National Institute of Health Dr. Ricardo Jorge
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Human TP53 is a tumour suppressor that acquires oncogenic functions during integrated stress response (ISR) due to a translational switch
No full textEukaryotic cells have developed different mechanisms and adaptive pathways that allow them to cope with external stress stimuli. Under stress conditions, global protein synthesis is shut down, and some alternative mechanisms of mRNA translation initiation are induced.
Although the tumour suppressor protein p53 — the most mutated gene in cancer — has been considered the guardian of the genome and a master regulator of several cellular functions, the truth is it is not just one isoform, the full-length (FLp53), but also many other p53 isoforms that have been described so far. Based on our previous results, some functions of the shorter isoforms are different from and complement FLp53 activity.
Here we show the specific induction of Δ160p53 isoform during integrated stress response (ISR). We confirmed the presence of an Internal Ribosome Entry Site (IRES) in p53 mRNA that controls Δ160p53 isoform translation, using a bicistronic reporter construct. When subjecting cells to endoplasmic reticulum stress, we showed that eIF2α phosphorylation is a key event leading to cap-independent expression of Δ160p53 during ISR.
Also, some cancer-specific mutations in the DNA-binding domain of p53 enhance cap-independent translation of Δ160p53 via Δ160p53IRES. Using an antisense morpholino oligo targeting Δ160IRES significantly reduces Δ160p53 protein levels and impaired its oncogenic functions.
Additionally, we found the 5’untranslated region of Δ160p53 inhibits the IRES activity.
Our data support a model in which an IRES structure in the coding region of p53 is activated under stress conditions, leading to the expression of the oncogenic shorter Δ160p53 isoform, whose structure is affected by cancer-specific mutations in the p53 gene.
A better understanding of Δ160p53IRES structure and function may be advantageous for a more efficient therapeutic targeting of p53.FCTinfo:eu-repo/semantics/publishedVersio
Learning from mRNA: the relevance of the tumour suppressor protein UPF1’s internal ribosome entry site-mediated translation in tumorigenesis
No full textCrucial in several cellular processes, such as nonsense-mediated mRNA decay, cell cycle progression, and telomere maintenance and homeostasis, Up-frameshift 1 (UPF1) has also been considered a tumour suppressor protein in hepatocellular carcinoma and gastric cancer, as it is underexpressed in the latter and negatively correlated to MALAT1 (long non-coding RNA metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1) expression. UPF1 overexpression inhibits some cancer-specific features, like proliferation, cell cycle progression, cell migration and invasion, and enhances apoptosis, turning the UPF1/MALAT1 pathway a potential therapeutic target for gastric cancer.
Here, we investigate the importance of UPF1 internal ribosome entry site (IRES)-dependent translation in tumorigenesis, specifically in colorectal cancer. Thus, we used a bicistronic system with two reporter genes, in which we cloned UPF1 5’ untranslated region (UTR) upstream the second cistron, whose translation will only occur internally. We transcribed the bicistronic mRNA in vitro and transfected HeLa (cervical cancer), NCM460 (normal intestinal-derived colonocytes) and HC116 (pre-metastatic colorectal carcinoma) cells with such mRNA, along with the positive and negative controls. The results show a significant increase in IRES-mediated translation levels compared to those of the negative control, both in normal conditions and under endoplasmic reticulum stress. Also, internal initiation occurs in the absence of the cap structure. Deletional and mutational analysis of UPF1 5’UTR showed that nucleotides 1–100 (stem loop (SL) I) and 151–275 (SL III) — out of 275 nucleotides — are the minimal required sequences for the IRES to work properly. Also, we used RNA antisense oligonucleotides (ASOs) targeting UPF1 IRES SL I and III, and observed a reduced UPF1 expression. Cellular viability increases in HCT116 cells and decreases in NCM460 cells treated with ASOs targeting SL III and SL I, respectively, whereas apoptosis increases in NCM460 cells and decreases in HCT116 cells treated with ASOs targeting SL I. This may be the dawn of a new RNA-based therapeutic approach regulating colorectal cancer development.FCTinfo:eu-repo/semantics/publishedVersio
