Kitasato University Repository / 北里大学リポジトリ

北里大学博士（医学）2023(令和5)年

多々良, 俊哉

タタラ, シュンヤ

TATARA, Shunya

Japanese

視線解析を用いた眼球運動評価システムの開発と有用性の検証

野田, 匠

ノダ, タクミ

NODA, Takumi

Prognostic value of hepato-renal dysfunction and frailty in patients with heart failure

北里大学博士（薬科学）2023(令和5)年

高橋, 那央也

タカハシ, ナオヤ

TAKAHASHI, Naoya

学位論文内容要旨 
北里大学大学院薬学研究科薬科学専攻医薬品化学教室 
氏名：高橋 那央也 印 
 
題目：「特異なアミン基質を用いた触媒的脱水縮合アミド化反応の開発と応用」 
 
１．緒言 
 アミドは医薬品や天然物に普遍的に含まれる重要な化学結合様式であることから，その効率
的な合成手法の開発が強く望まれている．一般的なアミド合成法は，化学量論量の活性化試薬を
用いた縮合反応であるが，水のみを副生成物とする触媒的アミド化反応が最も理想的な方法論
と認知されている(Scheme 1)．近年，脱水縮合による触媒的なアミド化反応の開発研究が精力的
に行われており，特に山本ら 1)の先駆的な報告をはじめとして，芳香族ボロン酸を触媒として用
いる方法論が現在までに数多く開発されてきた 2)．本反応は従来，カルボン酸とボロン酸が脱水
することにより生じるアシルボロ
ナートが反応の活性種と想定され
ていたが，近年，B–O–B 結合を有
する二量体構造が真の活性中間体
として提唱されている (Scheme 
2)3)．一方当研究室では独自に，B–
O–B 結合を分子内に組込んだ新規
ジボロン酸無水物 DBAA を開発
し，b-ヒドロキシカルボン酸を基
質としたアミド化反応において，
高活性な触媒として機能すること
を見出した(Scheme 3)4)．本触媒反
応は，アニリンなどの求核性の低
いアミン基質を用いた場合にも，
高い触媒活性を示す．また本反応
は，従来の有機ホウ素触媒反応で
は必須であった厳密な脱水操作を
一切必要としない特長を有する．
以上の知見を踏まえ今回筆者は，
DBAA を用いることで，求核性の
低さゆえに従来の触媒反応に適用
困難であったアミン基質を用いた
アミド化反応の実現が可能と考え
た．さらに，厳密な脱水操作を必須
とした従来法では実現困難なアミ
ン水溶液を基質とした触媒的脱水
縮合反応の開発を目的とした．  
carboxylic acid amide bond
stoichiometric
activating reagent
stoichiometric
byproduct
catalyst
– H2O
– AG-H
Ideal method: Catalytic Direct Amidation
Conventional method: Condensation Using Coupling Agents
clean byproduct
active acyl
intermediate
R1 OH
O
R AG
O
R1 N
O
R3
R2
HNR2R3
Scheme 1
HNR2R3
O
OH
N
H
Ph
75% (0.01 mol %)
Low Catalyst Loading     
(TON = 7,500)
MeO
BocHN N
H
O
OH
81%, dr >99:1 (2.0 mol %)
O
OMe
Amino Acids
SMe
B BO OH
HO
Biaryl-Based
Diboronic Acid Anhydride
Organodiboron
Scaffold
B BO
OHHO
B BO OH
HO
B BO OH
O O O
R2
H
proposed active intermediate
– H2O
β-hydroxy
carboxylic acids
R1
N R
7H
R6
N R
7H
R6
β-hydroxyamides
Highly Active Catalyst
B BO
HO OH
Br
Br
Br
Br DBAA 1
O
OH
N
H
76% (1.0 mol %)
Poor Nucleophilic Amine
Ph
Scheme 3
R1 OH
O
R1 O
O
H
O
B Ar
acylboronate intermediate
cat.
ArB(OH)2
− H2O
B
O
B
OO
O O
R1
R1
ArAr
dimeric B–O–B motif
− H2O
Scheme 2
HNR2R3
R1 N
O
R3
R2HNR
2R3
Cl
N
O
R7
R6
R4
OH
R5
OH
O
R4
OH
R5
No Dehydrative Operation
２．Weinreb アミドの触媒的合成法の開発 5,6) 
２−１．a-ヒドロキシ Weinreb アミドの触媒的合成 
Weinreb アミド 7)は，対応するケトンやアルデヒドへと容易に誘導可能な信頼性の高い前駆体
として，天然物合成をはじめとした幅広い場面で利用されている．しかしながら，触媒的脱水縮
合アミド化反応を利用した Weinreb アミド合成において，N,O-ジメチルヒドロキシルアミンを適
用することは，アミン基質の求核性の低さゆえに困難であった．そこで筆者は，N,O-ジメチルヒ
ドロキシルアミンをアミン基質とした触媒的アミド化反応を検討した．はじめに，0.5 mol %の
DBAA 1 存在下，3-L-フェニル乳酸
(2a)と 3 当量の N,O-ジメチルヒドロ
キシルアミン(3)との反応を行った
(Table 1)．その結果，反応は円滑に進
行し，ラセミ化が進行することなく
92%の高収率で目的とするa-ヒドロ
キシ Weinreb アミド 4a が得られた．
 b位に 4-ヒドロキシフェニル基やイ
ンドリル基を有するキラルなカルボ
ン酸基質を用いた場合にも，光学純
度を損うことなくアミド 4b, 4c が得
られた．a位にアルキル側鎖を組込
んだ基質でも反応は問題なく進行し
た(4d, 4e)．さらに，キラルなマンデ
ル酸を基質としたところ，ラセミ化
を抑制し，Weinreb アミド 4f が得ら
れた．芳香環上に電子供与基や電子
求引基を有する誘導体を用いた場合
にも，反応が円滑に進行した(4g–4i)．
また，メタ位やオルト位に置換基を
組込んだ基質においても，対応する
アミド 4j, 4k が高収率で得られた． 
２−２．市販のアミン塩酸塩を用いた Weinreb アミド合成 
アミン基質を市販の塩酸塩(3•HCl)に変更し検討を行った(Scheme 4)．その結果，3 当量の炭酸
水素ナトリウム共存下，反応は円滑に進行し，光学純度を一切損なうことなく 81%の高収率で，
目的とする Weinreb アミド 4f が得ら
れることが明らかになった．本結果
より，市販のアミン塩酸塩を反応系
中で遊離し Weinreb アミドが合成可
能であることを示した． 
２−３．化学選択的な Weinreb アミド合成 
a-ヒドロキシカルボン酸 2a と単
純カルボン酸 5 との競争実験を行っ
たところ，対応するa-ヒドロキシ
Weinreb アミド 4a が，高い化学選択
性にて得られた(Scheme 5)． 
OH
O
N OMeH
Me •HCl
N
ODBAA 1 (0.5 mol %)NaHCO3 (3.0 equiv)
DCE (0.2 M)
reflux, 24 h
2f
1.0 equiv
3•HCl
3.0 equiv
OH OH
4f
81%, >99% ee
OMe
Me
Scheme 4
DBAA 1 
(0.5 mol %)
HNMe(OMe)
(3) (3.0 equiv)
DCE (0.2 M)
reflux, 24 h
Ph OH
O
OH
Ph OH
O
Ph N
O
OH
Ph N
O
OMe
Me
OMe
Me2a
1.0 equiv
5
1.0 equiv
4a
>99%, >99% ee
6
6%
Scheme 5
N OMe
Me
O
OH
N OMe
Me
O
OH
N OMe
Me
O
OH
N OMe
Me
O
OH
N OMe
Me
O
OH
N OMe
Me
O
OH
N OMe
Me
O
OH
N OMe
Me
O
OH
N OMe
Me
O
OH
MeO Cl
F3C
Cl
Cl
N OMe
Me
O
OH
HO
N
H
4f
92%, >99% eea
4g
96%c
4d
83%
4e
98%c
4bb
89%c,d, 86% eea
4c
97%c, >99% eea
N OMe
Me
O
OH
4a
92%, >99% eea
4h
84%
4k
80%
4j
91%
4i
89%
B BO
HO OH
Br
Br
Br
Br
OH
O
R1 N OMeH
Me
N
O
R1
DBAA 1
DBAA 1 
(0.5 mol %)
DCE (0.2 M)
reflux, 24 h2
1.0 equiv
3
3.0 equiv
OH OH
α-hydroxy
carboxylic acids
α-hydroxy
Weinreb amides
a Ee was determined by chiral HPLC analysis. b Performed using acid 2b with 
86% optical purity. c Performed with 2.0 mol % of 1. d Performed in DCE (0.1 M)
Table 1
4
4
Me
OMe
２−４．本反応を鍵工程とした天然物合成への応用 
開発した触媒反応を鍵工程とした a-ヒドロキシケトン天然物群の合成を行った(Table 2)．すな
わち，DBAA 触媒アミド化反応によって得られたa-ヒドロキシ Weinreb アミド 4a を精製するこ
となく，イソブチルマグネシウムクロリドを作用させることで，サッタバシン(7)を高収率で合
成することに成功した．本反応はグラムスケールにも適用可能であり，カルボニルa位のラセミ
化を完全に抑制して天然物 7 が得られた．また，カルボン酸基質を 2b に変更することで 4-ヒド
ロキシサッタバシン(8)が収率 68%で得られた．さらに同様のワンポット連続反応を利用するこ
とで，対応する天然物がいずれも 70–90%の高収率で得られた(9, 10, 14)．続いて，種々の Weinreb
アミドに対して，4-(ベンジルオキシ)ベンジルマグネシウムクロリドを作用させた後，ベンジル
基の脱保護を行うことで，a-ヒドロキシケトン天然物 15–17 が高収率で得られた． 
３．第一級アミドの触媒的合成法の開発 8,9) 
３−１．a-もしくはb-ヒドロキシ第一級アミドの触媒的合成 
カルボン酸と安価で入手容易なアンモニア水溶液を基質とした触媒的な脱水縮合アミド化反
応は，第一級アミドの理想的な合成法であるが，従来の触媒的脱水縮合アミド化反応は厳密な脱
水操作を必要とすることから，その成功例は知られていなかった．そこで今回筆者は DBAA を
用いた，アンモニア水溶液をアミン基質とする第一級アミド合成を検討した．はじめに，5.0 mol %
の DBAA 1 存在下，3-ヒドロキシ-3-フェニルプロパン酸(18a)と 3.0 当量の 28%アンモニア水溶
液(19)とのアミド化反応を行った(Table 3A)．その結果，目的とするb-ヒドロキシ第一級アミド
20a が 96%の高収率で得られた．また芳香環上パラ位の電子的要因によらず，いずれも高収率で
対応するアミド 20b–20e が得られた．芳香環オルト位にメチル基を有する基質や複素環を組込
んだ基質でも収率の低下は観測されなかった(20f, 20g)．b位に脂肪族側鎖を有するカルボン酸を
基質としても反応は問題なく進行した(20h–20k)．a位に置換基を有するトロパ酸を用いても，良
好な収率でアミド 20l が得られた．続いて本触媒反応をa-ヒドロキシカルボン酸へと適用するこ
