BIOpreparations. Prevention, Diagnosis, Treatment (E-Journal) / БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение
Not a member yet
340 research outputs found
Sort by
Выбор метода и разработка стандартного образца для количественного определения антител к SARS-СоV-2 методом ИФА в препаратах иммуноглобулинов
Get PDFThe development of COVID-globulin, a COVID-19-specific human immunoglobulin preparation, involved choosing a method to quantify antibodies to SARS-CoV-2. Antibody titre determination by virus neutralisation (VN) is labour-intensive and unsuitable for large-scale application. To enable routine testing, it was necessary to develop a less demanding method; the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was the most appropriate of solutions. The lack of international and industry reference standards (RS) prompted the preparation and certification of an RS for COVID-globulin potency control.The aim of the study was to examine the possibility of substituting ELISA for VN and to develop an RS for SARS-CoV-2 antibody quantification in immunoglobulin preparations.Materials and methods: the authors used commercial ELISA kits by several manufacturers, COVID-globulin by Microgen (48 batches), and human plasma samples from multiple sources (1499 samples). The tests were performed by VN, ELISA, and chemiluminescent microparticle immunoassay.Results: the authors validated an ELISA method for SARS-CoV-2 antibody quantification with the selected reagent kits by the National Medical Research Center for Hematology (NMRC for Hematology) and Euroimmun AG. The authors demonstrated the possibility of using ELISA instead of VN (with a correlation coefficient of more than 0.9). They developed and characterised an in-house RS for SARS-CoV-2 antibody content in human immunoglobulin preparations. The RS was certified in newly introduced anti-COVID units (ACU) and in international binding antibody units (BAU) using the World Health Organisation (WHO) international reference panel (NIBSC code: 20/268). The RS's potency was measured in terms of its neutralising activity in ACU (320 ACU/mL) and BAU (2234.8 BAU/mL). The authors established the relationship between ACU and BAU units. For the selected ELISA reagent kits, the conversion factors were 6.4 (NMRC for Hematology) and 7.0 (Euroimmun AG).Conclusions: the ELISA method for SARS-CoV-2 antibody quantification and the RS for SARS-CoV-2 antibody content can be applied to determine the potency of human anti-COVID-19 immunoglobulins.В процессе разработки препарата специфического иммуноглобулина человека против COVID-19 (КОВИД-глобулин) одной из задач являлся выбор метода определения содержания антител к SARS-CoV-2. Определение титра антител в реакции нейтрализации (РН) является трудоемким и не позволяет применять метод массово. Наиболее доступным методом для рутинного использования представляется метод иммуноферментного анализа (ИФА). В связи с отсутствием международных и отраслевых стандартных образцов (СО) возникла необходимость в получении и аттестации СО для контроля специфической активности КОВИД-глобулина.Цель работы: изучение возможности замены реакции нейтрализации на метод ИФА для количественного определения антител к SARS-СоV-2 в препаратах иммуноглобулинов и разработка стандартного образца количественного определения антител к SARS-СоV-2.Материалы и методы: в исследовании использовали коммерческие наборы реагентов для ИФА различных производителей, препарат КОВИД-глобулин (48 серий) производства АО «НПО «Микроген», образцы плазмы крови человека (1499 образцов) различных производителей. В работе применяли РН, ИФА, хемилюминесцентный иммуноанализ на микрочастицах.Результаты: применение наборов реагентов для ИФА производства ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России и Euroimmun AG и валидация методики количественного определения антител к SARS-СоV-2 с помощью ИФА с использованием выбранных наборов реагентов показали возможность использования метода ИФА взамен РН (коэффициент корреляции более 0,9). Разработан и охарактеризован СО содержания антител к SARS-CoV-2 в препаратах иммуноглобулина человека. Разработанный СО аттестован в установленных нами впервые антиковидных единицах (АКЕ) и единицах связывания антител (BAU) с использованием международной референс-панели ВОЗ (код NIBSC 20/268). Специфическая активность приготовленного СО предприятия охарактеризована по нейтрализующей активности в антиковидных единицах – АКЕ (активность СО составила 320 АКЕ/мл), а также в единицах BAU, используемых ВОЗ (активность СО составила 2234,8 BAU/мл). Установлено соотношение единиц АКЕ с единицами BAU. Коэффициент пересчета составил 6,4 для набора реагентов ИФА производства ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России и 7,0 – для набора реагентов ИФА производства Euroimmun AG.Выводы: метод ИФА для количественного определения антител к SARS-СоV-2 и разработанный СО содержания антител к SARS-CoV-2 могут быть использованы для определения специфической активности препаратов иммуноглобулина человека против COVID-19.