UPF1 internal ribosome entry site-mediated translation and its importance in tumorigenesis
No full textAims: UPF1 internal ribosome entry site-mediated translation and its importance in tumorigenesis; Confirm UPF1 5’ untranslated region (UTR) can mediate
internal ribosome entry site (IRES)-mediated translation; Check whether the IRES-dependent translation is maintained under cap-dependent-impairing conditions
(hypoxia); Identify the minimal sequence required for IRES-mediated translation; Investigate the biological role of UPF1 IRES-mediated
translation in tumorigenesis.FCTinfo:eu-repo/semantics/publishedVersio
Regulation of the Human PERK mRNA Translation by Upstream Open Reading Frames
No full textUpstream open reading frames (uORFs) are cis-acting elements located within the 5’ leader sequence (5’UTR) of transcripts, which can regulate translation of the correspondent main open reading frame (mORF). During endoplasmic reticulum (ER) stress, the accumulation of unfolded proteins activates the ER-resident PKR-like ER kinase (PERK), which results in phosphorylation of eIF2α to inhibit global mRNA translation, while allowing the selective uORF-mediated translation of downstream effectors responsible for stress resolution or, ultimately, cell death. The dual role of PERK in regulating cell fate was implicated in human diseases, like diabetes, neurodegenerative disorders and cancer. Moreover, mutations in the EIF2AK3 gene (encoding PERK) were associated to the rare genetic disease, Wolcott-Rallison Syndrome (WRS). In this work, we aimed to study the translational regulatory role of 5 AUG- and 3 non-AUG-uORFs identified in the PERK 5’UTR and assess its biological relevance. While uORF2 and the non-AUG-uORFs 5, 6 and 7 (numbered according to their distance to the 5’ end of the mRNA) do not seem to have a regulatory role, uORF1, uORF3, uORF4 and uORF8 together present a strong repressive effect over mORF translation in basal conditions. Also, we observe that uORF1 is frequently translated allowing low levels of translation re-initiation at the main ORF. Curiously, we found that when PERK is overexpressed, it leads to the spontaneous activation of a portion of PERK in the absence of any stress stimulus, possibly highlighting the biological relevance of its uORF-mediated translational regulation. Conversely, during ER stress, increased bypass of uORF1 results in a modest degree of translational de-repression, which may help to counterbalance the increased rate of PERK protein turnover observed in these conditions. We also observed that alteration of the PERK uORFs by mutations found in WRS patients modify mORF expression, providing a possible link to the disease. Altogether, we highlight the importance of including 5’UTRs in the screening of disease-related mutations and the necessity of functional studies to assess their role in pathogenesis.Partially supported by UID/MULTI/04046/2013 center grant from FCT to BioISI. RF is recipient of a fellowship from BioSys PhD programme (SFRH/BD/114392/2016) from FCT.N/
Internal ribosome entry site (IRES)-mediated translation as a putative candidate mechanism to mRNA-based therapies
No full textUntranslated regions in the messenger RNA (mRNA) are susceptible to the interaction of regulatory elements including proteins or non-coding RNA molecules, being an important hotspot to the study of gene expression regulation. Internal Ribosome Entry Sites (IRES) are secondary structures usually located on the 5’UTR of an mRNA molecule that can recruit the ribosome during initiation of protein synthesis without the involvement of the cap structure. This mechanism tends to appear when the cell is under stress conditions, which might include the presence of oncogenes, growth factors or proteins involved in programmed cell death.
This work focuses on the human AGO1, an important key player for RNA-mediated gene silencing, and whether its 5’UTR is capable of driving cap-independent translation initiation.
To achieve this goal, a construct containing the 5’UTR of human AGO1 was cloned, taking advantage of a bicistronic vector containing two reporter genes, Renilla luciferase (RLuc) and firefly luciferase (FLuc), the last one cloned downstream from the 5’UTR. We performed luminometry assays to assess the relative translation efficiency of FLuc, which is under the control of AGO1 5’UTR.
