Showa University Academic Resource Repository / 昭和大学学術業績リポジトリ

昭和大学博士(医学)2023年度thesi

新屋, 光一朗

論文の内容の要旨 
 
論文題名 
Short-term Administration of Polypodium leucotomos Extract does not 
Inhibit CYP3A4-mediated Metabolism of Midazolam in Healthy Subjects: 
An Open-label, Two-period, Fixed-sequence Study  
（Polypodium leucotomos エキス短期投与は健康成人において CYP3A4 を
介する Midazolam 代謝を阻害しない） 
 
掲載雑誌名 
International Journal of Dermatology, 2022年掲載  
doi:10.1111/ijd.16303 
 
医学研究科医学専攻(医科薬理学分野) 博士課程 新屋 光一朗 
 
内容要旨 
【背景・目的】Polypodium leucotomos(PL)エキスは日焼け止めを目的と
したサプリメントとして用いられている。これまで我々は in vitro 実験
およびラットを用いた in vivo 実験で、PL エキスがチトクローム P450 
(CYP)3A の指標薬物である midazolam(MDZ)の代謝を阻害することを報告
した。本研究では PL エキスの CYP3A4阻害を介する薬物相互作用を明らか
にすることを目的として臨床試験を行った。 
【方法】日本人健康成人男性 6名を対象とした。1期は対照試験として MDZ 
(1 mg)を単回経口投与した。2 期は PL エキス(240 mg)を前日より計 3 回
摂取後に同様に MDZを投与した。経時的に採血後、血清 MDZ濃度を測定し、
薬物動態学的パラメータを 1 期と 2 期で比較した。 
【結果】PL エキス短期投与(2 期)後の MDZ の薬物動態学的パラメータは、
AUC0-8:19.18±3.65 ng･hr/mL、Cmax:7.81±1.25 ng/mL、t1/2:2.32±0.35 hr
であり、1 期の AUC0-8:18.74±2.97 ng･hr/mL、Cmax:8.78±1.67 ng/mL、
t1/2:2.52±0.52 hr と比較し有意な変化は認められなかった。 
【考察】PL エキス短期投与は健康成人において CYP3A4 阻害を介する薬物
相互作用を引き起こす可能性が低いことが示された。 
 


English

Short-term administration of Polypodium leucotomos extract does not inhibit CYP3A4-mediated metabolism of midazolam in healthy subjects: an open-label, two-period, fixed-sequence study

昭和大学博士(医学)2023年度doctoral thesi

山田, 真理

別紙１  
論文審査の結果の要旨 
報告番号 ○甲 ・乙 第  3436 号 氏 名  山田真理  
論文審査担当者 
主査 小風 暁 教授  
副査  松山 高明 教授  
副査  角田 卓也 教授  
論文題名：Pathological Social Withdrawal in Autism Spectrum Disorder: A Case Control 
Study of Hikikomori in Japan  
（発達障害とひきこもりの共通基盤：日本におけるケースコントロール研究） 
掲載雑誌名(巻・号・頁・掲載年)： 
Frontiers in Psychiatry, Vol.14 2023 年掲載 
DOI：10.3389/fpsyt.2023.1114224 
自閉症スペクトラム障害（Autism Spectrum Disorder:ASD）はひきこもりになりやすい疾患
として報告はされているが、ひきこもりと ASD との共通基盤について検討した研究はない。本
論文は、両疾患の共通基盤について検討したケースコントロール研究である。 
 山田らは、昭和大学烏山病院発達障害研究所における発達障害外来にて ASD と診断され通
院している男性成人患者を対象に、ひきこもりの構造化面接を行い、ひきこもり群、非ひきこ
もり群の２群に分けた。また生活状況などの聴取、血液生化学検査、および各種自記式検査を
実施し、比較検討を行った。 
 その結果、ひきこもり状態の ASD 患者は抑うつ状態や社交不安、感覚過敏や感覚回避傾向が
有意に高く、アトピー性皮膚炎の合併率も高いことが示された。また、ひきこもり群において
尿酸値が有意に低かった。先行研究においてもひきこもり群において尿酸値が低い傾向は報
告されており、ひきこもりのバイオマーカーになりうると考えた。 
 ひきこもりと ASD における心理学的および生物学的な共通基盤を明らかにした本論文は本
学大学院学位論文(博士)審査基準を満たしており、学位論文に値すると判断した。 
（主査が記載） 