とを試みた(Table 3B)．キラルなマンデル酸を基質として用いたところ，ラセミ化を最小限に抑
制しつつ，77%の高収率でa-ヒドロキシ第一級アミド 21a が得られた．また，芳香環上の電子的
要因によらず，高収率で対応するアミド 21b–21e が得られ，メタ位やオルト位に置換基を組込ん
O
OH
O
OHHO N
H
O
OH
O
OHHO
O
OHN
H
O
OH
O
OHHO
O
OH
OR OR OR
sattabacin (7) 4-hydroxy sattabacin (8)
68%, 86% eea92%, >99% eea
75%, >99% eea [1g scale, 0.5 mol %]
kurasoin A (9)
70%, 86% eea
kurasoin B (10)
75%, >99% eea
R = Bn (11): 79%
R = H (soraphinol A, 15)
circumcin C (14)
90%, >99% eea
R = Bn (12): 81%
R = H (soraphinol B, 16)
R = Bn (13): 79%
R = H (circumcin B, 17)b
90%, 98% eea 88%, >99% eea 90%, 86% eea
a Ee was determined by chiral HPLC analysis. b H2, Pd/C, EtOAc, rt, 5–12 h.
OH
O
N
O
DBAA 1  
(2.0 mol %)
HNMe(OMe) 
(3) (3.0 equiv)
DCE, reflux, 24 h
2
1.0 equiv
OH OH
Table 2
4
OMe
Me
RCH2MgCl 
(5.0 equiv)
THF, rt, 24 h
O
OH
R
without purification
7–14
B BO
HO OH
Br
Br
Br
Br DBAA 1
ArArAr
Ar = Ph (2a), >99% ee
Ar = 4-HOC6H4 (2b), 86% ee
Ar = 3-indolyl (2c), >99% ee
Ar = Ph (4a)
Ar = 4-HOC6H4 (4b)
Ar = 3-indolyl (4c)
R = iPr
R = Ph
R = 4-BnOC6H4
b b
だ場合においても，収率の低下は観測されなかった(21f, 21g)．加えて，イソブチル基やノルマル
ヘキシル基，ベンジル基などのアルキル側鎖も本触媒反応に適用可能であった(21h–21j)．NH フ
リーのインドール環を有する基質を用いても，良好な収率でa-ヒドロキシ第一級アミド 21k が
得られた． 
３−２．生理活性物質合成への応用 
本触媒反応の有用性を示すべく，生理活性物質への変換を行った．a-ヒドロキシ第一級アミド
21c に対して，LAH還元によるアミドカルボニル基の還元を行うことで，b-アミノアルコール 22
へと導いた．その後，得られた粗製生物を精製することなく，パラジウムカーボンを用いた加水
素分解によるベンジル基の脱保護を行うことで，オクトパミン(23)を 2工程収率 74%で合成する
ことに成功した(Figure 1A)．さらに，アミド 21b の還元，N-アシル化反応を連続的に行うことで，
生理活性物質であるアエゲリン(25)やテンバミド(26)を高収率で合成することに成功した．続い
て，b-ヒドロキシ第一級アミドからの変換について検討を行った(Figure 1B)．アミド 20c に対し
て LAH還元を行うことで，高収率でg-アミノアルコール 27 へと導いた．また，ヨードベンゼン
ジアセテートを作用させることで，種々の生理活性物質へと誘導可能な 2-オキサゾリジノン 28
を 99%の高収率で合成した．さらに，アミド 20f の酸触媒脱水反応により，a,b-不飽和第一級ア
ミドである天然物 U-77863(29)へと導くことに成功した． 
HO
OH
NH2
21c
a
(±)-octopamine (23)
74% over 2 steps
MeO
OH
N
H
O
(±)-aegeline (25)
83%
MeO
OH
N
H
O
(±)-tembamide (26)
72%
BnO
OH
NH2
without purification
MeO
OH
21b R
O
N
H
25 (R = (E)-CH=CHPh)
26 (R = Ph)
b
a
MeO
OH
NH2
c
without purification
A. Transformation of α-hydroxy primary amides
PhI(OAc)2 
(4.0 equiv)
MeCN (0.20 M)
40 °C, 3 h
28
2-oxazolidinone
20c
LiAlH4 (3.4 equiv)
THF (0.10 M)
70 °C, 4 h
TsOH•H2O (10 mol%)
toluene (0.01 M)
reflux, 41 h
27
1,3-amino alcohol
U-77863 (29)
α,β-unsaturated 
primary amide
99%
99%
79%
NH2
OH
MeO
NH
O
MeO
O
B. Transformation of β-hydroxy primary amides
20f
O
NH2
Me
22
24
(±)-aegeline (25)
(±)-tembamide (26)
a LiAlH4 (3.4 equiv), THF (0.10 M), 70 °C, 4 h. b 5% Pd/C (20 wt%), H2 (1 atm), MeOH (0.10 M), rt, 1 h. 
c RCOCl (1.1 equiv), CH2Cl2/pyridine (3:1, 0.08 M), 0 °C, 2 h.
Figure 1
ref 10
21a
77%, 96% eec
OH
NH2
O
21j
73%d
OH
NH2
O
21k
62%d
OH
NH2
O
N
H
Ar = 4-MeOC6H4 (21b): 88%d
Ar = 4-BnOC6H4 (21c): 80%d
Ar = 4-CF3C6H4 (21d): 97%
Ar = 4-ClC6H4 (21e): 85%
Ar = 3-ClC6H4 (21f): 87%d
Ar = 2-ClC6H4 (21g): 86%d
OH
NH2
O
Ar
OH
NH2
O
Alkyl
Alkyl = i-Bu (21h): 88%d
Alkyl = n-Hex (21i): 78%d
Ar = H (20a): 96%
Ar = 4-MeC6H4 (20b): >99%a
Ar = 4-MeOC6H4 (20c): 93%b
Ar = 4-FC6H4 (20d): 95%a
Ar = 4-CF3C6H4 (20e): 78%a
Ar = 2-MeC6H4 (20f): 86%
Ar = 2-thienyl (20g): 95%b
20j
95%
20k
79%
20l
72%b
O
NH2Ar
OH
O
NH2
OH O
NH2
OH O
NH2
OH
O
NH2Alkyl
OH
Alkyl = n-Pr (20h): 81%b
Alkyl = tert-Bu (20i): 95%
Table 3
a Performed for 48 h. b Performed at 110 °C. c Ee was determined by chiral HPLC analysis. d 10 mol % of DBAA 1 was used.
18 (n = 1), 2 (n = 0)
1.0 equiv
19
3.0 equiv
DBAA 1 (5.0 mol%)
C6H5Cl (0.20 M)
90 °C, 24 h
20 (n = 1), 21 (n = 0)
aqueous NH3
(28% solution)
O
OH
OH
R1
R2
O
NH2
OH
R1
R2
n n
R1 = Ar or Alkyl
B BO
HO OH
Br
Br
Br
Br DBAA 1
A. β-hydroxy primary amides B. α-hydroxy primary amidesb
４．結語 
 以上筆者は，当研究室で独自に開発した DBAA を用いることで，従来の触媒的アミド化反応
に適用困難であったアミン基質を用いた，前例のない触媒的脱水縮合を開発することに成功し
た．本合成法の開発により，合成化学上有用な Weinreb アミド，第一級アミドを入手容易なアミ
ン基質から直截的に合成することが可能となった．さらに，本触媒反応を鍵工程とした天然物合
成や，生理活性物質への誘導が可能であることから，高い実用性を示すことが明らかとなった． 
References 
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嶋田修之，牧野一石. (b) 第 45 回反応と合成の進歩シンポジウム (2019 年 10月 28日，岡山，
ポスター発表，1P-13) 有機ホウ素化合物を用いた Weinreb アミドの触媒的合成法の開発と天
然物合成への応用 ◯高橋那央也，大瀬尚希，嶋田修之，牧野一石. (c) 日本薬学会第 141 年
会 (2020 年 3月 27日，京都，口頭発表，27G-am10S) a-ヒドロキシ Weinreb アミドの触媒的
合成法の開発と天然物合成への応用 ◯高橋那央也，大瀬尚希，嶋田修之，牧野一石. (d) 日
本薬学会第 142 年会 (2021 年 3月 28日，広島，口頭発表，28V04-pm15S) a-ヒドロキシ Weinreb
アミドの触媒的合成法の開発と天然物合成への応用 ◯高橋那央也，大瀬尚希，嶋田修之，
牧野一石. (e) 第 63 回天然有機化合物討論会 (2021 年 9月 16日，大阪，ポスター発表，P2-
13) ジボロン酸無水物触媒を用いた Weinreb アミドの触媒的合成法の開発と天然物合成への
応用 ◯高橋那央也，大瀬尚希，嶋田修之，牧野一石. 
7) Narm, S.; Weinreb, S. M. Tetrahedron Lett. 1981, 22, 3815–3818. 
8) Takahashi, N.; Iwasawa, H.; Kinashi, T.; Makino, K.; Shimada, N. Chem. Commun. 2023, 59, 7391–
7394. 
9) (a) 第 38 回有機合成化学セミナー (2022 年 9月 29日，福岡，ポスター発表，P-08) 特異な
アミン基質を用いた触媒的脱水縮合アミド化反応の開発 ◯高橋那央也，大瀬尚希，牧野一
石，嶋田修之. (b) 第 47 回反応と合成の進歩シンポジウム (2022 年 11月 28日，千葉，ポス
ター発表，1P-21) 水溶性アミンを基質とした触媒的脱水縮合アミド化反応の開発 ◯高橋那
央也，牧野一石，嶋田修之. (c) 第 84 回有機合成化学協会関東支部シンポジウム (2023 年 5
月 13日，東京，口頭発表，B04) ジボロン酸無水物触媒によるアンモニア水溶液を用いた第
一級アミドの触媒的合成 ◯高橋那央也，岩澤太陽，牧野一石，嶋田修之. (d) 第 52 回複素環
化学討論会 (2023 年 10 月 14 日，仙台，口頭発表，3O-02) 特異なアミン基質を用いた触媒
的脱水縮合アミド化反応の開発 ◯高橋那央也，大瀬尚希，岩澤太陽，牧野一石，嶋田修之. 
優秀口頭発表賞受賞 (Heterocycles Award) 
10) Liardo, E.; González-Fernández, R.; Ríos-Lombardía, N.; Morís, F.; García-Álvarez, J.; Cadierno, V.; 
Crochet, P.; Rebolledo, F.; González-Sabín, J. ChemCatChem 2018, 10, 4676−4682. 
以上 