The results showed that human AGO1 5’UTR mediates a cap-independent eIF4G-dependent mechanism of translation initiation enhanced by a free 5’ end. Also, we saw that this alternative mechanism is maintained, and even enhanced, under stress conditions, such as the knock-down of eukaryotic initiation factor 4E, the protein that directly binds to the cap structure. We are currently investigating what is the minimal sequence required for IRES-mediated translation.
Combining these results with emerging RNA-based therapies will be helpful to develop novel strategies to prevent and treat disorders, such as cancer, involving dysregulation of AGO1 translation.info:eu-repo/semantics/publishedVersio
Funções não codificantes do mRNA de p53
No full textWe now want to test the relevance of the non-coding functions of p53 mRNA in carcinogenesis.FCTN/
O mecanismo alternativo de síntese proteica da proteína UPF1 e a sua relevância na tumorigénese
No full textA proteína up-frameshift 1 (UPF1) é uma proteína multifacetada, com um papel fundamental em vários mecanismos celulares. É um fator essencial no mecanismo de decaimento rápido de mRNAs aberrantes com codões nonsense (NMD, do inglês nonsense-mediated mRNA decay). É também uma proteína crucial para a progressão da fase S do ciclo celular e manutenção do tamanho e homeostasia dos telómeros, de um modo totalmente independente das suas funções no NMD. No que respeita à tumorigénese, a UPF1 é frequentemente considerada uma proteína supressora de tumores e um potencial alvo terapêutico para o carcinoma hepatocelular. Além disso, está subexpressa em cancro gástrico e correlacionada negativamente com a expressão de MALAT1 (do inglês long non-coding RNA metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1). De acordo com o estudo de Karger e colaboradores (colocar entre parenthesis a ref), a sobre-expressão de UPF1 inibe algumas das características específicas do cancro, como sejam a proliferação celular, a progressão do ciclo celular, a migração e a invasão celulares, e aumenta a apoptose. Assim, a UPF1 pode ser considerada um potencial modulador de MALAT1, o que demonstra que a via UPF1/MALAT1 pode ser usada como um alvo terapêutico para o cancro do estômago.
Neste trabalho, o nosso grupo, demonstrou que a região 5’ transcrita, mas não traduzida (UTR, do inglês untranslated region) do mRNA que codifica a UPF1 consegue utilizar um mecanismo alternativo de síntese proteica (i.e. tradução do mRNA) mediada por IRES (do inglês, internal ribosome entry sites). Este mecanismo alternativo permite a produção seletiva de proteínas em condições que impedem o normal mecanismo de tradução, funcionando. tanto em condições normais como sob condições de stress, tais como hipóxia, stress do retículo endoplasmático, inibição da via do mTOR, ou inibição da expressão do fator de iniciação eucariótico 4E, a proteína que se liga diretamente à estrutura cap e permite a tradução canónica. Ao fazer uma análise delecional e mutacional da sequência da 5’UTR de UPF1, verificámos que a sequência mínima necessária para a atividade dependente do IRES compreende os nucleótidos 1–100 e 151–275 (do total de 275 nucleótidos que compõem a 5’UTR). Fazendo uma previsão bioinformática da estrutura secundária formada por esta sequência, verificámos que há a formação de três stem loops (SL). O primeiro e o terceiro SL correspondem precisamente às sequências identificadas como essenciais e suficientes para a tradução mediada por IRES. Estes estudos foram conduzidos em células HeLa (cancro do colo do útero), e também em NCM460 (colonócitos derivados de mucosa intestinal normal) e HCT116 (carcinoma colo-rectal em fase pré-metastática), o que nos permite avaliar a importância deste mecanismo no desenvolvimento e progressão do cancro colorretal e, consequentemente, desenvolver novas abordagens terapêuticas, com a utilização de oligonucleótidos antisense de RNA para inibir esta tradução alternativa, o que constituirá uma proof-of-concept de uma potencial terapia para o cancro colorretal baseada em RNA.FCTinfo:eu-repo/semantics/publishedVersio
Relevance of Multigene Panels in the Molecular diagnosis of patients with disorders of sexual development
No full textIntroduction: Next generation sequencing (NGS) is increasingly used in the molecular diagnosis of rare diseases, such as disorders of sexual development (DSD), allowing the analysis of a greater number of genes in a single assay, providing faster results with reduced costs. DSD patients may present high phenotypic overlap (genital ambiguity, sex reversal, delayed/absent puberty, infertility) posing challenges to clinical diagnosis. NGS technology using multigene panels has higher hypothesis to identify the genetic cause and novel genetic variants in a large number of cases.
