Real Academia Nacional de Farmacia: Portal Publicaciones
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Diseño de un genosensor electroquímico para la detección indirecta de gluten en alimentos
Get PDFA new electrochemical genosensor has been developed for the detection of a specific DNA sequence that encodes for an immunogenic fragment of α-2-gliadin, protein of gluten wheat that plays an important role in celiac disease. The genosensor is based on a mixed self-assembled monolayer consisting on a capture probe and a diluent molecule, mercaptohexanol, both immobilized on screen-printed gold electrodes. A sandwich-type hybridization assay was selected, using a signaling-DNA probe labeled with biotin and streptavidin-alkaline phosphatase as a reporter molecule. Detection of DNA gluten is based on the measurement of the oxidization current of 1-naphthol, product formed by α-naphthyl phosphate enzymatic hydrolysis, by differential pulse voltammetry. Parameters involved in the sensing phase were investigated and optimized by cyclic voltammetry. The optimal capture probe to mercaptohexanol ratio was found to be 2 µM:9 mM. In order to minimize unspecific adsorptions, both signaling probe and enzyme-streptavidin conjugate concentrations (measurement phase parameters) were optimized (1 µM and 1.075·10-3 g/L respectively). A linear response from 20 nM to 250 nM is obtained with the proposed genosensor.Se propone un nuevo genosensor electroquímico para la detección de una secuencia específica de ADN que codifica un fragmento inmunogénico de la α-2-gliadina, proteína del gluten de trigo responsable de la celiaquía.. El diseño del genosensor se basa en la formación de una monocapa autoensamblada de sonda de captura y un agente bloqueante, mercaptohexanol, sobre electrodos de oro serigrafiados. Se eligió un ensayo tipo sándwich, utilizando una sonda indicadora marcada con biotina y el conjugado estreptavidina-fosfatasa alcalina como molécula de marcaje. La detección del analito se basó en la medida de la corriente de oxidación del 1-naftol, producto formado por la hidrólisis enzimática del 1-naftil-fosfato, mediante voltamperometría de pulso diferencial. Se investigaron y optimizaron los parámetros implicados en la composición de la fase sensora mediante voltametría cíclica, encontrándose como relación óptima sonda de captura:mercaptohexanol 2 µM:9 mM. Con el objetivo de minimizar las adsorciones inespecíficas, se optimizaron las concentraciones de sonda indicadora y conjugado enzima-estreptavidina, especies involucradas en la fase de medida, obteniéndose como valores óptimos 1 µM and 1,075x10-3 g/L respectivamente. El genosensor propuesto presentó una respuesta lineal entre 20 y 250 nM
La próxima monografía de la Real Academia Nacional de Farmacia, testimonio de la ciencia biomédica en España
Get PDFPURIFICACIÓN E INMOVILIZACIÓN DE ENZIMAS INDUSTRIALES
Get PDFLa purificación e inmovilización sencilla y correcta de una enzima nos permitirá diseñar biocatalizadores heterogéneos con una gran cantidad de enzima por gramo de catalizador y un elevado porcentaje de actividad catalítica por molécula de enzima. También existen protocolos de inmovilización que nos permiten mejorar notablemente las propiedades funcionales de las enzimas: actividad, estabilidad, selectividad, posibilidades de reactivación, etc. De este modo, la implantación masiva de las enzimas como catalizadores industriales será cada día más sencilla
Envejecimiento: ADN mitocondrial y nuclear
Get PDFLa longevidad ha sido durante años el último deseo de la humanidad, por esta razón, la búsqueda del “elixir de la vida” ha atormentado al hombre durante siglos. Posteriormente, cuando los campos de la ciencia y la tecnología comenzaban a extenderse y los avances conseguidos mejoraron la calidad de vida, tanto en ricos como en pobres, la reducción de la mortalidad y morbilidad en ancianos y la presencia de “supercentenarios” llevaría a pensar que la esperanza de vida seguiría aumentando de manera gradual y lentamente. En el siglo XXI, el hombre ha dejado atrás la búsqueda de la inmortalidad y se ha centrado en conseguir una mayor supervivencia en las mejores condiciones físicas y mentales. Para ello se recurre a la genómica buscando el descubrimiento de los factores genéticos que afectan al mecanismo del envejecimiento y a enfermedades relacionadas con él. Aunque se conocen todavía poco sobre los diversos factores que afectan a la longevidad en los seres humanos, en los últimos años se han publicado numerosos trabajos que evidencian la dependencia de la longevidad respecto al fondo genético