特異なアミン基質を用いた触媒的脱水縮合アミド化反応の開発と応用

北里大学博士（看護学）2023(令和5)年

平野, 美樹

ヒラノ, ミキ

HIRANO, Miki

Development of a self-care support education program for caregivers of heart failure patients

佐藤, 大史

サトウ, ヒロフミ

SATO, Hirofumi

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学位論文内容要旨 
 
氏名：佐藤 大史         印 
 
 
題目：カルシウム感知受容体 (CaSR) 作動薬ウパシカルセトの結合様式解析と
薬理学的研究 
 
要旨： 
【背景】 
二次性副甲状腺機能亢進症（SHPT）は血液透析患者における主要な合併症で
あり、慢性腎臓病の進行に伴って生じる。腎機能の低下は、ビタミン D が活性
化されず、カルシウムの吸収が不十分となり、血液中のカルシウム濃度が低下す
る。副甲状腺から分泌される副甲状腺ホルモン（PTH）は、カルシウムとリンの
ホメオスタシスを維持する役割を担っているが、低下した血中カルシウム濃度
を正常化しようとして PTH が過剰に分泌される。さらに、PTH の過剰分泌によ
り骨代謝異常が生じ、骨折、異所性石灰化、心機能障害などのリスクが増大する
1),2)。この副甲状腺からの PTH 分泌は、副甲状腺細胞表面に存在するクラス C の
G タンパク質共役型受容体（GPCR）の 1 つであるカルシウム感知受容体（CaSR）
によって制御されている。CaSR の細胞外 N 末端ドメインには、細胞外カルシウ
ムレベルを感知する Ca2+結合部位とホモ二量体形成に関与するドメイン（Venus 
flytrap domain）が存在し、高 Ca2+状態での CaSR の活性化は PTH の合成・分泌
を抑制する。一方、低 Ca2+状態では CaSR の活性が低下し、PTH の合成・分泌が
促進される 3)。CaSR が PTH 分泌を制御するこのメカニズムは、SHPT において
重要な治療ターゲットである。 
シナカルセト、エボカルセトおよびエテルカルセチドは、SHPT 治療のために
臨床で使用されている主な CaSR 作動薬である（Figure 1)。3 剤とも CaSR を活
性化し、PTH 分泌を抑制することで血中 Ca2+濃度を低下させる。シナカルセト
とエボカルセトは CaSR の 7 回膜貫通領域の Glu837 4)、エテルカルセチドは細
胞外領域の Cys482 に、それぞれ相互作用する 5)。 
本研究で用いるウパシカルセトは、グルタチオンなどの γ-グルタミルペプチ
ドの「コク味」研究で見出された新規 SHPT 治療薬であり、2021 年に日本で承
認された（Figure 1）。ウパシカルセトは、細胞外低 Ca2+濃度域では CaSR を活性
化せず、細胞外 Ca2+濃度依存的に CaSR 活性を増強する強力な正のアロステリ
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ック効果を有する 6)。一方、ウパシカルセトの CaSR に対する結合部位や、in vivo
における副甲状腺過形成、
異所性石灰化および骨構造
に対する影響については明
らかになっていない。そこ
で本研究では、ウパシカル
セトの CaSR 結合部位、並び
に慢性腎不全（CKD）モデル
ラットで生じる異所性石灰
化および骨構造への影響を
明らかにした。 
 
【方法】 
 各種 CaSR とウパシカルセトの結合親和力評価 
結合親和力評価には Scintillation Proximity Assay（SPA) 法を用いた。HEK-293
細胞、CaSR 発現 HEK 細胞および変異 CaSR をコードしたプラスミドでトラン
スフェクションした変異 CaSR-HEK 細胞について大量培養し、超遠心とホモジ
ナイズ処理により膜タンパク質を回収した。WGA PEI Type A PVT SPA シンチレ
ーションビーズ（PerkinElmer 社)をバッファー（50 mM Tris-HCl、1 mM MgCl2、
0.5% CHAPS、pH 7.4）に懸濁し、各膜タンパク質溶液を加え、4℃で 2 時間プレ
インキュベート後、ウパシカルセト、L-トリプトファンまたはシナカルセトのい
ずれかを加えた後、[3H]-ウパシカルセト（終濃度 0.25 又は 0.7kBq)を加え、室温
で 60 分間反応させた。MicroBeta2（PerkinElmer 社)を用いて測定値をカウント
し、特異的結合量を算出した。 
 In silico アプローチによるドッキングポーズの推定 
In silico アプローチには Schrödinger package program（Schrödinger LLC 社）を
使用した。ウパシカルセトと相互作用する可能性のある CaSR のアミノ酸を選択
するために、Protein Preparation Wizard program を使用して CaSR の ECD 領域の
結晶構造（PDB 5K5S、5FBH、5FBK）7),8)をもとに、側鎖相互作用に対する相互
作用フィンガープリントを出力ドッキングポーズに使用することで、相互作用
するアミノ酸の頻度を決定した。さらに、ウパシカルセトと CaSR の結合モデル
を検討するために、側鎖相互作用に対する相互作用フィンガープリントを用い
て、変異型 CaSR タンパク質に対する相対的結合能力と一致するドッキングポー
ズをフィルタリングした。選択したドッキングポーズの分子動力学シミュレー
ションは、Schrödinger suite の Desmond プログラムを用いて行った。各タンパク
質-リガンド複合体は、水和モデルを作成するために緩衝距離 10Å の立方体ボッ
Figure 1. 主な SHPT 治療薬の化学構造 
 
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クスに配置し、0.15M の NaCl 濃度でイオン化した。それぞれの系の全電荷は、
必要に応じて Na+イオンまたは Cl-イオンを加えて中和した。各シミュレーショ
ンは合計 120 ナノ秒実行し、シミュレーションは各系について 3 回繰り返した。 
 CKD ラットモデルに対するウパシカルセトの薬効評価 
雄性 Sprague-Dawley ラットまたは Wistar ラットを 1 週間の馴化後、0.75％の
アデニンを含む CE-2 固形飼料を自由摂取させた（正常群に対しては通常の CE-
2 固形飼料を与えた）。曝露 3-4 週間後、ラットの血液生化学パラメータ（血清
iPTH、Cre、UN、Ca、P）をスクリーニングし、目的の病態を示したラットに対
して 1mL/kg のウパシカルセト（0.2mg/kg、1mg/kg）または生理食塩水のいずれ
かを i.v.投与（週 3 回）または s.c.投与（1 日 1 回）した。治療開始 21 日後また
は 28 日後、ラットをイソフルラン麻酔下で腹腔灌流により安楽死させ、その後
組織（胸部大動脈、右大腿骨）を採取した。 
血管石灰化評価は、近位胸部大動脈を切り取り、ホルマリン固定した近位胸部
大動脈を 3 分割し、包埋してパラフィンでブロックした。ブロックからの薄切
断面をスライスし、von Kossa 染色キット（Polysciences 社）を用いて染色し、BZ-
X710 顕微鏡（Keyence 社)と BZ-H3A Analyzer ソフトウェア（Keyence 社)を用い
て画像化した。 
骨形態評価は、大腿骨の皮質間隙率を測定した。右大腿骨をエタノールに浸
し、2～8℃で保存し、マイクロフォーカス X 線装置（Scan Xmate-L090; Comscan 
Techno 社)を用いて骨を撮影した。これらの画像を専用ソフトウェア（TRI/3D-
BON;ラトックシステムエンジニアリング社）を用いて解析した。 
 
