Publicaciones seriadas del CENSA (E-Journals)
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PCR anidado múltiple para detección de fitoplasmas y begomovirus identificados en cultivos de soya en Cuba
Get PDFThe objective of the work was to develop a nested multiplex PCR assay for the simultaneous detection of phytoplasmas and the begomoviruses identified in soybean in Cuba. Two pairs of specific primers to the begomoviruses Tobacco yellow crinkle virus (TbYCV) and Rhynchosia golden mosaic Yucatan virus (RhGMYuV) were designed, and they were used in conjunction with two pairs of universal primers for the generic detection of phytoplasms under established conditions. The evaluation of the optimal temperature for alignment of the primers to the template, the analytical sensitivity, and the specificity of the primers, critical parameters for the nested PCR assay for begomoviruses, were optimized. Critical parameters for the nested multiplex PCR assay, such as the evaluation of different combinations of concentrations of the primers designed with the conditions established for phytoplasm nPCR, the analytical sensitivity, and the intra and inter-assay repeatability, were also optimized. Performance parameters of the multiplex nPCR assay were determined. In the multiple assay, the fragments expected for TbYCV (988 kb), RhGMYuV (968 kb), and phytoplasms (1250 kb) were successfully amplified, confirming the simultaneous, sensitive and specific detection of these pathogens. The analytical parameters of the trial performance were over 90%. The multiple nested PCR assay here developed allows a sensitive, fast and low-cost detection of phytoplasmas sp. and begomoviruses that affect soybean in Cuba. These results are the first of this type for the country and provide new methodological elements for the validation of plant pathogen detection assays.El objetivo del presente trabajo fue desarrollar un ensayo de PCR múltiple anidado para la detección simultánea de fitoplasmas y los begomovirus identificados en cultivos de soya en Cuba. Se diseñaron dos parejas de cebadores específicos a los begomovirus Tobacco yellow crinkle virus (TbYCV) y Rhynchosia golden mosaic Yucatan virus (RhGMYuV) que se utilizaron, conjuntamente, con dos parejas de cebadores universales para la detección genérica de fitoplasmas bajo condiciones ya establecidas. Se optimizaron los parámetros críticos para el ensayo de PCR anidado para begomovirus que incluyeron: evaluación de la temperatura óptima de alineamiento de los cebadores al molde, sensibilidad analítica y la especificidad de los cebadores. Se optimizaron los parámetros críticos para el ensayo de PCR múltiple anidado; estos fueron: evaluación de diferentes combinaciones de concentraciones de los cebadores diseñados con las condiciones establecidas para nPCR de fitoplasmas, sensibilidad analítica y repetitividad intra e interensayo. Se determinaron los parámetros de desempeño del ensayo de nPCR múltiple. En el ensayo múltiple se amplificaron satisfactoriamente los fragmentos esperados para el TbYCV (988 kb), RhGMYuV (968 kb) y los fitoplasmas (1250 kb), confirmando la detección simultánea, sensible y específica de estos patógenos. Los parámetros analíticos de desempeño del ensayo fueron superiores a 90 %. El ensayo de PCR anidado múltiple desarrollado permite una detección sensible, rápida y de menor costo para la detección de los fitoplasmas y begomovirus que afectan el cultivo de soya en Cuba. Estos resultados son los primeros de este tipo para el país y aportan nuevos elementos metodológicos para la validación de ensayos de detección de patógenos de plantas
Evaluación in vitro del potencial probiótico de Lactobacillus acidophilus SS80 y Streptococcus thermophilus SS77
