištenje standardnih lijekova u liječenju GERB-a može dovesti do neželjenih nuspojava, stoga raste popularnost blagog fitoterapijskog pristupa liječenju. U svrhu pronalaženja fitopreparata koji imaju znanstveno dokazan učinak, pretražene su baze PubMed i Scopus. Ukupno je pronađeno 47 kliničkih studija i 2 pregledna rada te je ispitan utjecaj različitih fitopreparata koji su podijeljeni u tri skupine. U prvoj skupini su uključeni fitopreparati antioksidativnog i protuupalnog djelovanja kao što su aloe vera, amla, bijeli glog, čubar, dunja, maslina, mirta, papaja i sladić. Sve su studije potvrdile njihovu učinkovitost, međutim rezultati jedne studije vezane uz papaju i druge za čubar nisu bili statistički značajni u odnosu na placebo. U drugu skupinu uključeni su fitopreparati koji tvore fizičku barijeru refluksu, a to su alginati, dječje antirefluksne formule, pektini te ostala vlakna. Dva pregledna rada su pokazala učinkovitost alginata i antirefluksnih formula. Međutim, ishodi studija vezanih uz različita vlakna bili su proturječni. U treću skupinu uključeni su tradicionalni pripravci različitih medicina: Acidinol sirup, Banxia Xiexin Tang, Pepsil i Safoof-e-Katira, Rikkunshito, Tongjiang granule, Wu chu yu tang i Zhizhukuanzhong kapsule te je svim navedenim pripravcima utvrđena učinkovitost. Stoga slijedi zaključak kako biljni pripravci mogu biti učinkovita pomoć u liječenju GERB-a te ih je potrebno dodatno proučavati u dobro dizajniranim kliničkim ispitivanjima na većem broju ispitanika kako bi se spoznale njihove mogućnosti, ali i ograničenja.Gastroesophageal reflux disease (GERD) is a common gastrointestinal disease with an increasing prevalence, defined as a pathological condition caused by reflux of gastric contents into the esophagus, oral cavity and sometimes the upper respiratory tract which can cause troublesome symptoms and/or additional complications. Long-term use of standard drugs in the treatment of GERD can lead to unwanted side effects, therefore mild, phytotherapeutic approach is gaining popularity among patients. PubMed and Scopus databases were searched to find phytopreparations with a scientifically proven effect. A total of 47 clinical studies and 2 review papers were found and the effect of different phytopreparations was examined, which were divided into three groups. The first group includes phytopreparations with antioxidant or anti-inflammatory effects, such as aloe vera, Indian gooseberry, common hawthorn, summer savory, quince, olive, myrtle, papaya and licorice. All studies confirmed their efficacy, however results of one study conducted for papaya and another for summer savory were not statistically significant compared to placebo. The second group includes phytopreparations that form a physical barrier against the reflux, such as alginates, anti-reflux infant formulas, pectins and other fibers. Two review papers have shown the effectiveness of alginates and anti-reflux formulas. However, the results of fiber-related studies were contradictory. The third group includes traditional herbal preparations from different types of medicines, such as Acidinol syrup, Banxia Xiexin Tang, Pepsil and Safoof-e-Katira, Rikkunshito, Tongjiang granules, Wu chu yu tang and Zhizhukuanzhong capsules. The effectiveness of all these preparations was confirmed. Therefore, it can be concluded that herbal preparations can be an effective choice in the treatment of GERD, so they need to be studied in additional well-designed clinical trials on a larger number of subjects in order to understand their possibilities, but also their limitations
Influence of Satureja montana L. essential oil and thymol on motility and proteolytic activity of Pseudomonas aeruginosa