Methodology: 33 genomic DNA samples from DSD patients were sequenced on MiSeq using the Ampliseq technology (Illumina). A customized gene panel covering 40 genes was used to prepare the libraries of the target sequences. The 40 genes were subdivided into 5 subpanels: primary sex determination, sex differentiation, hypogonadotropic hypogonadism/infertility, steroidogenesis and premature ovarian insufficiency. Variant classification, according to ACMG-AMP, was based on bioinformatics tools (ex. VEP, HSF, VarSome, Alamut) and databases (gnomAD, HGMD, ClinVar, dbSNP). Pathogenic, Likely pathogenic and VUS variants were confirmed by Sanger sequencing.
Results: 16 of the 33 patients were previously studied in our laboratory with negative results for the main genes associated with DSD (SRY, AR, ANOS1, GNRHR, CYP21A2). We identified 9 causative variants (8P/1LP) in 7 patients (21.2%) in AR, HSD17B3, LHCGR, FGFR1 and NR5A1. One patient was a compound heterozygous for HSD17B3 and another simultaneously homozygous for LHCGR and hemizygous for AR. The remaining 5 were homozigous, heterozigous or hemizygous for HSD17B3, LHCGR, NR5A1, FGFR1 or AR. One VUS, FGFR1:c.566G>A p.Arg189His, requires familial studies to revaluate its pathogenicity.
Discussion: Multigene NGS studies allows to increase the rate of variant detection, mainly in genes not included in a first molecular approach. It also contributes to establishing or confirming the clinical diagnosis, assisting in decisions regarding the treatment and reproductive management of patients and families, as well as in genetic counselling.FCT/MCTES, Projects - ToxOmics and Human Health (UIDB/00009/2020) and GenomePT (POCI-01-0145-FEDER-022184)info:eu-repo/semantics/publishedVersio
Multivariate Analysis applied in the study of the nutritional quality of processed products
No full textTrabalho de Projeto de Mestrado em Bioestatística, apresentado à Faculdade de Ciências da Universidade de Lisboa, 2023Dissertação orientada pela Professora Doutora Eunice Isabel Ganhão Carrasquinha Trigueirão da Faculdade de Ciências da Universidade de Lisboa e Doutora Helena Soares Costa do Instituto Nacional de Saúde Doutor Ricardo Jorge.Recently, the search for processed food has been increasing due to its characteristics and convenience, and accessibility in our everyday life. Regrettably, most of these products have salt and fat content superior to what national and international entities recommend. Following this issue, to contribute to the betterment of the nutritional quality of a diversity of processed products, the contents of their total fat and salt as well as fatty acids were analysed to verify the major differences between them. Under the PTranSALT project, 280 processed products were acquired in supermarkets, restaurants, takeaway, pastry shops, and fast-food chains and analysed as well. The purpose was to prioritize the nutritional parameters with the intent to proceed with the reformulation (if needed) of its composition. This leads to the contribution towards more safe and balanced nutrition. And for that, two multivariate techniques were considered: Cluster Analysis (CA) and Principal Component Analysis (PCA). Once these methods were applied it was verified that some of the products in the category of snacks, fries, and cookies show a poor nutritional profile, having simultaneously elevated levels of salt and saturated fatty acids. These are nutrients that, when consumed excessively, are associated with illnesses such as obesity, hypertension, and some other chronic diseases. In the future, it will be necessary for the topic of food processing to remain in the spotlight to address many of the existing gaps, both in current food classifications and their rather negative impact on public health.A procura por alimentos processados tem vindo a aumentar nos últimos tempos devido às suas características sensoriais, à sua conveniência e acessibilidade. Estando o consumo excessivo de alimentos processados associado a diveras implicações na saúde de quem os