【結果および考察】 
ウパシカルセトは、アミノ酸と同様に CaSR のポジティブアロステリックモジ
ュレーターであり 6)、化学構造は芳香族アミノ酸と類似していることから、ウパ
シカルセトの CaSR 結合部位はアミノ酸と同じであるという仮説を立てた。この
仮説を確認するため、L-トリプトファンがウパシカルセトの CaSR への結合能に
及ぼす影響について SPA 法を用いて評価した。まず、[3H]-ウパシカルセトと
CaSR の結合がウパシカルセト濃度依存的に抑制されたことから、系の妥当性を
確認した(Figure 2A)。次に、ウパシカルセトと CaSR の特異的結合は、L-トリプ
トファンの添加によって濃度依存的に減少した(Figure 2B, IC50:4.3 mM)。一方、
シナカルセトは 100 μM までの濃度では、ウパカルセトの CaSR への結合に影響
を与えなかった(Figure 2C)。この結果から、ウパシカルセトは CaSR のアミノ酸
結合部位に作用することが強く示唆された。 
 
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Figure 2. [3H]-ウパシカルセト(0.25kBq)と CaSR との結合に対する各化合物の影響 
A) ウパシカルセト B) L-トリプトファン C) シナカルセト、■又は●:CaSR 発現 HEK293 細胞
膜、□又は〇:HEK293 細胞膜。エラーバーは n=3 の平均値±S.D.を示す。 
 
続いて、CaSR に対するウパシカルセトの詳細な結合様式を明らかにする検
証を行った。すなわち、CaSR のアミノ酸結合部位を構成する各アミノ酸残基を
アラニン置換し、ウパシカルセトとの結合能への影響を評価した。 
まず、ウパシカルセトと既報の CaSR の ECD 領域の結晶構造 7),8)との In silico
ドッキングモデルによりアラニン置換する 8 つのアミノ酸（Arg66、Trp70、Ser147、
Ser170、Ser272、Glu297、Ser302、Ile416）を選択した。さらに、エテルカルセチ
ドの結合部位である Cys482、およびシナカルセトの結合部位である Glu837 につ
いても評価した。各アラニン変異型 CaSR に対するウパシカルセトの相対的結合
能を評価した結果、C482Y、E837A および S272A 以外の全ての変異型で、結合
能は低下した(Figure 3)。 
 
Figure 3. 野生型 CaSR と 
[3H]-ウパシカルセト(0.7 
kBq) 結 合 能 に 対 す る
CaSR の各変異の影響 
エラーバーは n=3 の平均値＋
S.D.を示す。統計解析は、野生
型に対し各変異型の相対結
合能について Dunnett 検定を
用いた（*P < 0.05, ***P < 0.001） 
 
 以上の結果から、ウパシカルセトと相互作用するCaSRアミノ酸残基を設定し、
分子動力学シミュレーションを用いて実験結果と矛盾しない安定的な結合様式
を見出した(Figure 4 A,B)。 
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Figure 4. ウパシカルセトの CaSR に対する結合様式 
A：CaSR とウパシカルセトの 3D 結合様式。黄色破線は水素結合を示す 
B：ウパシカルセトと CaSR アミノ酸残基との相互作用。赤：負電荷、青：正電荷、緑：疎水的 
 
ウパシカルセトと CaSR との結合では、これまでの CaSR 作動薬と異なり、
CaSR の Arg66、Leu322 および Phe320 がウパシカルセトのスルホ基と相互作用
することを確認した。ウパシカルセトの構造活性相関研究において、スルホ基を
除去した場合、活性が大幅に低下したことからも、ウパシカルセトのスルホ基と
CaSR 残基 (Arg66、Leu322 および Phe329) との相互作用が、CaSR 作動活性発現
に重要であることが示唆された(Figure 4B)。 
次に、血清 iPTH 値が正常群に比べて有意に上昇し、SHPT の病態が確立され
た CKD モデルラットを用いて、ウパシカルセトの異所性石灰化および骨構造に
対する影響を評価した。ウパシカルセトは、投与開始後 7 日目から CKD 対照群
と比較して血清 iPTH 値を有意に抑制した。また、血管石灰化に対する効果を確
認するため、胸部大動脈の von Kossa 染色を行った(Figure 5A)。Von Kossa 陽性
面積比は、CKD 対照群で正常群より有意に高かった。0.2mg/kg および 1mg/kg の
ウパシカルセト投与群では、CKD 対照群よりも有意に低く（それぞれ 41％およ
び 99％の減少）、用量依存的であった(Figure 5B)。 
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Figure 5. CKD モデルラットの血管石灰化に対するウパシカルセトの効果 
A：胸部大動脈の von Kossa 染色像、 スケールバー:300 μm。B：血管断面積に対する Von Kossa
陽性面積比。エラーバーは平均値±S.E.M.を示す（n=11~14）。統計解析は、病態コントロールに
対し Dunnet 検定を行った（** P < 0.01, *** P < 0.001） 
 
骨形態に対する効果は、右脛骨の皮質間隙率を評価した。皮質間隙率は CKD
対照群で正常群より有意に高く、1mg/kg のウパシカルセト投与群では空隙が優
位に抑制されていた(Figure 6 A,B)。 
 
 
 
Figure 6. CKD モデルラットの皮質骨空隙に対するウパシカルセトの効果 
A：各ラット群における右大腿骨断面の代表的な X 線画像、スケールバー:1 目盛あたり 1 mm。
B：皮質骨の空隙率。エラーバーは平均値±S.E.M.を示す。統計解析は、病態コントロールに対
し Dunnet 検定を行った（** P < 0.01, *** P < 0.001） 
 
最近、CaSR の SNPs が血液透析患者の病態生理や治療効果に影響を及ぼすこ
とが報告されている 9)。したがって、CaSR への結合様式が既存薬とは異なるウ
パシカルセトは、従来の薬剤に反応しない患者にも効果を示す可能性がある。ま
た、今回変異型を評価した CaSR アミノ酸残基のうち Arg66 と Trp70 は、CaSR
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の陰イオン結合部位として報告されている 10)。陰イオンは CaSR の不活性化状
態を安定化させるため、高リン血症患者では CaSR の機能が低下し、SHPT 治療
薬の薬効が低下することが示唆されている。高リン血症と関連する SHPT の重
要な病態の一つは異所性石灰化であり、これは血液中にカルシウムイオンとリ
ン酸イオンの不溶性塩が形成されることによって起こる。したがって、ウパシカ
ルセトと Arg66 や Trp70 のような陰イオン結合残基との相互作用は、CaSR の不
活性化状態を解除し、活性化状態への移行を促進する作用も期待できる。 
 
【結論】 
 本研究では、ウパシカルセトの CaSR への結合親和能評価や in silico 解析によ
る CaSR のアミノ酸結合部位は、シナカルセトやエテルカルセチドなどの従来の
薬剤とは大きく異なることを明らかにした。さらに、CKD モデルで SHPT 病態
への骨代謝異常リスクの低減効果を明らかにした。本研究成果は、今後の CKD
治療に大きく貢献するものと期待される。 
 
参考文献： 
1) Cunningham J et.al., Clin J Am Soc Nephrol 6: 913–921. (2011) 
2) Go AS et.al., N Engl J Med 13: 1296–305. (2004) 
3) Lau WL et.al., Clin J Am Soc Nephrol 6: 952–961. (2018) 
4) Miyazaki H et.al., Bioorg Med Chem Lett 28: 2055–2060. (2018) 
5) Alexander ST et.al., Mol Pharmacol 88: 853–865. (2015) 
6) Goto M. et.al., Eur. J. Pharmacol.956:175936. (2023) 
7) Geng Y et.al., Elife 5: e13662. (2016) 
8) Zhang C et al., Sci Adv 2: e1600241. (2016) 
9) Grzegorzewska AE et.al., Sci Rep 6: 35188. (2016) 
10) Centeno PP et.al., Nat Commun 10: 4693. (2019) 
以上 