No full textPseudomonas aeruginosa ubikvitarni je oportunistički patogen koji je sve češći uzročnik bolničkih infekcija, primarno kod imunokompromitiranih pacijenata i pacijenata s kroničnim ranama. Predstavlja sve veći problem u zdravstvu upravo zbog brojnih faktora virulencije koji omogućuju bakteriji prodor u i kroz tkivo domaćina i sposobnosti izbjegavanja imunosnog sustava domaćina. Ima brojne efektivne mehanizme rezistencije na antibiotike što dodatno otežava proces liječenja. Pseudomonas aeruginosa je sposobna stvoriti biofilm, a stvaranje biofilma je pod kontrolom bakterijske međustanične komunikacije. Isto tako, pod kontrolom bakterijske međustanične komunikacije su kretanje bakterije u obliku rojenja, rezistencija na antibiotike, stvaranje i izlučivanje faktora virulencije poput proteaza koje imaju sposobnost razgradnje tkiva domaćina, te ostalih sekundarnih metabolita koji dodatno kompliciraju infekciju bakterijom. Budući da se javlja sve veća rezistencija na klasičnu terapiju antibioticima, počinje se uzimati u obzir mogućnost korištenja eteričnih ulja u u kombinaciji s antibioticima ili zasebno. Eterična ulja su odavno poznata po svojim antimikrobnim svojstvima te zbog više mehanizama djelovanja na bakterije, pokazuju se kao dobri kandidati za testiranje na rast P. aeruginosa. U ovom radu ispitan je utjecaj eteričnog ulja biljne vrste Satureja montana L. i njene glavne sastavnice timola u koncentraciji od 0,5 mg/mL, zasebno i u kombinaciji s aminoglikozidnim antibiotikom tobramicinom u subinhibitornim koncentracijama od 0,5 μg/mL i 2 μg/mL na pokretljivost u obliku rojenja i proteolitičku aktivnost Pseudomonas aeruginosa sojeva ATCC 27853, BB1285 (rmtD+), PA14 i PAO1. Tobramicin zasebno djeluje inhibitorno na rojenje i proteolitičku aktivnost svih sojeva osim BB1285 (rmtD+), upravo zbog njegove visoke rezistencije na aminoglikozide. Eterično ulje Satureja montana L. djeluje inhibitorno na proteolitičku aktivnost soja PA14, a za soj PAO1 nema izražen učinak, dok za soj ATCC 27853 i BB1285 (rmtD+) djeluje promotivno. Timol pokazuje inhibitorno djelovanje jačeg intenziteta na proteolitičku aktivnost za soj PA14 i PAO1, promotivno za soj BB1285 (rmtD+), a za soj ATCC 27853 nema izražen učinak. Eterično ulje Satureja montana L. i timol djeluju inhibitorno na rojenje sojeva ATCC 27853, PAO1 i PA14, a na soj BB1285 (rmtD+) nemaju učinka, s time da timol pokazuje inhibitorni učinak jačeg intenziteta. Eterično ulje Satureja montana L. i tobramicin u kombinaciji pokazuju sinergistički učinak i djeluju inhibitorno na proteolitičku aktivnost sojeva ATCC 27853, PA14 i PAO1, a na soj BB1285 (rmtD+) nemaju izraženog učinka. Kombinacija timola i tobramicina je pokazala isti učinak, no jačeg intenziteta. Eterično ulje Satureja montana L. i tobramicin u kombinaciji pokazuju inhibitorni učinak na rojenje za sojeve ATCC 27853, PAO1 i PA14, dok za soj BB1285 (rmtD+) ne pokazuje vidljivi učinak. Kod soja ATCC 27853, PAO1 i PA14 se vidi antagonističko djelovanje. Učinak kombinacije timola i tobramicina na rojenje je isti kao i kombinacija eteričnog ulja Satureja montana L. i tobramicina, no jačeg intenziteta, što upućuje da je timol sastavnica koja ima najznačajniji učinak u eteričnom ulju Satureja montana L. Rezultati ovoga rada doprinijet ćemo daljnjem istraživanju novih mogućnosti u borbi protiv infekcija uzrokovanih bakterijom Pseudomonas aeruginosa.Pseudomonas aeruginosa is a ubiquitous opportunistic pathogen that is becoming an increasingly common cause of hospital infections. It is an increasing problem in health care because of the numerous virulence factors that allow the bacteria to penetreate into and through the host's tissue and its ability to avoid the immune system of the host. It has numerous effective mechanisms of antibotic resistance, which further complicates the treatment process. Pseudomonas aeruginosa is capable of producing biofilm, which is controlled by quorum sensing. Also, quorum sensing controls the movement of the bacteria in the form of swarming, antibiotic resistance, formation and excretion of various virulence factors, such as proteases that have the ability to break down the host's tissue and other secondary metabolites that further complicate the infection. Since the resistance to conventional antibiotic therapy is constantly increasing, the possibility of using essential oils separately or in combination with antibiotics may be considered. Essential oils have long been known for their antimicrobial properties and due to several mechanism of action towards bacteria, they are taken into consideration as good candidates for P. aeruginosa growth testing. This study examined the effects of Satureja montana L. essential oil and its main component thymol at a concentration of 0,5 mg/mL, separately and in combination