LAS FERMENTACIONES EN LA PRODUCCIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS DE INTERÉS FARMACÉUTICO
Get PDFLas fermentaciones industriales han sido muy utilizadas para la producción de moléculas orgánicas de interés farmacéutico. La mayoría de los productos farmacéuticos obtenidos por fermentaciones microbianas son metabolitos secundarios. Los metabolitos secundarios desempeñan diferentes papeles en la naturaleza, tales como antibióticos, toxinas, ionóforos, biorreguladores, así como, la señalización intra- e interespecífica. Se producen en la mayoría de los casos por hongos filamentosos y actinomicetos, pero también por otras bacterias (Bacillus, Pseudomonas, Mixobacterias y Cianobacterias). Desde un punto de vista biotecnológico, los metabolitos bioactivos han sido generalmente estudiados como potenciales sustancias antiinfecciosas (antibacterianos, antifúngicos, antivirales y antiparasitarios). Todo comenzó con el descubrimiento de la penicilina. El desarrollo de procesos de producción a gran escala para la penicilina en primer lugar, y después para una gran cantidad de antibacterianos, ha estimulado al desarrollo de la industria de la fermentación y ha contribuido a la evolución de la biotecnología moderna, incluyendo la aplicación de técnicas del ADN recombinante para mejorar los rendimientos de las líneas productoras. Las fermentaciones a escala industrial, también han permitido la producción de otros productos farmacéuticos, tales como agentes anti cancerígenos e inmunosupresores para el trasplante de órganos, y poniendo en el punto de mira enfermedades cardiovasculares y metabólicas. Esta revisión pretende describir las últimas novedades en las fermentaciones industriales para la producción de metabolitos secundarios de interés en el ámbito farmacéutico, tales como nuevas y viejas estatinas, antibacterianos, anti fúngicos, antibióticos antitumorales y agentes inmunosupresores
“Towards a new tuberculosis drug: pyridomycin-nature’s isoniazid”, Hartkoorn et al., EMBO Mol. Med., 4, 1-11 (2012)
Get PDFEnfermedad de Chagas: El desenlace de un conflicto entre el Parásito y el Sistema Inmunitario
Get PDFChagas´ disease was described more than one hundred years ago, but its pathogenesis remains controversial. For several decades it has been considered as an autoimmune disease. Molecular mimicry responsible for anti-parasite-responses that “crossreact” with self-molecules in Trypanosoma cruzi-infected host, epitopes dissemination and polyclonal activation support the autoimmune etiology of the disease. However, in the last years, parasites have been detected in tissues of hosts with chronic infections by using more sensitive techniques and also a correlation among inflammation and parasite antigens and/or DNA has been demonstrated. So, rather than discarding the autoimmune hypothesis, Chagas´ disease is considered as a parasite-induced disorder. This review resumes and analyzes the role of the persistence of parasites, the autoimmunity, as well as other factors possibly involved as microvascular changes and neurogenic alterations, in such a disease that interest both parasitologists and immunologists.Transcurridos más de cien años de su descubrimiento, la patogénesis de la enfermedad de Chagas sigue siendo un tema controvertido. Durante décadas se ha dado mayor relevancia a las consecuencias de la respuesta inmunitaria, hasta el punto de estar considerada como una enfermedad autoinmune. El mimetismo molecular entre antígenos del parásito y del hospedador, la diseminación de epitopos y la activación policlonal son algunos de los mecanismos que explicarían el carácter autoinmune de la enfermedad. Sin embargo, en los últimos años, el interés vuelve a centrarse en el parásito. La utilización de técnicas más sensibles no sólo ha puesto en evidencia su presencia en tejidos, sino que se ha demostrado que existe una correlación entre inflamación y antígenos y/o ADN parasitario. En base a ello, sin descartar la importancia de la respuesta inmune, la necesidad de que persista el parásito está inclinando la balanza hacia consideración como enfermedad parasitaria. Este artículo resume y analiza la participación del parásito, del sistema inmune, así como la influencia de otros factores, como cambios microvasculares o alteraciones neurogénicas, en la patogénesis de una enfermedad que apasiona a parasitólogos e inmunólogos