Проблемные аспекты разработки и регистрации генотерапевтических препаратов
Get PDFThere are a lot of diseases known today, which are caused by genetic abnormalities. Advances in genetics and biotechnology brought about gene editing technologies that can produce almost any gene, which ultimately led to the emergence of a new class of medicines - gene therapy products (GTPs). The aim of the study was to analyse international experience in development and authorisation of GTPs. The review highlights the challenges in GTP development, related to the search for an optimal approach to therapeutic gene delivery to the target cells. Viral vectors were shown to be a promising gene delivery system, with adenovirus (AV) and adeno-associated virus (AAV) based products demonstrating the highest efficacy and safety. The paper reviews current approaches to gene editing that allow modification of AVs and AAVs to improve GTP efficacy and safety. These modifications are carried out with the aim of, e.g., including a large therapeutic gene into a viral vector, decreasing viral protein expression levels, and decreasing viral vector immunogenicity. The review summarises GTP authorisation procedures in the USA and the European Union, including data on FDA and EMA subcommittees and departments entrusted with advisory functions. The paper mentions that there is one Russian-produced GTP authorised in the Russian Federation, and some other GTPs are in the pipeline. Therefore, the Russian regulatory framework and the Eurasian regulations and recommendations should be updated in order to accommodate for GTP development and authorisation.В настоящее время известно большое количество заболеваний, патогенез которых обусловлен генетическими нарушениями. Достижения в области генетики и биотехнологии привели к созданию методов, которые позволяют получить практически любой ген, что в конечном счете привело к появлению нового класса лекарственных средств – генотерапевтических препаратов (ГТП). Цель работы – критический анализ международного опыта создания и регистрации генотерапевтических лекарственных препаратов. В обзоре освещены проблемы разработки ГТП, связанные с поиском оптимального подхода для доставки терапевтического гена в клетки-мишени. Обосновано, что перспективными средствами доставки генов являются вирусные векторы, среди которых наибольшей эффективностью и безопасностью обладают препараты на основе аденовируса (AV) и аденоассоциированного вируса (AAV). Рассмотрены современные подходы для генного редактирования, позволяющие модифицировать AV и AAV для повышения эффективности и безопасности ГТП. Данные модификации необходимы для включения в вирусный вектор терапевтического гена большого размера, снижения уровня экспрессии вирусных белков и снижения иммуногенности вирусного вектора. Представлен опыт регистрации ГТП в регуляторных органах США и Европейского союза, в том числе сведения о подкомитетах в структурах FDA и EMA, выполняющих рекомендательные функции. Отмечено, что в Российской Федерации зарегистрирован один ГТП отечественного производства и активно ведутся разработки других препаратов данной группы. Сделано заключение о необходимости формирования отечественной нормативной базы для разработки и регистрации ГТП, а также нормативных рекомендаций в рамках государств – членов Евразийского экономического союза
Рекомендации по аттестации стандартных образцов для подтверждения подлинности структуры рекомбинантных терапевтических белков
Get PDFReference standards for structure identification of recombinant therapeutic proteins are essential for quality assessment of recombinant protein-based biotechnological medicinal products. The development and certification of such reference standards hold special relevance because of, firstly, the absence of international, national or compendial reference standards for a number of new or recently approved proteins and, secondly, the disruption of supply chains providing the biopharmaceutical industry of the Russian Federation with international reference standards. Moreover, international and national regulatory documents contain only general requirements for the procedure of reference standards certification but not the considerations specific to the standards for biotechnologicals’ structure identification, which vary with the production technologies for each individual active moiety. The aim of this work was to provide recommendations on the procedure for the development and certification of reference standards used to identify the structure of recombinant therapeutic proteins. These recommendations define 4 main stages of the procedure: stage 1 covers the development of requirements for the reference standard, including the justification of material and formulation choices, the elaboration of quality specifications, and the assessment of quality; stage 2 comprises the selection of analytical procedures and the establishment