consome, é muito importante e urgente encontrar soluções para diminuir esse impacto. Uma das principais causas associadas ao consumo excessivo de produtos processados e ultra processados, começa no desconhecimento das características e na facilidade da compra destes alimentos no supermercado. Isto dá-se porque grande parte dos consumidores não está devidamente informado acerca da composição nutricional dos alimentos. Grande parte dos alimentos processados, têm teores de sal e de gordura superiores aos recomendados pelas entidades nacionais e internacionais e por este motivo é essencial que os consumidores passem a saber identificar quais os alimentos que devem priorizar para terem uma alimentação mais nutritiva e equilibrada. Com vista a ajudar o consumidor a ler e interpretar a declaração nutricional de cada produto, já se encontram em vigor diferentes sistemas de simplificação de rótulos, nomeadamente o descodificador de rótulos e o Nutri-Score. Este trabalho surge para colmatar algumas das falhas presentes nestes sistemas, analisando diferentes nutrientes, não abrangidos em nenhum dos mencionados. No âmbito do projeto PTranSALT desenvolvido pelo Instituto Nacional de Saúde Doutor Ricardo Jorge (INSA), foram analisados os teores de gordura total, sal e ácidos gordos de diversos alimentos processados. Este projeto teve o intuito de contribuir com informação de forma a melhorar a qualidade nutricional dos produtos processados. Para isso, foram analisados 280 produtos processados, adquiridos em supermercados, restaurantes take away, pastelarias e cadeias de fast-food. Os vários produtos analisados foram agrupados consoante as suas características em nove grupos diferentes: Snacks, produtos fast-food, sementes e frutos secos, refeições pré-feitas, cereais, molhos, batatas fritas, produtos de panificação e pastelaria. Este trabalho tem como principal objetivo, verificar as principais diferenças relativas aos parâmetros analisados para diversos produtos processados, e ainda priorizar os parâmetros nutricionais com vista à reformulação (se necessário) da sua composição, contribuindo assim para alimentos mais seguros e equilibrados, e ainda determinar as caraterísticas major de cada agrupamento de produtos. Para isso, foram consideradas duas técnicas de Análise Multivariada, a Análise de Agrupamentos e Análise de Componentes Principais. A partir destas metodologias foi possível identificar quais os alimentos ou categorias de alimentos que devem ser considerados prioritários para a implementação de estratégias de reformulação, e assim obter alimentos mais saudáveis que possam contribuir para a prevenção dos principais riscos de consumo a eles associados. Com base nos resultados da análise descritiva verificou-se que grande parte dos produtos processados apresentaram valores de gordura superiores aos recomendados pelas entidades reguladoras. É importante destacar que estes produtos demonstraram uma redução bastante significativa na quantidade de ácidos gordos trans (com exceção de três produtos), sendo que todos eles se encontram dentro dos limites regulamentados. Em relação à caracterização de cada um dos grupos, observou-se que os alimentos que constituem o grupo dos Fast Food e dos molhos apresentam valores bastante elevados de sal, quando comparados com os restantes, enquanto que, as principais características dos frutos secos em análise foram os seus valores bastante elevados de gordura insaturada (nomeadamente os ácidos gordos monoinsaturados e polinsaturados). Os cereais que foram analisados são caracterizados pelos seus valores de ácidos gordos saturados e monoinsaturados. Finalmente, os produtos processados das categorias dos snacks, das batatas fritas, dos produtos de panificação e pastelaria, apresentam heterogeneidade dentro dos mesmos, não sendo possível identificar características major para cada um deles, sendo um obstáculo para a caracterização destes alimentos e do grupo a que pertencem. Considerando a Análise de Agrupamentos testou-se diferentes partições consideradas