カルシウム感知受容体（CaSR）作動薬ウパシカルセトの結合様式解析と薬理学的研究

北里大学博士（薬学）2024(令和6)年

吉田, 一平

ヨシダ, イッペイ

YOSHIDA, Ippei

1/7 
 
学位論文内容要旨 
 
氏名： 吉田 一平  印 
 
 
題目： 
薬剤耐性病原体に対する新規治療戦略に関する研究 
 
要旨： 
背景 
感染症による死者数は、細菌やウイルスによる下気道感染症を中心に、世界
で年間約 1400 万人と推計されている。様々な感染症に対する治療薬の開発が継
続的に行われてきたが、細菌やウイルスなど病原体の分類によらずあらゆる治
療薬に対して薬剤耐性病原体の出現が認められており、その拡大が人類にとっ
て大きな問題となっている。特に緊急性が高く脅威となる薬剤耐性菌について
は、世界保健機関（WHO）および米国疾病対策予防センター（CDC）からそ
れぞれ 2017 年および 2019 年にリストが発表され、新規抗菌薬の必要性が訴え
られた。さらに、複数の抗菌薬に対して耐性を示す多剤耐性菌では有効な抗菌
薬が限られており、いずれの抗菌薬も無効な薬剤耐性菌による感染症例も認め
られている。また、治療薬の種類が少ないウイルスなどの感染症では、耐性病
原体の出現が治療手段の枯渇につながりやすく致命的となる恐れもある。この
ような状況から、新規治療薬の開発により、薬剤耐性病原体に対して有効な治
療手段を増やすことで、薬剤耐性病原体が拡散する前に駆逐する治療戦略が重
要であると考えられる。 
本研究では、薬剤耐性病原体に対する新規治療戦略について、世界中で感染
拡大が危惧されているカルバペネム耐性腸内細菌目細菌（CRE）および小児を
中心に下気道感染症が問題となるRSウイルス（RSV）という、性質が異なる二
つの病原体に対して新規治療薬候補の化合物を用いて検討を行った。 
 
①  新規 LpxC 阻害化合物 TP0586532 による 
カルバペネム耐性腸内細菌目細菌に対するメロペネムの抗菌活性増強作用 
カルバペネム系抗菌薬は他の抗菌薬と比べ抗菌スペクトラムが広く、切り札
の位置付けとして使用されてきた。CREは、我が国では 1991年に初めて分離さ
れており、WHO および CDC の薬剤耐性菌リストにおいて最も緊急性が高い薬
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剤耐性菌に指定されている。CRE 感染症は世界的に増加しており、有効な治療
薬が限られ結果的に難治例、重症例が多くなるため、新規治療方法が必要とさ
れている。 
TP0586532 は、グラム陰性菌の外膜構成成分であるリポ多糖（LPS）の合成
酵素 LpxC を阻害する新規の非ヒドロキサム酸化合物として見出された（Figure 
1）。 
 
FIG 1 Chemical structure of TP0586532 (1) 
 
TP0586532 は、菌体の外膜透過性を亢進させることにより、併用した抗菌薬の
抗菌活性を増強させる可能性が考えられる。その仮説を検証するため、メロペ
ネム（MEM）、アミカシン、セフェピム、ピペラシリンおよびチゲサイクリン
といった様々な系統の抗菌薬に TP0586532 を併用して、カルバペネム感性の
Klebsiella pneumoniae および Escherichia coli に対する抗菌活性を評価した。その
結果、TP0586532 は、いずれの抗菌薬に対しても相加または相乗効果を示し、
各抗菌薬の抗菌活性を 2 から 32 倍に向上させることが明らかになった。次に、
CRE に対する抗菌活性が低い MEM に TP0586532 を併用することによる抗菌活
性の変化を β-ラクタマーゼ産生カルバペネム耐性 K. pneumoniaeおよび E. coli 計
21 株（blaKPC+ 13 株、blaNDM-1+ 5 株、blaVIM+ 2 株および blaIMP+ 1株）に対して
様々な濃度を組み合わせることにより評価した。その結果、9 株に対して相乗
効果、12 株に対して相加効果が認められ、TP0586532 が β-ラクタマーゼの種類
によらず CRE に対する MEM の抗菌活性を向上させることが示された（Table 
1）。さらに、MEM に TP0586532 を併用した時の殺菌作用を経時的に検討した
結果、評価した CRE 12 株中 10 株に対して相乗効果が認められ、単独と比べて
強い殺菌作用が認められた。代表例として、E. coli ATCC BAA-2469 の結果を
Figure 2 に示す。  
3/7 
 
TABLE 1 FICIs of meropenem used in combination with TP0586532 against 
carbapenem-resistant Enterobacteriaceaea (1) 
 
a: MEM, meropenem; MIC, minimum inhibitory concentration; FICI, fractional inhibitory 
concentration index. 
b: FICI interpretation: ≤0.5, synergistic; >0.5 to ≤1, additive. 
c: Two pairs of MICs against K. pneumoniae ATCC BAA-2344 and K. pneumoniae NCTC 13440 
had the same FICI, respectively. 
 
Strain
Resistance
gene
MIC (μg/mL)
FICI OutcomebMEM TP0586532
Alone Combined Alone Combined
K. pneumoniae
ATCC BAA-1705 KPC type 64 32 2 1 1.00 Additive
ATCC BAA-1898 KPC-2 64 32 2 0.5 0.750 Additive
ATCC BAA-1899 KPC-2 128 0.25 4 2 0.502 Additive
ATCC BAA-1900 KPC-3 32 4 4 1 0.375 Synergistic
ATCC BAA-1902 KPC-3 64 2 2 1 0.531 Additive
ATCC BAA-1903 KPC-2 32 8 4 1 0.500 Synergistic
ATCC BAA-1904 KPC-3 16 0.25 2 1 0.516 Additive
ATCC BAA-1905 KPC-2 32 8 2 0.5 0.500 Synergistic
ATCC BAA-2078 KPC type 32 8 2 0.5 0.500 Synergistic
ATCC BAA-2342 KPC type 32 8 2 0.5 0.500 Synergistic
ATCC BAA-2343 KPC type 32 8 1 0.25 0.500 Synergistic
ATCC BAA-2344 KPC type 64 32/16c 2 0.5/1c 0.750 Additive
ATCC BAA-2470 NDM-1 64 16 2 0.5 0.500 Synergistic
ATCC BAA-2578 NDM-1 64 16 2 0.5 0.500 Synergistic
NCTC 13439 VIM-1 32 1 4 2 0.531 Additive
NCTC 13440 VIM-1 64 16/8c 2 0.25/0.5c 0.375 Synergistic
E. coli
ATCC BAA-2340 KPC type 16 8 2 1 1.00 Additive
ATCC BAA-2452 NDM-1 64 0.5 1 0.5 0.508 Additive
ATCC BAA-2469 NDM-1 64 2 2 1 0.531 Additive
ATCC BAA-2471 NDM-1 128 64 1 0.5 1.00 Additive
NCTC 13476 IMP type 16 8 1 0.5 1.00 Additive
4/7 
 
 
FIG 2 Time-kill curves of meropenem used in combination with TP0586532 
against carbapenem-resistant E. coli ATCC BAA-2469 (1) 
The bacteria were treated with meropenem (MEM, 8 mg/mL) alone or in combination with 
TP0586532 at 0.5 or 1 minimum inhibitory concentration (MIC). 
 
TP0586532 による MEM の抗菌活性向上が菌体膜透過性の亢進によるもので
あるかについて検証するため、臭化エチジウム（EtBr）を用いて膜透過性評価
を行った。その結果、TP0586532は EtBrの CREへの流入を濃度依存的に増加さ
せたことから、TP0586532 の膜透過性亢進作用により MEM の細胞内移行が促
進されたことが示唆された。 
以上より、TP0586532 は LPS 合成を抑制することで、菌体膜透過性を亢進さ
せて CRE に対する MEM の抗菌活性を増強させることが明らかになった。従っ
て、TP0586532 と MEM との併用療法は、それぞれの単独療法よりも速やかで
強力な殺菌作用を発揮することで CRE の拡散防止にも有用な治療手段となる可
能性が考えられた。 
 
② 新規 F タンパク質阻害化合物 TP0591816 の F タンパク質変異 
耐性 RS ウイルスに対する薬理作用 
RSV は年齢を問わず呼吸器感染を引き起こすが、乳幼児への感染時には細気
管支炎や肺炎などに重症化して入院や呼吸管理が必要となる場合があり、乳幼
児に対する死亡リスクはインフルエンザウイルスより高いことが知られている。
特に、早産児や心肺系の基礎疾患または免疫不全がある場合には、重症化リス
クが上昇することも報告されている。RSV 感染に対する唯一の治療薬はリバビ
リンであり、安全性や有効性の面で課題がある。そこで新規 RSV 治療薬として、
F タンパク質阻害化合物である ziresovir の開発が進んでいるが、F タンパク質の
heptad-repeat B 領域に D486N などの変異を有する耐性株や cysteine-rich 領域に
T400I の変異を有する耐性株が出現することが知られている。このことから、
0
2
4
6
8
10
0 6 12 18 24
Time (h)
Limit of Detection
Control
MEM 8 μg/mL
TP0586532 0.5 MIC
TP0586532 MIC
MEM + TP0586532 0.5 MIC
MEM + TP0586532 MIC
V
ia
b
le
 C
e
ll 
C
ou
n
ts
 (
lo
g 1
0
C
F
U
/m
L)
5/7 
 
ziresovir の上市後にこれらの耐性株の拡散を防ぐため、ziresovir 耐性株に有効な
治療薬を開発する必要がある。 
私たちは、これまでに行ってきた抗 RSV 化合物の研究の中で新規環状化合物
TP0591816 を見出した（Figure 3）。TP0591816 の A 型および B 型 RSV に対する
抗ウイルス活性を HEp-2 細胞への感染実験により評価した結果、いずれの血清
型に対しても良好な抗ウイルス活性が認められた。さらに、TP0591816 は、
ziresovir に耐性を示す F タンパク質の D486N または T400I 変異株に対しても抗
ウイルス活性を示すことが明らかとなった（Table 2）。 
 
FIG 3 Chemical structure of TP0591816 (2) 
 
TABLE 2 Antiviral activities against wild-type and F protein mutant RSV and 
cytotoxicity of TP0591816 and known RSV inhibitors (2) 
 
a: All 50% effective concentration (EC50) and 50% cytotoxic concentration (CC50) values are 
represented as the geometric means of the results of at least four independent experiments. 
b: WT, wild type. 
 