of the values for the certified parameters; stage 3 includes stability studies and shelf-life setting; and stage 4 involves the development of documentation for the reference standard. The paper dwells upon the scope of the stages, taking into account the specific considerations for recombinant therapeutic proteins and the use of reference standards. The recommendations are based upon the extensive experience in biotechnologicals testing and standardisation of the employees of the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products. These recommendations can provide a base for the establishment of protein-specific certification programmes for reference standards used in structure identification. This approach will allow for systematisation of the process for standards development and ensure the traceability of information and the validity of results. The reference standards certified in accordance with these recommendations can be considered primary standards, if necessary.Наличие стандартных образцов для оценки подлинности структуры рекомбинантных терапевтических белков является непременным условием оценки качества биотехнологических лекарственных средств, полученных на их основе. Актуальность разработки и аттестации данных стандартных образцов обусловлена, с одной стороны, отсутствием международных или фармакопейных стандартных образцов для ряда новых или сравнительно недавно зарегистрированных белков, с другой стороны — нарушением логистической цепочки обеспечения биофармацевтической индустрии Российской Федерации международными стандартными образцами. При этом нормативные международные и отечественные документы содержат общие требования к процедуре аттестации стандартных образцов и не отражают специфику стандартных образцов для оценки подлинности структуры биотехнологических лекарственных средств, зависящую от технологии получения конкретной терапевтически активной молекулы. Цель работы — представление рекомендаций к процедуре разработки и порядку аттестации стандартных образцов для подтверждения подлинности структуры рекомбинантных терапевтических белков. В настоящих рекомендациях определены 4 основных этапа разработки и аттестации стандартных образцов: этап 1 — разработка требований к стандартному образцу, обоснование выбора материала для стандартного образца, формы выпуска, разработка спецификации и оценка качества; этап 2 — выбор методики и установление величины аттестованной характеристики; этап 3 — исследование стабильности и установление срока годности стандартного образца; этап 4 — разработка сопроводительной документации. Рассмотрены особенности наполнения данных этапов с учетом специфики рекомбинантных терапевтических белков и формата применения стандартных образцов. Настоящие рекомендации разработаны на основании многолетнего опыта работы сотрудников ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России в области экспертизы и стандартизации биотехнологических лекарственных препаратов. На основе рекомендаций возможно создание индивидуальных программ аттестации стандартных образцов для подтверждения подлинности структуры конкретного белка. Данный подход позволит систематизировать процесс разработки стандартных образцов, обеспечит прослеживаемость и доступность информации. Стандартные образцы, аттестованные в соответствии с настоящими рекомендациями, могут рассматриваться как первичные в случае необходимости
Перспективные направления в совершенствовании вакцин для профилактики полиомиелита
Get PDFPolioviruses belong to Enterovirus C species and cause severe lesions of the nervous system. In the post-polio eradication era, the World Health Organisation recommends inactivated polio vaccines for effective long-term protection of the population. In order to meet the needs of global health, it is planned to increase the use of traditional and optimised inactivated polio vaccines and introduce new types of vaccines that are being developed based on the current understanding of RNA-containing viruses. The aim of the study was to analyse ways of improving vaccine preparations and to review promising areas for polio immunoprophylaxis development. The authors considered innovations across all stages of the technological process, aimed at obtaining optimised vaccines, as well as vaccine delivery systems. The article presents information on new vaccine strains and cell lines for vaccine production. The authors summarised the results of clinical studies of inactivated vaccines, new vaccines based on genetically stable vaccine strains of poliovirus, and vaccines containing virus-like particles. The most likely candidates for introduction are the vaccines based on virus-like particles obtained from genetically modified strains of poliovirus. At the moment, many issues related to current trends in improving the immunoprophylaxis of poliomyelitis are debatable and need to be addressed in the near future.