Pathological social withdrawal in autism spectrum disorder: A case control study of hikikomori in Japan

刑部, 優希

In-hospital blood collection increases the rate of indeterminate results in interferongamma release assays

昭和大学修士(保健医療学)2022年度thesi

畝, 浩介

論文の内容の要旨 
 
 
 
論文題名 
病院で子どもを看取る看護師による家族支援の後方視的研究 
 
掲載雑誌名 
なし 
 
保健医療学研究科保健医療学専攻 博士前期課程看護領域看護マネジメント学部門 
畝 浩介 
 
内容要旨 
【背景・目的】子どもの病状が悪化し回復が望めない家族の戸惑いや不安は明らかになってい
るが、看護記録からみる家族支援に関する研究は少ない。そこで、病院で子どもを看取る家族の
思いや苦悩への看護介入を後方視的にみて、子どもを看取る家族への支援の内容を明らかにする。 
【方法】期間：2016 年 1 月〜2022 年 1 月 
対象：関東県内２病院の病棟で亡くなられた小児患者の電子カルテの看護記録 
データ収集方法：家族支援について記載のある看護記録 
分析方法：看護記録を意味が違わないように抽出しコード化、類似性に基づき抽象化しサブカテ
ゴリー、カテゴリーとした。 
【結果】研究対象者は 20 名、抽出したコードは 81、サブカテゴリーは 21、カテゴリーは６。
看取りの家族支援では 5 つのカテゴリー『子どもを思う気持ちを尊重する』『選択を支持する』
『残された時間を子どもと共に過ごせるようにする』『心身を気遣う』『子どもとの絆を実感でき
るようにする』だった。看取り後の家族支援では１つのカテゴリー『子どもとの別れの空間をつ
くる』に分類した。 
【考察】看護師は家族と共にケアをし、家族との関係性を築き感情表出しやすい環境を作って
いた。看取り後は家族と共に子どもの最後の清潔ケアを行いながら、子どもへの思いを傾聴して
いた。病院で看取る子どもの家族支援において看護師は、思いや苦悩を表出できる機会をつくる
ために、意図的に家族と共にケアを実践していく必要がある。 