RSV のライフサイクルに対する TP0591816 の阻害作用機序を解析するため、
TP0591816 を添加する時間と抗ウイルス活性の関係について評価した。その結
果、HEp-2 細胞に対して TP0591816 をウイルスと同時に添加した際には良好な
抗ウイルス活性が認められた一方、ウイルス添加に遅れて TP0591816 を添加す
ることで抗ウイルス活性が減弱したことから、TP0591816 がウイルスの細胞へ
の侵入過程を阻害していることが示唆された。次に、侵入阻害の詳細な機序を
調べるため、4℃（接着）または 37℃（膜融合）での阻害活性の評価を行った。
Compound
EC50 (nM)a
CC50
(nM)aA2 (subgroup A)
18537
(subgroup B)
WTb D486N F488L T400I WTb
TP0591816 0.255 0.549 5.09 2.97 0.0824 >30,000
BMS-433771 50.0 >1,000 >1,000 >1,000 68.4 >30,000
VP-14637 0.467 >1,000 >1,000 >1,000 0.458 >30,000
Ribavirin 11,700 12,700 13,700 9,710 8,450 159,000
6/7 
 
その結果、TP0591816を4℃で添加した際には抗ウイルス活性が認められなかっ
た一方、37℃で添加した際には良好な抗ウイルス活性が認められたことから、
TP0591816 がウイルス侵入時の膜融合を阻害していることが示唆された。さら
に、ウイルス侵入後に TP0591816 を添加しても感染細胞間の膜融合の阻害が観
察されたことから、TP0591816 は F タンパク質の膜融合機能を阻害しているも
のと考えられた。TP0591816 の作用点を解析する目的で、TP0591816 存在下で
RSV の継代培養を行って選択された耐性株の変異箇所を解析した。その結果、
選択された耐性株は F タンパク質に変異を有していたことから、TP0591816 の
標的分子が F タンパク質であることが明らかになった。さらに、選択された耐
性株で認められた変異は L141F であり、ziresovir 耐性株で認められていた
cysteine-rich 領域や heptad-repeat B 領域には変異が認められなかった。従って、
TP0591816 の F タンパク質における作用点は ziresovir とは異なる可能性が示唆
された。 
動物モデルに対する薬効評価として RSV感染マウスに対し TP0591816を投与
した結果、用量依存的な肺内ウイルス力価の低下が認められた（Figure 4）。 
 
  
FIG 4 Efficacy of TP0591816 in a mouse model (2) 
TP0591816 was administered subcutaneously to mice at doses of 1, 10, and 100 mg/kg at 1 h 
before virus inoculation. The mice were then inoculated intranasally with 1 × 107 PFU of RSV A2, 
and the lung virus titers were determined at 4 dpi. Data are represented as the means ± SEM 
(n = 8 mice per group). **, P < 0.01 versus vehicle (Steel’s test). 
 
さらに、抗ウイルス活性、肝代謝安定性およびサルにおける PK データなどか
ら生理学的薬物動態モデリングを行い、TP0591816 の臨床有効用量をシミュレ
ーションした。その結果、TP0591816 は、D486N 変異株および T400I 変異株に
対しても各々55.5 および 705 mg の用量で 1 日 2 回投与することにより治療効果
2
3
4
5
6
Vehicle 1 mg/kg 10 mg/kg 100 mg/kg
L
un
g 
vi
ru
s 
tit
er
(l
og
10
P
F
U
/g
 o
f l
un
g
) ** **
**
TP0591816
7/7 
 
を示すと推定された。 
以上より、TP0591816 は、RSV の F タンパク質を標的とするにもかかわらず
ziresovir を始めとする F タンパク質阻害化合物に対して耐性を示す RSV 株に対
しても有効性を示すことが明らかになった。従って、TP0591816 は、将来、先
行して開発された F タンパク質阻害薬が治療に使われるようになった場合に出
現する可能性のある RSV 耐性株に対しても有効性を示すことで、F タンパク質
阻害薬としての治療手段の確保につながると考えられた。 
 
総括 
 以上の研究結果から、新規 LpxC阻害化合物 TP0586532と MEMの併用療法は
CRE を速やかで強力に殺菌する新規の治療手段となり得ること、また
TP0591816 は ziresovir 耐性 RSV 株に対して有効性を示す F タンパク質阻害薬と
して新規の治療選択肢を提供することが期待できる。このように、本研究では
性質が異なる二つの薬剤耐性病原体が拡散する前に駆逐する治療戦略を提案す
る。 
 
(1) Yoshida I et al. 2022. TP0586532, a Novel Non-Hydroxamate LpxC Inhibitor: 
Potentiating Effect on In Vitro Activity of Meropenem against Carbapenem-Resistant 
Enterobacteriaceae. Microbiol Spectr. 10:e0082822. 
(2) Yoshida I et al. 2020. Pharmacological Characterization of TP0591816, a Novel 
Macrocyclic Respiratory Syncytial Virus Fusion Inhibitor with Antiviral Activity 
against F Protein Mutants. Antimicrob Agents Chemother. 65:e01407-20. 
以上 


薬剤耐性病原体に対する新規治療戦略に関する研究

北里大学博士（薬科学）2024(令和6)年

小林, 慎平

コバヤシ, シンペイ

KOBAYASHI, Shimpei

学位論文内容要旨 
 
北里大学 薬学部  
氏名：小林 慎平  
 
【題目】 
三次元分布関数を用いたタンパク質周辺の水分子のサンプリング手法の開発 
 
【論文目録】 
Kobayashi S., Kiyota Y., Takeda-Shitaka M., Bulletin of the Chemical Society of Japan, 97(6), 
uoae063 (2024). 
 
 
【背景・目的】 
タンパク質が他のタンパク質やリガンドと相互作用する上で、水分子の存在はきわめて
重要である。タンパク質周辺の水分子の位置を知ることは、タンパク質の機能や相互作用の
理解、創薬研究などにつながる。 
タンパク質周辺の水分子の位置を予測する手法には、様々なアプローチがある。その 1つ
が、3D-RISM 理論に代表される、水の三次元分布関数を求める方法である。この方法は、
標的タンパク質の周辺の水分子の存在しやすさを三次元分布関数、即ち水の確率密度とし
て計算することができる。近年では AI を用いて三次元分布関数を計算する手法も開発され
ており、このアプローチは今後さらに興味深いものとなる可能性がある。 
3D-RISM計算等で得られる三次元分布関数は、コンピュータ上の三次元グリッド空間上
において、標的タンパク質を格納したボックスを計算領域として計算される。水の確率密度
は計算領域内の全てのグリッド点について計算される。三次元分布関数が計算されたなら
ば、それを基に、明示的な水分子への変換、即ち水分子の位置予測を行うことができる。三
次元分布関数を基に、明示的な水分子の位置を予測する手法は既にいくつか開発されてお
り、代表的な手法としては確率密度が最大の位置への水分子の配置を繰り返す手法である
「Placevent」が挙げられる。本研究においては、三次元分布関数を基に明示的な水分子の
位置を予測した１つの水和構造を、「サンプル」と定義した。 
本研究では、重み付きモンテカルロ法を水分子のサンプリングに適用した生物分子設計
学教室の先行研究を応用し、水の酸素原子の三次元分布関数を基に、水の位置を予測する手
法である「DroPred」を開発した。本研究では、「水の位置」として、水の酸素原子の座標
を予測した。DroPredは、重み付きモンテカルロ法をベースに、三次元分布関数から得られ
る確率密度を調整した重みを使用し、水の確率密度が高いグリッド点を優先しながら水分
子を配置するサンプリング手法であり、1つの三次元分布関数から複数のサンプルを得るこ
とができる。 
 
【方法】 
三次元分布関数に基づく調整重みの導入 
重み付きモンテカルロ法とは、モンテカルロ・サンプリングの手法の一つで、確率密度関
数に従って重み付けを行い、重みの大きい事象を優先的に発生させる方法である。水分子の
サンプリングについて考えた場合、一般的なモンテカルロ・サンプリングであれば、発生さ
せた乱数と、計算に使用するボックスのグリッド点を対応させることで、水分子のサンプリ
ングを行うことができる。これに対し重み付きモンテカルロ法では、各グリッド点を、三次
元分布関数から得られる確率密度に基づいて重み付けすることで、水分子を確率密度の高
いグリッド点に優先的に配置することが可能となる。 
式(1)に示す累積確率密度関数を定義することにより、0 から 1 の値域で発生させた乱数
を三次元座標と対応させることができる。 
𝑃(𝑥′,𝑦′, 𝑧′) =
1
𝑁
∫ ∫ ∫ 𝜌O𝑔O(𝐫)|𝑔o(𝐫)≥𝑐
d𝑥d𝑦d𝑧
𝑧′
−∞
𝑦′
−∞
𝑥′
−∞
(1) 
ここで、𝜌Oは水の酸素原子の数密度であり、𝑔O(𝐫)は分布関数から得られる確率密度の値、
𝑐は確率密度のクライテリアである。本研究では、確率密度のクライテリアを𝑔o(𝐫) ≥ 2とし
た。また、N は累積確率密度関数 P の値域を 0 から 1 にするための規格化定数である。本
研究では、確率密度の大きさによる予測水の配置されやすさを調整するため、指数 w を導
入した。これにより、確率密度の高い場所への予測水の配置確率を高め、確率密度の低い場
所への予測水の配置確率を抑えることができる。(式(2)) 本論文においては、重みを調整す
るための指数 w を「調整指数」、調整された重みを「調整重み」と定義した。 
𝑃(𝑥′, 𝑦′, 𝑧′) =
1
𝑁𝑤
∫ ∫ ∫ 𝜌O (𝑔O(𝐫)|𝑔o(𝐫)≥𝑐
)
𝑤
d𝑥d𝑦d𝑧
𝑧′
−∞
𝑦′
−∞
𝑥′
−∞
(2) 
 