adequadas aos dados. A Análise de Agrupamentos Hierárquica com recurso à Distância Euclidiana, foi usada para determinar as distâncias entre os vários objetos, tal como a Análise de Agrupamentos Não Hierárquica com recurso ao algoritmo de K-means. A partir dos dados e de metodologias para determinar o número ótimo de clusters, as partições que se mostraram mais indicadas, consoante os dados apresentados, foram as partições a 4 e a 6 clusters, para ambas as classificações. Visto os alimentos que foram recolhidos, terem sido inicialmente agrupados em 9 categorias de produtos processados, a partição em 9 clusters foi testada e comparada com as restantes. De forma a poder identificar as características de cada um dos clusters, formados pela Análise de Agrupamentos, a Análise de Componentes Principais foi também aplicada com vista à descrição dos mesmos, consoante as variáveis analisadas. Ao comparar os clusters com as conclusões obtidas a partir da análise descritiva dos dados, a partição a 9 clusters mostrou ser a mais adequada face aos dados e às características identificadas nos mesmos. Esta conclusão aplica-se tanto para a Análise de Agrupamentos Hierárquica como para a Análise de Agrupamentos Não-Hierárquica, e por esse motivo ao ser aplicado o método de Análise de Componentes Principais esta partição foi também considerada. Pela Análise de Componentes Principais verificou-se que alguns dos produtos pertencentes às categorias dos Snacks, Batatas fritas e das Bolachas, mostram um perfil nutricional menos adequado, apresentando simultaneamente valores elevados de sal e de ácidos gordos saturados. Nutrientes esses que quando consumidos em excesso estão associados a vários tipos de doenças tais como a obesidade, hipertensão e outras doenças crónicas. Deste modo é necessário que estes alimentos sofram várias reformulações na sua constituição de forma a torná-los muito mais equilibrados. Para além destes alimentos, dois produtos pertencentes à categoria dos snacks mostraram valores de sal muito elevados. Inclusivamente, em três das bolachas analisadas, abundam na sua constituição, essencialmente ácidos gordos saturados, sendo que os mesmos quando consumidos em excesso estão associados a várias implicações bastante negativas para a saúde dos consumidores. Posto isto, é possível perceber que apesar de já terem sido aplicadas várias regulamentações que limitam o consumo de determinados nutrientes, muitos dos alimentos comercializados são constituídos por nutrientes menos equilibrados e adequados para consumo, como o excesso de gordura e de sal. Pelas conclusões obtidas neste projeto os snacks, as batatas fritas e as bolachas são constituídos por nutrientes que devem ser bastante reajustados, uma vez que o seu consumo excessivo é prejudicial. Além de serem necessárias novas ferramentas para ajudar os consumidores a fazerem escolhas alimentares mais conscientes e informadas, também é de grande importância o desenvolvimento de diferentes medidas com vista à reformulação de vários dos produtos processados analisados no decorrer deste projeto. No futuro, será necessário que a temática do processamento alimentar continue em voga, de modo a solucionar muitas das lacunas existentes, quer a nível das classificações alimentares atuais, quer do seu impacto bastante negativo na saúde humana.info:eu-repo/semantics/publishedVersio
Antimicrobial Resistance and Zoonotic Bacteria: Assessing interventions, risk factors and the occurrence of antimicrobial resistance in the food chain production in Portugal