Japanese

病院で子どもを看取る看護師による家族支援の後方視的研究

昭和大学修士(保健医療学)2023年度thesi

石埜, 靖一郎

Dual Energy CTを用いた副腎腺腫における良悪性の鑑別診断について

塘地, 正美

回復期リハビリテーション看護師が捉える自らの看護実践の特徴

福原, 大祐

家兎の自家腱を用いた半月板部分再建術における至適骨孔位置の検討

2022年度昭和大学学士会特別講演会　医学部教授最終講義departmental bulletin pape

小林, 一女

いつまでも快聴であるために

2022年度昭和大学学士会特別講演会　藤が丘病院・教授定年退職記念講演departmental bulletin pape

鹿間, 裕介

42
昭和学士会誌　第83巻　別冊〔 42-46頁，2023〕
呼吸器内科医として歩んできた 
39 年間を振り返って
昭和大学藤が丘病院呼吸器センター呼吸器内科
鹿 　間　　裕 　介
2022 年度昭和大学学士会特別講演会―藤が丘病院・教授　定年退職記念講演―
2023 年 3 月 2 日　18：00 ～ 18：40　昭和大学藤が丘病院C棟講堂から ZOOMによる Live 配信
○司会　それでは 2022 年度昭和大学学士会特別講
演会，藤が丘病院・教授定年退職記念講演を開会い
たします．開会に先立ちまして，藤が丘病院，門松
副院長から開会のごあいさつと，これからご講演い
ただく鹿間先生の紹介をお願いいたします．それで
は先生，よろしくお願いいたします．
○門松香一　副院長　門松でございます．本日の座
長を務めさせていただきます．今月をもって 3人の
教授が定年退職と相成りました．呼吸器内科の鹿間
教授，放射線科の橋本教授，そして心臓血管外科の
田中教授でございます．いずれの先生方も藤が丘病
院でも大変ご活躍された先生方でございます．その
先生方の退職を記念いたしまして，3人の先生方を
お迎えして最終講義を行っていただきます．これま
で，医師として積まれてこられた経験や，今後私た
ちの指標となる講義を賜りたいと存じます．
　それでは最初に，昭和大学藤が丘病院，呼吸器セ
ンター，呼吸器内科，鹿間裕介教授よりご講演いた
だきます．
　まず恒例に従いまして鹿間裕介先生のご略歴をご
紹介せていただきます．鹿間先生は，1984 年 3 月
に昭和大学医学部を卒業後，同年 5月に医師国家試
験に合格され，同年 6 月，昭和大学医学部第一内
科，医員，1986 年 5 月に後期助手，1990 年に助手，
1992 年 10 月には昭和大学，医学博士を取得されて
おります．1993 年 10 月から米国ウィスコンシン大
学免疫アレルギー科に留学され，帰国後，2001 年 6
月，昭和大学横浜市北部病院呼吸器センターの講
師，2005 年には呼吸器センターの准教授，2016 年
7 月は藤が丘病院の呼吸器内科医長，そして准教
授，2017 年 8 月からは藤が丘病院の呼吸器内科診
療科長，教授，2020 年 4月から昭和大学藤が丘病院，
呼吸器センター長，教授としてご活躍されてこられま
した．
　資格といたしましては，日本内科学会認定医，日本
呼吸器学会専門医指導医，あと所属学会は，日本内
科学会，日本呼吸器学会，日本アレルギー学会，日本
肺癌学会，American Thoracic Society，European 
Respiratory Societyなど所属されております．
　本日は鹿間先生より「呼吸器内科医として歩んで
きた 39 年間を振り返って」という内容でご講演い
ただきます．それでは鹿間先生，よろしくお願いい
たします．
○鹿間教授　門松先生，ご丁寧なご紹介ありがとう
ございます．呼吸器内科の鹿間です．退職記念講演
ということで，こういった題名でお話をさせていた
だこうかと思っていますけれど，昭和大学の医学部
を卒業しておりますので，学生時代の 6年を加える
と 45 年間，昭和大学に在籍したことになります．
　1984 年卒業後，高橋昭三先生が主任教授でい
らっしゃった第一内科に入局いたしました．当時は
まだ講座制であり，5つの研究班があり，その中で
中島宏昭先生が指導されていた気管支鏡班，通称ブ
ロンコ班と呼ばれていましたけども，そこに所属い
たしました．これは昭和大学病院の正面玄関（写真