Полиовирусы, принадлежащие к энтеровирусам группы С, являются причиной тяжелых поражений нервной системы. В эпоху после ликвидации полиомиелита Всемирная организация здравоохранения рекомендует для длительной эффективной защиты населения инактивированные вакцины против полиомиелита. Для обеспечения потребностей глобального здравоохранения предполагается увеличить применение традиционных и оптимизированных инактивированных вакцин против полиомиелита, а также внедрить вакцины нового типа, которые разрабатываются на основе современных представлений о РНК-содержащих вирусах. Цель работы — анализ аспектов усовершенствования вакцинных препаратов и обзор перспективных направлений развития иммунопрофилактики полиомиелита. Рассмотрены инновационные разработки на всех этапах технологического процесса, выполненные с целью получения оптимизированных вакцин, а также системы доставки вакцин. Представлена информация о новых вакцинных штаммах и клеточных линиях для производства вакцины. Обобщены результаты клинических исследований инактивированных вакцин, новых вакцин на основе генетически стабильных вакцинных штаммов вируса полиомиелита и вакцин, содержащих вирусоподобные частицы. Наиболее вероятно внедрение вакцин на основе вирусоподобных частиц генетически модифицированных штаммов вируса полиомиелита. В настоящее время многие вопросы, касающиеся актуальных направлений совершенствования иммунопрофилактики полиомиелита, являются дискуссионными и требуют решения в ближайшем будущем
Перспективы применения метода ионной хроматографии в оценке качества биологических лекарственных препаратов
Get PDFQuantitative characterisation of excipients in biologicals is an important part of the quality assurance process both at the level of finished products and intermediates, as well as active pharmaceutical ingredients. Ion chromatography with amperometric and conductometric detection of separation products has a number of advantages. The main of the advantages is the possibility of direct determination of semivolatile compounds that have neither chromophoric groups, nor intrinsic fluorescence. The aim of this study was to compare ion chromatography with alternative methods in order to identify promising areas for its use in assessing the quality of biologicals. The authors analysed regulatory documents and literature and summarised the methods applied for quantitative determination of ionic excipients in biological medicinal products. The authors investigated the possibility of using ion chromatography for determination of the main active pharmaceutical ingredient in polysaccharide vaccines and excipients in biologicals. The study demonstrated the feasibility of ion chromatography for simultaneous quantitation of cations (ammonium, calcium, magnesium) and anions (chlorides, sulfates, nitrates) in reconstitution solvents for lyophilised biologicals; quality assessment of active pharmaceutical ingredients in biologicals (quantitative analysis of polysaccharides in polysaccharide vaccines, profiling of glycosylated proteins, etc.); and determination of several carbohydrate stabilisers in biologicals with the same analytical procedure. According to the conclusions, ion-exchange chromatography with conductometric and amperometric detection, aimed at quality assessment of biological products, can shortly take a leading position in quantitation of ionic excipients, carbohydrate stabilisers, and main active ingredients (polysaccharides) in polysaccharide vaccines, including the vaccines in the immunisation schedule.Количественная характеристика вспомогательных веществ, входящих в состав биологических лекарственных препаратов (БЛП), является важной составляющей процесса подтверждения качества как на уровне готового продукта, так и на стадиях промежуточных продуктов, в том числе фармацевтических субстанций. Метод ионной хроматографии с амперометрическим и кондуктометрическим способами детектирования продуктов разделения обладает рядом достоинств, основным из которых является возможность прямого определения малолетучих соединений, не имеющих хромофорных групп и не обладающих собственной флуоресценцией. Цель работы — на основании сравнительного анализа метода ионной хроматографии и альтернативных методов определить перспективные области применения метода ионной хроматографии в оценке качества БЛП. На основании результатов проведенного анализа нормативной документации и данных литературы обобщены методы количественного определения вспомогательных веществ с ионной структурой в БЛП. Рассмотрены возможности применения метода ионной хроматографии для определения основного действующего вещества в полисахаридных вакцинах и вспомогательных веществ в БЛП. Показана целесообразность применения метода ионной хроматографии для одновременного количественного определения катионов (аммоний, кальций, магний) и анионов (хлориды, сульфаты, нитраты) в растворителе для лиофилизированных БЛП, для оценки качества действующего вещества БЛП (количественное определение полисахарида в полисахаридных вакцинах, гликопрофиль гликозилированных протеинов и т.д.), а также при определении нескольких стабилизаторов углеводной природы БЛП одной методикой. Сделан вывод, что ионообменная хроматография с кондуктометрическим и амперометрическим детектированием при оценке качества БЛП в ближайшей перспективе может занять лидирующие позиции в количественной оценке вспомогательных веществ с ионной структурой, стабилизаторов углеводной природы и основного действующего вещества — полисахарида в полисахаридных вакцинах, в том числе вакцинах национального календаря профилактических прививок
