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Studio del ruolo dei polimorfismi a singolo nucleotide rs12979860 e rs8099917 dell’IL28B in una coorte di pazienti italiani con infezione cronica da virus dell’epatite C sottoposti a terapia interferonica
No full textRole of CDK9 in skeletal muscle
No full textCdk9 is a member of cyclin-dependent kinases and it is expressed in human and murine tissue with high levels in terminally differentiated cells. The elevated levels of Cdk9 and its regulatory subunits in terminally differentiated cells, together with the fact that it is implicated in the regulation of transcriptional elongation via phosphorylation of CTD of RNA polII, distinguishes Cdk9 from the other cdks.
Cyclin partners of CDK9 are cyclin T1, T2a, T2b and K, with a formation of a complex, called p-TEF-B. In Hela cells about 80% of cellular P-TEFb is composed of cyclin T1 and the cyclin –dependent kinase 9 (CDK9), and about 20% of cellular CDK9 is complexed to other cyclins, such as cyclin T2a, T2b and with cyclin K.
It was demonstrated that CdK9 complexed with CyT2a plays a role in the activation of myogenic program and Cdk9-CyT2a activity is not down-regulated in myotube formation, but its activation contributes to the transcriptional activity MyoD-mediated during myogenic program.
The formation of a multimeric complex, containing cdk9/cyclin T2a and MyoD is present in muscle cells during the activation of the differentiation program and the N-terminal region of Cdk9 directly interacts with the b-HLH region of MyoD, allowing the formation of a complex also containing cyclin T2a.
Recently a 55 kDa protein called CDK9-55 has been identified. This isoform presents 117 additional amminoacids residues at the N-terminal portion of Cdk9-42 and it conserves all molecular features of 42 isoform, indeed it associates with CycT phosphorylates CTD of RNA polII.
Cdk9-55 is significantly upregulated in cells induced to differentiate, either in C2C12 cells or in satellite isolated cells, and it was demonstrated that there is a clear induction of cdk9-55 expression in injured skeletal muscles.
Analysis in vivo on limbs at different times of development demostrated a different correlation between two CDK9 isoforms: CDK9-55 is involved during foetal myogenesis, whereas the CDK9-42 is expressed during embrional myogenesis. Study in vitro demonstrated that CDK9-55 is the isoform more expressed during differentiation both embrional and fetal myoblasts. A new antibody, p-CDK9, permitted us to define CDK9-55 as the active isoform during the differentiation. CDK9-55 is also the isoform more expressed during the re-innervation process.
The analysis of different cyclins that complex with different members of kinase proteins showed that in vivo only cyclin K and D3 are involved during foetal myogenesis, suggesting their interaction with CDK9-55, whereas Cyclin T1, T2, L and H are implicated during primary myogenesis, in concomitance with CDK9-42 expression. Study in vitro demonstrated that only cyclin T2 is involved during the differentiation process for embrional and fetal myoblasts.
Between inhibitory post transcriptional regulator mechanism of CDK9 there is the interaction with 7SKsnRNA and HEXIM1, our studies, on C2C12 cells, by RIP assay demonstrated that CDK9 isn’t associated with 7SKsnRNA/Hexim1 during differentiative phase, supporting that in differentiation CDK9 is active
Disturbi Specifici dell’Apprendimento: nuclei di fragilità in relazione all’età ed all’iter clinico
No full textA partire dal 2006 in Italia i rappresentanti delle maggiori società scientifiche ed associazioni che si occupano di disturbi di apprendimento, attraverso varie Consensus Conference, sono pervenuti all’elaborazione di raccomandazioni cliniche e linee guida per la diagnosi dei Disturbi Specifici di Apprendimento. Nel dicembre 2010 è stata promossa un’ulteriore Consensus Conference dall’Istituto Superiore di Sanità per il Sistema Nazionale Linee Guida (SNLG-ISS, 2011) dove vengono fornite anche indicazioni per la ricerca futura. Inoltre, nel 2010 viene approvata la Legge 170 che riconosce il Disturbo Specifico dell’Apprendimento a pieno titolo. Sono stati effettuati 4 studi (longitudinali e trasversali) nei quali abbiamo scelto come parametro di riferimento l’età intesa sia come momento della valutazione che come momento della diagnosi/fase evolutiva attraversata, per indagare il peso di tale variabile sull’assetto sintomatologico con cui si manifestano dislessia e disortografia.