1）ですが，第一内科の外来と医局はこの正面玄関
の 2階にありました．
　初期の頃の気管支鏡（池田茂人先生の教科書から
取ってきだものです）は，今とは雲泥の差で，気管
支鏡のチャンネルはこの 1か所だけで，鉗子を入れ
たり，吸引したり二つの操作をひとつのチャンネル
で行うため，術者と助手の息を合わせるのが大変で
講　　演
呼吸器内科医として歩んできた 39 年間を振り返って
43
した．また今のようにモニターもなければ，ビデオ
装置もなく気道内を見ることができるのは術者だけ
でしたので早く術者になりたいとよく思ってました．
　当時，呼吸器内科の入院というのは半分が喘息患
者さんでした．今は喘息で入院する方は年間数例だ
と思いますが，この頃は吸入ステロイドが普及し始
める頃であり，まだ喘息コントロールは十分でなく
発作による呼吸困難の緊急入院などが頻りでした．
残りの半分は肺癌の患者さんでした．その肺癌の患
者さんも今のように遺伝子を調べたりすることもな
く，治療法についてもあまり選択肢がない状況で，
化学療法で多少縮小するもののなかなかサバイバル
ベネフィットが実感できない時代でした．
　大学で 1年間研修した後，岡山の河本病院に 2年
間出向しました．県境の山の中の病院で，藤が丘呼
吸器のご出身の河本英世先生のもとでご指導いただ
きました．非常にゆったりとした所で，大学のあく
せくした診療から，解放感がある診療を経験し，医
療の幅を感じました．この病院の特徴の一つは，や
はり結核病棟があったことだと思います．現在呼吸
器科医であっても結核を診断することはあってもな
かなか入院診療をすることはなくこういった結核病
棟のあるところで 2 年間勤務したことは良い経験
だったと思っています．
　もう一つ，自分自身で大きなプラスだったと思う
のは往診です．それまで大学では看取りというと，
モニターを見て，波形がフラットになったら，それ
で看取る（宣告）わけですけど，こういった田舎で
すので往診し，枕元にじっと座って，脈や呼吸の変
化をみたりして，自然な看取りをすることが新鮮に
感じられました．看取ったあとに息をふきかえすの
ではないかと最初の頃はドキドキしていたことを思
い出します．
　2年間の出張後，大学に戻ってきて臨床と研究に明
け暮れました．当時，中島宏昭先生がメイヨークリ
ニックに留学されていたので，リウマチ・膠原病科の
小林和夫先生にご指導いただいて研究を始めました．
異物型肉芽腫，foreign body granulomaの成因を in 
vitro の系で解析することでした．Sepharose 4B と
いうマイクロビーズにいろいろなサイトカインを結
合させてマクロファージの集簇を倒立顕微鏡や電子
顕微鏡で観察するものでした．さまざまなサイトカ
インの中で，IL-1 と TNF-αが granuloma の形成に
関係することを見いだしました．後にこれが私の学
位論文になりましたけれども，明け方までこういっ
た実験して，日中は患者さんを診ているという状況
で，寝不足な毎日でした．
　当時ブロンコ班に所属しておりましたので，がん
の患者さんを診ることが多く，私が入局した 1984
年当時は告知することがタブーという時代でした．
それがだんだん患者さんの知る権利などいろいろな
議論があり，告知が次第に増えて 1995 年頃から告
知することが一般的になりました．そして終末期に
蘇生を行わないDNRという対応も並行して一般的
になってきました．それらの変遷の中でこういった
患者さんを診ておりました．
　その後，研究が一段落したあとは病理学教室に
時々行って，伸展固定肺を作って諸星利男先生に肺
病理を教えていただきました．入局 6年目，医長出
張として鹿児島の今給黎病院に出張になりました．
出張病院で病理解剖ができる病院はあまりありませ
んが，ここはそれが可能で非常にアクティブな病院
で，本学の関連病院でもあります．
　鹿児島に赴任した当初は呼吸器として火山灰と肺
病変について研究できないかと思っていましたが，
行ってみたら全然様相が違って，成人T細胞白血
病（adult T-cell leukemia：ATL）の抗体陽性の肺
病変が非常に多いことを知りました．ATLAの肺
病変としては間質性肺炎やDPBのような細気管支