Анализ серотипового пейзажа пневмококков для определения композиционной модели отечественной пневмококковой конъюгированной вакцины
Get PDFDiseases caused by Streptococcus pneumoniae, as well as antibiotic resistance of its serotypes, are the leading cause of death amongst children worldwide. To prevent pneumococcal infection, the population is immunised with conjugate vaccines containing different amounts of polysaccharides of certain serotypes. Development of a full-cycle Russian vaccine is vital because the active pharmaceutical ingredients for the vaccines registered in the Russian Federation are produced abroad, and only the final stages of production of vaccines of this group are performed in the territory of the Russian Federation. Considering the phenomenon of serotype replacement associated with the long-term widespread use of pneumococcal conjugate vaccines, it is necessary to carefully select the serotype composition for the new vaccine. The aim of this work was to analyse the serotype distribution of pneumococci in the Russian Federation and other countries in order to select optimal serotypes for the Russian vaccine for human use, taking into account vaccination schedules for each age group. This review presents an analysis of the pneumococcal serotype distribution in the Russian Federation in the pre-vaccination era, as well as after the introduction of routine vaccination. In addition, the review includes data on the serotype distribution in the Eurasian Economic Union countries. The authors described a model composition containing at least sixteen serotypes. It will increase effectiveness of immune protection of the population, providing a more complete coverage of serotypes, considering their prevalence in the Russian Federation. Based on the analysis, the serotype composition for the sixteen-valent pneumococcal conjugate vaccine is proposed for further production and preclinical and clinical trials. A new Russian pneumococcal conjugate vaccine will ensure vaccination of all population groups within the National Immunisation Schedule of the Russian Federation.Заболевания, вызываемые Streptococcus pneumoniae, а также возникновение антибиотикорезистентных серотипов пневмококков являются ведущей причиной смертности детского населения во всем мире. С целью предотвращения пневмококковой инфекции применяют вакцинацию с использованием конъюгированных вакцин, содержащих различное количество полисахаридов определенных серотипов. В Российской Федерации зарегистрированы вакцины, активные фармацевтические субстанции для которых производятся за рубежом, а на территории Российской Федерации локализуются только финишные стадии производства вакцин данной группы, поэтому разработка отечественной вакцины полного цикла является жизненно значимой. Учитывая явление «смены серотипов» при длительном широком использовании пневмококковых конъюгированных вакцин, необходимо тщательно подбирать серотиповой состав новой вакцины. Цель работы — анализ серотипового пейзажа пневмококков на территории Российской Федерации и других стран с целью выбора модельной композиции оптимального серотипового состава российской вакцины для применения у людей с учетом схем вакцинации для каждой возрастной группы. В обзоре представлены результаты анализа распространения серотипов пневмококков в Российской Федерации в довакцинальную эру, а также после внедрения вакцинации в рутинную педиатрическую практику. Кроме того, представлены данные по серотиповому пейзажу в государствах — членах Евразийского экономического союза. Предложен модельный состав вакцины, содержащей не менее шестнадцати серотипов пневмококка. Выбранная модель позволит увеличить эффективность иммунной защиты населения, обеспечив более полный охват серотипов, учитывая их распространенность на территории Российской Федерации. На основе проведенного анализа предложен уникальный серотиповой состав шестнадцативалентной пневмококковой конъюгированной вакцины для дальнейшего производства и проведения доклинических и клинических испытаний. Появление новой отечественной пневмококковой конъюгированной вакцины позволит обеспечить вакцинацию всех групп населения в рамках национального календаря профилактических прививок Российской Федерации