Il campione preso in esame è tratto da una popolazione clinica afferita al “Dipartimento di Pediatria e Neuropsichiatria Infantile” e segnalato al Servizio di terzo livello di Neuropsicologia. I soggetti sono stati scelti in base ai criteri di inclusione ed esclusione definiti dall’ICD-10 (WHO, 2000) e dalle varie Consensus Conferences italiane (AID, 2009; PARCC e SNLG-ISS, 2011) e per la diagnosi sono state effettuate le prove raccomandate dal SNLG-ISS (2011).
La scelta di range di età molto ristretti è un criterio importante per cercare di verificare il cambiamento del disturbo nel tempo. La presenza di una difficoltà linguistica si conferma essere un fattore di rischio per la comparsa di un DSA. L’intervento riabilitativo precoce riduce parzialmente l’entità del disturbo di lettura e scrittura. L’epoca della segnalazione del DSA appare sensibile a variabili esterne (bambini con difficoltà di sviluppo associate, SES più elevato e familiarità vengono segnalati più precocemente) oltre che all’entità del disturbo di per sé. La segnalazione tardiva si accompagna ad una maggior compromissione della comprensione. Rapidità e correttezza sono elementi distintivi del disturbo in tutte le fasce d’età considerate, con differenti equilibri nel tempo anche in relazione al tipo di prove utilizzate
Coerenza ed ottimalità delle stime calibrate su informazioni da indagini campionarie
No full textIl lavoro affronta il problema della coerenza esterna e dell'ottimalità nel caso in cui si vogliono introdurre nel processo di stima delle informazioni di cui si conoscono i totali di controllo da altre indagini campionarie e, quindi, questi sono affetti da errori campionari. Le espressioni di stimatori che soddisfano queste proprietà sono presentate e le loro performance sono studiate attraverso uno studio di simulazione e l'applicazione a casi reali
La responsabilità penale del medico e le problematiche connesse al rischio clinico. Una proposta di riforma
No full textLinking crystal chemistry and physical properties of natural and synthetic spinels: an UV-VIS-NIR and Raman study
No full textThe present work deals with the detailed study of multiple oxides with spinel structure with the aim to explore two among their variety of useful physical properties: optical and vibrational properties. Spinels represent very important minerals largely occurring in rocks as well as materials of high relevance from a gemological and technological point of view. To understand their physical properties a complete chemical, structural and spectroscopic study was performed analyzing a large amount of natural and synthetic spinels by Electron MicroProbe, Single-Crystal X-ray Diffraction, Optical Absorption and Raman spectroscopies.
Regarding the optical properties, an accurate characterization on blue synthetic spinels and on natural multicolor spinels was made to investigate the cause of the various colors shown by the spinels. The synthetic blue spinels belonging to the MgAl2O4-CoAl2O4 series were successful synthetized by flux growth method. The optical spectra of the Co-spinels show electronic transitions only due to the Co2+ in tetrahedral coordination, which causes the characteristic blue colour of cobalt spinels. The multicolor spinels owe their different colors not to the major elements but to a combination of two or more minor elements such as Cr3+, V3+, Fe2+, Fe3+ and Co2+, occupying tetrahedrally (T) and/or octahedrally (M) coordinated sites in the spinel structure as also demonstrated by the recorded optical spectra.