炎の所見がよく見られました．この病気は西日本に
多く見られて，関東で見ることはあまりないと思い
ます．呼吸器内科は入院患者 30 名程でその内半数
写真 1
鹿 　間　　裕 　介
44
の方がATL抗体陽性で，気管支鏡で気道内の異型
リンパ球を調べたりしていました．当時，鹿児島大
学の第三内科の納先生の教室はHTLV-1 関連脊髄
症：HAMについての研究が盛んで呼吸器の領域で
はHABAというような言い方で，こういうウイル
ス関連の肺病変が認められることがよく議論されて
ました．
　2年間鹿児島におりまして，その後米国ウィスコン
シン大学のアレルギー臨床免疫，Allergy clinical 
immunology の教室に留学する機会をいただきまし
た．これは（写真 2）私の恩師であります中島宏昭先
生，それからアメリカのボスでありましたWilliam 
Busse 先生，それから Julie Sedgwick 先生です．
　ここではもっぱら好酸球の実験をしていました．
末梢血から好酸球を分離して，その cell biology を
3 年間やっていました．好酸球を分離するのに大体
4～ 5 時間かかるわけですけど，それから実験が始
まるという非常に手間のかかる実験でした．
　私の研究内容は好酸球からのサイトカイン産生
と，接着分子関連の仕事が主でした．この中で私が
非常に興味を持っていたのは，VCAM-1 という ad-
he sion molecule と，間質蛋白の fibronectin につい
ての研究でした．好酸球は骨髄から出て血流に乗っ
て内皮細胞に接着，ローリングして内皮の間隙を
縫って間質に入って上皮に着いて，そこで脱顆粒を
起こして上皮障害を起こすというプロセスです．こ
のトランスマイグレーションのプロセスがよく知ら
れているわけですけれども，血管内皮にはadhesion 
molecule，VCAM-1 が表出しており，それに好酸
球はα4β1 というリガンドを介して接着します．一
方α4β1 は間質タンパクである fibronectin の CS1
と接合することが当時分かっておりましたので，こ
の 2つの分子と好酸球の活性化について着目して研
究していました．
　好酸球はVCAM-1 には非常に強く接着しますが，
tissue fibronectin に対する接着は弱く，このことは
末梢血から内皮でトラップするには強い接着が必要
であり間質を抜けていくには接着は弱い方が合理的
と考えられます．一方，VCAM-1 に接着した好酸
球の cell survival は弱いが tissue fibronectin の上
で培養すると非常に延びることを見いだしました．
その機序として好酸球からの GM-CSF の産生が
VCAM-1 よりも tissue fibronectin がより強く誘導
することがわかりました．さらにこれらの差がどこ
からくるのか，α4β1 以外にα5β1，β2 integrin
などの接着因子について検討しましたが，私の留学
期間がタイムリミットとなりました．当時，
MAdCAM-1 に接着するα4β7 が候補ではないかと
いうところで帰国いたしました．この研究は共同研
究者のDeane Mosher（fibronectin の発見者）の研
究室でα4β7 がこの fibronectin で誘導される GM-
CSFの産生に関与していることが証明され1999年，
私の帰国 3年後に publish されました．
　当時，喘息の領域では airway remodeling，基底
膜肥厚について盛んに研究されていて，fibronectin 
や tenascin，collagen type Ⅲなどの間質蛋白に興
味が移り，実験対象も好酸球から fibroblast へだん
だん移行していく時期でした．
写真 2 写真 3
呼吸器内科医として歩んできた 39 年間を振り返って
45
　そうこうしてる間に 2001 年，私にとっては非常
に大きな転機がありました．北部病院の立ち上げの
ための異動です．北部病院で斬新だったのはセン
ター化と電子カルテでした．この写真（写真 3）は
開院当日に撮られたものでセンター長の中島宏昭先
生，旗の台からは笠原慶太先生と私，藤が丘からは
大眉寿々子先生，外科は門倉光隆先生が旗の台か
ら，また神尾義人先生が藤が丘から参加されまし