Get PDFThe objective of this work was to evaluate in vitro the probiotic properties of Lactobacillus acidophilus SS80 and Streptococcus thermophilus SS77 strains for animal use. Strains were characterized by biochemical tests, hemolysis, resistance to different pH, bile salt concentrations, microbial antagonism test against five animal pathogens, and auto-aggregation, co-aggregation and hydrophobicity tests. The results showed that both strains produce hydrogen peroxide, lipase and lecithinase. S. thermophilus SS77 was positive to casein proteolysis; however, the strains did not produce biogenic amines from the amino acids Lysine, Tyrosine and Tryptophan. In addition, S. thermophilus SS77 used alanine from 36 h on, whereas L. acidophilus SS80 used histidine from 72 h on. Both strains were negative to the hemolysis test and differed significantly in the pH values reached in skimmed milk powder after 2 h. They grew at pH 6.5 and 5.5 and resisted the simulated gastric juice for 3 h, with survival rates above 98 %. The strain of L. acidophilus SS80 grew only at 0.3 % bile (% w / v), while S. thermophilus SS77 did it at 0.3 %, 0 % and 1 % (% w / v). Growth inhibition occurred on all pathogenic strains evaluated, being Lactobacillus acidophilus SS80 more effective. Both strains were positive to the auto-aggregation, co-aggregation and hydrophobicity tests with values higher than 48 %. It is concluded that both strains have potential to be used as probiotic additives in animal feeding.El presente trabajo tuvo como objetivo evaluar in vitro las propiedades probióticas de las cepas de Lactobacillus acidophilus SS80 y Streptococcus thermophilus SS77 para uso animal. Las cepas fueron caracterizadas mediante pruebas bioquímicas, de hemólisis, de resistencia a diferentes pH, a concentraciones de sales biliares, y prueba de antagonismo microbiano frente a cinco patógenos de animales y autoagregación, coagregación e hidrofobicidad. Los resultados mostraron que ambas cepas producen peróxido de hidrógeno, lipasa y lecitinasa. S. thermophilus SS77 fue positivo a proteólisis de la caseína; sin embargo, las cepas no produjeron aminas biógenas desde los aminoácidos Lisina, Tirosina y Triptofano. Además, S. thermophilus SS77 utilizó la Alanina a partir de las 36 h, mientras que L. acidophilus SS80 usó Histidina a partir de las 72 h. Las dos cepas resultaron negativas a la prueba de hemólisis y difieren significativamente en los valores de pH alcanzados en leche descremada en polvo a partir de las 2 h. Crecieron a pH 6,5 y 5,5 y resistieron al jugo gástrico simulado por 3 h, con porcentajes de supervivencia por encima de 98 %. La cepa de L. acidophilus SS80 creció solo con 0,3 % de bilis (% p/v), mientras que S. thermophilus SS77 con 0,3 %, 0 % y 1 % (% p/v). Se produjo inhibición del crecimiento sobre todas las cepas patógenas evaluadas; resultó más efectiva Lactobacillus acidophilus SS80. Ambas cepas resultaron positivas a la prueba de autoagregación, coagregación e hidrofobicidad con valores superiores a 48 %. Se concluye que ambas cepas tienen potencial para ser utilizadas como aditivos probióticos en la alimentación animal
Primer informe de ácaros fitófagos y depredadores presentes en Morus alba L. cultivar Gui Sang You 62 (morera) en Cuba
Get PDFIn order to identify the mite species infesting Morus alba L. (mulberry), systematic samplings were carried out on mulberry plants belonging to the "Los Mangos" farm of the Science, Technology and Innovation Entity "Sierra Maestra", Playa municipality, La Habana, Cuba, from January to June 2018. In the samplings, 30 plants were selected at random, from which three leaves were extracted and examined under a Stemi DV4 stereo microscope. The adult mites were rinsed and mounted on slides. For their identification, they were observed under an Axioskop A1 microscope, and the corresponding dichotomous keys were used. As a result of the inventory, it was reported the presence of the phytophagous mite Tetranychus sp. (Acari: Tetranychidae) and the predators Neoseiulus longispinosus, Euseius hibisci and Amblyseius curiosus (Acari: Phytoseiidae).Con el objetivo de identificar las especies de ácaros presentes en Morus alba L. (morera) se realizaron muestreos sistemáticos en plantas de morera pertenecientes a la Finca “Los Mangos” de la Entidad de Ciencia, Tecnología e Innovación “Sierra Maestra”, municipio Playa, La Habana, Cuba, en el periodo de enero a junio de 2018. En los muestreos se seleccionaron 30 plantas al azar, de cada una se extrajeron tres hojas, las que se revisaron bajo un microscopio estereoscopio Stemi DV4. Los ácaros adultos se aclararon y se montaron en portaobjetos. Para su identificación se observaron con un microscopio Axioskop A1 y se emplearon las claves dicotómicas correspondientes. Como resultado del inventario se informa la presencia del acaro fitófago Tetranychus sp. (Acari: Tetranychidae) y los depredadores Neoseiulus longispinosus, Euseius hibisci y Amblyseius curiosus (Acari: Phytoseiidae)