3D-RISM計算における三次元分布関数は、計算領域内の各グリッド点(𝑥𝑖 , 𝑦𝑗 , 𝑧𝑘)に確率密
度𝑔o(𝑥𝑖 , 𝑦𝑗 , 𝑧𝑘)として与えられる。本研究では、3D-RISM 計算によって与えられた確率密度
を基に、確率密度𝐺o(𝑥𝑖 , 𝑦𝑗 , 𝑧𝑘)を再定義した。 
𝐺o(𝑥𝑖 , 𝑦𝑗 , 𝑧𝑘) =
1
8
∑ ∑ ∑(𝑔o(𝑥𝑖+𝑙 , 𝑦𝑗+𝑚, 𝑧𝑘+𝑛)|𝑔o(𝑥𝑖+𝑙,𝑦𝑗+𝑚,𝑧𝑘+𝑛)≥𝑐)
𝑤
1
𝑛=0
1
𝑚=0
1
𝑙=0
(3) 
これにより、式(2)は以下のように表される。 
𝑃(𝑋′, 𝑌′, 𝑍′) =
1
𝑁𝑤
∑∑∑ 𝜌
O
𝑉𝐺o (𝑥𝑖, 𝑦𝑗, 𝑧𝑘)
𝑍′
𝑘=0
𝑌′
𝑗=0
𝑋′
𝑖=0
(4) 
式(4)に基づいて水分子のサンプリングを行った。 
  
DroPred における水分子の配置アルゴリズム 
DroPred における水分子の位置予測アルゴリズムについて説明する(図 1)。 
はじめに乱数を発生させ、式(4)に従ってグリッド点の座標へと変換する。次に、そのグ
リッド点と、既に配置した全ての予測水との距離を計算し、周囲 2.0Å以内に水分子が存在
しない場合、水分子を挿入する。この操作を、予測水が十分に配置されるまで繰り返す。 
 
 
図 1. DroPred による水分子の配置アルゴリズム 
 
 
データセットの準備 
精度検証のため、タンパク質-タンパク質複合体のテストセット(151 ターゲット)を準備
した。ターゲットの PDB ファイルに含まれる実験構造中の水分子(結晶水)のうち、タンパ
ク質-タンパク質界面に存在し、B-factorが 40 未満であるものを評価の対象とした。 
 
 
3D-RISM計算 
DroPred および Placevent の入力となる三次元分布関数は、3D-RISM 計算によって取得
した。3D-RISM計算は、AmberTools の「sander」プログラムを使用して行った。3D-RISM
計算の計算コストは計算領域の体積に依存するため、ボックスの大きさが最適となるよう
にターゲットの向きと位置を調整した。三次元グリッド空間上のグリッド点同士の間隔は
0.25Åとした。 
 
DroPred 及び Placevent の実行 
 三次元分布関数を入力に DroPredを実行し、タンパク質界面の水分子の位置を予測した。
調整指数には 0 から 10の整数値を使用した (DP_w0～DP_w10) 。 ここでDP_w0 は、一
般的なモンテカルロ法によるランダムな配置、DP_w1 は三次元分布関数をそのまま重みと
して使用した重み付きモンテカルロ法によるサンプリングである。DroPred は任意の数の
サンプルを出力することができるが、本研究では各ターゲットについてそれぞれ 1000 サン
プルを出力した。性能比較のため、同一の三次元分布関数を使用し、Placevent による予測
も行った。Placevent からは、各ターゲットに対して 1サンプルのみが出力される。 
 
 
【結果】 
評価基準 
DroPredの性能は、タンパク質複合体界面に存在する結晶水の再現性によって評価した。
本研究においては、結晶水の再現は、その結晶水が存在する位置の周囲 1Å以内に予測した
水分子（予測水）を配置できた場合と定義した。各標的タンパク質は、複数の結晶水を持つ
ため、サンプルの精度を、予測水が再現した結晶水の割合 (coverage)で評価した。 
 Coverage による比較の場合、予測する水の数は重要な要素である。基本的に、予測する
水分子の数が多くなるほど、coverage は上昇する。DroPred によって配置される水分子の
数はサンプルごとに異なるが、性能評価においては、配置された順に Placevent と同数まで
の予測水を使用した。 
 
精度評価 
 
図 2. DroPred による水分子の予測精度 
各標的タンパク質について、出力した 1000 個のサンプルの coverage を計算し、中央値を算出し
た。調整指数ごとの coverage の中央値の平均値(Average coverage)を示す。Placevent においては、
標的タンパク質につき１個のサンプルが出力されるため、それらの Average coverage となる。 
 
重み付きモンテカルロ法、及び調整指数による重みの調整が、水分子の予測精度に与える
影響について検証した。 
一般的なモンテカルロ法による予測(DP_w0)と比較して、重み付きモンテカルロ法を用
いた予測(DP_w1)では、Average coverage が大きく上昇したが、Placevent と比較すると低
く、結晶水を精度よく再現出来ているとは言えない。一方、調整指数によって重みを調整し
たDP_w2以降ではcoverageが更に上昇し、DP_w6でAverage coverage＝47.4％と、coverage
が最大となった。この結果は、調整指数による重みの調整が、予測精度を更に上昇させるこ
とを示唆しており、DP_w6 では Placevent（coverage=43.5%）と同等以上の精度を期待で
きる。一方で、DP_w8 以降では coverageが低下したことから、過剰に大きな調整指数は精
度を悪化させる可能性がある。 
 
分布関数の再現度の評価 
 次に、調整重みを使用した重み付きモンテカルロ法による複数サンプルの生成が、基とな
った三次元分布関数を表現しているかを検証した。 
評価対象とした全ての結晶水(5448 個)が存在する地点で、結晶水が存在する位置の確率
密度と、1000 個のサンプル中の予測水の出現率の相関を検証した(図 3) 。予測水の出現率
は、1000 個のサンプルの中で、その結晶水が再現されたサンプルの割合として定義した。 
 図 3 に示すように、一般的なモンテカルロ法による配置(DP_w0)では、結晶水が存在す
る位置の確率密度と、その結晶水の出現率に相関は見られなかった。しかし、重み付きモン
テカルロ法による予測(DP_w1)から相関が現れはじめ、調整指数によって重みを調整した
場合(DP_w2～DP_w10)には強い相関が見られた。DP_w3 のとき、相関係数が最大となっ
た(R＝0.778)。この結果は、重み付きモンテカルロ法によって配置された予測水が、基とな
った分布関数をよく表現していることを示唆していると考えられる。 
  
 
 
図 3. 結晶水が存在する位置での確率密度と出現率の相関 
 
  
DroPred による予測例 
 
図 4. DroPred における水分子の予測が良好な結果を示した例 (PDB ID: 2XGY) 
(a)全体構造 赤球：結晶水 四角の枠：相互作用界面 
(b) DroPred および placevent の計算で共通して用いた三次元分布関数(紫の透過面) 
(c) DroPred（DP_w6）の中で最も coverage の高かったサンプル 
赤球：結晶水 オレンジ球：DroPred の予測水 
(d) Placevent の予測によって得られたサンプル 
赤玉：結晶水 白球：Placevent の予測水 
 
DroPred の予測結果が良好であった例を示す(図 4)。 
このターゲット(PDB ID: 2XGY)には、結晶水が 15個存在するが、DroPred（DP_w6）
によって生成された1000個のサンプルのうち最も coverageの高かったサンプルでは、
coverage は 93.3%であった(図 4(c))。Placevent によって予測されたサンプルの
coverage は 60.0%であった(図 4(d))。 
 
【考察】 
 本研究では、重み付きモンテカルロ法をベースにして、水の三次元分布関数から得られる
確率密度を調整した重みを使用し、確率密度の高い場所を優先しながら水分子のサンプリ
ングを行う手法を開発した。予測精度の検証の結果、調整重みの導入が有効であることが確
認できた。また、生成された複数のサンプルは、基となった分布関数をよく表現しているこ
と、サンプルの中には、Placevent の精度を大きく上回るサンプルも含まれている可能性が
あることも示唆された。本研究の成果は、水分子を含んだタンパク質の機能や相互作用の解
析などに貢献できるものであると期待される。 
以上 


三次元分布関数を用いたタンパク質周辺の水分子のサンプリング手法の開発

佐藤, 稔子

サトウ, トシコ

SATO, Toshiko

治療開始前の乳がん患者に対する動画を用いた心理教育の有効性に関する検討

井上, 真里

イノウエ, マリ

INOE, Mari

子どもの睡眠を促す養育行動票の開発

北里大学博士（医薬開発学）2023(令和5)年

小田, 喜博

オダ, ヨシヒロ

ODA, Yoshihiro

1 
 
学位論文内容要旨 
 
 
北里大学大学院 薬学研究科 臨床医学（医薬開発学） 
氏名：小田 喜博 印 
 
【題目】 
Research on single-arm trials for obtaining regulatory approval of new anticancer drugs 
（新規抗がん剤の承認取得のために実施される単群試験に関する研究） 
 