た．開院当時は 6名で 40 床を診ており，夜中の呼
び出しも度々でした．それでもだんだんに入局者も
増え，鈴木隆先生が中島先生の後任のセンター長と
して就任され，外科で取られた手術肺から
fibroblast を樹立することができるようになり，研
究を進めることができました．この研究では IL-10
が TGF-βで誘導される collagen type Ⅲの産生を増
強することを見いだし，その機序に IL-10 が TGF-
βの type Ⅱ receptor の発現を亢進することを確認
いたしました．この研究には微生物学教室の田中和
生先生，幸田力先生に大変ご助力いただきました．
　この頃同時に，生理学教室から浅野和仁先生が保
健医療学部に異動になられていて，現在の COPD
の治療薬であるチオトロピウムの抗炎症作用や細胞
外マトリックスの調節機能についての研究を一緒に
やらせていただくことができました．
　神奈川に来てから，臨床をやりながら楽しかった
のは，7基幹病院の先生方と共同研究する機会を得
たことです．COPD に対してチオトロピウムにア
ドエアを併用することで，臨床症状や呼吸機能の改
善を見るというものですけれども，ここで目新し
かったのは，IOS（インパルスオシレーション法）
という，強制オッシレーション法を用いて呼吸抵抗
を評価したことです．ちょうど外来やりながら，横
に IOS を置いて検査しながら診察するということ
もありました．
　立ち上げ以来忙しいながらもみんな活気があっ
て，それがやりがいのある職場だなと思っていまし
たが，2016 年夏に藤が丘病院に突然異動というこ
とでこちらに参りました．
　当時，今の教授室のクーラーが入らなくて，真夏
の引っ越しで 1か月間ぐらいクーラーが故障してい
て，非常に暑いところだなというのが藤が丘病院に
来た時の印象でした．
　これはその時のメンバー（写真 4）ですけども，
今は異動／退職された先生方もいらっしゃいますけ
ど，非常に気持ちよく迎えていただきました．
　当初，診療科長として赴任しましたがなかなか慣
れず，特に管理的な仕事や収入についてなど不得手
だと感じていました．今まで経験したことがないよ
うな課題もありましたが何とか慣れてきたと思って
いた時に，2019 年コロナのパンデミックが起こり
ました．これには病院を挙げての対応となり，呼吸
器内科もその中核となって，医局の先生方には非常
に頑張っていただき今も心から感謝しております．
　パンデミックの直前，ちょうど加藤栄助先生の壮
行会のときに撮った写真です（写真 5）．呼吸器内
科では何かイベントやるというとOBの先生方にも
多数参加していただき，非常に和気あいあいとした
科だなと感じています．
写真 5写真 4
鹿 　間　　裕 　介
46
　また私が藤が丘来て一番うれしかったのは，多く
の先生方に入局していただいたことで，着任後 20
名の新しい仲間ができたことが非常に励みになりま
した．今後ますます増えて，またみんながいろんな
ことを勉強していくと思いますが，ぜひ今後も発展
していただくようにお願いしたいと思います．
　最後に，これまでいろいろご指導いただいた先
生，それから支えていただいた方々に感謝申し上げ
て私の話をお仕舞いにしたいと思います．どうもご
清聴ありがとうございました．
○司会　鹿間先生，貴重なご講演ありがとうござい
ました．それでは高橋寛病院長より記念品の贈呈を
お願いしたいと思います．高橋病院長，よろしくお
願いいたします．
○高橋寛　病院長　鹿間先生，どうもありがとうご
ざいます．先生が藤が丘の呼吸器センター長として
センターを牽引していただき，本当に先生には感謝
しております．またこの 3年間の COVID の対応に
ついては，先生をはじめ呼吸器チームに頑張ってい
ただいて誠にありがとうございます．先生には今後
も呼吸器センター長として，どうぞよろしくお願い
します．今日は面白い，興味深いお話をありがとう
ございました．
　記念の楯を，昭和大学学士会からですので，どう
ぞ．
○鹿間教授　ありがとうございます．
○司会　引き続き，花束贈呈，お願いいたします．
○鹿間教授　ありがとうございます．
○司会　鹿間先生，ありがとうございました．いま
一度，盛大な拍手をお願いいたします．