Actividad antagónica de Trichoderma asperellum Samuels, Lieckfeldt & Nirenberg sobre aislados de diferentes grupos anastomósicos de Rhizoctonia solani Kühn
Get PDFThe objective of the work was to evaluate the antagonistic activity of seven strains of Trichoderma asperellum Samuels, Lieckfeldt & Nirenberg against isolates from three anastomosis groups of Rhizoctonia solani Kühn in vitro. The antagonistic capacity was determined by evaluating the competition for space (diameter of the colonies, according to the scale by Bell et al.) and mycoparasitism (Trichoderma growth on the pathogen colonies) in dual culture. All the strains were located in class 1 of the scale by Bell et al., given by the highest growth rate of the Trichoderma strains. Parasitism was determined by the colonized anastomosis group, standing out the Trichoderma strains Ta.13 versus AG-2.1; Ta.17, Ta.75, Ta.78, and Ta.90 against AG-5; and Ta.85 against AG-8, wich overgrew more than 75% (parasitism) the area of the pathogen colonies. From the practical point of view, tthese results are of great importance because the R. solani complex is responsible for considerable economic losses in various crops of interest.El trabajo tuvo como objetivo evaluar la actividad antagónica in vitro de siete cepas de Trichoderma asperellum Samuels, Lieckfeldt & Nirenberg frente a aislamientos de Rhizoctonia solani Kühn pertenecientes a tres grupos anastomósicos. La capacidad antagónica se determinó evaluando la competencia por espacio (diámetro de las colonias, según escala de Bell et al.) y el micoparasitismo (crecimiento de Trichoderma sobre las colonias de los patógenos) en cultivo dual. Todas las cepas se ubicaron en la clase 1 de la escala de Bell et al, dado a la alta velocidad de crecimiento de las cepas de Trichoderma. El parasitismo estuvo determinado por el grupo anastomósico colonizado; se destacaron, con más de 75 % de parasitismo, las cepas Ta.13 frente a AG-2.1, Ta.17, Ta.75, Ta.78 y Ta.90 frente a AG-5; y Ta.85 frente a AG-8. Desde el punto de vista práctico, estos resultados revisten gran importancia debido a que el complejo R. solani causa pérdidas económicas considerables en diversos cultivos de interés
Morfología y polaridad de la onda T del electrocardiograma en el ganado bovino
Get PDFThe aim of this research was to determine in which areas of the bovine body surface the electrodes should be placed to record T waves with stable polarity and morphology by using bipolar and unipolar leads to detect alterations in the conduction of the ventricular repolarization impulse. One hundred animals of both sexes from different age groups were used. Each T-wave form was numerically coded and its polarity was classified. Sixteen different forms of T waves were observed, presenting four types of polarity: positive, negative, biphasic +/- and biphasic -/+. In the bipolar shoulder lead IH, the T wave was largely negative or biphasic +/-; and it was positive or biphasic -/+ in the remaining bipolar leads. The T-wave was negative or in some cases biphasic +/- in the unipolar basal leads of the heart. Positive or biphasic polarity was always obtained in the apical leads -/+ and four to six different forms were recorded. It is concluded that, in the areas located towards the base or the apex of the heart, leads can be used originating electrocardiographic records with great stability in the polarity of the T wave and in which the quantity of different forms detected is very reduced, with great predominance of the pointed one, so that they become a very useful reference to diagnose the alterations in the conduction of the repolarization impulse through the cardiac ventricles.El objetivo de esta investigación fue determinar en qué áreas de la superficie corporal del bovino deben ser colocados los electrodos para registrar ondas T con polaridad y morfología estables, al emplear derivaciones bipolares y monopolares para detectar alteraciones en la conducción del impulso de repolarización ventricular. Se utilizaron 100 animales de uno y de otro sexo, de diferentes grupos etarios. Se codificó numéricamente cada forma de onda T y se clasificó su polaridad. Se observaron 16 formas diferentes de ondas T, las cuales presentan cuatro tipos de polaridad: positiva, negativa, bifásica +/- y bifásica -/+. En la derivación bipolar de hombro IH, la onda T resultó, en gran proporción, negativa o bifásica +/-; en las restantes derivaciones bipolares fue positiva o bifásica -/+. En las derivaciones monopolares basales del corazón, la onda T fue negativa o en algunos casos bifásicas +/-. En las derivaciones apicales se obtuvo siempre polaridad positiva o bifásica -/+ y se registraron de cuatro a seis formas diferentes. Se concluye que, en las áreas situadas hacia la base o hacia el ápice del corazón, se pueden emplear derivaciones que originan registros electrocardiográficos con gran estabilidad en la polaridad de la onda T y en las que la cantidad de formas diferentes detectadas es muy reducida, con gran predominio de la puntiaguda, por lo que se convierten en una referencia muy útil para diagnosticar las alteraciones en la conducción del impulso de repolarización por los ventrículos cardíacos
Extracción de cuerpo extraño en el estómago de un canino
Get PDFA dog´s stomach with the presence of a foreign body was analyzed by the gastrotomy surgical technique. The clinical method was used for diagnosis. As a complementary study, a simple x-ray of the abdomen was performed to confirm the diagnosis. The presence of a radiodense structure was observed resulting in a non-linear foreign body with an irregular surface (blade) located in the stomach. The correct procedure for clinical, trans-surgical diagnosis and post-surgical care allowed the recovery of the animal.Se presenta la realización de la técnica quirúrgica de gastrotomía en un animal de la especie canina con presencia de un cuerpo extraño. Para el diagnóstico se utilizó el método clínico. Como estudio complementario se realizó radiografía simple de abdomen para el diagnóstico confirmativo. Se observó la presencia de una estructura radiodensa que resultó un cuerpo extraño no lineal de superficie irregular (cuchilla) ubicado en el estómago. El correcto procedimiento para el diagnóstico clínico, transquirúrgico y cuidados posquirúrgicos permitieron la recuperación del paciente
Desarrollo embrionario de bovino in vitro cocultivado con células oviductales y del cumulus oophorus
Get PDFThe research was aimed at evaluating the effect of embryos co-cultured with oviductal and cumulus oophorus cells on the development of blastocyst in vitro. Oviducts and ovaries were collected from slaughtered bovine females. Oviductal cells were obtained after a longitudinal incision of the oviduct and cumulus cells were collected from follicular fluid; both cell types were placed for culture in TCM-199 with 20 % Fetal Bovine Serum (FBS). The cumulus-oocyte complexes (COC\u27s) were collected by the aspiration of follicles from 2 to 7 mm diameter and they were placed for maturation in TCM-199 with 10 % FBS. Subsequently, they were fertilized using a concentration of 1x106 spermatozoa/mL. After fertilization, they were divided into three treatments: 1) Control, 2) Co-culture with cumulus cells and 3) Co-culture with oviduct cells. The development was evaluated at 192 hours of in vitro culture, determining the amount of divided embryos, morulas and blastocysts. They were cultured in sequential SOF medium by the treatment: 1) 538 oocytes, 2) 627 oocytes and 3) 478 oocytes. The results were the following: 14 % of blastocysts in the co-culture of cumulus cells, 7 % in the co-culture of oviduct and 4 % in the control, with a significant statistical difference (p<0.05) among the three treatments. It is concluded that the use of somatic cells in conditioned medium can stimulate the blastocyst stage development in vitro to the bovine embryos.La presente investigación tuvo como objetivo evaluar el efecto del cocultivo de los embriones con células oviductales y del cúmulo oóforo (cumulus oophorus) sobre el desarrollo de embriones in vitro en estadio de blastocisto. Los oviductos y ovarios se colectaron de hembras bovinas sacrificadas en un rastro. Las células oviductales se obtuvieron tras una incisión longitudinal del oviducto; las células del cumulo oophorus se colectaron del líquido folicular. Ambos tipos celulares se colocaron para su cultivo en TCM-199 con 20 % de Suero Fetal Bovino (SFB). Los complejos cúmulo-ovocitos (COC’s) fueron colectados por aspiración de folículos de 2 a 7 mm de diámetro y