Разработка и аттестация фармакопейного стандартного образца для подтверждения подлинности первичной структуры очищенного рекомбинантного интерферона бета-1b методом пептидного картирования
Get PDFMedicines based on recombinant human interferons (rhIFNs) beta-1a and beta-1b are used as first-line treatment of multiple sclerosis. Meanwhile, rhIFN beta-1a and beta-1b have structural differences associated with the eukaryotic or prokaryotic expression systems, respectively. Pharmacopoeias require identification of the primary structure of recombinant proteins by peptide mapping, which involves the use of reference material. Currently, there is no international reference standard available for rhIFN beta-1b structural identification. The aim of the study was development and certification of a pharmacopoeial reference standard for identification of the amino acid sequence of purified rhIFN beta-1b by peptide mapping. Materials and methods: rhIFN beta-1b produced by GENERIUM and endoproteinase Glu-C from Staphylococcus aureus V8 were used in the study. The peptide mapping was performed using reverse-phase high-performance liquid chromatography (RP HPLC) and high-resolution mass spectrometry. Statistical evaluation of the results included calculation of the arithmetic mean, standard deviation, and coefficient of variation. Results: the authors developed and certified a Russian Pharmacopoeia reference standard for structural identification of rhIFN beta-1b (PhRS 3.2.00447). The certified characteristic is the range of retention times of characteristic peaks: the absolute retention time was 42.0–43.2 for the third (reference) peak, the relative retention time was 0.61–0.66 for the first peak, 0.68–0.73 for the second peak, 1.04–1.06 for the fourth peak, 1.14–1.15 for the fifth peak, 1.22–1.24 for the sixth peak, and 1.29–1.30 for the seventh peak. Conclusions: the authors developed requirements for the rhIFN beta-1b pharmacopoeial reference standard. The material chosen as the candidate reference standard was an intermediate rhIFN beta-1b product sampled before addition of human serum albumin. The quality control was carried out in accordance with the developed specification. The authors analysed the amino acid sequence of the molecule, confirmed the presence of the disulfi e bond, and obtained the certifi d characteristic of the reference standard. Comparative analysis of the peptide maps of the certified rhIFN beta-1b pharmacopoeial reference standard and the rhIFN beta-1a reference standard revealed differences between the maps, and, therefore, confirmed the relevance of the developed reference standard.Лекарственные препараты на основе рекомбинантных человеческих интерферонов (рчИФН) бета-1а и бета-1b применяют в качестве препаратов первой линии при лечении рассеянного склероза. При этом рчИФН бета-1а и бета-1b имеют структурные отличия, обусловленные использованием эукариотической или прокариотической системы экспрессии соответственно. Согласно международным фармакопейным требованиям необходима оценка подлинности первичной структуры рекомбинантного белка методом пептидного картирования, который предполагает использование стандартного образца сравнения. Международный стандартный образец рчИФН бета-1b для оценки подлинности отсутствует. Цель работы: разработка и аттестация фармакопейного стандартного образца для подтверждения подлинности аминокислотной последовательности очищенного рекомбинантного рчИФН бета-1b методом пептидного картирования. Материалы и методы: рчИФН бета-1b производства АО «ГЕНЕРИУМ»; эндопротеиназа Glu-C из Staphylococcus aureus V8. Исследование проводили методом пептидного картирования с использованием обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ОФ ВЭЖХ) и метода масс-спектрометрии высокого разрешения. Результаты оценивали с применением статистических методов расчета среднего арифметического, стандартного отклонения, коэффициента вариации. Результаты: разработан и аттестован стандартный образец Государственной фармакопеи Российской Федерации для подтверждения подлинности рчИФН бета-1b (ФСО 3.2.00447). Аттестованная характеристика представлена в виде диапазонов времен удерживания характеристических пиков: абсолютное время удерживания третьего (референтного) пика составило 42,0–43,2 мин, относительное время удерживания первого пика — 0,61–0,66, второго пика — 0,68–0,73, четвертого пика — 1,04–1,06, пятого пика — 1,14–1,15, шестого пика — 1,22–1,24, седьмого пика — 1,29–1,30. Выводы: разработаны требования к ФСО рчИФН бета-1b, в качестве кандидата в стандартный образец выбран полупродукт рчИФН бета-1b, отобранный на стадии до добавления человеческого сывороточного альбумина; проведен контроль качества в соответствии с разработанной спецификацией и проанализирована аминокислотная последовательность молекулы с подтверждением наличия дисульфидной связи; получена аттестованная характеристика ФСО; сравнительный анализ пептидных карт разработанного и аттестованного ФСО рчИФН бета-1b и стандартного образца (СRS) рчИФН бета-1а показал различие данных пептидных карт и, следовательно, необходимость применения разработанного ФСО