Regarding the vibrational properties, a systematic study of three synthetic solid solutions (Mg,Co)Al2O4, (Mg,Fe)Al2O4 and (Mg(Al,Cr)2O4 was carried out by Raman spectroscopy to determine the relationships between the Raman active modes and spinel crystal chemistry. On the basis of comparative inspection of the spectra, it follows that each studied end-member exhibits a Raman fingerprint with at least one peculiar peak in terms of Raman shift and relative intensity. In addition, for each series a good relationship between a Raman active mode and spinel principal component was established. In addition to the Raman features, a study of the fluorescence features attributed to chromophoric ions observed in the Raman spectra was made to distinguish between natural, thermally-treated, and synthetic materials.
Finally, a multianalytical investigation of a natural zincian spinel by electron microprobe, single-crystal X-ray diffraction, Raman and optical absorption spectroscopies was achieved to fully characterize a Zn-rich spinel approaching the endmember gahnite (ZnAl2O4) composition
Photonic high dimensional systems and their applications in fundamental quantum mechanics, quantum information and quantum communication
No full textMeccanismi cellulari e molecolari del processo di tumorigenesi indotto da Virus del Papilloma umano
No full textLa relazione di causalità tra carcinoma squamoso della cervice uterina (SCC) e infezione da Virus del Papilloma umano (HPV) mucosali ad alto rischio è ampiamente riconosciuta, mentre in letteratura sono presenti dati contrastanti sulla possibile associazione tra alcuni genotipi di HPV cutanei e lo sviluppo di tumori cutanei di tipo non-melanoma (NMSC).
Il progetto di ricerca della tesi è incentrato sullo studio delle capacità trasformanti di HPV, analizzate in un sistema cellulare funzionale ad evidenziare i differenti meccanismi in grado di indurre la tumorigenesi dipendente da genotipi diversi di HPV. Sono stati utilizzati cheratinociti umani trasformati dalle proteine E6 ed E7 di HPV mucosale ad alto rischio di tipo 16 (K16) e cheratinociti umani immortalizzati dalle proteine E6 ed E7 di HPV cutaneo di tipo 38 (K38). L’attività trasformante di E6 ed E7 di entrambi i genotipi di HPV coinvolge principalmente l’inibizione dei soppressori tumorali p53 e pRb con alcune differenze sostanziali che riguardano soprattutto la proteina E6. Infatti, mentre le proteine E7 di HPV16 e HPV38 inibiscono l’attività del soppressore tumorale pRb con un simile meccanismo di azione, l’effetto di E6 dei due diversi genotipi su p53 è molto differente. L’oncoproteina E6 di HPV16 lega p53 promuovendone la degradazione; invece E6 di HPV38, agendo insieme a E7 con meccanismi ancora poco noti, modifica l’attività transattivante di p53 favorendo l’accumulo del suo inibitore ΔNp73 e la conseguente down-regolazione dell’attivazione trascrizionale dei geni target di p53 coinvolti nell’inibizione della proliferazione cellulare. È stato inoltre descritto che la proteina oncogena E7 di HPV16 attiva il fattore di trascrizione κB (NF-κB), implicato nell’attivazione di una serie di geni necessari per la sopravvivenza della cellula. Recenti evidenze, inoltre, indicano che E6 ed E7 agiscono anche su ulteriori meccanismi cellulari regolatori dell’espressione genica quali i microRNA (miRNA).