【背景・目的】 
抗がん剤の開発は、探索的な第 1 相及び第 2 相試験を実施した後に、第 3 相において、無作為化比較
試験（RCT）により標準的治療との臨床的有用性を比較するというように段階的に進めることが一般的
である。一方、患者数の少ない癌腫等では RCT の実施が困難なことが多く、探索的に実施される単群試
験（SAT）の結果で承認されることもある。近年の抗がん剤の開発では、医学・科学技術の進歩を背景と
して SAT の結果に基づいて承認される品目が増加している。 
SAT での有効性の評価は客観的奏効率（ORR）に基づいて行われるため ORR の大きさは重要であり、
一般的には高い ORR を示す薬剤が承認されやすい傾向がある。一方で、ORR の大きさの臨床的意義は
癌腫や治療ラインによって異なるため、承認に必要な ORR の大きさは単純な ORR の高低ではなく、そ
れぞれの状況によって異なる。しかし、個々の薬剤について、その対照となる治療法と比較してどの程度
の ORR の上乗せが示されれば臨床的意義があると言えるのかを示した特定の基準等はない。 
米国には迅速承認（AA）プログラムがあり、抗がん剤では、主に代替エンドポイントである ORR を
主要評価項目とする SAT の結果に基づいて審査され、AA が与えられる。AA 取得後には RCT による検
証的試験の実施が法的に求められており、その試験で臨床的利益が確認されなければ承認が取り消され
る。近年、AA プログラムを利用した承認は増加しており、その多くは抗がん剤であるが、AA 件数の増
加に伴い承認取り下げの件数も増えている。SAT と RCT では主要評価項目が異なるものの、SAT で推
定された臨床的有用性が検証的試験で適切に評価できていたかという点については不明である。 
本研究では、SAT を主たる試験データとして用いて承認取得を目指す開発計画を進めるにあたり、主
に有効性評価の観点から考慮すべき事項を明らかにすることを目的とした。近年、米国で SAT データに
基づいて承認された新規抗がん剤を研究対象として、まず SAT における重要な評価指標である ORR に
ついて、独自の基準を設けて対照となる治療法を 1 つ選択し、その治療法の ORR と新薬の ORR を比較
することで SAT での承認に必要な ORR の大きさを検討した（研究 1）。さらに SAT の結果で AA を得
た品目に関して、その後の検証的試験で通常承認に移行した品目と承認取り消しとなった品目の特徴を
比較・考察した（研究 2） 
2 
 
【方法】 
研究 1：米国で単群試験の結果に基づいて承認された抗がん剤の奏効率に関する研究 
米国で 2016 年 1 月から 2019 年 12 月の間に SAT データに基づいて承認された固形がんを研究対象と
し、Food and Drug Administration（FDA）のウェブサイトに公開されている承認通知、審査報告書お
よび labeling から審査優遇策、主要な SAT 試験における ORR とその 95%信頼区間、作用機序のデータ
を入手した。また対照とする治療法を「同じ患者層に対する最新の既存治療」と規定して 1 つ選択し（Best 
Comparison Therapy（BCT））、FDA の審査報告書、全米総合がん情報ネットワークガイドライン、公
表論文から ORR とその 95%信頼区間のデータを入手した。記述統計により、研究対象医薬品と BCT の
ORR を比較した。 
 
研究 2：米国で迅速承認された抗がん剤の通常承認への移行の成否における特徴に関する研究 
研究 1 の対象医薬品から、AA プログラム下で承認された品目を特定して研究 2 の研究対象とした。対
象医薬品について AA 取得後に行われた検証的試験の実施状況及び試験結果に関する情報を、2022 年 12
月をカットオフ日として FDA のウェブサイト、ClinicalTrials.gov のデータベース、公表論文から入手
した。AA 後に通常承認に移行した品目（通常承認移行品目）と承認取り消しとなった品目（承認取消品
目）について、AA 取得時の主要な SAT での ORR と検証的試験の ORR の違い等について比較した。 
 
【結果】 
研究 1：米国で単群試験の結果に基づいて承認された抗がん剤の奏効率に関する研究 
31 の研究対象医薬品のうち BCT が特定できた
28 品目について、それぞれの ORR を比較した（図
1）。28 品目のうち 23 品目（82.1%）で新薬の ORR
の点推定値が BCT の ORR の点推定値を上回り、
そのうち 16 品目（69.6%）では新薬の ORR の 95%
信頼区間の下限が BCT の ORR の点推定値を上回
った。残りの 7 品目については、新薬の ORR の
95%信頼区間の下限が BCT の ORR の点推定値を
下回っていたが、その差は僅か（1.0-3.4%）であっ
た。新薬の ORR の点推定値が BCT の ORR の点
推定値を下回った 5 品目に関しては、BCT 以外の
治療法との比較で、その ORR の点推定値を新薬の
ORRの95%信頼区間の下限が上回っていたものが
3 品目、治療選択肢が限定的であるとの観点から承
図 1：新薬と BCT の ORR の比較 
3 
 
認されたと推測されるものが 2 品目であった。 
 
研究 2：米国で迅速承認された抗がん剤の通常承認への移行の成否における特徴に関する研究 
研究 1 の研究対象医薬品 31 品目
の中に AA プログラム下で承認され
たものは 24 品目あり、そこから通常
承認移行品目 11 品目、承認取消品目
6 品目を特定し、研究対象とした。 
AA取得時の主要なSATでのORR
を比較したところ、承認取消品目は
通常承認移行品目より著しく低い
ORR を示していた（図 2）。しかし承
認取消品目がすべて免疫チェックポ
イント阻害剤（ICI）であったため、
ICI のみで比較したところ、両者に差
は認められなかった（図 3）。 
AA 後の検証的試験について、AA
取得時の主要な SAT の治療ライン
と異なる治療ラインでの実施が 14
品目（82.4%）、レジメンの変更が 5
品目（29.4%）あった。 
データが入手可能であった 15 品
目（通常承認移行 9 品目、承認取消
6 品目）を対象として、それぞれの品
目の検証的試験における新薬群と対
照群の ORR の差を見たところ、対照
群に対する ORR の上乗せが全体の
中央値（8.8%）を超えた品目はすべ
て通常承認に移行しており、中央値
以下の品目は 75%が承認取り消しと
なった（図 4）。 
 
図 2：通常承認移行品目と承認
取消品目の ORR の比較
（全研究対象） 
図 3：通常承認移行品目と承認
取消品目の ORR の比較
（ICI のみ） 
図 4：検証的試験における新薬群と対照群の ORR の差 
4 
 
【考察】 
研究 1 の結果から、SAT データに基づいて承認された多くの品目において、ORR の大きさに関わら
ず、新薬の ORR の 95%信頼区間の下限が BCT の ORR の点推定値を上回ることが示され、これが SAT
を主たる試験データとして用いて承認を得る上で重要な要素であることが示唆された。新たなモダリテ
ィである ICI のように必ずしも高い ORR を示さないような薬剤であっても、既存治療の ORR を僅かで
も統計学的に有意に上回るように症例数を集積し、期待される結果が得られれば、承認に値する大きさの
ORR とみなされることが示唆された。 
研究 2 では、多くの品目において AA 前後で治療ラインやレジメンが異なるため試験間で結果を比較
することが困難であり、AA 取得時の主要な SAT で推定された臨床的有用性を検証的試験で適切に評価
できていたかは明らかではない。しかし、検証的試験の成否に影響を与えたと考えられる事項として、
AA 取得時の主要な SAT における低い ORR 値は、検証的試験の成功の不確実性を高めると考えられた。
また、検証的試験では ORR は副次的評価項目の位置づけであるものの、新薬群が対照群を一定程度上回
るような相対的に大きい ORR を得られないと検証的試験における成功の不確実性が高まると考えられ
た。 
本研究結果に基づくと、SAT における重要な評価指標である ORR の臨床的意義は、数値としての ORR
の高低ではなく、対照となる治療法に対する新薬の ORR の相対的な上乗せの大きさであると考えられ
る。AA 取得時の主要な SAT では、新薬が AA プログラム下で承認される時点で最新の治療法を既存対
照とし、それを有意に上回る ORR が臨床的意義のある ORR であった。したがって、SAT を主たる試験
データとして承認を目指す開発戦略では、将来の承認時点の治療法を想定した試験を計画することが望
ましい。また、AA 後に行われる検証的試験では、試験計画時点の既存治療を対照群として設定し、その
ORR に対する新薬群での一定程度の上乗せが、臨床的意義のある ORR であると考えられた。多くの検
証的試験は AA 取得時の主要な SAT の患者層と異なる患者層を対象に実施されていたが、癌腫や治療ラ
インによって既存治療の ORR は変わり、それに伴って新薬に求められる ORR の大きさは変わることか
ら、特に SAT で低い ORR 値であった新薬は検証的試験を計画する際に慎重な検討が必要である。新薬
の作用機序等の特性に応じた併用レジメンの検討、試験の対象患者の選択等、新薬の開発戦略計画時に
ORR の臨床的意義を含めて十分に議論することが望ましい。 
抗がん剤による治療の目的は治癒又は延命・症状緩和であり、抗がん剤の開発において最も重要な評価
指標は全生存期間である。ORR は新薬の抗腫瘍効果を客観的に評価できる指標であるが、全生存期間と
ORR は必ずしも相関しない。それは全生存期間の延長には抗腫瘍効果だけでなく有害事象の程度・頻度
や用量強度等の様々な要因が関係するためである。しかし、本研究により SAT を主たる試験データとし
て用いて承認を目指す開発計画において、臨床的意義のある ORR は SAT のみならずその後の検証的試
験も含めて重要な評価指標であることが確認された。 
以上 


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