呼吸器内科医として歩んできた39年間を振り返って

昭和大学博士(歯学)2023年度thesi

若月, 萌音

論文要約 
 
論文題名 
Fast-track preparation of lung specimens for electron 
microscope observations of the pulmonary endothelial glycocalyx 
(肺グリコカリックスの電子顕微鏡迅速観察法の確立) 
 
掲載雑誌名 
Medical molecular Morphology（掲載予定） 
DOI 10.1007/s00795-023-00360-1 
 
歯学研究科 歯学専攻(歯科麻酔科学分野) 博士課程 若月 萌音   
 
論文要約 
【背景・目的】 
グリコカリックス(GCX)は、血管内腔面を覆う脆弱な構造物である。特に
肺血管内腔の GCX の破壊・脱落は、肺水腫や肺炎を含む様々な血管障害の
引き金となり、GCX が血管障害に起因する臓器障害の発症に関わる重要な
因子であると考えられている[1]。GCX の状態を評価することは、肺疾患患
者の予後を決定し、治療介入の有効性を評価するための重要な指標となる
可能性がある。しかし、GCX は非常に薄く壊れやすい層であるため、その
構造保持を確実にするためには試料作製方法を検討する必要がある。マウ
スではランタン加固定液を用いた灌流固定により、GCX の電子顕微鏡像が
得られている[2,3]が、この方法はヒト標本に応用することはできない。
我々は、以前、アルシアンブルー(ALB)染色したホルマリン固定パラフィ
ン包埋（FFPE）標本とエポキシ樹脂包埋超薄切片を用いて、灌流固定なし
で、マウス腎臓の GCX を観察する方法を開発した[4]。これにより、ホル
マリン浸漬固定標本でも GCXの形態変化を評価することが可能となった。
本研究では、この浸漬固定法を応用して肺血管内皮上の GCX を可視化する
方法を確立することで、ヒト肺血管透過性亢進病態の解明や治療戦略へ貢
献することを目的とした。 
【方法】 
実験には BALB/C マウス 10 週齢 雄を使用した。ランタン加固定液で灌流
固定した肺組織をコントロールとした。 
①脱気回数・浸漬時間の条件検討 
マウスから摘出・細切した約 5mm 角の肺をそれぞれ 0,30,50,100 回脱気
し、FFPE 標本を作製した。また、マウス肺を摘出後に常法の透過電子顕微
鏡（TEM）標本を作製した。この光顕・TEM 試料を用いて脱気回数、浸漬時
間の最適条件と脱気操作に対する肺微細構造へのダメージを検討した。ま
た、FFPE 標本を PAM 染色し、肺血管内皮上の GCX 形態を低真空モードで
走査電子顕微鏡（SEM）観察した。 
②GCX 観察の迅速化の検討 
脱気 100 回後、1日 ALB 浸漬固定したマウス肺組織を脱水・臨界点乾燥・
オスミウムコーティング後に高真空モードで SEM 観察した。また、同じ肺
組織で常法の TEM 試料作製をし、TEM 観察した。 
③病態マウスとの比較検討 
マウスに LPS 腹腔内投与し、敗血症モデル[5]を作製した。健常マウスと
敗血症マウスの血中の白血球数（WBC）、血小板数（PLT）、シンデカン-1 値、
酸素飽和度（SpO2）を測定した。SEM/TEM による画像解析で GCX 形態の比
較検討をした。 
【結果】 
① 
・光顕下では、脱気 30 回以上した肺標本は、浸漬固定時間に関わらず、
組織内部まで ALB 染色されていた。 
・肺胞の形態は ALB浸漬固定標本のほうがコントロールよりも保持良好だ
った。 
・TEM 下での肺微細構造の比較では、ALB 浸漬固定標本のほうが、コント
ロールよりも肺胞腔・血管、基底膜やミトコンドリアなどの保持が良好だ
った。 
・FFPE 標本を SEM 観察したところ、脱気 30 回以上した標本で GCX の付着
を確認でき、特に 100 回脱気した標本で最も明瞭に GCX の付着を観察する
ことができた。 
・脱気 100 回後、1日 ALB 浸漬固定した肺標本が最短かつ最適な条件と判
断した。 
② 
・FFPE標本によるGCX観察では試料作製から観察までに6日間要したが、
迅速 ALB 脱気浸漬固定法では 2日間で GCX 観察可能となり、これはコント
ロールの GCX 形態像と比較しても明らかな差異は認められなかった。 
③ 
・血液データや SpO2 値から LPS 投与後 12 時間の時点で最も敗血症が重症
化した。 
・LPS 投与後 12 時間の SEM/TEM 観察では、GCX が肺血管内皮上に球状に散
在している様子が確認され、付着密度も健常マウスより低下していた。 
・画像解析による GCX 付着量や付着長さも、敗血症マウスでは健常マウス
より有意に低下していた。 
【考察】 
FFPE 標本による ALB 脱気浸漬固定法では観察まで 6 日間要したが、脱気
操作による肺微細構造への明らかな損傷はなく、GCXも観察可能であった。
しかし、FFPE 標本を用いずに、試料作製過程でオスミウムコーティングを
用いることで、２日に短縮することができた。上記の 2方法による GCX 形
態像はコントロールと比較しても明らかな差は認められなかったため、本
迅速 ALB 脱気浸漬固定法は肺血管内皮上の GCX 観察法に適していると考
えた。本法は将来的に動物だけでなく、ヒト標本にも応用が可能で、臨床
における術中迅速病理診断や血管透過性亢進病態の機序解明、新たな治療