with amynoglicoside tobramycin at subinhibitory concentrations of 0,5 μg/mL and 2 μg/mL on swarming motility and the proteolytic activity of P. aeruginosa strains ATCC 27853, BB1285 (rmtD+) PA14 and PAO1. Tobramycin showed an inhibitory effect on swarming and proteolytic activity of all strains except BB1285 (rmtD+) because of its high resistance to aminoglycosides. Satureja montana L. essential oil acted inhibitory to the proteolitic activity of strain PA14, but for the strain PAO1 it had no visible effect, while for strains ATCC 27853 and BB1285 (rmtD+) it stimulated the proteolytic activity. Thymol demonstrated inhibitory effect of higher intensity towards proteolytic activity of strains PA14 and PAO1, promotive effect for BB1285 (rmtD+) and no effect for strain ATCC27853. Satureja montana L. essential oil and thymol had an inhibitory effect on the swarming of strains ATCC 27853, PAO1 and PA14, but for the strain BB1285 (rmtD+) they showed no effect, with thymol showing inhibitory effect of higher intensity. Satureja montana L. essential oil and tobramycin in combination showed synergistic effect on reducing the proteolytic activity for strain ATCC 27853, PA14 and PAO1, but for strain BB1285 (rmtD+) they had no significant effect. The combination of thymol and tobramycin demonstrated the same effect, but of a higher intensity. Satureja montana L. essential oil and tobramycin in combination reduced the swarming of strains ATCC27853, PA14 and PAO1, while for strain BB1285 (rmtD+) they had no signicificant effect. Antagonistic effect of tobramycin and Satureja montana L. essential oil was shown on strains ATCC 27853, PAO1 and PA14. Effects of combination of thymol and tobramycin on swarming was the same as that of the combination of tobramycin and Satureja montana L., but of a higher intensity, which indicates that thymol is a component that has the most significant effect in Satureja montana L. The results of this study will hopefully contribute to further research of new possibilities in fighting Pseudomonas aeruginosa infections
Uspostava pedijatrijskih referentnih intervala za koagulacijske parametre za sustav analizatora/reagensa
No full textCilj: Uspostaviti referentne intervale (RI) globalnih pretraga zgrušavanja i najučestalijih parametara krvarenja za dječju populaciju obzirom na dob i spol uzimajući u obzir korištenu metodu, analizator i reagens te usporediti dobivene vrijednosti s indirektnom metodom određivanja RI.
Ispitanici i metode: Podaci za parametre zgrušavanja: protrombinsko vrijeme (PV; s), aktivirano parcijalno tromboplastinsko vrijeme (aPTV; s), trombinsko vrijeme (TV; s), aktivnosti fibrinogena (Fbg; g/l) faktora VIII (FVIII; %), faktora XIII (FXIII; %), von Willebrandova faktora (VWF:Ac; %), antigena koncentracija von Willebrandova faktora (VWF:Ag; %) i aktivnost vezanja von Willebrandova faktora za kolagen (VWF:CB; %) prikupljeni su retrospektivno iz laboratorijskog informacijskog sustava tijekom pet godina (2015. - 2021.). U obzir su uzeti samo laboratorijski rezultati zdravih ispitanika (N = 1000) u dobi od 1-18 godina određivani na analizatorima STA-R. Prva grupa (N = 250) pokriva dobnu skupinu od 1-5 godina, druga (N = 248) od 6-10, treća (N = 242) od 11-14 te četvrta grupa (N = 260) od 15-18 godina. U svih ispitanika RI su određeni prema smjernicama CLSI (engl. Clinical Laboratory Standard Institute) – direktnim a posteriori pristupom. Nadalje, dobivene vrijednosti uspoređene su s vrijednostima RI dobivenim indirektnom metodom (N = 12348).
Rezultati: Od globalnih parametara zgrušavanja jedino RI za PV nisu pokazali statistički značajnu razliku između djevojčica i dječaka (P = 0,111). Statistički značajna razlika RI-a među dobnim skupinama pokazala se za PV i aPTV (P < 0,0001 i P = 0,007). Referentni intervali FVIII i FXIII nisu se statistički značajno razlikovali između dobnih skupina (P = 0,078 i P = 0,082) dok je za FXIII značajna razlika između spola ispitanika (P = 0,038). Dokazana je statistički značajna razlika u RI za sva tri parametravWF za grupu 4 u odnosu na ostale grupe (P = 0,029, P =
0,005 i P = 0,009). Indirektna procjena RI za globalne teste sustava zgrušavanja rezultirala je statistički nerazlučivim razlikama u RI u odnosu na RI dobivene direktnom metodom.