Использование малых объемов аналитических проб при определении невидимых механических включений счетно-фотометрическим методом
Get PDFThe light obscuration method described in the State Pharmacopoeia of the Russian Federation for subvisible particle testing, provides for preparation of a pooled sample with a minimum volume of 25 mL to be used in four measurements, each with 5.0 mL of the test sample. In the case of, for example, ready-to-use 0.2–0.3 mL pre-filled syringes, the method requires pooling the contents of a large number of products, which is economically costly. The use of small volumes of test samples in measurements by the light obscuration method is especially relevant for expensive medicines. Current particle counters allow for testing of 0.1 mL samples, but this requires assessment of the procedure’s accuracy. The aim of the study was to assess the accuracy of subvisible particle testing by the light obscuration method for small volumes of test samples. Materials and methods: we used an HIAC 9703+ liquid particle counter; particle count reference standards containing 0.998×106 particles/mL and 3.800 particles/mL; suspensions of standard latex particles with a known size (20 μm). Results: the study assessed the accuracy of subvisible particle determination by the light obscuration method for small test samples of 0.1‒0.5 mL: trueness was 96–100%; repeatability was 0.8–1.8%; linear correlation coefficients for the calculated versus theoretical number of particles were more than 0.999. The use of 0.1 mL test samples is impractical because of insufficient accuracy of the test results. The relative standard deviation of subvisible particle measurements obtained with 0.2–5.0 mL test samples did not exceed the measurement error of the instrument. The use of small test samples (0.2–1.0 mL) requires the use of a 1 mL sampling syringe. The study demonstrated the need for determination of the pre-run volume (not less than 0.1 mL). Comparative testing of standard (5.0 mL) and small (0.5 mL) samples of protein-based biological products showed comparable results. Conclusions: the study demonstrated that the light obscuration method could be used for small volumes of test samples.Счетно-фотометрический метод определения невидимых механических включений, описанный в Государственной фармакопее Российской Федерации, предусматривает формирование из образцов лекарственных препаратов пробы объемом не менее 25 мл, необходимой для проведения четырех измерений, каждое объемом 5 мл. Для препаратов, выпускаемых, например, в готовых к использованию преднаполненных шприцах объемом 0,2–0,3 мл, метод требует объединения большого количества первичных упаковок, что экономически затратно. Для дорогостоящих препаратов актуальным является использование малых объемов аналитических проб при проведении испытаний счетно-фотометрическим методом. Применяющиеся на практике счетчики частиц позволяют проводить анализ лекарственных препаратов в объемах от 0,1 мл, но это требует оценки точности методики. Цель работы: оценить точность определения невидимых механических включений счетно-фотометрическим методом с использованием малых объемов аналитических проб. Материалы и методы: в работе использовали счетчик частиц HIAC 9703+; стандартные образцы счетной концентрации, содержащие 0,998×106 частиц/мл и 3800 частиц/мл; суспензии стандартных латексных частиц с заданным размером (20 мкм). Результаты: оценена точность методики определения количества невидимых частиц счетно-фотометрическим методом при использовании малых аналитических проб объемом от 0,1 мл до 5,0 мл: правильность составила 96–100%; повторяемость – 0,8–1,8%; коэффициенты корреляции линейной зависимости расчетного количества частиц от теоретического значения – более 0,999. Проведение измерений с аналитической пробой объемом 0,1 мл нецелесообразно из-за недостаточной точности результатов. Относительное стандартное отклонение результатов измерений количества невидимых частиц, получаемых при использовании аналитических проб объемом от 0,2 до 5,0 мл, не превышает относительной погрешности результатов измерений счетчика частиц. При проведении испытания с использованием малых аналитических проб (0,2–1,0 мл) рекомендуется использовать шприц-пробоотборник объемом 1 мл. Показана необходимость предварительной установки объема преаналитической пробы (не менее 0,1 мл). Сравнительные испытания биологических лекарственных препаратов белковой природы (7 наименований) при использовании стандартной (5,0 мл) и малой (0,5 мл) аналитических проб продемонстрировали сопоставимые результаты. Выводы: анализ результатов проведенных исследований свидетельствует о возможности использования счетно-фотометрического метода с малыми объемами аналитических проб