戦略へ貢献することが期待される。しかし、本研究では LPS 投与後 12 時
間後の GCX 脱落像を観察したが、その自然回復過程や薬剤投与時の GCX 形
態変化は追っていないため、今後さらなる検討が必要である[6,7]。 
【参考文献】 
1. Kataoka H, Ushiyama A, Akimoto Y, Matsubara S, Kawakami H, 
Iijima T(2017) Structural behavior of the endothelial 
glycocalyx is associated with pathophysiologic status in 
septic mice: an integrated approach to analyzing the 
behavior and function of the glycocalyx using both electron 
and fluorescence intravital microscopy. Anesth Analg 
125:874-883 
2. Inagawa R, Okada H, Takemura G, Suzuki K, Takada C, Yano H, 
Ando Y, Usui T, Hotta Y, Miyazaki N, Tsujimoto A, Zaikokuji 
R, Matsumoto A, Kawaguchi T, Doi T, Yoshida T, Yoshida S, 
Kumada K, Ushikoshi H, Toyoda I, Ogura S (2018) 
Ultrastructural alteration of pulmonary capillary 
endothelial glycocalyx during endotoxemia. Chest 154:317-
325 
3. Okada H, Takemura G, Suzuki K, Oda K, Takada C, Hotta Y, 
Miyazaki N, Tsujimoto A, Muraki I, Ando Y, Zaikokuji R, 
Matsumoto A, Kitagaki H, Tamaoki Y, Usui T, Doi T, Yoshida 
T, Yoshida S, Ushikoshi H, Toyoda I, Ogura S (2017) Three-
dimensional ultrastructure of capillary endothelial 
glycocalyx under normal and experimental endotoxemic 
conditions. Crit Care 21:261 
4. Mukai S, Takaki T, Nagumo T, Sano M, Kang D, Takimoto M, Honda 
K (2021) Three-dimensional electron microscopy for 
endothelial glycocalyx observation using Alcian blue with 
silver enhancement. Med Mol Morphol 54:95-107 
5. Thomas RC, Bath MF, Stover CM, Lambert DG, Thompson JP (2014) 
Exploring LPS-induced sepsis in rats and mice as a model to 
study potential protective effects of the 
nociceptin/orphanin FQ system. Peptides 61:56-60 
6. Shinohara A, Ushiyama A, Iijima T (2021) Time-dependent 
dynamics required for the degradation and restoration of 
the vascular endothelial glycocalyx layer in 
lipopolysaccharide-treated septic mice. Front Cardiovasc 
Med 8:730298 
7. Suzuki K, Okada H, Takemura G, Takada C, Tomita H, Yano H, 
Muraki I, Zaikokuji R, Kuroda A, Fukuda H, Nishio A, 
Takashima S, Suzuki A, Miyazaki N, Fukuta T, Yamada N, 
Watanabe T, Doi T, Yoshida T, Kumada K, Ushikoshi H, 
Yoshida S, Ogura S (2020) Recombinant thrombomodulin 
protects against LPS-induced acute respiratory distress 
syndrome via preservation of pulmonary endothelial 
glycocalyx. Br J Pharmacol 177:4021-4033 
 
【倫理審査委員会承認番号】 
昭和大学動物実験承認番号：54025 
国立保健医療科学院動物実験承認番号：R3-001 
 
【利益相反(COI)】 
開示すべき COI はありません 


Not a member yet