Il coinvolgimento di quest’ultimo meccanismo di regolazione dell’espressione genica nella tumorigenesi associata a HPV è stato valutato utilizzando un approccio di tipo “high throughput” attraverso l’analisi del miRNoma espresso dalle K16 e K38 comparate ai cheratinociti di controllo. Sono stati così identificati miRNA deregolati sia nelle K16 che nelle K38. Saggi specifici eseguiti tramite Real-Time RT-PCR hanno permesso di confermare la deregolazione di un gruppo significativo di miRNA in entrambi i tipi di cheratinociti. Poiché studi precedenti effettuati nel laboratorio hanno dimostrato che l’Interferone (IFN) di tipo I inibisce la proliferazione di linee cellulari di SCC HPV-positive e dei cheratinociti K16 e K38 (Chiantore et al., 2012, Vannucchi et al., 2000, Vannucchi et al., 2005), è stato valutato l’effetto del trattamento di IFN sull’espressione dei miRNA nei cheratinociti E6/E7-trasdotti. L’IFN-β sembra essere in grado di riportare l’espressione di alcuni miRNA deregolati ad un livello simile a quello dei cheratinociti di controllo. L’analisi dei target dei miRNA identificati, tuttora in corso, permetterà di approfondire i meccanismi coinvolti nella deregolazione della proliferazione indotta dalle oncoproteine di HPV e nell’azione antitumorale svolta dall’IFN.
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E’ stata anche valutata la risposta antitumorale dell’ospite alle cellule HPV-trasformate esaminando la possibilità di indurre in vitro la risposta di linfociti T citotossici (CTL) E6/E7 specifici attraverso l’uso di cellule presentanti l’antigene (APC), quali le cellule dendritiche (DC) o le cellule di Langerhans (LC), differenziate in vitro da monociti umani trattati con GM-CSF+IL-4 o GM-CSF+IL-4+TGF-β, rispettivamente. Le APC sono state poi pulsate con cheratinociti E6/E7-trasdotti necrotici e/o apoptotici. È stato definito il protocollo di priming in vitro valutando la citotossicità dei CTL specifici per E6 ed E7 e MHC-I ristretti, sulla base della diversa capacità d’internalizzazione, del grado di maturazione e del microambiente extracellulare delle APC pulsate. I saggi di citotossicità hanno mostrato che la percentuale maggiore di killing specifico è stata ottenuta stimolando i CTL con LC incubate con frammenti cellulari necrotici ed in presenza di siero umano, indicando che una corretta maturazione delle APC risulta essere importante per l’induzione della risposta immunitaria cellulare.
Inoltre, poiché è stato riportato che miRNA specifici sono coinvolti nei pathways di maturazione delle APC (Turner et al., 2011, Jurkin et al., 2010), sono stati analizzati i livelli di espressione di alcuni miRNA selezionati nelle DC e LC utilizzate nello studio. Particolare attenzione è stata focalizzata sui miR-146a e miR-21 attivati dal pathway NF-κB e sul miR-98 associato alla regolazione del differenziamento cellulare e della risposta infiammatoria. I diversi livelli di espressione dei miRNA sono stati valutati nelle APC incubate con frammenti necrotici ottenuti da cellule K16 e K38 e in quelle stimolate con lipopolisaccaride batterico (LPS), rispetto alle APC immature. I dati ottenuti hanno mostrato un’over-espressione del miR-146a in tutte le combinazioni di stimolazione per le LC, mentre il miR-98 è risultato over-espresso solo nelle LC stimolate con K38 necrotiche. La ricerca dei target è stata al momento focalizzata sul miR-98, i cui target validati sono HMGA2 (high mobility group AT- hook 2) e HNRNPP2 (heterogeneous nuclear ribonucleoprotein 2) mentre tra i target putativi è presente il recettore 1 per il transforming growth factor-beta (TGF-βR1) la cui funzione potrebbe essere correlata alla maturazione delle LC.
I risultati ottenuti mostrano differenze nei pattern di espressione dei miRNA nei cheratinociti immortalizzati dalle proteine E6 ed E7 di HPV di tipo mucosale e cutaneo e indicano che l’IFN-β può esercitare la sua azione antiproliferativa in cellule tumorali HPV-trasformate, anche attraverso meccanismi di regolazione dell’espressione genica da miRNA. Inoltre si individuano le LC come le APC più appropriate nel produrre CTL E6/E7 specifici con un maggiore tasso di killing e indicano che la maturazione delle LC sia dipendente dai differenti cheratinociti E6/E7-trasdotti, quindi dalla capacità oncogena delle proteine dello specifico genotipo di HPV