colocados para su maduración en TCM-199 con 10 % de SFB; posteriormente, se fertilizaron utilizando una concentración de 1x106 espermatozoides/mL. Después de la fertilización se dividieron en tres tratamientos: 1) Control, 2) Cocultivo con células de cúmulo, 3) Cocultivo con células del oviducto. El desarrollo se evaluó a 192 horas de cultivo in vitro, determinando la cantidad de embriones divididos, mórulas y blastocistos. Se cultivaron en medio SOF secuencial, por tratamiento: 1) 538 ovocitos, 2) 627 ovocitos y 3) 478 ovocitos. Los resultados fueron los siguientes: 14 % de blastocistos en el cocultivo de células cúmulo, 7 % en el cocultivo de oviducto y 4 % en el control, con una diferencia estadística significativa (p<0,05) entre los tres tratamientos. Se concluye que el uso de medios condicionados con células somáticas puede estimular el desarrollo in vitro hasta estadio de blastocisto de los embriones bovinos
Evaluación de la calidad higiénico-sanitaria de la leche cruda por métodos de flujo citométrico
Get PDFThe development and application of modern equipment in the quality based raw milk payment system of the world dairy sector contribute to the improvement of the quality of the raw material and dairy products. BactoScan FC® and Fossomatic MinorTM are automated equipment that measure the hygienic-sanitary quality of raw milk by flow cytometry with proven reliability. In Cuba, a minimum threshold for the hygienic-sanitary quality has been established through the Methylene Blue Reduction (TRAM) test and the qualitative somatic cell count (CMT). The objective of this work was to evaluate the hygienic-sanitary quality of raw milk by BactoScan FC® and Fossomatic MinorTM equipment and their relationship with the conventional TRAM and CMT methods, established in the quality payment system. For this, 1,540 samples of raw milk from the tank were analyzed by automated and conventional methods. The results showed that, for the hygienic-sanitary quality parameters, 83 % and 87.5 % of the samples analyzed were above the specification parameter established by the International Dairy Federation. There is a high correlation between the results obtained by the automated methods and those used to pay for the quality of the milk. The equipment evaluated in this study can be an alternative to be used in the quality based raw milk payment system in Cuba because they provide results in less time and with better precision.El desarrollo y la aplicación de modernos equipos en los sistemas de pago por calidad del sector lácteo mundial contribuyen a la mejora de la calidad de la materia prima y de los productos lácteos. El BactoScan FC® y el Fossomatic MinorTM son equipos automatizados que miden la calidad higiénico-sanitaria de la leche cruda por citometría de flujo con una confiabilidad demostrada. En Cuba, se tiene establecido un umbral mínimo para la calidad higiénico-sanitaria mediante la prueba de reducción del azul de metileno (TRAM) y el conteo cualitativo de células somáticas (CMT). El objetivo de este trabajo fue evaluar la calidad higiénico-sanitaria de la leche cruda por los equipos BactoScan FC® y Fossomatic MinorTM y su relación con los métodos convencionales TRAM y CMT, establecidos en el sistema de pago por calidad. Para ello se analizaron 1 540 muestras de leche cruda de tanque, por los métodos automatizados y los convencionales. Los resultados mostraron que, para los parámetros de calidad higiénico-sanitaria, el 83 % y 87,5 %, respectivamente de las muestras analizadas, se encontraban por encima del parámetro de especificación establecido por la Federación Internacional de Lechería. Existe una elevada correlación entre los resultados obtenidos por los métodos automatizados y los empleados para el pago de la calidad de la leche. Los equipos evaluados en este estudio pueden ser una alternativa a utilizar en el sistema de pago por calidad de la leche cruda en Cuba porque brindan resultados en menor tiempo y con mejor precisión
Fijación externa transarticular en una gata con fractura conminuta distal de tibia