Zaključak: Referentni intervali znatno se razlikuju obzirom na dob, metodu, proizvođača te korišteni reagens. Moraju se koristiti referentni rasponi specifični za dob/spol kao i za sustav analizatora/reagensa kako bi se osigurala pravilna procjena hemostaze u djece. Referentni intervali dobiveni korištenjem indirektne metode usporedivi su s RI dobivenim direktnom metodom.Objectives: Establishment of reference intervals (RI) of global clotting tests and the most common bleeding parameters for the paediatric population with respect to age and sex, taking into account the method, analyser and reagent used and to compare the obtained values with the indirect method of determining RI.
Patients and Methods: Data for coagulation parameters: prothrombin time (PT; s), activated partial thromboplastin time (APTT; s), thrombin time (TT; s), fibrinogen activity (Fbg; g/l) factor VIII (FVIII; %), factor XIII (FXIII; %), von Willebrand factor (VWF:Ac; %), antigenic concentration of von Willebrand factor (VWF:Ag; %) and collagen binding activity of von Willebrand factor (VWF:CB; %) were collected retrospectively from laboratory information system over five years (2015-2021). Only laboratory results of healthy subjects (N = 1000) aged 1-18 years determined on STA-R analysers were taken into account. The first group (N = 250) covers the age group of 1-5 years, the second (N = 248) of 6-10, the third (N = 242) of 11-14 and the fourth group (N = 260) of 15-18 years. In all subjects, RI was determined according to the Clinical Laboratory Standard Institute guidelines (CLSI) – using direct a posteriori approach. Furthermore, the obtained values were compared with the RI values obtained by the indirect method (N = 12348).
Results: Of the global coagulation parameters, only RI for PV did not show a statistically significant difference between girls and boys (P = 0.111). A statistically significant difference in RI between age groups was shown for PV and aPTV (P < 0.0001 and P = 0.007). The reference intervals of FVIII and FXIII did not differ statistically significantly between age groups (P = 0.078 and P = 0.082), while for FXIII there was a significant difference according to gender (P = 0.038). A statistically significant difference in RI was proved for all three parameters of vWF for group 4 in
relation to other groups (P = 0.029, P = 0.005 and P = 0.009). Further, indirect estimation of RI for global coagulation system tests resulted in statistically indistinguishable differences in RI relative to RI obtained by the direct method.
Conclusion: Reference intervals vary considerably depending on age, method, manufacturer, and reagent used. Reference ranges specific to age/gender as well as analyser/reagent system must be used to ensure proper assessment of haemostasis in children. Reference intervals obtained using the indirect method are comparable to the RI obtained by the direct method
Analytical procedures based on the application of X-ray fluorescence total reflection spectrometry for multielement analysis of biological samples
No full textPoznavanje te praćenje elementarnog sastava bioloških uzoraka od velikog je interesa s obzirom na
važnost pojedinih elemenata u različitim (pato) fiziološkim procesima u ljudskom organizmu kao i
njihovoj ulozi u dijagnostici i prevenciji različitih poremećaja. Danas su dostupne različite analitičke
tehnike za elementnu analizu bioloških uzoraka što je vrlo važno u kliničkoj primjeni i ranijem
otkrivanju bolesti poput ateroskleroze, autoimunih bolesti, neuroloških poremećaja, starenja i raka.
Posebna pažnja se posvećuje primjeni analitičkih tehnika i metoda koje vode brigu o načelu „zelene
kemije“ prvenstveno upotreba malih količina uzorka, male količine reagensa, brz i siguran postupak.
U tom smislu, TXRF postaje važan alat za kvalitativnu i kvantitativnu elementarnu analizu. TXRF
tehnika temelji se na fizikalnom fenomenu totalne refleksije X-zraka koji pokazuje da se
reflektivnost X-zraka s ravnog materijala izrazito povećava ispod kritičnog kuta od 0,1°. Cilj ovog
diplomskog rada bio je proučiti i sistematizirati znanstvenu literaturu o mogućnosti primjene TXRF
spektrometrije za određivanju metala u različitim tipovima bioloških uzoraka u svrhu procjene
potencijalne rutinske primjene TXRF u kliničkim laboratorijima te u nutricionističke svrhe