No full textTese de doutoramento em Saúde Pública Global apresentada à Escola Nacional de Saúde Pública, Universidade Nova de Lisboa, 2022.Tese defendida a 29-09-2023.Orientadora Professora Andreia Leite e coorientador Professor Miguel Cardo.Background: Resistant microorganisms that spread in the food system are a major threat to animal health and public health since they are a potential pathway of transmission to humans. This thesis evaluates: (i) antimicrobial resistance (AMR) prevalence and associated risk factors in the Portuguese food system (ii) effectiveness of interventions designed to reduce and adequate antimicrobial usage in animal production and tackle AMR. Methods: Portuguese AMR surveillance program on animals and food products data, 2014-2019, were used to estimate prevalence of AMR in Escherichia coli, Campylobacter and Salmonella samples, factors associated with Salmonella resistance, and AMR profiles. Logistic regression and clustering methods were applied. Effectiveness was assessed in a systematic review with meta-analysis. Articles were identified on PubMedTM, ScopusTM, The Cochrane LibraryTM, Web of ScienceTM, and grey literature on DANS EASYTM, WorldCatTM, RCAAPTM. Effectiveness was estimated by intervention, bacterial species, production type and population through fixed and random-effects models. Results: High prevalence of Salmonella resistance was observed, especially during summer and in post farm-stages to most antimicrobials and in summer and farms to fluoroquinolones and quinolones-F(Q). Salmonella F(Q) resistance was associated with broilers. Clusters suggested an escalating multi-drug resistance (MDR) behavior from farm to post-farm stages. Our review indicates that organic and antimicrobial-free farms, and group treatment restrictions lead to AMR reduction. Conclusions: Further attention is needed in the Portuguese food system regarding AMR behavior in particular in post-farm stages due to the potential source of MDR bacteria. Our findings support policy- and decision-making on effective interventions to reduce AMR. Keywords: food-producing animals; antimicrobial resistance; zoonotic bacteria; surveillance; food security; One Health.Contexto: Os microrganismos resistentes e a sua disseminação pelo sistema de produção de alimentos constituem uma ameaça para a saúde animal e para a saúde pública. Foram avaliados: (i) prevalência de resistência aos antimicrobianos (RAM) e fatores de risco associados à sua ocorrência no sistema português de produção de alimentos, (ii) efetividade de intervenções para redução do uso de antimicrobianos em produção animal e assim reduzir a RAM. Métodos: Análise dos dados do Programa de Vigilância de Resistência aos Antimicrobianos em animais e alimentos de origem animal, 2014-2019 em Portugal, para estudar as RAM e os seus perfis em E. coli, Campylobacter e Salmonela, e avaliar fatores de risco associados ao desenvolvimento de RAM em Salmonella, através de modelos de regressão logística e de clustering. A efetividade foi estudada através de revisão sistemática com meta-análise. Os artigos foram identificados na PubMedTM, ScopusTM, The Cochrane LibraryTM, Web of ScienceTM, e literatura cinzenta na DANS EASYTM, WorldCatTM, RCAAPTM. A efetividade foi estimada por tipo de intervenção e produção, espécie bacteriana, e população animal, através de modelos de efeitos fixos ou aleatórios. Resultados: Prevalência elevada de resistência à Salmonella, especialmente durante o Verão na maioria dos antimicrobianos testados e em fases de produção destinadas ao processamento de alimentos, mas também para fluoroquinolonas e quinolonas-F(Q)- ao nível de explorações de animais. A resistência às F(Q) em Salmonella esteve mais associada a frango de engorda. Os grupos formados pelo método de clustering, indicaram um comportamento de multirresistência em cascata desde as unidades de produção de animais até às de retalho. A revisão demonstrou uma redução de RAM associada à produção orgânica, explorações livres de utilização de antimicrobianos e restrições de tratamentos de grupo. Conclusão: É essencial reforçar a atenção ao comportamento das RAM no sistema português de produção de alimentos, principalmente em unidades de processamento de alimentos e de retalho, devido à potencial fonte de bactérias multirresistentes. Os resultados obtidos apresentam informação útil para a definição de ações no combate às RAM.Funding: This research was supported by the Portuguese Foundation for Science and
Technology (FCT) (PD/BD/135759/2018 and COVID/BD/152615/2022)N/