Get PDFThis research was focused on young feline cat having a comminuted fracture in the distal third of the right tibia with severe soft tissue trauma. Diagnosis was carried out from a radiological study. The extensive area of the damaged soft tissue influenced the selection of a bilateral external fixation system with methyl methacrylate. Nails were placed in the proximal and distal tibia. A transarticular fixation of the tarsus was performed by extending the external fixator to the metatarsals. The tarsal joint was immobilized for seven weeks, which guaranteed greater stability to the fracture. The bone callus began to form at 15 days post-surgery and stopped claudication at 25 days. The fixation system was removed at seven weeks when the fracture had consolidated and the bone remodeling process had begun.A consulta llegó una paciente felina joven, con una fractura conminuta en el tercio distal de la tibia derecha, con estado grave de los tejidos blandos circundantes. El diagnóstico se realizó a partir de un estudio radiológico. La extensa área de tejido blando dañado influyó en la selección de un sistema de fijación externa bilateral con metil metacrilato. Se colocaron clavos en la porción proximal y distal de la tibia, y se realizó una fijación transarticular del tarso, mediante la extensión del tutor externo a los metatarsos. La articulación del tarso estuvo inmovilizada por siete semanas; esto garantizó una mayor estabilidad a la fractura presente. A los 15 días posoperatorio el callo óseo comenzó a formarse y a los 25 dejó de claudicar. El sistema de fijación se retiró a las siete semanas cuando la fractura había consolidado y había comenzado el proceso de remodelación ósea
Detección de microorganismos de la clase Mollicutes asociados al complejo respiratorio-reproductivo en caballos de Mayabeque, Cuba
Get PDFResearches on the detection of mycoplasmas in horses are relatively scarce. However, there are reports about their association to the respiratory-reproductive complex. In Cuba, the presence of these microorganisms in horses is unknown, so the objective of this work was to detect the presence of microorganisms of the class Mollicutes associated to the respiratory-reproductive complex in horses from Mayabeque, Cuba complex in horses from San José de las Lajas, Mayabeque. For this purpose, 97 animals from four localities of this municipality were analyzed. One hundred and thirty-one exudates (97 nasal and 34 preputial) were collected for diagnosis by microbiological culture and PCR. The presence of Mollicutes was detected in 37.11 % of the samples; of these 88.8 % corresponded to nasal exudates and 11.2 % to preputial exudates. The presence of Mollicutes was detected in all localities. Locality "D" and animals older than two years old had the highest number of positive results. An isolate was obtained from preputial exudate, which was identified as Acholeplasma spp. by biochemical tests. Studies related to the presence of Mollicutes in horses are being carried out for the first time in Cuba, so it is necessary to continue studies related to the epidemiology of these pathogens, as part of the control of the respiratory-reproductive complex in this species.Las investigaciones sobre la detección de micoplasmas en caballos son relativamente escasas; sin embargo, existen reportes sobre su asociación al complejo respiratorio-reproductivo. En Cuba se desconoce sobre la presencia de estos microorganismos en caballos, por lo que el objetivo de este trabajo fue detectar la presencia de microorganismos de la clase Mollicutes asociados al complejo respiratorio-reproductivo en caballos procedentes de San José de las Lajas, Mayabeque. Para esto se trabajaron 97 animales procedentes de cuatro localidades de este municipio. Se colectaron 131 exudados (97 nasales y 34 prepuciales) para el diagnóstico por cultivo microbiológico y PCR. En 37,11 % de las muestras se detectó la presencia de Mollicutes; de ellas 88,8 % correspondieron a exudados nasales y 11,2 % a exudados prepuciales. En todas las localidades se detectó la presencia de Mollicutes; la localidad “D” y los animales mayores de dos años fueron los de mayor número de resultados positivos. Se obtuvo un aislado procedente de exudado prepucial, el cual se identificó por pruebas bioquímicas, como Acholeplasma spp. Por primera vez en Cuba se realizan estudios relacionados con la presencia de Mollicutes en caballos, por lo que resulta necesario continuar los estudios relacionados con la epidemiología de estos patógenos, como parte del control del complejo respiratorio-reproductivo en esta especie